检索结果-内蒙古大学图书馆

中国病原生物学杂志 2024年第5期19卷 502-506,513页

作者：吴倩文刘书振张建辉曹新颖孙泽坤贾钰刚张莹李波清赵慧琳季晓飞滨州医学院病原生物学教研室山东烟台264003 滨州医学院第二临床医学院

目的用GFP拆分方法示踪幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,Hp)感染过程中CagA向胃上皮细胞内的转运过程。方法(1)PCR扩增CagA基因的上下游同源臂,连入敲除质粒pSJHK4中,将质粒通过电击转化的方法转入Hp中,利用卡那霉素筛选CagA敲除突变株... 详细信息

目的用GFP拆分方法示踪幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,Hp)感染过程中CagA向胃上皮细胞内的转运过程。方法(1)PCR扩增CagA基因的上下游同源臂,连入敲除质粒pSJHK4中,将质粒通过电击转化的方法转入Hp中,利用卡那霉素筛选CagA敲除突变株ΔCagA。(2)PCR扩增绿色荧光蛋白GFP第11β折叠(GFP11)的基因序列并与CagA基因序列的3′端相连,将融合序列连入Hp-大肠埃希菌穿梭质粒pCHFHp中,并通过电击转化的方法转入ΔCagA中,利用氯霉素筛选CagA与GFP-11的融合表达突变株。(3)PCR扩增GFP第1-10β折叠(GFP1-10)的基因序列,包装慢病毒,利用病毒感染的方法将其转入胃上皮细胞GES-1中。将(2)中构建的Hp突变株以100∶1的感染复数感染(3)构建的表达GFP(1-10)的GES-1细胞体系,利用荧光显微镜观察细胞内的荧光情况,通过Western blot检测细胞内的CagA蛋白含量。结果构建了CagA敲除质粒pSJHK4-cagA,转入Hp中得到CagA敲除突变株ΔCagA。构建了CagA与GFP-11的融合表达质粒pCHFHp-cagAgfp11,转入ΔCagA中获得CagA与GFP-11的融合表达突变株HpG27-cagAgfp11。构建了含有GFP1-10基因序列的慢病毒,感染GES-1细胞后获得GFP1-10稳定表达的细胞株。在HpG27-cagAgfp11感染GES-1模型中,观察到细胞中的绿色荧光,说明CagA被转运到GES-1细胞内部,其融合表达的GFP-11与细胞内表达的GFP1-10结合发出荧光,Western blot结果也证实CagA被转运至胞内。结论在Hp感染GES-1细胞模型中,GFP拆分方法能够示踪CagA向细胞的转运过程,这为CagA的转运研究提供了新方法,有助于HpIV型分泌系统(T4SS)作用机制的深入研究。

关键词：幽门螺杆菌 CagA GFP拆分 T4SS

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抗大别班达病毒人源单克隆抗体Fab片段的噬菌体展示文库构建

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中国病原生物学杂志 2024年第11期19卷 1251-1254,1259页

作者：徐家馨王静静王琳徐睿杰吴玉龙李波清乔媛媛滨州医学院基础医学院病原生物学教研室山东烟台264003

目的构建具有潜在中和活性的人源抗大别班达病毒(SFTSV)抗体Fab片段的噬菌体展示文库。方法从具有交叉中和活性的SFTS恢复期患者血液样本中分离外周血单个核细胞(PBMC)并提取总RNA,逆转录PCR得到cDNA。以cDNA为模板进行第一轮PCR扩增,... 详细信息

