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Kisspeptin/kiss1 r系统在营养性肥胖雄性大鼠下丘脑弓状核的表达以及对下丘脑-垂体-睾丸轴的影响

中华男科学杂志 2014年第9期20卷 792-797页

作者：刘冉冉张洪芹滨州医学院烟台校区组织学与胚胎学教研室山东烟台264003

目的:通过构建营养性肥胖雄性大鼠的模型,探讨下丘脑弓状核kisspeptin/kiss1r系统和促性腺激素释放激素(GnRH)的表达和作用,以及对下丘脑-垂体-睾丸轴(HPT)的影响。方法:孕14 d SD大鼠,其后代随机分为正常组和高能饲料组,构建营养性肥... 详细信息

目的:通过构建营养性肥胖雄性大鼠的模型,探讨下丘脑弓状核kisspeptin/kiss1r系统和促性腺激素释放激素(GnRH)的表达和作用,以及对下丘脑-垂体-睾丸轴(HPT)的影响。方法:孕14 d SD大鼠,其后代随机分为正常组和高能饲料组,构建营养性肥胖模型。将肥胖大鼠进一步分为对照组和实验组,实验组侧脑室注入kisspeptin。记录体重参数和内分泌激素的改变;免疫组化和Western印迹检测各组大鼠下丘脑弓状核中瘦素受体(LepR)、kisspeptin、kiss1r和GnRH的蛋白表达。qRT-PCR检测各组大鼠下丘脑弓状核GnRH mRNA的表达。结果:成功构建营养性肥胖大鼠,体重参数和内分泌激素改变明显。相比较正常组,对照组大鼠弓状核LepR、kisspeptin和GnRH表达减少,侧脑室注入kisspeptin后,实验组大鼠弓状核GnRH显著增加,血清LH和T水平显著升高,未见LepR和kiss1r的改变。结论:中枢注入kisspeptin可以显著改善由营养性肥胖引起的GnRH低表达,纠正HPT轴功能失调,进而改善生殖功能。

关键词： kisspeptin/kiss1r系统促性腺激素释放激素瘦素受体肥胖下丘脑-垂体-睾丸轴大鼠

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甲状腺激素对胸腺上皮细胞CK19蛋白表达的影响

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中国组织化学与细胞化学杂志 2009年第5期18卷 541-546页

作者：王东殷彦君马云崔春红冯国营梁琛滨州医学院组织胚胎学教研室滨州256603 滨州医学院形态学实验室滨州256603 山东万杰医学院组织胚胎学教研室淄博255213

目的探讨甲状腺激素对胸腺的发育的影响及可能的机制。方法将12只怀孕4d的大鼠随机分成A组和B组,A组正常饮水,B组孕鼠供以含有0.02%甲巯咪唑的饮水制备仔鼠甲状腺功能低下动物模型,将A组的仔鼠随机分成对照组和甲状腺素钠组,将B组的仔... 详细信息

目的探讨甲状腺激素对胸腺的发育的影响及可能的机制。方法将12只怀孕4d的大鼠随机分成A组和B组,A组正常饮水,B组孕鼠供以含有0.02%甲巯咪唑的饮水制备仔鼠甲状腺功能低下动物模型,将A组的仔鼠随机分成对照组和甲状腺素钠组,将B组的仔鼠随机分成甲低组和甲低+甲状腺素钠组。甲状腺素钠组和甲低+甲状腺素钠组于出生后15d给予腹腔注射甲状腺素钠(0.5mg/kg体重,1次/d),连续给药25 d。所有动物于出生后40d麻醉处死,测定仔鼠的胸腺重量及脏器指数;采用放射免疫技术测定仔鼠血清中三碘甲状腺原氨酸(triiodothyronine,T3)、四碘甲状腺原氨酸(tetraiodothyronine,T4)、促甲状腺激素(thyroid-stimulatinghormone,TSH)水平,免疫组织化学技术检测胸腺上皮细胞细胞角蛋白19(cytokeratin19,CK19)蛋白的表达量。结果与对照组比较,甲状腺素钠组仔鼠血清中T3、T4显著升高,TSH减少,胸腺重量增大;甲低组仔鼠血清中T3、T4明显降低,TSH显著增高,胸腺重量降低,胸腺上皮细胞CK19蛋白表达减少。与甲低组比较,甲低+甲状腺素钠组仔鼠血清中T3、T4升高,TSH降低,胸腺指数增大,胸腺上皮细胞CK19蛋白的表达明显增多。结论甲状腺激素可以通过影响胸腺上皮细胞CK19的表达量,使胸腺发育或退化。

