检索结果-内蒙古大学图书馆

人胎盘源间充质干细胞通过CD73/Nrf2途径抑制Th1细胞分泌TNF-α减轻急性移植物抗宿主病小鼠肝损伤机制研究

中华微生物学和免疫学杂志 2023年第9期43卷 663-670页

作者：吴沄桦张恒超韩凯悦赵雅萱栾希英滨州医学院免疫学教研室烟台264003

目的:探究人胎盘源间充质干细胞(human placenta-derived mesenchymal stem cells,hPMSCs)通过CD73/核因子E2相关因子2(nuclear factor-erythroid 2-related factor 2,Nrf2)途径抑制CD4^(+)IFN-γ+T(Th1)细胞分泌TNF-α减轻急性移植物抗宿主病(graft versus-host disease,GVHD)小鼠肝损伤的作用机制。方法:流式细胞术分析GVHD小鼠外周血和肝组织中Th1细胞对TNF-α的表达以及CD4^(+)IFN-γ+TNF-α+T(TNF-α+Th1)细胞上PD-1的表达水平。采用苏木精-伊红(hematoxylin-eosin,HE)染色、马松(Masson)染色和免疫荧光染色观察各组GVHD小鼠肝组织病理变化,并进一步用HE染色观察各组GVHD小鼠皮肤和肺组织病理变化。体外建立非条件性外周血单个核细胞(peripheral blood mononuclear cells,PBMCs)向Th1细胞诱导方案,检测TNF-α+Th1细胞比例以及其Nrf2和磷酸化细胞核内核因子-κB(phosphorylated nuclear factor-kappa B,p-NF-κB)的平均荧光强度(mean fluorescence intensity,MFI)。结果:与正常对照组相比,GVHD发病高峰组小鼠外周血和肝组织中TNF-α+Th1细胞比例和TNF-α+Th1细胞对PD-1的表达明显升高(P<0.01);hPMSCs干预可降低小鼠外周血和肝组织中TNF-α+Th1细胞比例(P<0.001),促进小鼠外周血和肝组织中TNF-α+Th1细胞对PD-1的表达(P<0.01,P<0.001),然而shCD73对小鼠外周血和肝组织中TNF-α+Th1细胞的干预效果明显减弱(P<0.05,P<0.01)。肝组织病理学分析结果显示,肝脏中TNF-α+Th1细胞比例分别与Suzuki′s评分、胶原面积和α-SMA的MFI呈正相关(P<0.001)。同样,皮肤和肺组织病理学分析结果也显示,外周血中TNF-α+Th1细胞比例分别与皮肤的Cetkovic-Cvrlje评分和肺的Qiao Shukai评分呈正相关(P<0.001)。PBMCs活化实验也显示hPMSCs能下调TNF-α+Th1细胞比例(P<0.01),上调TNF-α+Th1细胞对PD-1的表达(P<0.05);进一步分析发现hPMSCs可增强TNF-α+Th1细胞中Nrf2的MFI(P<0.05),减弱p-NF-κB的MFI(P<0.01)。结论:hPMSCs可能通过CD73/Nrf2途径上调PD1的表达,抑制TNF-α+Th1细胞形成,进而减轻GVHD小鼠肝损伤。

关键词：人胎盘源间充质干细胞 Th1细胞 PD-1 CD73 Nrf2 NF-κB

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脱钙骨基质负载脂肪源性干细胞修复兔桡骨节段性骨缺损

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中国组织工程研究 2025年

作者：丁一凡尹文杰张力袁淑娅孙国驹张乃丽赵冬梅马丽娜滨州医学院基础医学院人体解剖学教研室滨州医学院第二临床医学院诊断学教研室

背景：脱钙骨基质是临床常用的骨修复材料，但在临床应用中发现存在成骨能力不足的问题，将脱钙骨基质与具有成骨潜力的细胞复合可有效提高成骨能力。目的：探讨脱钙骨基质复合脂肪源性干细胞提高桡骨节段性骨缺损修复能力的可行性。方... 详细信息