目的构建具有潜在中和活性的人源抗大别班达病毒(SFTSV)抗体Fab片段的噬菌体展示文库。方法从具有交叉中和活性的SFTS恢复期患者血液样本中分离外周血单个核细胞(PBMC)并提取总RNA,逆转录PCR得到cDNA。以cDNA为模板进行第一轮PCR扩增,分别获得抗体重链可变区(VH)和轻链可变区(Vκ和Vλ)序列。以pComb3XTT、pComb3Xλ质粒为模板,分别获得抗体重链恒定区(CH1)和轻链恒定区(Cκ、Cλ)序列。第二轮通过重叠延伸PCR(SOE-PCR)扩增VH和CH1得到Fd重链,同样扩增Vκ和Cκ、Vλ和Cλ得到完整的κ和λ抗体轻链。第三轮以上述扩增产物为模板再次进行SOE-PCR,得到完整的抗体Fab基因片段。将Fab基因片段插入到pComb3XSS噬菌粒中,构建噬菌体展示抗体文库。结果通过三轮PCR扩增出抗体Fab片段的序列,成功构建库容量为1.875×10^(9)的噬菌体展示抗体文库。结论利用具有交叉中和活性的SFTS恢复期患者血源建立了人源抗SFTSV Fab片段的噬菌体展示抗体文库,为下一步筛选特异性单克隆中和抗体建立了可靠的前期基础。

关键词： SFTSV 噬菌体展示抗体文库库容量人源单克隆抗体

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信号肽类型对新布尼亚病毒SFTSV Gn蛋白靶向表达特征影响的研究

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中国病原生物学杂志 2023年第2期18卷 132-135,140页

作者：张凡张娟徐家馨吴玉龙李波清乔媛媛滨州医学院基础医学院病原生物学教研室山东烟台264003

目的研究不同类型信号肽对新布尼亚病毒(SFTSV)包膜蛋白Gn表达的影响。方法以SFTSV(SD4毒株)M段为模板PCR扩增Gn基因,双酶切后分别连接至A16H和pHL表达载体,连接产物转染293T细胞,收集细胞和上清进行Western blot、免疫荧光以及质谱检... 详细信息

目的研究不同类型信号肽对新布尼亚病毒(SFTSV)包膜蛋白Gn表达的影响。方法以SFTSV(SD4毒株)M段为模板PCR扩增Gn基因,双酶切后分别连接至A16H和pHL表达载体,连接产物转染293T细胞,收集细胞和上清进行Western blot、免疫荧光以及质谱检测,分析Gn重组蛋白的表达情况;ELISA检测Gn重组蛋白的结合活性。结果成功构建缺失载体信号肽的pA16H-Gn质粒和包含信号肽的sp-pA16H-Gn质粒,以及携带另一种载体信号肽的pHL-Fc-Gn质粒。缺失载体信号肽的pA16H-Gn质粒在细胞内外均不表达Gn重组蛋白(rGn-Fc),包含A16H载体信号肽的sp-pA16H-Gn质粒在细胞内表达Gn重组蛋白(rGn-Fc),但不能分泌表达,包含pHL载体信号肽的pHL-Fc-Gn质粒可将Gn重组蛋白(rGn-Fc)分泌表达到胞外,且具有结合活性。结论载体本身携带的信号肽会影响SFTSV Gn重组蛋白的表达,不同信号肽影响重组蛋白的表达定位。该研究为SFTSV Gn重组蛋白的开发奠定了基础,同时也为SFTSV重组疫苗的研究提供了新思路。

关键词：发热伴血小板减少综合征病毒信号肽分泌重组蛋白

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小鼠胃类器官培养中真菌污染的鉴定与控制

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中国病原生物学杂志 2022年第7期17卷 757-760,765页

作者：李菁张莹佟小涵何靜吕心张锐清杜运秋刘岩红李波清滨州医学院病原生物学教研室山东烟台264003 滨州医学院附属医院

目的探讨小鼠胃类器官培养过程中污染真菌的种类及其控制措施。方法利用小鼠胃成体干细胞培养胃类器官;分离小鼠胃类器官培养过程中产生的污染物,革兰染色观察镜下形态;将污染物分离培养,并进行真菌ITS基因测序分析;梯度浓度试验探究可... 详细信息

