检索结果-内蒙古大学图书馆

中国病原生物学杂志 2024年第5期19卷 502-506,513页

作者：吴倩文刘书振张建辉曹新颖孙泽坤贾钰刚张莹李波清赵慧琳季晓飞滨州医学院病原生物学教研室山东烟台264003 滨州医学院第二临床医学院

目的用GFP拆分方法示踪幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,Hp)感染过程中CagA向胃上皮细胞内的转运过程。方法(1)PCR扩增CagA基因的上下游同源臂,连入敲除质粒pSJHK4中,将质粒通过电击转化的方法转入Hp中,利用卡那霉素筛选CagA敲除突变株... 详细信息

目的用GFP拆分方法示踪幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,Hp)感染过程中CagA向胃上皮细胞内的转运过程。方法(1)PCR扩增CagA基因的上下游同源臂,连入敲除质粒pSJHK4中,将质粒通过电击转化的方法转入Hp中,利用卡那霉素筛选CagA敲除突变株ΔCagA。(2)PCR扩增绿色荧光蛋白GFP第11β折叠(GFP11)的基因序列并与CagA基因序列的3′端相连,将融合序列连入Hp-大肠埃希菌穿梭质粒pCHFHp中,并通过电击转化的方法转入ΔCagA中,利用氯霉素筛选CagA与GFP-11的融合表达突变株。(3)PCR扩增GFP第1-10β折叠(GFP1-10)的基因序列,包装慢病毒,利用病毒感染的方法将其转入胃上皮细胞GES-1中。将(2)中构建的Hp突变株以100∶1的感染复数感染(3)构建的表达GFP(1-10)的GES-1细胞体系,利用荧光显微镜观察细胞内的荧光情况,通过Western blot检测细胞内的CagA蛋白含量。结果构建了CagA敲除质粒pSJHK4-cagA,转入Hp中得到CagA敲除突变株ΔCagA。构建了CagA与GFP-11的融合表达质粒pCHFHp-cagAgfp11,转入ΔCagA中获得CagA与GFP-11的融合表达突变株HpG27-cagAgfp11。构建了含有GFP1-10基因序列的慢病毒,感染GES-1细胞后获得GFP1-10稳定表达的细胞株。在HpG27-cagAgfp11感染GES-1模型中,观察到细胞中的绿色荧光,说明CagA被转运到GES-1细胞内部,其融合表达的GFP-11与细胞内表达的GFP1-10结合发出荧光,Western blot结果也证实CagA被转运至胞内。结论在Hp感染GES-1细胞模型中,GFP拆分方法能够示踪CagA向细胞的转运过程,这为CagA的转运研究提供了新方法,有助于HpIV型分泌系统(T4SS)作用机制的深入研究。

关键词：幽门螺杆菌 CagA GFP拆分 T4SS

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人胎盘源间充质干细胞通过CD73/Nrf2途径抑制Th1细胞分泌TNF-α减轻急性移植物抗宿主病小鼠肝损伤机制研究

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中华微生物学和免疫学杂志 2023年第9期43卷 663-670页

