检索结果-内蒙古大学图书馆

中国病原生物学杂志 2024年第5期19卷 502-506,513页

作者：吴倩文刘书振张建辉曹新颖孙泽坤贾钰刚张莹李波清赵慧琳季晓飞滨州医学院病原生物学教研室山东烟台264003 滨州医学院第二临床医学院

目的用GFP拆分方法示踪幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,Hp)感染过程中CagA向胃上皮细胞内的转运过程。方法(1)PCR扩增CagA基因的上下游同源臂,连入敲除质粒pSJHK4中,将质粒通过电击转化的方法转入Hp中,利用卡那霉素筛选CagA敲除突变株... 详细信息

目的用GFP拆分方法示踪幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,Hp)感染过程中CagA向胃上皮细胞内的转运过程。方法(1)PCR扩增CagA基因的上下游同源臂,连入敲除质粒pSJHK4中,将质粒通过电击转化的方法转入Hp中,利用卡那霉素筛选CagA敲除突变株ΔCagA。(2)PCR扩增绿色荧光蛋白GFP第11β折叠(GFP11)的基因序列并与CagA基因序列的3′端相连,将融合序列连入Hp-大肠埃希菌穿梭质粒pCHFHp中,并通过电击转化的方法转入ΔCagA中,利用氯霉素筛选CagA与GFP-11的融合表达突变株。(3)PCR扩增GFP第1-10β折叠(GFP1-10)的基因序列,包装慢病毒,利用病毒感染的方法将其转入胃上皮细胞GES-1中。将(2)中构建的Hp突变株以100∶1的感染复数感染(3)构建的表达GFP(1-10)的GES-1细胞体系,利用荧光显微镜观察细胞内的荧光情况,通过Western blot检测细胞内的CagA蛋白含量。结果构建了CagA敲除质粒pSJHK4-cagA,转入Hp中得到CagA敲除突变株ΔCagA。构建了CagA与GFP-11的融合表达质粒pCHFHp-cagAgfp11,转入ΔCagA中获得CagA与GFP-11的融合表达突变株HpG27-cagAgfp11。构建了含有GFP1-10基因序列的慢病毒,感染GES-1细胞后获得GFP1-10稳定表达的细胞株。在HpG27-cagAgfp11感染GES-1模型中,观察到细胞中的绿色荧光,说明CagA被转运到GES-1细胞内部,其融合表达的GFP-11与细胞内表达的GFP1-10结合发出荧光,Western blot结果也证实CagA被转运至胞内。结论在Hp感染GES-1细胞模型中,GFP拆分方法能够示踪CagA向细胞的转运过程,这为CagA的转运研究提供了新方法,有助于HpIV型分泌系统(T4SS)作用机制的深入研究。

关键词：幽门螺杆菌 CagA GFP拆分 T4SS

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抗大别班达病毒人源单克隆抗体Fab片段的噬菌体展示文库构建

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中国病原生物学杂志 2024年第11期19卷 1251-1254,1259页

作者：徐家馨王静静王琳徐睿杰吴玉龙李波清乔媛媛滨州医学院基础医学院病原生物学教研室山东烟台264003

目的构建具有潜在中和活性的人源抗大别班达病毒(SFTSV)抗体Fab片段的噬菌体展示文库。方法从具有交叉中和活性的SFTS恢复期患者血液样本中分离外周血单个核细胞(PBMC)并提取总RNA,逆转录PCR得到cDNA。以cDNA为模板进行第一轮PCR扩增,... 详细信息