关键词：甲状腺激素胸腺上皮细胞细胞角蛋白19

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镉对小鼠附睾的损害及维生素E的拮抗作用

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中国地方病学杂志 2005年第4期24卷 386-388页

作者：黄悦苏敏姜俸蓉许庭良贵阳医学院组织胚胎学教研室 550004

目的研究慢性染镉对小鼠附睾的损害及维生素E(VitaminE,VE)的保护作用。方法健康昆明种小鼠75只(体质量28～35g)随机分成3组:镉组(氯化镉2mg/kg,皮下注射,2次/周,共3个月)、VE组(染镉同时给VE10mg·kg-1·d-1,灌胃)和对照组(注... 详细信息

目的研究慢性染镉对小鼠附睾的损害及维生素E(VitaminE,VE)的保护作用。方法健康昆明种小鼠75只(体质量28～35g)随机分成3组:镉组(氯化镉2mg/kg,皮下注射,2次/周,共3个月)、VE组(染镉同时给VE10mg·kg-1·d-1,灌胃)和对照组(注射等量生理盐水)。通过HE染色、免疫组化细胞凋亡(Tunel法)染色和透射电镜技术观察小鼠附睾管上皮细胞细微结构的改变,对各组附睾管上皮细胞形态作立体定量分析,并对凋亡细胞进行计数。结果①镉组小鼠附睾上皮细胞明显受损,细胞出现变性、坏死。VE组仅少数小鼠附睾局部上皮细胞受到损伤。②镉组与对照组相比,小鼠附睾上皮细胞胞核的平均截面周长、平均截面积、平均表面积、平均体积和体积密度均显著缩小(P<0.05);VE组附睾上皮细胞胞核的上述参数值与对照组相比差异无统计学意义(P>0.05),而与镉组相比,相应形态参数值明显增大(P<0.05)。③凋亡细胞计数表明,镉组附睾上皮细胞凋亡比对照组明显增多(P<0.01);VE组细胞凋亡比镉组明显减少(P<0.01),而与对照组比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论①慢性染镉可引起小鼠附睾管上皮细胞形态损害;②镉有促进小鼠附睾管上皮细胞凋亡的作用;③VE对镉引起的小鼠附睾管上皮细胞损害有保护作用;④VE对镉所致的小鼠附睾管上皮细胞凋亡有拮抗作用。

关键词：镉维生素E 附睾细胞凋亡

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慢性砷中毒大鼠肾脏蛋白激酶C-α达的研究

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中国地方病学杂志 2012年第2期31卷 159-161页

作者：李远慧钱立全李金华贵阳医学院组织胚胎学教研室 550004

【摘要】目的探讨蛋白激酶C（PKC）-α在慢性砷中毒大鼠肾脏的表达及作用。方法将60只清洁级SD大鼠按体质量随机分为高砷（10．0mg／kg）、低砷（0．4mg／kg）组和对照（蒸馏水）组，采用自由饮水方式进行染毒，每10天称体质量1次，调... 详细信息

【摘要】目的探讨蛋白激酶C（PKC）-α在慢性砷中毒大鼠肾脏的表达及作用。方法将60只清洁级SD大鼠按体质量随机分为高砷（10．0mg／kg）、低砷（0．4mg／kg）组和对照（蒸馏水）组，采用自由饮水方式进行染毒，每10天称体质量1次，调节给药量。连续染毒4个月，测血砷、尿砷。取大鼠肾脏用免疫组织化学SABC法，观察肾脏PKC-α阳性细胞并计数，采用Biomias图像分析软件测定其平均灰度值。结果高砷组和低砷组的SD大鼠肾脏近端小管PKC-α阳性细胞计数[（3．62±1．90）、（10．07±3．22）个／视野]、肾小球PKC-α阳性细胞计数[（3．62±1．90）、（10．07±3．22）个／视野]均低于对照组[（60．00±9．63）、（18．57±2．71）个／视野，P均〈O．05），高砷组和低砷组的大鼠尿砷[（7366．624±1086．50）、（1744．314±300．12）μg／L]、血砷[（31．59±9．24）、（16．58±2．08）pr,／L]均高于对照组[（18．97±3．58）、（18．974±3．58）lxg／L，P均〈0．05]。高砷组和低砷组的SD大鼠肾脏近端小管、肾小球PKC-α阳性细胞平均灰度值（142．79±11．16、122．15±5．91）均高于对照组（114．33±6．70，P均〈0．05）。结论砷可使SD大鼠肾脏PKC-α阳性细胞表达减少。