背景：脱钙骨基质是临床常用的骨修复材料，但在临床应用中发现存在成骨能力不足的问题，将脱钙骨基质与具有成骨潜力的细胞复合可有效提高成骨能力。目的：探讨脱钙骨基质复合脂肪源性干细胞提高桡骨节段性骨缺损修复能力的可行性。方法：以猪骨为原材料制备脱钙骨基质，采用酶解贴壁法体外分离、培养新西兰大白兔脂肪源性干细胞，流式细胞术检测细胞表型，并进行成骨、成脂诱导分化。将脂肪源性干细胞接种到脱钙骨基质复合培养3 d，倒置显微镜、扫描电镜观察脂肪源性干细胞在脱钙骨基质上的生长情况。取新西兰大白兔24只，随机分成4组，分别为空白对照组、脱钙骨基质组、脂肪源性干细胞-脱钙骨基质组和自体骨组，建立双侧桡骨节段缺损(12 mm)模型，按组别植入相应材料，术后4,8,12周通过拍摄X射线片、苏木精-伊红染色评价骨修复情况。结果与结论：(1)培养的细胞贴壁聚集生长，呈长梭形，CD44、CD71高表达，CD34、CD45、CD106低表达；成骨诱导分化后茜素红染色可见被染成橘红色的矿化结节；成脂诱导分化后油红O染色可见细胞内染成鲜红色的脂滴；(2)脂肪源性干细胞紧密复合于脱钙骨基表面，生长状态良好，并向孔隙内部生长；(3)X射线片和组织学观察显示，脂肪源性干细胞-脱钙骨基质组新西兰大白兔骨缺损修复情况优于空白对照组、脱钙骨基质组，与自体骨组相当。结果表明，负载脂肪源性干细胞可有效弥补脱钙骨基质成骨能力的不足。

关键词：脂肪源性干细胞脱钙骨基质桡骨节段性骨缺损成骨新西兰大白兔组织工程

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良好童年特质对促进中国老年人群自评健康的分析

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现代预防医学 2025年第10期52卷 1849-1853+1878页

作者：姜欣彤张滢王萍玉滨州医学院公共卫生学院流行病学教研室

目的了解老年人自评健康现况，分析良好童年特质对老年人自评健康影响，并针对影响程度高的因素提出建议，促进全社会健康水平提高。方法利用中国家庭追踪调查（CFPS）数据，选择年龄≥60岁的老年人数据，以自评健康为因变量，年龄、... 详细信息

目的了解老年人自评健康现况，分析良好童年特质对老年人自评健康影响，并针对影响程度高的因素提出建议，促进全社会健康水平提高。方法利用中国家庭追踪调查（CFPS）数据，选择年龄≥60岁的老年人数据，以自评健康为因变量，年龄、性别、吸烟、饮酒、户口、婚姻状况、受教育程度、工作状态、医疗保险、14岁前健康状况、14岁前领袖气质、14岁前冒险精神为自变量，采用χ2检验和二元logistic回归分析老年人自评健康的影响因素，并用随机森林模型对影响因素重要性进行排序。结果大部分老年人在童年期健康状况良好，具有领袖气质和冒险精神。吸烟、饮酒、受教育程度高、处于工作状态、14岁前健康状态好、14岁前具有冒险精神、14岁前具有领袖气质，其OR值均大于1,且P<0.05,可能是老年人自评健康的保护因素，而女性、农村户口的OR值均小于1,且P<0.05,可能是老年人自评健康的危险因素。影响因素的重要性排序前三位依次是14岁前健康状况、14岁前领袖气质、14岁前冒险精神。结论童年特质对老年期健康存在一定影响，可以从改善儿童生理和心理健康状况入手，培养他们的领袖气质与冒险精神，促进老年人身体健康。

关键词：良好童年特质老年人群自评健康

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GFP拆分方法示踪幽门螺杆菌CagA的转运研究

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中国病原生物学杂志 2024年第5期19卷 502-506,513页