目的构建具有潜在中和活性的人源抗大别班达病毒(SFTSV)抗体Fab片段的噬菌体展示文库。方法从具有交叉中和活性的SFTS恢复期患者血液样本中分离外周血单个核细胞(PBMC)并提取总RNA,逆转录PCR得到cDNA。以cDNA为模板进行第一轮PCR扩增,分别获得抗体重链可变区(VH)和轻链可变区(Vκ和Vλ)序列。以pComb3XTT、pComb3Xλ质粒为模板,分别获得抗体重链恒定区(CH1)和轻链恒定区(Cκ、Cλ)序列。第二轮通过重叠延伸PCR(SOE-PCR)扩增VH和CH1得到Fd重链,同样扩增Vκ和Cκ、Vλ和Cλ得到完整的κ和λ抗体轻链。第三轮以上述扩增产物为模板再次进行SOE-PCR,得到完整的抗体Fab基因片段。将Fab基因片段插入到pComb3XSS噬菌粒中,构建噬菌体展示抗体文库。结果通过三轮PCR扩增出抗体Fab片段的序列,成功构建库容量为1.875×10^(9)的噬菌体展示抗体文库。结论利用具有交叉中和活性的SFTS恢复期患者血源建立了人源抗SFTSV Fab片段的噬菌体展示抗体文库,为下一步筛选特异性单克隆中和抗体建立了可靠的前期基础。

关键词： SFTSV 噬菌体展示抗体文库库容量人源单克隆抗体

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信号肽类型对新布尼亚病毒SFTSV Gn蛋白靶向表达特征影响的研究

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中国病原生物学杂志 2023年第2期18卷 132-135,140页

作者：张凡张娟徐家馨吴玉龙李波清乔媛媛滨州医学院基础医学院病原生物学教研室山东烟台264003

目的研究不同类型信号肽对新布尼亚病毒(SFTSV)包膜蛋白Gn表达的影响。方法以SFTSV(SD4毒株)M段为模板PCR扩增Gn基因,双酶切后分别连接至A16H和pHL表达载体,连接产物转染293T细胞,收集细胞和上清进行Western blot、免疫荧光以及质谱检... 详细信息

目的研究不同类型信号肽对新布尼亚病毒(SFTSV)包膜蛋白Gn表达的影响。方法以SFTSV(SD4毒株)M段为模板PCR扩增Gn基因,双酶切后分别连接至A16H和pHL表达载体,连接产物转染293T细胞,收集细胞和上清进行Western blot、免疫荧光以及质谱检测,分析Gn重组蛋白的表达情况;ELISA检测Gn重组蛋白的结合活性。结果成功构建缺失载体信号肽的pA16H-Gn质粒和包含信号肽的sp-pA16H-Gn质粒,以及携带另一种载体信号肽的pHL-Fc-Gn质粒。缺失载体信号肽的pA16H-Gn质粒在细胞内外均不表达Gn重组蛋白(rGn-Fc),包含A16H载体信号肽的sp-pA16H-Gn质粒在细胞内表达Gn重组蛋白(rGn-Fc),但不能分泌表达,包含pHL载体信号肽的pHL-Fc-Gn质粒可将Gn重组蛋白(rGn-Fc)分泌表达到胞外,且具有结合活性。结论载体本身携带的信号肽会影响SFTSV Gn重组蛋白的表达,不同信号肽影响重组蛋白的表达定位。该研究为SFTSV Gn重组蛋白的开发奠定了基础,同时也为SFTSV重组疫苗的研究提供了新思路。

关键词：发热伴血小板减少综合征病毒信号肽分泌重组蛋白

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干扰素调控COVID-19发生及发展的研究进展

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病毒学报 2025年

作者：张遥马宏炜何进伟张芳琳延安大学延安医学院病原生物学教研室空军军医大学基础医学院微生物与病原生物学教研室

自2019年12月至今，严重急性呼吸系统综合征冠状病毒2(Severe acute respiratory syndrome coronavirus 2,SARS-CoV-2)感染所致的新型冠状病毒肺炎（Coronavirus disease 2019, COVID-19）疫情蔓延全球，对人类健康和社会经济产生了严重影响。病毒感染后机体可启动以干扰素（Interferon,IFN）为核心的固有免疫应答，而IFN作为一种重要的固有免疫分子，具有抗病毒和调节免疫反应的双重作用。近期研究表明，SARS-CoV-2可通过多种机制逃逸IFN反应，且在IFN应答缺陷或机体产生IFN自身抗体的条件下，COVID-19患者重症率增加、预后差，提示IFN对COVID-19病情转归具有重要调控作用。本综述将重点讨论IFN在SARS-CoV-2感染中的作用及其对疾病预后的影响，为COVID-19的防控和治疗提供理论支持。

