检索结果-内蒙古大学图书馆

中国病原生物学杂志 2020年第11期15卷 1262-1267,1276页

作者：张锐清杜运秋李菁佟小涵曲磊吴玉龙季晓飞张莹李波清滨州医学院病原生物学教研室山东烟台264003

目的研究幽门螺杆菌(Hp)对胃上皮细胞GES-1自噬与凋亡的影响。方法Hp与自噬抑制剂3-MA、广谱凋亡抑制剂Z-VAD-FMK处理后的GES-1细胞共培养,流式细胞术检测细胞凋亡情况,Western blot检测LC3B-Ⅱ、Caspase-3及PARP蛋白的表达。结果3-MA... 详细信息

目的研究幽门螺杆菌(Hp)对胃上皮细胞GES-1自噬与凋亡的影响。方法Hp与自噬抑制剂3-MA、广谱凋亡抑制剂Z-VAD-FMK处理后的GES-1细胞共培养,流式细胞术检测细胞凋亡情况,Western blot检测LC3B-Ⅱ、Caspase-3及PARP蛋白的表达。结果3-MA处理后,与空白对照组相比,Hp组LC3B-Ⅱ蛋白相对表达量显著增高(t=7.54,P<0.01);3-MA+Hp组与Hp组相比,LC3B-Ⅱ蛋白相对表达量显著降低(t=-3.24,P<0.05);与空白对照组相比,Hp组、3-MA组GES-1细胞凋亡率均显著增加(t值分别为-9.71和-3.25,P<0.01或P<0.05)。Z-VAD-FMK处理后,与空白对照组相比,Hp组GES-1细胞凋亡率显著增加,(t=-9.29,P<0.01);Hp+Z-VAD-FMK组较Hp组GES-1细胞凋亡率显著下降(t=-8.47,P<0.01);与空白对照组相比,Hp组、Z-VAD-FMK组的LC3B-Ⅱ蛋白相对表达量均显著增加(t值分别为-12.98和-11.28,均P<0.01)。3-MA与Z-VAD-FMK共处理后,3-MA+Hp+Z-VAD-FMK组较3-MA+Z-VAD-FMK组和Hp+Z-VAD-FMK组的GES-1细胞凋亡率显著增加(t值分别为-4.91和-9.64,P<0.05或P<0.01);3-MA+Hp+Z-VAD-FMK组与3-MA+Z-VAD-FMK组相比,Caspase-3蛋白相对表达量显著增加,PARP蛋白相对表达量显著下降(t值分别为-5.16和3.02,均P<0.05);3-MA+Hp+Z-VAD-FMK组较Hp+Z-VAD-FMK组LC3B-Ⅱ蛋白相对表达量显著下降(t=4.63,P<0.05)。结论幽门螺杆菌既能上调GES-1细胞自噬也能诱导其凋亡,并通过增加Caspase-3表达的同时降低PARP的表达以增强自噬抑制引起的细胞凋亡。而在抑制凋亡后,幽门螺杆菌可能诱导GES-1细胞发生自噬性死亡。

关键词：幽门螺杆菌自噬凋亡 GES-1细胞

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整合素β1通过ILK/FAK/F-actin通路影响幽门螺杆菌诱导的GES-1细胞自噬的研究

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中国病原生物学杂志 2020年第9期15卷 1028-1032,1037页

作者：杜运秋张锐清曲磊程雪吴玉龙赵慧琳张莹李波清滨州医学院病原生物学教研室山东烟台264003

目的观察整合素β1对ILK/FAK/F-actin通路的调节作用,分析其对幽门螺杆菌(Hp)诱导GES-1细胞自噬的影响。方法利用siRNA沉默GES-1细胞整合素β1的表达后与幽门螺杆菌共培养6 h,Western blot检测ILK的表达。以ILK特异性抑制剂Cpd22抑制细... 详细信息