作者：吴沄桦张恒超韩凯悦赵雅萱栾希英滨州医学院免疫学教研室烟台264003

目的:探究人胎盘源间充质干细胞(human placenta-derived mesenchymal stem cells,hPMSCs)通过CD73/核因子E2相关因子2(nuclear factor-erythroid 2-related factor 2,Nrf2)途径抑制CD4^(+)IFN-γ+T(Th1)细胞分泌TNF-α减轻急性移植物抗宿主病(graft versus-host disease,GVHD)小鼠肝损伤的作用机制。方法:流式细胞术分析GVHD小鼠外周血和肝组织中Th1细胞对TNF-α的表达以及CD4^(+)IFN-γ+TNF-α+T(TNF-α+Th1)细胞上PD-1的表达水平。采用苏木精-伊红(hematoxylin-eosin,HE)染色、马松(Masson)染色和免疫荧光染色观察各组GVHD小鼠肝组织病理变化,并进一步用HE染色观察各组GVHD小鼠皮肤和肺组织病理变化。体外建立非条件性外周血单个核细胞(peripheral blood mononuclear cells,PBMCs)向Th1细胞诱导方案,检测TNF-α+Th1细胞比例以及其Nrf2和磷酸化细胞核内核因子-κB(phosphorylated nuclear factor-kappa B,p-NF-κB)的平均荧光强度(mean fluorescence intensity,MFI)。结果:与正常对照组相比,GVHD发病高峰组小鼠外周血和肝组织中TNF-α+Th1细胞比例和TNF-α+Th1细胞对PD-1的表达明显升高(P<0.01);hPMSCs干预可降低小鼠外周血和肝组织中TNF-α+Th1细胞比例(P<0.001),促进小鼠外周血和肝组织中TNF-α+Th1细胞对PD-1的表达(P<0.01,P<0.001),然而shCD73对小鼠外周血和肝组织中TNF-α+Th1细胞的干预效果明显减弱(P<0.05,P<0.01)。肝组织病理学分析结果显示,肝脏中TNF-α+Th1细胞比例分别与Suzuki′s评分、胶原面积和α-SMA的MFI呈正相关(P<0.001)。同样,皮肤和肺组织病理学分析结果也显示,外周血中TNF-α+Th1细胞比例分别与皮肤的Cetkovic-Cvrlje评分和肺的Qiao Shukai评分呈正相关(P<0.001)。PBMCs活化实验也显示hPMSCs能下调TNF-α+Th1细胞比例(P<0.01),上调TNF-α+Th1细胞对PD-1的表达(P<0.05);进一步分析发现hPMSCs可增强TNF-α+Th1细胞中Nrf2的MFI(P<0.05),减弱p-NF-κB的MFI(P<0.01)。结论:hPMSCs可能通过CD73/Nrf2途径上调PD1的表达,抑制TNF-α+Th1细胞形成,进而减轻GVHD小鼠肝损伤。

关键词：人胎盘源间充质干细胞 Th1细胞 PD-1 CD73 Nrf2 NF-κB

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抗大别班达病毒人源单克隆抗体Fab片段的噬菌体展示文库构建

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中国病原生物学杂志 2024年第11期19卷 1251-1254,1259页

作者：徐家馨王静静王琳徐睿杰吴玉龙李波清乔媛媛滨州医学院基础医学院病原生物学教研室山东烟台264003

目的构建具有潜在中和活性的人源抗大别班达病毒(SFTSV)抗体Fab片段的噬菌体展示文库。方法从具有交叉中和活性的SFTS恢复期患者血液样本中分离外周血单个核细胞(PBMC)并提取总RNA,逆转录PCR得到cDNA。以cDNA为模板进行第一轮PCR扩增,... 详细信息

目的构建具有潜在中和活性的人源抗大别班达病毒(SFTSV)抗体Fab片段的噬菌体展示文库。方法从具有交叉中和活性的SFTS恢复期患者血液样本中分离外周血单个核细胞(PBMC)并提取总RNA,逆转录PCR得到cDNA。以cDNA为模板进行第一轮PCR扩增,分别获得抗体重链可变区(VH)和轻链可变区(Vκ和Vλ)序列。以pComb3XTT、pComb3Xλ质粒为模板,分别获得抗体重链恒定区(CH1)和轻链恒定区(Cκ、Cλ)序列。第二轮通过重叠延伸PCR(SOE-PCR)扩增VH和CH1得到Fd重链,同样扩增Vκ和Cκ、Vλ和Cλ得到完整的κ和λ抗体轻链。第三轮以上述扩增产物为模板再次进行SOE-PCR,得到完整的抗体Fab基因片段。将Fab基因片段插入到pComb3XSS噬菌粒中,构建噬菌体展示抗体文库。结果通过三轮PCR扩增出抗体Fab片段的序列,成功构建库容量为1.875×10^(9)的噬菌体展示抗体文库。结论利用具有交叉中和活性的SFTS恢复期患者血源建立了人源抗SFTSV Fab片段的噬菌体展示抗体文库,为下一步筛选特异性单克隆中和抗体建立了可靠的前期基础。