关键词： IFN SARS-CoV-2 COVID-19 固有免疫疾病预后

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没食子酸与氯硝柳胺联合灭螺作用研究

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中国寄生虫学与寄生虫病杂志 2024年第2期42卷 251-258页

作者：郑涛刘佳豪李彬李佳珊聂娟熊涛湖南中医药大学医学院病原生物学教研室长沙410006

目的本研究旨在探讨具有交替氧化酶(AOX)抑制活性的中药单体分子没食子酸和氯硝柳胺的联合灭螺效果及其灭螺机制。方法阴性钉螺采自湖北省公安县,随机分为7组,空白对照组(H_(2)O),实验组分别为氯硝柳胺(N1组:0.06 mg/L,N2组:0.1 mg/L)... 详细信息

目的本研究旨在探讨具有交替氧化酶(AOX)抑制活性的中药单体分子没食子酸和氯硝柳胺的联合灭螺效果及其灭螺机制。方法阴性钉螺采自湖北省公安县,随机分为7组,空白对照组(H_(2)O),实验组分别为氯硝柳胺(N1组:0.06 mg/L,N2组:0.1 mg/L)和没食子酸(G1组:0.8 g/L,G2组:1.6 g/L)单独使用,及联合使用(M1组:0.06 mg/L氯硝柳胺+0.8 g/L没食子酸,M2组:0.06 mg/L氯硝柳胺+1.6 g/L没食子酸)。检测各组钉螺经药物浸杀12、24和48 h后的存活率,液氮包埋后切片并染色,光学显微镜下观察并定量分析,检测钉螺软体切片中细胞色素C氧化酶(CCO)和乳酸脱氢酶(LDH)的相对酶活力值,以平均光密度值表示。钉螺匀浆后离心、取上清,DCFH-DA探针共孵育,用BCA蛋白定量试剂盒测定总蛋白含量,多功能酶标仪检测荧光强度,ROS值以样品测得的荧光强度(FI)除以蛋白质浓度(μg)的值表示,用总超氧化物歧化酶(SOD)活性检测试剂盒测定SOD水平。钉螺死亡率的差异分析采用卡方检验;CCO活性和氧化应激水平的数据用Levene’s Test确定方差齐性后,用Tukey HSD的多重比较方法进行不同组间的两两比较。结果G1和G2组浸杀后未表现出显著的灭螺效应。M1组和M2组在浸杀48 h后的钉螺死亡率分别达到70.0%(56/80)和84.2%(101/120),均高于N1组(44.4%,32/72)(χ2=9.13、32.52,均P<0.05);与N2组相比,钉螺死亡率差异均无统计学意义(χ2=0.11、2.58,均P>0.05)。N1和N2组钉螺的LDH活性呈下降趋势;M1组和M2组钉螺体内CCO和LDH活性均降低(均P<0.05),48 h后M1组的LDH活性在肌肉组织和肝脏分别为0.152±0.002和0.172±0.016,CCO活性分别为0.180±0.022和0.335±0.014;M2组的LDH活性为0.166±0.008和0.173±0.022,CCO活性为0.199±0.009和0.294±0.015,与空白对照组LDH活性(0.229±0.006和0.227±0.010)、CCO活性(0.259±0.008和0.428±0.024)的差异均有统计学意义(均P<0.05)。M1组在处理后24 h的SOD活性为(5.56±0.91)UI/g,高于空白对照组的(5.26±0.08)UI/g(P<0.05);M2组的SOD活性在处理后12、24和48 h呈现先升高后降低的趋势[(2.40±0.45)、(8.14±0.15)、(1.60±0.21)UI/g],与空白对照组在相应时间点的(3.54±0.94)、(5.26±0.08)、(5.10±0.87)UI/g相比,变化趋势显著(均P<0.05)。M1组在处理后24 h和48 h的ROS水平分别为(1619.00±168.25)FI/μg和(1866.65±211.79)FI/μg,M2组在48 h后的ROS水平达到(2451.29±195.91)FI/μg,均高于空白对照组在相应时间点的(802.37±114.69)、(1393.81±86.12)FI/μg(均P<0.05)。结论没食子酸显著增强了低浓度氯硝柳胺的灭螺效果,其灭螺机制为通过阻断AOX的代偿上调,进一步加重了钉螺能量代谢失衡和氧化应激压力。