关键词：砷中毒蛋白激酶C-α 肾大鼠

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Cpd5对人卵巢癌SKOV3细胞增殖抑制和凋亡诱导作用

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中国临床药理学与治疗学 2009年第10期14卷 1121-1127页

作者：陈莉霍冠华吕耀凤张芹滨州医学院妇产科学教研室滨州医学院组织胚胎学教研室

目的:观察Cpd5[2-(2-巯基乙醇)-3-甲基-1,4-萘醌,Compound5]对人卵巢癌SKOV3细胞增殖和凋亡的影响。方法:MTT法观察Cpd5对SK-OV3细胞的生长抑制作用,AnnexinV/PI双标记流式细胞术检测Cpd5对SKOV3细胞的凋亡诱导,Hoechst-33258染色荧光显微镜观察细胞凋亡形态。结果:5、10、20、30、40、50、60μmol/LCpd5处理SKOV3细胞48h,生长抑制率分别为2.77%、5.19%、10.61%、41.15%、71.37%、82.90%、89.81%。不同时间点(12、24、48和72h)检测,细胞生长抑制率存在剂量-时间依赖关系。流式细胞术检测,30μmol/LCpd5处理12、24和48h后,细胞凋亡率分别达9.25%、20.07%、56.16%;50μmol/L组的细胞凋亡率明显高于30μmol/L,且随时间增加而显著增加。用40、50和60μmol/LCpd5处理细胞12h,光镜观察即可见明显的形态学改变。荧光显微镜观察:AnnexinV-EGFP/PI双染显示,实验组比阴性对照组细胞凋亡率明显增多;Cpd5作用24、48h后,Hoechst-33258染色可见细胞出现明显的凋亡形态,20μmol/L浓度组凋亡率增加,30、40、50、60μmol/L各组细胞凋亡率显著增加。结论:Cpd5能以剂量-时间依赖的方式抑制SKOV3细胞增殖并诱导凋亡,是潜在的抗卵巢癌新化合物。

关键词： Cpd5 细胞凋亡卵巢癌 SKOV3

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半胱氨酸蛋白酶-8和P53在慢性砷中毒大鼠肾近端小管表达的研究

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中国地方病学杂志 2012年第5期31卷 531-533页

作者：钱立全李远慧孔祥照金婷婷李娜贵阳医学院组织胚胎学教研室 550004

目的探讨慢性砷中毒大鼠肾近端小管细胞半胱氨酸蛋白酶-8（caspase-8）和P53表达致肾脏损伤的分子机制。方法60只SD大鼠分为对照组，低、高剂量组，每组20只，高、低剂量组分别给予三氧化二砷（As2O3）10．0、0．4mg／kg水溶液自由饮用... 详细信息

目的探讨慢性砷中毒大鼠肾近端小管细胞半胱氨酸蛋白酶-8（caspase-8）和P53表达致肾脏损伤的分子机制。方法60只SD大鼠分为对照组，低、高剂量组，每组20只，高、低剂量组分别给予三氧化二砷（As2O3）10．0、0．4mg／kg水溶液自由饮用，对照组自由饮用蒸馏水。分笼4个月，测定血砷、尿砷，取肾脏标本，组织学技术HE染色，免疫组织化学（SABC）法检测大鼠肾小管上皮细胞caspase-8、P53免疫阳性细胞，并进行计数和图像分析研究。结果对照组，低、高剂量组肾近端小管上皮caspase-8阳性细胞计数[（3．33±1．32）、（31．14±8．02）、（46．50±7．20）个／视野]依次增加（P均〈0．05），平均灰度值（151．34±6．40、133．58±4．63、128．34±16．28）依次降低（P均〈0．05），P53阳性细胞计数[（3．17±1．59）、（26．29±4．23）、（47．00±6．22）个／视野]依次增加（P均〈0．05），平均灰度值（142．54±8．06、121．48±5．68、101．89±6．35）依次降低（P均〈0．05）。结论caspase-8、P53阳性细胞增多是砷中毒致肾脏损伤的分子机制之一。