作者：吴倩文刘书振张建辉曹新颖孙泽坤贾钰刚张莹李波清赵慧琳季晓飞滨州医学院病原生物学教研室山东烟台264003 滨州医学院第二临床医学院

目的用GFP拆分方法示踪幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,Hp)感染过程中CagA向胃上皮细胞内的转运过程。方法(1)PCR扩增CagA基因的上下游同源臂,连入敲除质粒pSJHK4中,将质粒通过电击转化的方法转入Hp中,利用卡那霉素筛选CagA敲除突变株... 详细信息

目的用GFP拆分方法示踪幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,Hp)感染过程中CagA向胃上皮细胞内的转运过程。方法(1)PCR扩增CagA基因的上下游同源臂,连入敲除质粒pSJHK4中,将质粒通过电击转化的方法转入Hp中,利用卡那霉素筛选CagA敲除突变株ΔCagA。(2)PCR扩增绿色荧光蛋白GFP第11β折叠(GFP11)的基因序列并与CagA基因序列的3′端相连,将融合序列连入Hp-大肠埃希菌穿梭质粒pCHFHp中,并通过电击转化的方法转入ΔCagA中,利用氯霉素筛选CagA与GFP-11的融合表达突变株。(3)PCR扩增GFP第1-10β折叠(GFP1-10)的基因序列,包装慢病毒,利用病毒感染的方法将其转入胃上皮细胞GES-1中。将(2)中构建的Hp突变株以100∶1的感染复数感染(3)构建的表达GFP(1-10)的GES-1细胞体系,利用荧光显微镜观察细胞内的荧光情况,通过Western blot检测细胞内的CagA蛋白含量。结果构建了CagA敲除质粒pSJHK4-cagA,转入Hp中得到CagA敲除突变株ΔCagA。构建了CagA与GFP-11的融合表达质粒pCHFHp-cagAgfp11,转入ΔCagA中获得CagA与GFP-11的融合表达突变株HpG27-cagAgfp11。构建了含有GFP1-10基因序列的慢病毒,感染GES-1细胞后获得GFP1-10稳定表达的细胞株。在HpG27-cagAgfp11感染GES-1模型中,观察到细胞中的绿色荧光,说明CagA被转运到GES-1细胞内部,其融合表达的GFP-11与细胞内表达的GFP1-10结合发出荧光,Western blot结果也证实CagA被转运至胞内。结论在Hp感染GES-1细胞模型中,GFP拆分方法能够示踪CagA向细胞的转运过程,这为CagA的转运研究提供了新方法,有助于HpIV型分泌系统(T4SS)作用机制的深入研究。

关键词：幽门螺杆菌 CagA GFP拆分 T4SS

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基于健康生态学模型的中国女性老年人群抑郁症状影响因素研究

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中国全科医学 2025年第13期28卷 1595-1600页

作者：张滢姜欣彤王萍玉滨州医学院公共卫生学院流行病学教研室山东省烟台市264003

背景我国老年人口基数庞大且增长迅速,抑郁是老年人群常见的情绪障碍和心理健康问题,而女性老年人群的心理健康问题日益成为社会关注的焦点。目的基于健康生态学模型多层次、全方位探讨女性老年人群抑郁症状的影响因素,为识别及干预中... 详细信息