目的探讨小鼠胃类器官培养过程中污染真菌的种类及其控制措施。方法利用小鼠胃成体干细胞培养胃类器官;分离小鼠胃类器官培养过程中产生的污染物,革兰染色观察镜下形态;将污染物分离培养,并进行真菌ITS基因测序分析;梯度浓度试验探究可抑制污染物的药物及最适浓度。结果小鼠胃类器官培养过程中的污染物为出芽短梗霉菌;500μg/L的两性霉素B可有效抑制污染的出芽短梗霉菌;控制真菌污染后成功构建小鼠胃类器官,第9 d时检测类器官仍具有活性。结论出芽短梗霉菌可引起小鼠胃类器官培养过程中的真菌污染,通过添加两性霉素B控制真菌污染可成功构建小鼠胃类器官。

关键词：胃类器官真菌污染出芽短梗霉菌

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济南市某三级医院急性发热呼吸道症状就诊患者呼吸道病原体检测结果分析

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中国感染控制杂志 2025年第5期24卷 631-637页

作者：兰庆站吕心郝莹莹卢冰如李波清山东第一医科大学附属省立医院临床医学检验部山东济南250014 滨州医学院基础医学院病原生物学教研室山东烟台264003

目的了解济南市某院急性发热呼吸道症状呼吸道病原体感染情况,探究其流行病学特征,为该地区急性呼吸道感染的科学诊疗提供参考依据。方法选取2018年1月—2024年6月于山东第一医科大学附属省立医院进行呼吸道病原体IgM抗体检测的患者... 详细信息

目的了解济南市某院急性发热呼吸道症状呼吸道病原体感染情况,探究其流行病学特征,为该地区急性呼吸道感染的科学诊疗提供参考依据。方法选取2018年1月—2024年6月于山东第一医科大学附属省立医院进行呼吸道病原体IgM抗体检测的患者为研究对象。采用磁微粒化学发光法对9种常见的呼吸道病原体进行IgM抗体检测,分析不同性别、年龄段、季节、年份各组患者病原体检出情况。结果共纳入19 463例就诊者。其中有6 933例患者至少检测出一种病原体,占35.62%,检出率居前三位的病原体分别为肺炎支原体(MP)、乙型流感病毒(FluB)、甲型流感病毒(FluA),检出率分别为17.14%、13.62%、4.58%;单一检出率为28.57%,多重检出率为7.05%;女性检出率较男性高(38.02%VS 33.78%),差异有统计学意义(P<0.001)。随着年龄的增长呼吸道病原体总检出率先降低后增高;呼吸道病原体检出率在冬季最高(41.59%),秋季最低(31.23%);随着年份的增加总检出率逐年降低。结论该地区呼吸道病原体感染以MP、FluB为主,未成年人是高发人群,冬季是高发季节,近年来检出率逐年降低。应加强高发人群在高发季节的防护诊疗力度,避免引起大规模的地区性流行。

关键词：急性呼吸道感染呼吸道病原体检出率 IgM抗体

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含Src同源2结构域蛋白酪氨酸磷酸酶2抑制剂在肿瘤靶向和免疫治疗中的应用进展

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中国新药杂志 2024年第15期33卷 1557-1563页