关键词：砷中毒大鼠肾近端小管半胱氨酸蛋白酶-8 P53

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海洛因戒断及复吸对大鼠肾上腺髓质细胞β-内啡肽和促肾上腺皮质激素表达及血清皮质醇的影响

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解剖学报 2013年第2期44卷 269-273页

作者：黄智梁文妹贵阳医学院组织学胚胎学教研室贵阳550004

目的探讨海洛因戒断、脱毒及复吸对大鼠肾上腺髓质细胞β-内啡肽(β-EP)和促肾上腺皮质激素(ACTH)表达及血清皮质醇(COR)的影响。方法成年雄性SD大鼠63只,随机分为实验组(21只)、盐水对照组(21只)和正常对照组(21只),实验组又分为戒断... 详细信息

目的探讨海洛因戒断、脱毒及复吸对大鼠肾上腺髓质细胞β-内啡肽(β-EP)和促肾上腺皮质激素(ACTH)表达及血清皮质醇(COR)的影响。方法成年雄性SD大鼠63只,随机分为实验组(21只)、盐水对照组(21只)和正常对照组(21只),实验组又分为戒断组、脱毒组和复吸组,采用免疫组织化学、图像分析法及放射免疫测定法进行研究。结果与正常及盐水对照组比较,海洛因戒断组β-EP免疫反应(β-EP-IR)细胞染色变浅,平均灰度值升高(P<0.05);经美沙酮脱毒治疗,β-EP-IR细胞染色较正常及盐水对照组加深,平均灰度值降低(P<0.05);海洛因复吸组β-EP-IR细胞表达再次减弱,但与正常及盐水组比较,平均灰度值差异无显著性。与正常及盐水对照组比较,实验各组大鼠肾上腺髓质ACTH免疫反应(ACTH-IR)细胞染色均变浅,平均灰度值增高,有显著差异(P<0.05)。放射免疫测定结果表明,实验各组大鼠血清COR均显著高于正常对照组(P<0.05)。结论海洛因戒断、脱毒、复吸影响了大鼠肾上腺髓质细胞表达β-EP、ACTH以及血清COR的分泌。

关键词： β-内啡肽促肾上腺皮质激素皮质醇肾上腺髓质细胞海洛因免疫组织化学大鼠

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生长抑素和胰岛淀粉样多肽在生后发育期家兔胃窦黏膜的定位和表达

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吉林大学学报（医学版） 2013年第4期39卷 710-714,I0002页

作者：夏白娟梁文妹洪艳韩晶胡赟李一欣贵阳医学院组织学与胚胎学教研室贵州贵阳550004

目的:观察家兔生后发育期间生长抑素(SS)和胰岛淀粉样多肽(IAPP)在胃窦黏膜中的定位和表达,探讨其与机体消化功能的关系。方法:生后5、15、25、35、60和90d家兔各10只,处死后取胃窦组织,常规石蜡包埋,制成连续切片,用免疫组织化学SABC... 详细信息

目的:观察家兔生后发育期间生长抑素(SS)和胰岛淀粉样多肽(IAPP)在胃窦黏膜中的定位和表达,探讨其与机体消化功能的关系。方法:生后5、15、25、35、60和90d家兔各10只,处死后取胃窦组织,常规石蜡包埋,制成连续切片,用免疫组织化学SABC法和图像分析法对SS、IAPP免疫反应阳性细胞的定位和表达进行分析。结果:不同发育阶段兔胃窦黏膜内均有SS和IAPP的表达。阳性产物呈棕黄色,位于细胞质内。家兔生后5和15d,SS阳性细胞分散存在于黏膜上皮内,染色较浅,35d开始逐渐增多,于60d时数量最多(P<0.05),90d时减少至35d水平;细胞平均灰度值于35d时降低,60d时达到最低(P<0.05)。IAPP阳性细胞多数定位于胃窦黏膜结缔组织中,家兔从生后5d开始IAPP阳性细胞数量逐渐增多,尤以60d增多明显(P<0.05);其平均灰度值于35d之后降低,低于5、15和25d组(P<0.05)。结论:SS和IAPP在家兔胃窦黏膜中的表达随生长发育而发生变化,二者可能以内分泌、旁分泌的方式参与生后机体的消化活动,并在胃黏膜的生长修复和自我保护中发挥重要作用。