目的观察整合素β1对ILK/FAK/F-actin通路的调节作用,分析其对幽门螺杆菌(Hp)诱导GES-1细胞自噬的影响。方法利用siRNA沉默GES-1细胞整合素β1的表达后与幽门螺杆菌共培养6 h,Western blot检测ILK的表达。以ILK特异性抑制剂Cpd22抑制细胞ILK的表达后与幽门螺杆菌共培养6 h,Western blot检测LC3B、p62、FAK、Paxillin的表达;制备细胞爬片,以iFluor-594标记的鬼笔环肽对F-actin进行染色,观察细胞形态。结果沉默整合素β1后,空白组、Hp组、沉默组、阴性对照组、沉默+Hp组、阴性对照+Hp组ILK相对表达量分别为1.012±0.073、0.637±0.216、0.727±0.173、1.173±0.177、0.712±0.160、0.983±0.119,与空白组相比,Hp组ILK的相对表达量降低(t=3.288,P<0.05),沉默组较阴性对照组,沉默+Hp组较阴性对照+Hp组ILK相对表达量均显著降低(t值分别为-4.420和-3.238,均P<0.01)。抑制ILK表达后,空白组、Cpd22组、Hp组、Cpd22+Hp组LC3B的相对表达量分别为0.437±0.064、0.808±0.116、0.812±0.130、1.247±0.201,p62相对表达量分别为0.904±0.141、1.121±0.105、1.392±0.110、0.960±0.103,与空白组相比,Cpd22和Hp组细胞内LC3B及p62相对表达量均显著增加(t值分别为-4.838、-4.479、-3.269、3.313,均P<0.01),Cpd22+Hp组较Hp组细胞LC3B的相对表达量增高(t=-3.147,P<0.05),p62相对表达量降低(t=2.907,P<0.05)。Cpd22组FAK、Paxillin相对表达量较空白组均增加(t值分别为-2.303、-3.460,均P<0.05),Cpd22+Hp组FAK、Paxillin相对表达量较Hp组均降低(t值分别为2.446、-2.648,P<0.05),Cpd22抑制ILK后感染Hp,细胞F-actin染色呈现明显杂乱碎丝状。结论整合素β1通过上调ILK的表达抑制幽门螺杆菌诱导的GES-1细胞自噬,其机制可能与FAK/Paxillin/F-actin通路有关。

关键词：幽门螺杆菌整合素β1 GES-1细胞整合素连接激酶细胞自噬

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烟台市市售海鱼异尖线虫幼虫感染现况调查

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中国寄生虫学与寄生虫病杂志 2017年第5期35卷 472-477页

作者：张雯倩任晓彤赵玉绮盖欣欣张玉梅柏雪莲滨州医学院临床医学院烟台264003 滨州医学院病原生物学教研室烟台264003

目的了解烟台市市售海鱼感染异尖线虫(Anisakis spp.)幼虫的情况。方法2016年1月至12月,在烟台市各海鲜市场随机采购不同种类的海鱼,解剖鱼体,查找、分离内脏和肌肉中的异尖线虫幼虫,光学显微镜下鉴定虫种,统计分析不同鱼种、不同脏器... 详细信息