作者：石格格王昭维邱玥媛何磊李招招史佳欣赵博晨韩笑杜海琛张英起西北大学生命科学学院空军军医大学药学系生物制药学教研室空军军医大学基础医学院

由PTPN11基因编码的含Src同源2结构域蛋白酪氨酸磷酸酶2(Src homology 2 domain-containing protein tyrosine phosphatase, SHP2)是细胞关键调节因子蛋白酪氨酸磷酸酶(protein tyrosine phosphatase, PTP)家族的一员，在多种恶性肿瘤中高表达。一方面，SHP2通过介导RAS-MAPK,PI3K-AKT和JAK-STAT等信号通路调节肿瘤细胞的生理功能。另一方面，在肿瘤微环境中，SHP2与免疫抑制受体[如程序性死亡受体1(programmed death-1,PD-1)、细胞毒性T淋巴细胞相关抗原4(cytotoxic T lymphocyte-associated antigen-4,CTLA-4)等]结合，调节免疫细胞的功能，造成免疫微环境的抑制性。因此，SHP2在肿瘤中具有调节肿瘤细胞和免疫微环境的双重功能，提示其为极具价值的肿瘤治疗靶点。近年来，大量具有成药潜力的SHP2抑制剂进入临床试验，为肿瘤靶向治疗提供新的可能。目前SHP2抑制剂的研究已经取得一定成果，但仍存在较多耐药性、非特异性和毒性等问题。因此，需进一步研究SHP2抑制剂的成药性和靶向策略。本文对SHP2参与信号通路的调控机制和其在肿瘤和免疫微环境中的作用进行总结，并对SHP2抑制剂及其临床研究进展进行综述。

关键词：含Src同源2结构域蛋白酪氨酸磷酸酶2 肿瘤信号通路肿瘤免疫微环境含Src同源2结构域蛋白酪氨酸磷酸酶2抑制剂

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原花青素B_(2)软膏对UVB诱导BALB/c-nu小鼠皮肤光老化的防治效果

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滨州医学院学报 2023年第5期46卷 327-331页

作者：李岚李燕妮滨州医学院基础医学院医学遗传学与细胞生物学教研室山东烟台264003 滨州医学院药学院生物制药工艺与制剂教研室山东烟台264003

目的通过紫外线UVB照射模拟光老化,研究原花青素B_(2)软膏对BALB/c-nu小鼠皮肤组织形态及生化指标的影响,探寻它在皮肤光保护方面的作用机理。方法以正交试验优选原花青素B_(2)软膏基质,将健康BALB/c-nu小鼠分为对照组、模型组和抹药组... 详细信息

目的通过紫外线UVB照射模拟光老化,研究原花青素B_(2)软膏对BALB/c-nu小鼠皮肤组织形态及生化指标的影响,探寻它在皮肤光保护方面的作用机理。方法以正交试验优选原花青素B_(2)软膏基质,将健康BALB/c-nu小鼠分为对照组、模型组和抹药组,于处理后第14天取材。HE染色和Masson染色进行皮肤组织的形态学检测;ELISA方法测定皮肤组织中抗氧化酶和炎症因子的变化。结果形态观察:与对照组相比,模型组小鼠皮肤均出现褶皱、红斑等症状,表皮层厚度显著增加且厚度不均,棘层细胞肥大,胶原纤维数量减少;与模型组相比,抹药组减轻了UVB照射造成的皮肤损伤,抑制了UVB诱导的表皮增厚现象,胶原纤维虽也出现减少,但相比于模型组有明显的改善。炎症因子检测:与对照组比较,模型组小鼠皮肤组织中SOD含量减少和炎症因子(IL-6,TNF-α)的含量明显增高(P<0.05);与模型组相比,抹药组小鼠皮肤组织中SOD含量回升并且降低了炎症因子的水平(P<0.05)。结论原花青素B_(2)软膏可以抑制皮肤组织中炎症因子的产生,提高抗氧化酶的活性,具有较好地抵抗UVB皮肤光老化的保护价值。

关键词：原花青素B_(2)软膏光老化 UVB 皮肤组织

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不同静电纺丝膜上骨髓间充质干细胞的黏附、增殖与成血管平滑肌分化

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中国组织工程研究 2025年第4期29卷 661-669页

作者：孙现娟王秋花张锦艺杨杨杨王文双张晓晴滨州医学院基础医学院人体解剖与组织胚胎学教研室生物材料与组织再生国际合作联合实验室山东省烟台市264003 烟台毓璜顶医院妇科山东省烟台市264000

背景:临床上迫切需要小口径人工血管来治疗冠状动脉和外周动脉疾病,目前,血管组织工程已成为制备小口径人工血管的主要方法,选择合适的生物材料和细胞来源是小口径组织工程血管构建成功的关键因素。目的:观察4种静电纺丝膜材料对骨髓间... 详细信息

