目的探讨高糖培养肾小管上皮细胞中miR-27 a调控分泌型卷曲相关蛋白1(Sfrp1)对细胞向间质细胞转分化(EMT)的影响。方法将NRK-52E细胞分为正常糖(NG组)和高糖(HG组)两组,利用RT-qPCR检测NRK-52E细胞中miR-27 a、Sfrp 1的表达情况,Western blot检测NRK-52E细胞中Sfrp1、E-钙粘蛋白(E-cadherin)、α平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、Ⅳ型胶原(col-Ⅳ)的蛋白表达;将NRK-52E细胞分为野生型Sfrp 1-3′UTR+miR-27 a mimics阴性对照组(wt Sfrp 1-3′UTR+miR-27 a mnc组)、野生型Sfrp 1-3′UTR+miR-27 a mimics组(wt Sfrp 1-3′UTR+miR-27 a m组)、突变型Sfrp 1-3′UTR+miR-27 a mimics阴性对照组(mt Sfrp 1-3′UTR+miR-27 a mnc组)以及突变型Sfrp 1-3′UTR+miR-27 a mimics组(mt Sfrp 1-3′UTR+miR-27 a m),通过双荧光素酶报告基因检测系统检测萤火虫荧光值与海肾荧光值的比值,验证miR-27 a对Sfrp1表达的影响;在高糖诱导下,利用细胞转染实验将NRK-52E细胞设miR-27 a mimics阴性对照组(miR-27 a mnc组)、miR-27 a mimics组(miR-27 a m组)、miR-27 a inhibitor阴性对照组(miR-27 a inc组)以及miR-27 a inhibitor组(miR-27 a i组),通过RT-qPCR检测各组细胞中miR-27 a、Sfrp 1 mRNA的表达,Western blot检测各组细胞中Sfrp1、E-cadherin、α-SMA、col-Ⅳ蛋白的表达水平。结果RT-qPCR结果显示,与NG组比较,HG组miR-27 a表达水平增高(P<0.05),Sfrp 1 mRNA表达水平降低(P<0.05);Western blot结果显示,与NG组比较,HG组α-SMA、col-Ⅳ蛋白水平增高(P<0.05),Sfrp1、E-cadherin蛋白表达水平降低(P<0.05);荧光素酶报告基因显示,wt Sfrp 1-3′UTR+miR-27 a m组荧光素酶活性明显低于wt Sfrp 1-3′UTR+miR-27 a mnc组(P<0.05),而mt Sfrp 1-3′UTR+miR-27a mnc组与mt Sfrp 1-3′UTR+miR-27 a m组荧光素酶活性未见明显变化(P>0.05);细胞转染RT-qPCR结果显示,与miR-27 a mnc组比较,miR-27 a m组miR-27 a表达增加(P<0.05),而Sfrp 1 mRNA表达降低(P<0.05);与miR-27 a inc组比较,miR-27 a i组miR-27 a表达降低(P<0.05),而Sfrp 1 mRNA表达增加(P<0.05);Western blot结果显示,与miR-27 a mnc组比较,miR-27 a m组α-SMA、col-Ⅳ蛋白表达增加(P<0.05),Sfrp1、E-cadherin蛋白表达降低(P<0.05);与miR-27a inc组比较,miR-27 a i组α-SMA、col-Ⅳ蛋白表达降低(P<0.05),Sfrp1、E-cadherin蛋白表达增加(P<0.05)。结论miR-27 a可以通过抑制Sfrp1的表达促进肾小管EMT,参与糖尿病肾病肾纤维化的发生。
目的筛选三阴性乳腺癌(triple-negative breast cancer,TNBC)预后相关基因,并探讨影响TNBC预后的可能机制。方法GEO和TCGA数据库下载表达谱数据,分别使用GEO2R和R语言程序包筛选TNBC和非三阴性乳腺癌差异基因;GO和KEGG富集分析差异基因...
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目的筛选三阴性乳腺癌(triple-negative breast cancer,TNBC)预后相关基因,并探讨影响TNBC预后的可能机制。方法GEO和TCGA数据库下载表达谱数据,分别使用GEO2R和R语言程序包筛选TNBC和非三阴性乳腺癌差异基因;GO和KEGG富集分析差异基因的分子功能及信号通路;生存曲线和单变量Cox回归分析筛选预后相关基因,ROC曲线进一步验证;Cibersort算法探讨预后相关基因与免疫细胞浸润的关系;HPA数据库在线分析预后相关基因在正常乳腺组织中的分布。结果获得TNBC差异基因217个,富集在雌激素相关信号通路,生物过程主要富集在乳腺上皮发育、腺体发育、腺体形态发生等,细胞成分主要富集在微绒毛膜、细胞基底外侧膜等,分子功能主要富集于跨膜受体蛋白酪氨酸激酶活性等;筛选出7个预后相关基因,ROC曲线显示AUC值>0.8的有COL9A3;免疫浸润分析显示COL9A3表达与记忆B细胞和单核细胞的浸润程度呈负相关,与初始B细胞和中性粒细胞的浸润程度呈正相关。单细胞测序结果显示COL9A3主要分布在成纤维细胞中。结论筛选出COL9A3可能作为TNBC预后相关基因;TNBC的发生发展可能与雌激素受体相关信号通路、细胞基底外侧膜和基膜的改变以及单核细胞、中性粒细胞的浸润及EMT的进程有关,为TNBC临床治疗提供参考。
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