目的了解烟台市市售海鱼感染异尖线虫(Anisakis spp.)幼虫的情况。方法2016年1月至12月,在烟台市各海鲜市场随机采购不同种类的海鱼,解剖鱼体,查找、分离内脏和肌肉中的异尖线虫幼虫,光学显微镜下鉴定虫种,统计分析不同鱼种、不同脏器和不同体质量下异尖线虫幼虫的感染情况。结果共解剖海鱼14种256尾,海鱼异尖线虫幼虫总感染率为66.4%(170/256),平均感染度为14.8条/尾。感染率较高的鱼种有鲐鱼(Pneumatophorus japonicus)、带鱼(Trichiurus lepturus)、辫子鱼(Platycephalus indicus)和黑鲪(Sebastodes fuscescens)等,感染率分别是100%(26/26)、92.3%(24/26)、92.0%(23/25)、85.7%(18/21),平均感染度分别为25.1、21.1、12.2和24.9条/尾;其他鱼种感染率由高到低依次是海鳗(Monopterus albus,80.0%,6.3条/尾)、真燕鳐(Prognichthys agooz,70.0%,3.3条/尾)、小黄鱼(Larimichthys polyactis,66.0%,11.7条/尾)、蓝点马鲛(Scomberomorus niphonius,52.0%,9.1条/尾)、高眼鲽(Cleisthenes herzensteini,50.0%,1.8条/尾)、鲱鱼(Clupea pallasi,44.4%,9.5条/尾)和黑背圆颌针鱼(Tylosurus melanotus,38.1%,2.0条/尾);银鲳(Pampus argenteus)、绿鳍马面鲀(Thamnaconus modestus)、海鲈鱼(Perca fluviatilis)未检出异尖线虫幼虫。异尖线虫幼虫多寄生于海鱼的肠系膜及肠壁、体腔和胃壁。不同鱼种的异尖线虫幼虫感染度与其体质量的相关性不同:体质量为0.25~0.35 kg的鲐鱼、0.16~0.20 kg的带鱼、0.16~0.25 kg的辫子鱼、0.05~0.10 kg的小黄鱼、0.17~0.26 kg的黑鲪、0.81~1.00 kg的蓝点马鲛的感染度较高,分别为46.5、27.2、18.0、12.0、42.7和68.0条/尾。在这6种鱼中,黑鲪和小黄鱼的感染度随体质量的增加而降低(r=-0.484,P<0.05;r=-0.633,P<0.01),蓝点马鲛的感染度随体质量的增加而增高(r=0.740,P<0.01),鲐鱼、带鱼、辫子鱼感染度与体质量无相关关系(r=-0.237、-0.080、-0.196,均P>0.05)。结论烟台市售海鱼中,鲐鱼、带鱼、辫子鱼和黑鲪的异尖线虫幼虫感染率较高(85%以上)。

关键词：海鱼异尖线虫感染烟台市

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Ipr1对巨噬细胞抗结核分枝杆菌感染免疫相关基因表达的影响

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中国人兽共患病学报 2011年第8期27卷 715-720页

作者：李娜刘鹏飞李波清乔媛媛张玉梅滨州医学院病原生物学教研室烟台264003 滨州医学院附属医院神经外科烟台264003

目的应用基因芯片技术检测Ipr1的表达对巨噬细胞感染分枝杆菌H37Ra后参与免疫应答的相关基因的表达差异。方法实验组与对照组细胞分别感染分枝杆菌H37Ra,基因芯片检测实验组和对照组细胞感染H37Ra 96h后免疫相关基因表达差异。定量PCR... 详细信息

目的应用基因芯片技术检测Ipr1的表达对巨噬细胞感染分枝杆菌H37Ra后参与免疫应答的相关基因的表达差异。方法实验组与对照组细胞分别感染分枝杆菌H37Ra,基因芯片检测实验组和对照组细胞感染H37Ra 96h后免疫相关基因表达差异。定量PCR反应检测芯片结果中上调的3个基因的表达差异用以验证芯片结果的可靠性。结果基因芯片检测结果显示Ipr1基因的表达上调了11个固有免疫机制中相关基因表达,其中与MΦ抗Mtb感染关系密切的基因有:TLR2、TLR4I、rak1、Traf6、Ifngr1、Tnfrsf1a,而参与调节适应性免疫应答的相关基因如:IL-1,IL-12无明显表达差异。结论 Ipr1增强MΦ抗Mtb感染的机制可能主要是通过上调MΦ抗感染固有免疫机制的有关基因的表达从而发挥抗菌作用。本实验为进一步研究Ipr1促进MΦ的活化及杀伤胞内吞噬的Mtb的作用机制奠定了基础。

关键词： Ipr1 结核分枝杆菌巨噬细胞

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幽门螺杆菌临床分离株热休克蛋白60基因序列分析

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中国病原生物学杂志 2014年第3期9卷 230-235页

作者：孙万菊杜东龙孙辉周秀芝张珍李波清滨州医学院病原生物学教研室山东烟台264003

目的分析幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,Hp)临床分离株热休克蛋白60基因编码区序列特征。方法对分离自我国不同地区、患有不同胃肠疾病患者的63株Hp提取基因组DNA并设计hsp60特异性引物,采用聚合酶链反应(PCR)扩增hsp60基因,经1%琼脂... 详细信息