关键词：湖北钉螺没食子酸氯硝柳胺灭螺效果葡萄糖代谢酶活性氧化应激水平

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2022—2023年承德市呼吸道合胞病毒的暴发流行及其临床特征研究

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中华微生物学和免疫学杂志 2024年第2期44卷 155-161页

作者：马倩格高姝畅郭心悦严梦瑶户祖熙谢广成李涛承德医学院第二临床学院儿科承德067000 承德医学院病原生物学教研室承德067000

目的确定呼吸道合胞病毒(respiratory syncytial virus,RSV)在承德市的流行情况及临床特征。方法收集2022年8月—2023年6月因呼吸道感染在承德市中心医院儿科住院治疗的患儿咽拭子478份及其临床信息,实时定量PCR检测A亚型和B亚型RSV的... 详细信息

目的确定呼吸道合胞病毒(respiratory syncytial virus,RSV)在承德市的流行情况及临床特征。方法收集2022年8月—2023年6月因呼吸道感染在承德市中心医院儿科住院治疗的患儿咽拭子478份及其临床信息,实时定量PCR检测A亚型和B亚型RSV的分子流行情况,对RSV感染患者的临床特征进行分析。结果67.57%(323/478)的住院患儿为RSV阳性,RSV呈暴发流行且均为RSV-A型,2022年11—12月和2023年5—6月为RSV-A型的2次感染高峰。RSV-A型阳性患儿中,86.07%(278/323)为合并其他病原体检出病例,其中与细菌共检出的例数最多,以肺炎链球菌为主,肺炎克雷伯菌次之。流感病毒A型是最常见的共检出病毒。与RSV-A型共检出患儿组相比,RSV-A型单独检出组的乳酸脱氢酶(Z=2.396,P=0.017)较高,且高于正常高值;RSV-A型共检出组的白细胞计数(Z=2.417,P=0.016)、中性粒细胞比例(Z=3.218,P=0.001)、C-反应蛋白(Z=1.998,P=0.046)和肌酐(Z=2.107,P=0.035)较高,淋巴细胞比例(Z=3.205,P=0.001)较低,但位于正常值范围。RSV-A型合并检出细菌或其他病毒的患儿临床特征无差异(P均>0.05)。结论RSV-A型是承德市2022—2023年呼吸道感染患儿的主要病原体,且多与细菌共检出。RSV-A型检测阳性患儿的临床特征与RSV-A型是否合并其他呼吸道病原体情况相关。

关键词：呼吸道合胞病毒流行特征临床特征儿童

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小鼠胃类器官培养中真菌污染的鉴定与控制

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中国病原生物学杂志 2022年第7期17卷 757-760,765页

作者：李菁张莹佟小涵何靜吕心张锐清杜运秋刘岩红李波清滨州医学院病原生物学教研室山东烟台264003 滨州医学院附属医院

目的探讨小鼠胃类器官培养过程中污染真菌的种类及其控制措施。方法利用小鼠胃成体干细胞培养胃类器官;分离小鼠胃类器官培养过程中产生的污染物,革兰染色观察镜下形态;将污染物分离培养,并进行真菌ITS基因测序分析;梯度浓度试验探究可... 详细信息

目的探讨小鼠胃类器官培养过程中污染真菌的种类及其控制措施。方法利用小鼠胃成体干细胞培养胃类器官;分离小鼠胃类器官培养过程中产生的污染物,革兰染色观察镜下形态;将污染物分离培养,并进行真菌ITS基因测序分析;梯度浓度试验探究可抑制污染物的药物及最适浓度。结果小鼠胃类器官培养过程中的污染物为出芽短梗霉菌;500μg/L的两性霉素B可有效抑制污染的出芽短梗霉菌;控制真菌污染后成功构建小鼠胃类器官,第9 d时检测类器官仍具有活性。结论出芽短梗霉菌可引起小鼠胃类器官培养过程中的真菌污染,通过添加两性霉素B控制真菌污染可成功构建小鼠胃类器官。

关键词：胃类器官真菌污染出芽短梗霉菌

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结核病蛋白亚单位疫苗佐剂研究进展

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中华微生物学和免疫学杂志 2024年第6期44卷 489-500页