背景:临床上迫切需要小口径人工血管来治疗冠状动脉和外周动脉疾病,目前,血管组织工程已成为制备小口径人工血管的主要方法,选择合适的生物材料和细胞来源是小口径组织工程血管构建成功的关键因素。目的:观察4种静电纺丝膜材料对骨髓间充质干细胞增殖、黏附及分化为血管平滑肌细胞的影响。方法:分离提取SD大鼠骨髓间充质干细胞。将骨髓间充质干细胞分别接种于聚己内酯(PCL)、聚己内酯-透明质酸(PCL-HA)、聚己内酯-丝素蛋白(PCL-SF)、聚己内酯-明胶(PCL-GEL)静电纺丝膜材料上,培养1,3,7 d后,扫描电镜下观察材料上的细胞排布,鬼笔环肽染色观察材料上的细胞增殖与黏附,qRT-PCR检测材料上细胞分泌的CD90、Meflin、转化生长因子βmRNA表达;向血管平滑肌细胞诱导分化7 d后,qRT-PCR检测材料上细胞ɑ-平滑肌肌动蛋白mRNA表达。结果与结论:①扫描电镜下可见骨髓间充质干细胞在4种静电纺丝膜上均沿着静电纺丝膜的纤维走向排列;②鬼笔环肽染色显示,骨髓间充质干细胞在4种静电纺丝膜上分布规律,均沿着纤维走向呈现平行分布,并且PCL-HA、PCL-SF、PCL-GEL静电纺丝膜较PCL静电纺丝膜更有利于骨髓间充质干细胞的增殖、黏附,PCL-SF静电纺丝膜相较于PCL-HA、PCL-GEL静电纺丝膜更有利于骨髓间充质干细胞的增殖、黏附;③qRT-PCR检测显示,4种静电纺丝膜材料均可维持骨髓间充质干细胞CD90和Meflin的mRNA表达,组间比较差异无显著性意义(P>0.05);PCL-HA、PCL-SF、PCL-GEL组培养1,7 d的转化生长因子βmRNA表达高于PCL组(P<0.05),PCL-SF组培养3,7 d的转化生长因子βmRNA表达高于其他3组(P<0.05),PCL-HA组培养7 d的转化生长因子βmRNA表达高于PCL-GEL组(P<0.05);④qRT-PCR检测显示,PCL-SF组ɑ-平滑肌肌动蛋白mRNA表达高于其他3组(P<0.05),PCL-HA组ɑ-平滑肌肌动蛋白mRNA表达高于PCL组(P<0.05);⑤结果表明:相较于PCL、PCL-HA、PCL-GEL静电纺丝膜,PCL-SF静电纺丝膜与骨髓间充质干细胞结合更适合制备小口径组织工程血管。

关键词：骨髓间充质干细胞小口径组织工程血管静电纺丝聚己内酯聚己内酯-透明质酸聚己内酯-丝素蛋白聚己内酯-明胶

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聚己内酯-透明质酸静电纺丝膜联合间充质干细胞修复子宫内膜损伤

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中国组织工程研究 2025年第16期29卷 3369-3379页

作者：安江茹张锦艺王秋花杨杨杨王文双张晓晴滨州医学院基础医学院人体解剖与组织胚胎学教研室生物材料与组织再生国际合作联合实验室山东省烟台市264003 烟台毓璜顶医院妇科山东省烟台市264000

背景:人子宫内膜间充质干细胞能够直接修复受损的子宫内膜,促进血管生成、恢复子宫形态结构,然而将干细胞直接注入受损子宫内膜后的细胞存活率低、滞留时间短,修复效果有限。目的:观察聚己内酯-透明质酸静电纺丝膜复合人子宫内膜间充质... 详细信息