关键词： SFTSV 噬菌体展示抗体文库库容量人源单克隆抗体

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脱钙骨基质负载脂肪源性干细胞修复兔桡骨节段性骨缺损

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中国组织工程研究 2025年

作者：丁一凡尹文杰张力袁淑娅孙国驹张乃丽赵冬梅马丽娜滨州医学院基础医学院人体解剖学教研室滨州医学院第二临床医学院诊断学教研室

背景：脱钙骨基质是临床常用的骨修复材料，但在临床应用中发现存在成骨能力不足的问题，将脱钙骨基质与具有成骨潜力的细胞复合可有效提高成骨能力。目的：探讨脱钙骨基质复合脂肪源性干细胞提高桡骨节段性骨缺损修复能力的可行性。方... 详细信息

背景：脱钙骨基质是临床常用的骨修复材料，但在临床应用中发现存在成骨能力不足的问题，将脱钙骨基质与具有成骨潜力的细胞复合可有效提高成骨能力。目的：探讨脱钙骨基质复合脂肪源性干细胞提高桡骨节段性骨缺损修复能力的可行性。方法：以猪骨为原材料制备脱钙骨基质，采用酶解贴壁法体外分离、培养新西兰大白兔脂肪源性干细胞，流式细胞术检测细胞表型，并进行成骨、成脂诱导分化。将脂肪源性干细胞接种到脱钙骨基质复合培养3 d，倒置显微镜、扫描电镜观察脂肪源性干细胞在脱钙骨基质上的生长情况。取新西兰大白兔24只，随机分成4组，分别为空白对照组、脱钙骨基质组、脂肪源性干细胞-脱钙骨基质组和自体骨组，建立双侧桡骨节段缺损(12 mm)模型，按组别植入相应材料，术后4,8,12周通过拍摄X射线片、苏木精-伊红染色评价骨修复情况。结果与结论：(1)培养的细胞贴壁聚集生长，呈长梭形，CD44、CD71高表达，CD34、CD45、CD106低表达；成骨诱导分化后茜素红染色可见被染成橘红色的矿化结节；成脂诱导分化后油红O染色可见细胞内染成鲜红色的脂滴；(2)脂肪源性干细胞紧密复合于脱钙骨基表面，生长状态良好，并向孔隙内部生长；(3)X射线片和组织学观察显示，脂肪源性干细胞-脱钙骨基质组新西兰大白兔骨缺损修复情况优于空白对照组、脱钙骨基质组，与自体骨组相当。结果表明，负载脂肪源性干细胞可有效弥补脱钙骨基质成骨能力的不足。

关键词：脂肪源性干细胞脱钙骨基质桡骨节段性骨缺损成骨新西兰大白兔组织工程

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信号肽类型对新布尼亚病毒SFTSV Gn蛋白靶向表达特征影响的研究

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中国病原生物学杂志 2023年第2期18卷 132-135,140页

作者：张凡张娟徐家馨吴玉龙李波清乔媛媛滨州医学院基础医学院病原生物学教研室山东烟台264003

目的研究不同类型信号肽对新布尼亚病毒(SFTSV)包膜蛋白Gn表达的影响。方法以SFTSV(SD4毒株)M段为模板PCR扩增Gn基因,双酶切后分别连接至A16H和pHL表达载体,连接产物转染293T细胞,收集细胞和上清进行Western blot、免疫荧光以及质谱检... 详细信息

目的研究不同类型信号肽对新布尼亚病毒(SFTSV)包膜蛋白Gn表达的影响。方法以SFTSV(SD4毒株)M段为模板PCR扩增Gn基因,双酶切后分别连接至A16H和pHL表达载体,连接产物转染293T细胞,收集细胞和上清进行Western blot、免疫荧光以及质谱检测,分析Gn重组蛋白的表达情况;ELISA检测Gn重组蛋白的结合活性。结果成功构建缺失载体信号肽的pA16H-Gn质粒和包含信号肽的sp-pA16H-Gn质粒,以及携带另一种载体信号肽的pHL-Fc-Gn质粒。缺失载体信号肽的pA16H-Gn质粒在细胞内外均不表达Gn重组蛋白(rGn-Fc),包含A16H载体信号肽的sp-pA16H-Gn质粒在细胞内表达Gn重组蛋白(rGn-Fc),但不能分泌表达,包含pHL载体信号肽的pHL-Fc-Gn质粒可将Gn重组蛋白(rGn-Fc)分泌表达到胞外,且具有结合活性。结论载体本身携带的信号肽会影响SFTSV Gn重组蛋白的表达,不同信号肽影响重组蛋白的表达定位。该研究为SFTSV Gn重组蛋白的开发奠定了基础,同时也为SFTSV重组疫苗的研究提供了新思路。