背景我国老年人口基数庞大且增长迅速,抑郁是老年人群常见的情绪障碍和心理健康问题,而女性老年人群的心理健康问题日益成为社会关注的焦点。目的基于健康生态学模型多层次、全方位探讨女性老年人群抑郁症状的影响因素,为识别及干预中国女性老年人群的抑郁症状提供理论依据。方法于2024年1月提取中国健康与养老追踪调查(CHARLS)2020年调查数据,选取≥60岁女性老年人群为研究对象(n=4594)。基于健康生态学模型将影响因素分为个人特征层、行为特征层、人际网络层、生活和工作条件层、政策环境层5个层面,采用χ2检验和二分类Logistic回归模型探讨抑郁症状的影响因素,并建立中国女性老年人群抑郁症状健康生态学模型。结果中国女性老年人群抑郁症状检出率为48.06%(2208/4594)。Logistic回归分析结果显示,年龄≥80岁(OR=0.601,95%CI=0.449~0.804)、睡眠时间≥6 h(OR=0.561,95%CI=0.493~0.639)、对生活满意(OR=0.256,95%CI=0.199~0.330)、自评身体健康状况好(OR=0.459,95%CI=0.395~0.533)、城市户口(OR=0.717,95%CI=0.603~0.853)、对子女满意(OR=0.666,95%CI=0.472~0.940)、受教育程度为初中及以上(OR=0.712,95%CI=0.582~0.871)、家庭收入>5万元(OR=0.822,95%CI=0.704~0.959)、所在城市人均国内生产总值(GDP)为5万~10万元(OR=0.841,95%CI=0.730~0.970)是中国女性老年人群发生抑郁症状的保护因素(P<0.05);已失能(OR=1.786,95%CI=1.556~2.050)、患慢性病(OR=1.159,95%CI=1.014~1.324)、中部地区(OR=1.298,95%CI=1.107~1.522)和西部地区(OR=1.407,95%CI=1.183~1.675)是中国女性老年人群发生抑郁症状的危险因素(P<0.05)。结论中国女性老年人群抑郁症状检出率较高,影响因素较多,包括个人特征层的年龄,行为特征层的睡眠时间、对生活满意度、自评身体健康情况、失能情况、慢性病情况,人际网络层的户口类型、对子女满意度、地理分布,生活和工作条件层的受教育情况、家庭收入,政策环境层的所在城市人均GDP。应从各个层面,针对重点人群,联合采取有效干预措施,减少中国女性老年人群抑郁症状的发生。

关键词：抑郁健康生态学模型老年人女性患病率影响因素研究

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孕期刚地弓形虫感染对滋养层细胞和蜕膜免疫细胞表面CD73表达的影响及其与不良妊娠的关系

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中国寄生虫学与寄生虫病杂志 2025年第2期43卷 210-216页

作者：景天宇牟汝涛张帆刘现兵胡雪梅张海霞李志丹滨州医学院免疫学教研室烟台市烟台山医院介入医学科齐鲁医药学院免疫学教研室

目的探讨孕期刚地弓形虫感染对滋养层细胞及蜕膜免疫细胞表面CD73表达的影响，并分析其与不良妊娠结局的关系。方法收集健康早孕期正常流产的蜕膜和绒毛组织4个，采用聚蔗糖-泛影葡胺淋巴细胞分离液分离蜕膜单个核细胞，percoll法分... 详细信息

