目的:通过构建营养性肥胖雄性大鼠的模型,探讨下丘脑弓状核kisspeptin/kiss1r系统和促性腺激素释放激素(GnRH)的表达和作用,以及对下丘脑-垂体-睾丸轴(HPT)的影响。方法:孕14 d SD大鼠,其后代随机分为正常组和高能饲料组,构建营养性肥...
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目的:通过构建营养性肥胖雄性大鼠的模型,探讨下丘脑弓状核kisspeptin/kiss1r系统和促性腺激素释放激素(GnRH)的表达和作用,以及对下丘脑-垂体-睾丸轴(HPT)的影响。方法:孕14 d SD大鼠,其后代随机分为正常组和高能饲料组,构建营养性肥胖模型。将肥胖大鼠进一步分为对照组和实验组,实验组侧脑室注入kisspeptin。记录体重参数和内分泌激素的改变;免疫组化和Western印迹检测各组大鼠下丘脑弓状核中瘦素受体(LepR)、kisspeptin、kiss1r和GnRH的蛋白表达。qRT-PCR检测各组大鼠下丘脑弓状核GnRH mRNA的表达。结果:成功构建营养性肥胖大鼠,体重参数和内分泌激素改变明显。相比较正常组,对照组大鼠弓状核LepR、kisspeptin和GnRH表达减少,侧脑室注入kisspeptin后,实验组大鼠弓状核GnRH显著增加,血清LH和T水平显著升高,未见LepR和kiss1r的改变。结论:中枢注入kisspeptin可以显著改善由营养性肥胖引起的GnRH低表达,纠正HPT轴功能失调,进而改善生殖功能。
目的:探讨顺铂对LTEP-a-2细胞内miR-34b、Bcl-2、Smad3表达的影响,明确顺铂的抗癌机制.方法:体外培养LTEP-a-2细胞,实验组加入不同浓度顺铂,阴性对照组为不加顺铂的细胞;给药组细胞在给予相应浓度顺铂作用36小时后,置于倒置显微镜下观察药物处理前后LTEP-a-2细胞的形态变化;收集细胞,加入培养液吹打混匀成细胞重悬液,吸取100μl细胞重悬液Trypan Blue stain染色3分钟,倒置显微镜下观察计数,计算各实验组细胞存活率台盼蓝染色法计算细胞存活率;加药36小时后,每孔加入10μl 0.5％MTT溶液,培养4小时后,置酶标仪上测490nm处各孔OD值,并计算各组细胞抑制率;应用miRNA提取试剂盒按说明提取小RNA,为小RNA加poly A尾后进行反转录,得到cDNA后进行实时荧光定量PCR检测细胞内miR-34b的含量;将收集的各加药组细胞进行SDS-PAGE蛋白电泳,电泳结束后,加入Bcl-2及Smad3蛋白一抗4℃摇床过夜后用TBST洗膜,加入HRP标记的二抗置振荡器孵育,于暗室内曝光并拍照.
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