关键词：发热伴血小板减少综合征病毒信号肽分泌重组蛋白

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IL-6通过促进人胎盘间充质干细胞上CD73的表达调节其迁移、黏附和增殖能力

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中华微生物学和免疫学杂志 2022年第12期42卷 940-948页

作者：张恒超赵楠楠张加深韩凯悦赵雅萱戚荣栾希英滨州医学院免疫学教研室烟台264003

目的探讨IL-6影响人胎盘间充质干细胞(human placenta-derived mesenchymal stem cells,hPMSCs)表面CD73的表达,以及调节其迁移、黏附和增殖的作用机制。方法流式细胞术(flow cytometry,FCM)和Western blot分析外源性IL-6和hPMSCs分泌的IL-6对hPMSCs上CD73表达的影响。单克隆抗体阻断和Western blot方法检测IL-6对hPMSCs中信号转导及转录激活蛋白3(signal transducer and activator of transcription 3,STAT3)磷酸化的影响。实时无标记动态细胞分析技术(real-time cellular analysis,RTCA)分析慢病毒转染后低表达CD73的hPMSCs和APCP(5′-α,β亚甲基-二磷酸腺苷)预处理后hPMSCs的迁移、黏附和增殖变化。结果FCM与Western blot检测结果显示,外源性和hPMSCs分泌的IL-6均能促进CD73在hPMSCs上的表达(P<0.001,P<0.01)。IL-6R抑制剂处理后,hPMSCs上CD73表达明显下降(P<0.01);IL-6可上调hPMSCs内STAT3磷酸化和CD73水平(P<0.05,P<0.01),而加入STAT3抑制剂后,CD73表达下降(P<0.01)。RTCA分析结果显示,敲低hPMSCs上CD73的表达后,hPMSCs的黏附和增殖能力均明显降低(P<0.01,P<0.05),迁移能力明显上升(P<0.05)。使用APCP抑制hPMSCs上CD73水解酶活性后,hPMSCs同样表现出黏附和增殖能力明显降低,而迁移能力增强(P<0.05)。结论IL-6能够通过JAK/STAT3通路增强hPMSCs上CD73的表达,进而影响其迁移、黏附和增殖能力。

关键词：间充质干细胞胎盘 IL-6 CD73 迁移黏附增殖

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烟台市成年男性居民吸烟变化情况及影响因素分析

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中国卫生统计 2024年第1期41卷 113-116页

作者：林杨陈琦李佳琏刘文昊陈裕玺孙红卫王玖滨州医学院公共卫生学院卫生统计学教研室 264003

目的了解烟台市成年居民2017年、 2021年吸烟变化趋势及影响因素,为政府部门以及相关机构采取针对性措施提供依据。方法采取多阶段分层抽样方法,于2017年、 2021年对在芝罘区居住6个月及以上,且年龄大于或等于18岁的男性居民进行横断... 详细信息

目的了解烟台市成年居民2017年、 2021年吸烟变化趋势及影响因素,为政府部门以及相关机构采取针对性措施提供依据。方法采取多阶段分层抽样方法,于2017年、 2021年对在芝罘区居住6个月及以上,且年龄大于或等于18岁的男性居民进行横断面调查,由经过统一培训的调查员采用问卷调查、以面对面询问的方式进行。单因素分析采用Wilcoxon秩和检验和卡方检验,多因素分析采用logistic回归分析。结果 2021年各年龄段吸烟率较2017年均有所下降,标化后整体吸烟率由2017年的37.89%降低为2021年的30.80%(χ^(2)=12.669,P<0.001);logistic回归结果显示,文化水平、吸烟致病风险认知、职业、饮酒情况、早餐食用情况为吸烟的独立影响因素。学历越低,吸烟率越高,以本科及以上学历为参考,小学及以下(OR=2.161, 95%CI=1.077~4.335)和初中大专(OR=1.795, 95%CI=1.132~2.848)吸烟率更高;饮酒频率越高,吸烟的概率越高(OR=1.196, 95%CI=1.047~1.367);过量饮酒频率越高,吸烟的概率越高(OR=1.445, 95%CI=1.184~1.764);吸烟致病风险认知越高,吸烟概率越低(OR=0.877, 95%CI=0.806~0.954);职业方面,以当前未就业者/专业技术人员为参考,商业/服务业人员吸烟概率较大(OR=1.761, 95%CI=1.241~2.499);每周早餐次数越多,吸烟概率越低(OR=0.660, 95%CI=0.541~0.805)。结论烟台市居民控烟效果整体较好,但部分人群吸烟率仍然很高,要针对重点人群采取针对性的控烟措施。