目的探讨孕期刚地弓形虫感染对滋养层细胞及蜕膜免疫细胞表面CD73表达的影响，并分析其与不良妊娠结局的关系。方法收集健康早孕期正常流产的蜕膜和绒毛组织4个，采用聚蔗糖-泛影葡胺淋巴细胞分离液分离蜕膜单个核细胞，percoll法分离滋养层细胞，将纯化的蜕膜单个核细胞和滋养层细胞分别分为对照组和感染组，每组1×107个，感染组按细胞与弓形虫3∶1感染，感染后24 h，采用流式细胞术检测滋养层细胞、蜕膜自然杀伤细胞（decidualnaturalkiller,dNK）、蜕膜巨噬细胞（decidualmacrophage,dMφ）和蜕膜树突状细胞（decidualdendriticcell,dDC）表面CD73表达。将分离的滋养层细胞分为对照组和感染组，每组1×10～7个，感染组按细胞与弓形虫1∶1感染，感染后24 h提取蛋白，蛋白质免疫印记（Westernblotting）分析弓形虫感染后滋养层细胞CD73蛋白的相对表达水平。野生型C57BL/6J雌鼠60只与雄鼠30只，CD73基因敲除(CD73-/-)雌鼠60只与雄鼠30只均分别按雌雄比为2∶1随机合笼过夜。孕鼠随机均分为野生型对照组和野生型感染组，CD73-/-对照组和CD73-/-感染组，孕8 d，感染组孕鼠分别经腹腔注射400个弓形虫速殖子，对照组注射等量生理盐水。孕14 d，解剖子宫并观察胎盘、胎鼠情况，计算异常胎率。免疫组化染色检测胎盘组织中CD73的表达。采用GraphPad Prism9.0软件进行统计学分析，组间数据分析采用独立样本Student’st检验。结果流式细胞术结果显示，对照组滋养层细胞表面CD73阳性细胞比例为（39.25±1.43）%，高于感染组的（31.27±2.79）%（t=5.31,P <0.05），对照组dDC、dMφ和dNK细胞表面CD73阳性细胞比例分别为（38.17±7.71）%、（25.80±6.85）%、（9.39±0.75）%，高于感染组的（36.33±7.64）%、（20.58±5.18）%、（7.74±1.08）%（t=4.25、5.24、3.57，均P <0.05）;Westernblotting结果显示，对照组滋养层细胞CD73蛋白相对表达水平为0.79±0.07，较感染组的0.38±0.05显著下调（t=24.80,P <0.01）；免疫组化结果显示，野生型对照组胎盘组织阳性细胞呈棕色集中表达在胎盘侧，尤其近血管处，野生型感染组阳性细胞较对照组少。野生型感染组小鼠胎盘组织CD73表达灰度值为9.79±0.30，较野生型对照组的20.20±4.60显著降低（t=3.89,P <0.05）。野生型对照组和CD73-/-对照组胎盘胎鼠发育良好，有光泽，子宫圆润饱满，野生型感染组和CD73-/-感染组孕鼠明显缺血，伴有严重淤血，胎鼠与胎盘不成形，出现吸收胎鼠现象，胎盘发育不良。野生型感染组小鼠胎盘和胎鼠体质量分别为（0.05±0.01） g和（0.07±0.03） g，低于野生型对照组的（0.07±0.01） g和（0.13±0.08） g （t=3.22、5.36，均P <0.01）;CD73-/-对照组分别为（0.07±0.04） g和（0.12±0.01） g，与野生型对照组差异无统计学意义（t=0.62、 0.13，均P> 0.05）;CD73-/-感染组分别为（0.03±0.00） g和（0.01±0.00） g，较野生型感染组显著减轻（t=3.10、5.08，均P <0.01）。野生型对照组和CD73-/-对照组异常胎率均为0，野生型感染组为（55.73±0.18）%，较野生型对照组显著增加（t=7.79,P <0.01）,CD73-/-感染组为（76.00±0.20）%，较野生型感染组显著增加（t=2.44,P <0.05）。结论孕早期刚地弓形虫感染可显著下调母胎微环境中滋养层细胞及蜕膜免疫细胞（dNK、dMφ和dDC）表面CD73的表达，且CD73表达下调与弓形虫感染致不良妊娠的发生密切相关。

关键词：刚地弓形虫不良妊娠 CD73 滋养层细胞蜕膜免疫细胞免疫微环境

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IL-6通过促进人胎盘间充质干细胞上CD73的表达调节其迁移、黏附和增殖能力

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中华微生物学和免疫学杂志 2022年第12期42卷 940-948页