目的分析幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,Hp)临床分离株热休克蛋白60基因编码区序列特征。方法对分离自我国不同地区、患有不同胃肠疾病患者的63株Hp提取基因组DNA并设计hsp60特异性引物,采用聚合酶链反应(PCR)扩增hsp60基因,经1%琼脂糖凝胶电泳后切胶回收、纯化PCR产物并测序,用DNAstar 5.0软件中的Clustal W程序对hsp60基因序列及由该序列翻译的氨基酸序列进行比较分析。结果成功特异性扩增并纯化到hsp60全基因序列。经序列比对,发现不同胃肠疾病来源的hsp60基因核苷酸序列在877、1 399以及1 579位点处存在单核苷酸多态性(single nucleotide polymorphism,SNP)。其中来源于非胃癌患者的Hp在以上三位点处分别有8株(8/48,16.67%)G→A置换,9株(9/48,18.75%)C→G置换,7株(7/48,14.58%)A→G置换;胃癌患者来源的Hp在以上三位点处分别有3株(3/18,16.67%)G→A置换,1株(1/18,5.55%)C→G置换,2株(2/18,11.11%)A→G置换。将核苷酸序列翻译为氨基酸序列后,在以上三位点所对应的氨基酸序列,即293、467以及527位点处分别发生了由缬氨酸(V)到异亮氨基酸(I)、谷氨酰胺(Q)到谷氨酸(E)以及苏氨酸(T)到丙氨酸(A)的改变。结论我国Hp临床分离株热休克蛋白60基因序列存在单核苷酸多态性位点。

关键词：幽门螺杆菌热休克蛋白60基因序列分析单核苷酸多态性

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华支睾吸虫parkin蛋白的分子生物学特征研究

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中国病原生物学杂志 2016年第7期11卷 643-648页

作者：柏雪莲李波清张玉梅张艳丽耿丽杜镇镇赵慧琳滨州医学院病原生物学教研室山东烟台256603

目的了解华支睾吸虫Parkin蛋白(Clonorchis sinensis Parkin)的生物学特性。方法从华支睾吸虫cDNA文库获得Parkin的cDNA全长,NCBI搜索与之相似度高的基因序列,预测其所含结构域和功能;应用MEGA5程序对来自GenBank中与之有较高相似度的... 详细信息

目的了解华支睾吸虫Parkin蛋白(Clonorchis sinensis Parkin)的生物学特性。方法从华支睾吸虫cDNA文库获得Parkin的cDNA全长,NCBI搜索与之相似度高的基因序列,预测其所含结构域和功能;应用MEGA5程序对来自GenBank中与之有较高相似度的基因序列进行分析,构建基因进化树;原核表达重组融合蛋白CsParkin,纯化后免疫Blab/c小鼠,获得多克隆抗体,采用Western blot鉴定天然CsParkin;采用qRT-PCR测定CsParkin基因在不同发育阶段的表达水平。结果 CsParkin蛋白含有5个结构域,分别是Ubl、RING0、RING1、IBR和RING2,具有典型的Parkin蛋白结构;该蛋白与人及各种动物的Parkin有很高的相似度,与其他吸虫有更近的进化关系;Western blot显示原核表达的重组CsParkin,与天然CsParkin分子质量相同,均为45.7ku;CsParkin在囊蚴中的表达量高于成虫;免疫组化显示CsParkin主要分布于成虫受精囊中的精子及口吸盘和睾丸,在囊蚴中广泛分布。结论肝吸虫CsParkin属蛋白于保守蛋白,具有典型的泛素连接酶3的功能结构,推测其在蛋白的泛素化中起到作用,可能在华支睾吸虫的生长过程中发挥作用。

关键词：华支睾吸虫 Parkin 泛素连接酶

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LAIR-1 siRNA对幽门螺杆菌诱导单核细胞THP-1凋亡的影响

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中国病原生物学杂志 2016年第8期11卷 690-695页