关键词：吸烟影响因素变化趋势烟草控制健康教育

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基于健康生态学模型的中国女性老年人群抑郁症状影响因素研究

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中国全科医学 2025年第13期28卷 1595-1600页

作者：张滢姜欣彤王萍玉滨州医学院公共卫生学院流行病学教研室山东省烟台市264003

背景我国老年人口基数庞大且增长迅速,抑郁是老年人群常见的情绪障碍和心理健康问题,而女性老年人群的心理健康问题日益成为社会关注的焦点。目的基于健康生态学模型多层次、全方位探讨女性老年人群抑郁症状的影响因素,为识别及干预中... 详细信息

背景我国老年人口基数庞大且增长迅速,抑郁是老年人群常见的情绪障碍和心理健康问题,而女性老年人群的心理健康问题日益成为社会关注的焦点。目的基于健康生态学模型多层次、全方位探讨女性老年人群抑郁症状的影响因素,为识别及干预中国女性老年人群的抑郁症状提供理论依据。方法于2024年1月提取中国健康与养老追踪调查(CHARLS)2020年调查数据,选取≥60岁女性老年人群为研究对象(n=4594)。基于健康生态学模型将影响因素分为个人特征层、行为特征层、人际网络层、生活和工作条件层、政策环境层5个层面,采用χ2检验和二分类Logistic回归模型探讨抑郁症状的影响因素,并建立中国女性老年人群抑郁症状健康生态学模型。结果中国女性老年人群抑郁症状检出率为48.06%(2208/4594)。Logistic回归分析结果显示,年龄≥80岁(OR=0.601,95%CI=0.449~0.804)、睡眠时间≥6 h(OR=0.561,95%CI=0.493~0.639)、对生活满意(OR=0.256,95%CI=0.199~0.330)、自评身体健康状况好(OR=0.459,95%CI=0.395~0.533)、城市户口(OR=0.717,95%CI=0.603~0.853)、对子女满意(OR=0.666,95%CI=0.472~0.940)、受教育程度为初中及以上(OR=0.712,95%CI=0.582~0.871)、家庭收入>5万元(OR=0.822,95%CI=0.704~0.959)、所在城市人均国内生产总值(GDP)为5万~10万元(OR=0.841,95%CI=0.730~0.970)是中国女性老年人群发生抑郁症状的保护因素(P<0.05);已失能(OR=1.786,95%CI=1.556~2.050)、患慢性病(OR=1.159,95%CI=1.014~1.324)、中部地区(OR=1.298,95%CI=1.107~1.522)和西部地区(OR=1.407,95%CI=1.183~1.675)是中国女性老年人群发生抑郁症状的危险因素(P<0.05)。结论中国女性老年人群抑郁症状检出率较高,影响因素较多,包括个人特征层的年龄,行为特征层的睡眠时间、对生活满意度、自评身体健康情况、失能情况、慢性病情况,人际网络层的户口类型、对子女满意度、地理分布,生活和工作条件层的受教育情况、家庭收入,政策环境层的所在城市人均GDP。应从各个层面,针对重点人群,联合采取有效干预措施,减少中国女性老年人群抑郁症状的发生。

关键词：抑郁健康生态学模型老年人女性患病率影响因素研究

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小鼠胃类器官培养中真菌污染的鉴定与控制

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中国病原生物学杂志 2022年第7期17卷 757-760,765页