背景:人子宫内膜间充质干细胞能够直接修复受损的子宫内膜,促进血管生成、恢复子宫形态结构,然而将干细胞直接注入受损子宫内膜后的细胞存活率低、滞留时间短,修复效果有限。目的:观察聚己内酯-透明质酸静电纺丝膜复合人子宫内膜间充质干细胞修复大鼠子宫内膜损伤的效果。方法:①细胞实验:采用胶原酶消化法提取人子宫内膜间充质干细胞,静电纺丝技术制备聚己内酯-透明质酸静电纺丝膜。将人子宫内膜间充质干细胞分别接种于聚苯乙烯培养板与聚己内酯-透明质酸静电纺丝膜上,通过DNA定量分析、WST-1细胞活性实验、鬼笔环肽染色、扫描电镜观察细胞的增殖与黏附能力,qRT-PCR检测静电纺丝膜上细胞CD90、Meflin的mRNA表达。②动物实验:取27只处于动情期的雌性SD大鼠,通过机械搔刮法建立宫腔粘连模型后随机分为3组,每组9只:空白对照组不进行任何治疗,对照组将聚己内酯-透明质酸静电纺丝膜植入宫腔损伤部位,实验组将聚己内酯-透明质酸静电纺丝膜/人子宫内膜间充质干细胞补片植入宫腔损伤部位。术后第3,7,14天取材,采用苏木精-伊红染色观察子宫形态结构及腺体数量,qRT-PCR和免疫荧光染色观察子宫组织CD31、血管内皮生长因子的表达。结果与结论:①细胞实验:与聚苯乙烯培养板相比,聚己内酯-透明质酸静电纺丝膜可促进人子宫内膜间充质干细胞的增殖与黏附,并且聚己内酯-透明质酸静电纺丝膜支持人子宫内膜间充质干细胞基因CD90和Meflin的表达;②动物实验:苏木精-伊红染色显示,聚己内酯-透明质酸静电纺丝膜/人子宫内膜间充质干细胞补片可促进子宫内膜损伤后形态结构的恢复,术后第14天的内膜厚度与腺体数量均多于空白对照组、对照组(P<0.05);qRT-PCR和免疫荧光染色检测显示,实验组术后第7,14天的CD31、血管内皮生长因子mRNA与蛋白表达均高于空白对照组、对照组(P<0.05);③结果表明:聚己内酯-透明质酸静电纺丝膜可以提高干细胞的存活率、延长干细胞与受损组织的接触时间,二者复合移植可更好地修复受损子宫内膜组织。

关键词：子宫内膜宫腔粘连人子宫内膜间充质干细胞静电纺丝膜聚己内酯透明质酸

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基于科研素养和创新能力培养的教学模式探索与实践

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中国继续医学教育 2025年第5期17卷 29-33页

作者：许聪卞伟华刘向勇张道来滨州医学院药学院细胞生物学教研室山东烟台264003 滨州医学院药学院蛋白质与抗体工程教研室山东烟台264003

深化高等学校创新创业教育改革,不仅是对传统教育模式的挑战,更是对高等教育功能的重新定位。在全球化、信息化和知识经济的时代背景下,培养创新型青年人才已成为建设创新型国家的核心战略,也是高校人才培养的主要任务。大学生作为国家... 详细信息

深化高等学校创新创业教育改革,不仅是对传统教育模式的挑战,更是对高等教育功能的重新定位。在全球化、信息化和知识经济的时代背景下,培养创新型青年人才已成为建设创新型国家的核心战略,也是高校人才培养的主要任务。大学生作为国家的未来和希望,其科研素养和创新能力的水平直接关系到国家的创新能力和国际竞争力。因此,近年来,高校纷纷将大学生科研素养和创新能力的培养提升到战略高度,并在教学实践中不断探索和尝试。文章在分析培养大学生科研创新能力的必要性和现状的基础上,以滨州医学院药学院的《细胞生物学》课程教学为例,阐明如何在日常教学中与科研有效融合,通过序贯式的科研训练提升学生的创新能力,探索为社会培养出更多优秀的创新型人才的新模式。

关键词：医学院校细胞生物学科研素养创新能力序贯式培养课程思政医学教育改革

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