关键词：生长抑素胰岛淀粉样多肽生后发育胃窦家兔

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水通道蛋白-2、4在小鼠肾发育过程中的表达

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解剖学报 2006年第5期37卷 588-591页

作者：刘美菊郭敏锦州医学院组织学与胚胎学教研室锦州121001

目的观察水通道蛋白-2(AQP-2)和水通道蛋白-4(AQP-4)在小鼠肾脏发育过程中的表达位置,探讨其与肾脏发生发育的关系及作用。方法免疫组织化学SABC法染色和体视学半定量检测AQP-2、AQP-4的表达。结果AQP-2在胚龄17d的胎鼠可以明确检测到,... 详细信息

目的观察水通道蛋白-2(AQP-2)和水通道蛋白-4(AQP-4)在小鼠肾脏发育过程中的表达位置,探讨其与肾脏发生发育的关系及作用。方法免疫组织化学SABC法染色和体视学半定量检测AQP-2、AQP-4的表达。结果AQP-2在胚龄17d的胎鼠可以明确检测到,其表达部位为集合管主细胞的管腔膜和胞浆内。体视学测量发现,从胚龄17d开始表达到生后1d的小鼠其管腔膜的面密度值逐渐增加,此后面密度值基本上没有变化。AQP-4在胚龄14d的胎鼠可见到微弱的表达,随着胚龄的增长其表达逐渐增加,到生后1d达到最大水平,以后随着日龄的增加表达量无明显变化,并且在每一个时期的表达量都远远小于AQP-2的表达量。AQP-4的表达部位为集合管的侧基底细胞膜。结论推测AQP-2对小鼠出生后肾脏水平衡的调节作用比较重要,而AQP-4对出生前水平衡的调节作用比较重要。

关键词：肾脏发育水通道蛋白-2 水通道蛋白-4 免疫组织化学体视学小鼠

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体外应用大鼠胰腺提取物诱导小鼠间充质干细胞分化为胰岛素产生细胞

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解剖学报 2009年第5期40卷 789-793页

作者：李宏丹穆长征辽宁医学院组织学胚胎学教研室锦州121001

目的探讨大鼠胰腺提取物(RPE)是否可以使小鼠骨髓间充质干细胞(BMMSCs)分化为胰岛素产生细胞(IPCs),以及小鼠BMMSCs的分化条件,为糖尿病的干细胞治疗提供新的方法。方法传代纯化培养昆明小鼠的骨髓间充质干细胞,应用SD大鼠的RPE诱导分... 详细信息

目的探讨大鼠胰腺提取物(RPE)是否可以使小鼠骨髓间充质干细胞(BMMSCs)分化为胰岛素产生细胞(IPCs),以及小鼠BMMSCs的分化条件,为糖尿病的干细胞治疗提供新的方法。方法传代纯化培养昆明小鼠的骨髓间充质干细胞,应用SD大鼠的RPE诱导分化小鼠BMMSCs为IPCs,首先取18瓶小鼠BMMSCs随机分为6组,每组3瓶,分别加入RPE 10mg/L、20mg/L、30mg/L、40mg/L、50mg/L、100mg/L,筛选出最佳的分化剂量,然后用最佳的分化剂量(50mg/L)分化BMMSCs,免疫酶细胞化学鉴定细胞内胰岛素的表达;双硫腙染色检测胰岛素产生细胞的分化和纯度。放射免疫分析检测C肽片段表达。结果50mg/L RPE可以使间充质干细胞分化良好,形态较规则,1周后细胞分化成熟,双硫腙染色呈现猩红色;免疫酶细胞化学和免疫荧光细胞化学显示:胰岛素表达阳性,C肽放射免疫学显示有C肽释放。结论RPE可以使小鼠的骨髓间充质干细胞分化为胰岛素产生细胞。

关键词：胰腺提取物骨髓间充质干细胞胰岛素产生细胞免疫酶细胞化学放射免疫学大鼠小鼠

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