作者：孙辉张莹季晓飞陈醒醒李娇娇李波清滨州医学院病原生物学教研室山东烟台264003

目的研究LAIR-1基因沉默对幽门螺杆菌(Helicobacter pylori)诱导单核细胞THP-1凋亡的影响。方法以Hp ATCC26695分别感染THP-1细胞6、12、24和48h,采用流式细胞术检测细胞凋亡及LAIR-1蛋白的表达。应用Lipofectamine RNAiMAX转染3对LAIR-1siRNAs入单核细胞THP-1中,采用半定量RT-PCR及流式细胞术检测沉默效应,筛选出的较有效的一对siRNA再转染入单核细胞THP-1,48h后加入Hp培养24h,采用流式细胞术检测细胞凋亡率。结果 Hp感染THP-1细胞6、12、24和48h后的细胞凋亡率分别为(84±1.77)%、(69.13±4.29)%、(48.3±3.37)%和(21.1±4.67)%,LAIR-1蛋白表达相对荧光强度分别为14 934±178、14 369±244、12 259±523和7438±539;转染后48h较有效的siRNA对LAIR-1mRNA及蛋白沉默效率分别为(39.1±4.67)%和(38.4±3.18)%;将筛选出的siRNA转染细胞48h后,用Hp感染24h,流式细胞仪检测显示转染组与阴性对照组细胞凋亡率分别为(56.1±9.8)%和(36.9±3.2)%,转染后感染组与空白组LAIR-1蛋白表达相对荧光强度分别为12 181±219和10 228±136。结论在Hp感染细胞THP-1 48h内,随着感染时间延长LAIR-1的表达及THP-1细胞凋亡率显著降低即LAIR-1siRNA能抑制LAIR-1的表达及THP-1细胞的凋亡。

关键词：幽门螺杆菌单核细胞凋亡白细胞相关免疫球蛋白样受体-1 小分子干扰RNA

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整合素β1亚基对幽门螺杆菌感染胃上皮细胞GES-1凋亡及增殖的影响

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中国病原生物学杂志 2016年第10期11卷 888-892,896页

作者：陈醒醒张莹孙辉李娇娇张艳丽李波清滨州医学院病原生物学教研室山东烟台264003

目的分析幽门螺杆菌感染胃上皮细胞过程中整合素β1亚基表达的变化,观察整合素β1对幽门螺杆菌感染胃上皮细胞GES-1凋亡及增殖的影响。方法将幽门螺杆菌与胃上皮细胞GES-1共培养,采用流式细胞术检测整合素β1的表达量变化;应用iRNA技术... 详细信息

目的分析幽门螺杆菌感染胃上皮细胞过程中整合素β1亚基表达的变化,观察整合素β1对幽门螺杆菌感染胃上皮细胞GES-1凋亡及增殖的影响。方法将幽门螺杆菌与胃上皮细胞GES-1共培养,采用流式细胞术检测整合素β1的表达量变化;应用iRNA技术降低胃上皮细胞GES-1中β1亚基的表达;幽门螺杆菌感染胃上皮细胞及iRNA降低β1的表达后,采用流式细胞术检测细胞的凋亡,采用CCK-8法检测细胞增殖情况。结果幽门螺杆菌感染胃上皮细胞12、24、48h后空白对照组凋亡率分别为(10.80±0.71)%、(12.23±0.06)%和(12.30±2.12)%,Hp感染组凋亡率分别为(24.20±0.14)%、(30.05±2.47)%和(26.40±1.91)%,差异均有统计学意义(t值分别为-26.28、-7.701和-12.855,P<0.05);与幽门螺杆菌共培养6、24、48h胃上皮细胞增殖受到抑制,抑制率分别为(35.00±3.22)%、(40.96±2.45)%和(8.00±3.33)%;幽门螺杆菌与胃上皮细胞GES-1共培养24、48h流式细胞术检测整合素β1表达,空白对照组平均荧光强度(MFI)分别为(1616.33±24.70)和(1834.67±17.01),Hp感染组为(1484.00±60.89)和(1376.00±14.11),差异有统计学意义(t值分别为3.488和35.95,P<0.05);应用iRNA技术降低胃上皮细胞GES-1整合素β1亚基表达24、48h,对照组凋亡率分别为(18.75±3.59)%和(39.75±3.68)%,iRNA组凋亡率分别为(26.25±4.11)%和(55.30±5.57)%,差异有统计学意义(t值为-2.746和-4.656,P<0.05);胃上皮细胞中β1亚基的表达降低后细胞增殖受到抑制,24、36、48、72h抑制率分别为(6.16±1.07)%、(17.15±2.76)%、(10.84±1.34)%和(21.87±1.72)%。结论幽门螺杆菌能降低胃上皮细胞GES-1整合素β1亚基的表达,而且可能通过降低整合素β1亚基的表达促进上皮细胞GES-1的凋亡并抑制其增殖。