作者：周帅牛红霞浙江中医药大学基础医学院病原生物与免疫学教研室杭州310053

结核病是由结核分枝杆菌感染引起的全球传染病,是导致人类死亡的十大主要原因之一。卡介苗(BCG)是目前唯一临床应用的结核病疫苗,但其对成人结核病的保护作用不明确。在结核病新型疫苗中,蛋白亚单位疫苗因其成分明确、安全性高的特点,... 详细信息

结核病是由结核分枝杆菌感染引起的全球传染病,是导致人类死亡的十大主要原因之一。卡介苗(BCG)是目前唯一临床应用的结核病疫苗,但其对成人结核病的保护作用不明确。在结核病新型疫苗中,蛋白亚单位疫苗因其成分明确、安全性高的特点,且具有强化BCG效应的优势,近年来备受关注。然而,亚单位结核病疫苗中的蛋白抗原所诱导的免疫应答较弱,通常需要佐剂辅助以增强其免疫效果。本综述旨在关注结核病疫苗新制剂中使用的各类佐剂(包括已进入临床试验阶段和尚处于临床前开发阶段的佐剂),对各类佐剂的优缺点及可应用性进行客观评价,并指出目前佐剂研究中存在的问题及未来的研究方向。

关键词：结核病亚单位疫苗佐剂中药佐剂

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粪菌移植治疗消化道内外疾病的研究进展

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中国微生态学杂志 2024年第11期36卷 1354-1359页

作者：刘笑彤杜晓安王文君孟欣然刘宏鑫范丽君李运清济宁医学院临床医学院山东济宁272067 济宁医学院病原生物学教研室济宁市药理学重点实验室

粪菌移植(fecal microbiota transplantation,FMT)是将健康个体粪便中的菌群分离并移植到患者肠道内的特殊治疗方式,目前已广泛用于治疗艰难梭菌感染和炎症性肠病等以菌群失调为特征的消化道内疾病。此外,FMT也被用于改善一系列消化道... 详细信息

粪菌移植(fecal microbiota transplantation,FMT)是将健康个体粪便中的菌群分离并移植到患者肠道内的特殊治疗方式,目前已广泛用于治疗艰难梭菌感染和炎症性肠病等以菌群失调为特征的消化道内疾病。此外,FMT也被用于改善一系列消化道外疾病,如抑郁症、代谢综合征和COVID-19感染等。通过临床实践,人们认识到FMT在治疗菌群相关疾病方面具有较大的潜力,但对FMT后微生物定植的规律尚缺乏全面、系统的认识,这已成为限制FMT广泛应用的主要因素。本文对FMT治疗消化道内外疾病的临床研究进行了总结和详细阐述,以期为FMT的进一步临床应用提供理论指导。

关键词：粪菌移植艰难梭菌感染炎症性肠病代谢综合征抑郁症

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四次跨膜蛋白在病毒感染中作用的研究进展

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病毒学报 2023年第2期39卷 599-608页

作者：李婉莹叶伟薛亚娟张芳琳延安大学医学院病原生物学教研室延安716000 空军军医大学、基础医学院微生物与病原生物学教研室西安710032

四次跨膜蛋白(Tetraspanins,Tspans)是一个作为“细胞膜主要组织者”的跨膜糖蛋白家族。它们与其他膜蛋白横向结合形成富含Tspans的微结构域(Tetraspanin-enriched microdomains,TEMs),在细胞表面建立了独特的平台,从而直接或间接参与... 详细信息

四次跨膜蛋白(Tetraspanins,Tspans)是一个作为“细胞膜主要组织者”的跨膜糖蛋白家族。它们与其他膜蛋白横向结合形成富含Tspans的微结构域(Tetraspanin-enriched microdomains,TEMs),在细胞表面建立了独特的平台,从而直接或间接参与病毒感染的多个阶段。Tspans在调控病毒进入、转录、复制和组装释放等阶段均发挥了重要作用。研究Tspans在病毒感染中的作用,可以为病毒感染疾病的临床药物研发提供新靶点。本文综述了Tspans在病毒感染中作用的研究进展。

关键词：四次跨膜蛋白病毒感染

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