作者：李菁张莹佟小涵何靜吕心张锐清杜运秋刘岩红李波清滨州医学院病原生物学教研室山东烟台264003 滨州医学院附属医院

目的探讨小鼠胃类器官培养过程中污染真菌的种类及其控制措施。方法利用小鼠胃成体干细胞培养胃类器官;分离小鼠胃类器官培养过程中产生的污染物,革兰染色观察镜下形态;将污染物分离培养,并进行真菌ITS基因测序分析;梯度浓度试验探究可... 详细信息

目的探讨小鼠胃类器官培养过程中污染真菌的种类及其控制措施。方法利用小鼠胃成体干细胞培养胃类器官;分离小鼠胃类器官培养过程中产生的污染物,革兰染色观察镜下形态;将污染物分离培养,并进行真菌ITS基因测序分析;梯度浓度试验探究可抑制污染物的药物及最适浓度。结果小鼠胃类器官培养过程中的污染物为出芽短梗霉菌;500μg/L的两性霉素B可有效抑制污染的出芽短梗霉菌;控制真菌污染后成功构建小鼠胃类器官,第9 d时检测类器官仍具有活性。结论出芽短梗霉菌可引起小鼠胃类器官培养过程中的真菌污染,通过添加两性霉素B控制真菌污染可成功构建小鼠胃类器官。

关键词：胃类器官真菌污染出芽短梗霉菌

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木犀草素对白血病K562/ADR细胞多药耐药的逆转作用及机制研究

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天津医药 2023年第12期51卷 1321-1325页

作者：周欣宇李京敏张婷贾秀红滨州医学院附属医院儿科 256603 滨州医学院基础医学院人体解剖学教研室

目的探究木犀草素(Lut)对慢性髓系白血病K562/ADR细胞多药耐药性的逆转作用及其机制。方法K562和K562/ADR细胞经不同浓度阿霉素(ADR)处理24 h后,采用CCK-8实验检测K562/ADR细胞耐药倍数。Lut单独或联合ADR作用K562/ADR细胞24 h后,采用C... 详细信息

目的探究木犀草素(Lut)对慢性髓系白血病K562/ADR细胞多药耐药性的逆转作用及其机制。方法K562和K562/ADR细胞经不同浓度阿霉素(ADR)处理24 h后,采用CCK-8实验检测K562/ADR细胞耐药倍数。Lut单独或联合ADR作用K562/ADR细胞24 h后,采用CCK-8实验检测Lut的细胞毒性及对ADR的增敏作用。取对数生长期K562/ADR细胞分为0μmol/L Lut组、2μmol/L Lut组、4μmol/L Lut组,采用流式细胞术检测细胞内ADR蓄积量的变化;RT-PCR法和Western blot法分别检测核因子E2相关因子2(Nrf2)、多药耐药相关蛋白1(MRP1)、P-糖蛋白(P-gp)、谷胱甘肽-S-转移酶pi(GST-pi)mRNA和蛋白的表达;谷胱甘肽(GSH)试剂盒检测细胞内GSH的含量。结果与K562细胞相比,K562/ADR细胞株对ADR具有明显的耐药性,耐药倍数为53.69倍。与0μmol/L Lut相比,不同浓度Lut作用于K562/ADR细胞后,细胞生长均受到不同程度的抑制(P<0.05),其中2、4μmol/L Lut对K562/ADR细胞的增殖抑制率<10%,为无毒性的Lut浓度。与0μmol/L Lut组相比,2、4μmol/L Lut组可明显增强ADR对K562/ADR的细胞增殖抑制率,增加细胞内ADR蓄积量,提高逆转耐药倍数,降低细胞内GSH含量,下调细胞中MRP1、P-gp、GST-pi、Nrf2 mRNA及蛋白的表达(P<0.05);且4μmol/L Lut作用效果较2μmol/L Lut更显著。结论Lut可抑制K562/ADR细胞增殖,逆转其对ADR的耐药性,其机制可能与Lut下调Nrf2、MRP1、P-gp、GST-pi表达,进而增加细胞内ADR蓄积量有关。

关键词：白血病髓系慢性 BCR-ABL阳性木犀草素抗药性多药核因子E2相关因子2 多药耐药相关蛋白1 P-糖蛋白谷胱甘肽-S-转移酶pi

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