关键词：整合素β1 胃上皮细胞幽门螺杆菌 iRNA

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华支睾吸虫生长因子受体结合蛋白2的生物学特性和功能研究

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中国病原生物学杂志 2015年第8期10卷 726-730,758页

作者：柏雪莲李波清张玉梅张珍耿丽杜镇镇赵慧琳滨州医学院病原生物学教研室山东烟台264003

目的探索华支睾吸虫生长因子受体结合蛋白2(Clonorchis sinensis growth factor receptor bound protein 2,CsGrb2)的生物学特性和功能。方法从华支睾吸虫cDNA文库获得CsGrb2的cDNA全长,NCBI搜索与之相似度高的基因序列,预测其所含结构... 详细信息

目的探索华支睾吸虫生长因子受体结合蛋白2(Clonorchis sinensis growth factor receptor bound protein 2,CsGrb2)的生物学特性和功能。方法从华支睾吸虫cDNA文库获得CsGrb2的cDNA全长,NCBI搜索与之相似度高的基因序列,预测其所含结构域和功能;应用MEGA5程序对来自于Genbank中与之有较高相似度的基因序列进行分析,构建基因进化树;原核表达重组融合蛋白CsGrb2,用表达的融合蛋白CsGrb2免疫小鼠,产生多克隆抗体,采用Western blot鉴定华支睾吸虫提取物中的天然CsGrb2,采用免疫组化法检测CsGrb2在华支睾吸虫成虫及囊蚴的分布;采用qRT-PCR测定CsGrb2基因在不同发育阶段的表达水平。结果 CsGrb2基因编码一个含有SH3-SH2-SH3结构的多肽,与人及各种动物的Grb2有着很高的相似度,与其他吸虫有着更近的进化关系;重组CsGrb2在原核系统中大量表达并纯化,Western blot显示天然CsGrb2与重组CsGrb2分子质量相同,均为34ku;CsGrb2在囊蚴中的表达量高于成虫。免疫组化显示CsGrb2主要分布于成虫的口、腹吸盘,间质组织,受精囊中的精子及囊蚴的大多数器官。结论CsGrb2属于保守蛋白,推测在华支睾吸虫的器官生成,能量代谢和精子的有丝分裂方面发挥作用。

关键词：华支睾吸虫生长因子受体结合蛋白2 器官生成能量代谢精子生成

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小鼠胃类器官培养中真菌污染的鉴定与控制

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中国病原生物学杂志 2022年第7期17卷 757-760,765页

作者：李菁张莹佟小涵何靜吕心张锐清杜运秋刘岩红李波清滨州医学院病原生物学教研室山东烟台264003 滨州医学院附属医院

目的探讨小鼠胃类器官培养过程中污染真菌的种类及其控制措施。方法利用小鼠胃成体干细胞培养胃类器官;分离小鼠胃类器官培养过程中产生的污染物,革兰染色观察镜下形态;将污染物分离培养,并进行真菌ITS基因测序分析;梯度浓度试验探究可... 详细信息

目的探讨小鼠胃类器官培养过程中污染真菌的种类及其控制措施。方法利用小鼠胃成体干细胞培养胃类器官;分离小鼠胃类器官培养过程中产生的污染物,革兰染色观察镜下形态;将污染物分离培养,并进行真菌ITS基因测序分析;梯度浓度试验探究可抑制污染物的药物及最适浓度。结果小鼠胃类器官培养过程中的污染物为出芽短梗霉菌;500μg/L的两性霉素B可有效抑制污染的出芽短梗霉菌;控制真菌污染后成功构建小鼠胃类器官,第9 d时检测类器官仍具有活性。结论出芽短梗霉菌可引起小鼠胃类器官培养过程中的真菌污染,通过添加两性霉素B控制真菌污染可成功构建小鼠胃类器官。

关键词：胃类器官真菌污染出芽短梗霉菌

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