作者：张恒超赵楠楠张加深韩凯悦赵雅萱戚荣栾希英滨州医学院免疫学教研室烟台264003

目的探讨IL-6影响人胎盘间充质干细胞(human placenta-derived mesenchymal stem cells,hPMSCs)表面CD73的表达,以及调节其迁移、黏附和增殖的作用机制。方法流式细胞术(flow cytometry,FCM)和Western blot分析外源性IL-6和hPMSCs分泌的IL-6对hPMSCs上CD73表达的影响。单克隆抗体阻断和Western blot方法检测IL-6对hPMSCs中信号转导及转录激活蛋白3(signal transducer and activator of transcription 3,STAT3)磷酸化的影响。实时无标记动态细胞分析技术(real-time cellular analysis,RTCA)分析慢病毒转染后低表达CD73的hPMSCs和APCP(5′-α,β亚甲基-二磷酸腺苷)预处理后hPMSCs的迁移、黏附和增殖变化。结果FCM与Western blot检测结果显示,外源性和hPMSCs分泌的IL-6均能促进CD73在hPMSCs上的表达(P<0.001,P<0.01)。IL-6R抑制剂处理后,hPMSCs上CD73表达明显下降(P<0.01);IL-6可上调hPMSCs内STAT3磷酸化和CD73水平(P<0.05,P<0.01),而加入STAT3抑制剂后,CD73表达下降(P<0.01)。RTCA分析结果显示,敲低hPMSCs上CD73的表达后,hPMSCs的黏附和增殖能力均明显降低(P<0.01,P<0.05),迁移能力明显上升(P<0.05)。使用APCP抑制hPMSCs上CD73水解酶活性后,hPMSCs同样表现出黏附和增殖能力明显降低,而迁移能力增强(P<0.05)。结论IL-6能够通过JAK/STAT3通路增强hPMSCs上CD73的表达,进而影响其迁移、黏附和增殖能力。

关键词：间充质干细胞胎盘 IL-6 CD73 迁移黏附增殖

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抗大别班达病毒人源单克隆抗体Fab片段的噬菌体展示文库构建

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中国病原生物学杂志 2024年第11期19卷 1251-1254,1259页

作者：徐家馨王静静王琳徐睿杰吴玉龙李波清乔媛媛滨州医学院基础医学院病原生物学教研室山东烟台264003

目的构建具有潜在中和活性的人源抗大别班达病毒(SFTSV)抗体Fab片段的噬菌体展示文库。方法从具有交叉中和活性的SFTS恢复期患者血液样本中分离外周血单个核细胞(PBMC)并提取总RNA,逆转录PCR得到cDNA。以cDNA为模板进行第一轮PCR扩增,... 详细信息

目的构建具有潜在中和活性的人源抗大别班达病毒(SFTSV)抗体Fab片段的噬菌体展示文库。方法从具有交叉中和活性的SFTS恢复期患者血液样本中分离外周血单个核细胞(PBMC)并提取总RNA,逆转录PCR得到cDNA。以cDNA为模板进行第一轮PCR扩增,分别获得抗体重链可变区(VH)和轻链可变区(Vκ和Vλ)序列。以pComb3XTT、pComb3Xλ质粒为模板,分别获得抗体重链恒定区(CH1)和轻链恒定区(Cκ、Cλ)序列。第二轮通过重叠延伸PCR(SOE-PCR)扩增VH和CH1得到Fd重链,同样扩增Vκ和Cκ、Vλ和Cλ得到完整的κ和λ抗体轻链。第三轮以上述扩增产物为模板再次进行SOE-PCR,得到完整的抗体Fab基因片段。将Fab基因片段插入到pComb3XSS噬菌粒中,构建噬菌体展示抗体文库。结果通过三轮PCR扩增出抗体Fab片段的序列,成功构建库容量为1.875×10^(9)的噬菌体展示抗体文库。结论利用具有交叉中和活性的SFTS恢复期患者血源建立了人源抗SFTSV Fab片段的噬菌体展示抗体文库,为下一步筛选特异性单克隆中和抗体建立了可靠的前期基础。

关键词： SFTSV 噬菌体展示抗体文库库容量人源单克隆抗体

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烟台市成年男性居民吸烟变化情况及影响因素分析

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中国卫生统计 2024年第1期41卷 113-116页

作者：林杨陈琦李佳琏刘文昊陈裕玺孙红卫王玖滨州医学院公共卫生学院卫生统计学教研室 264003

目的了解烟台市成年居民2017年、 2021年吸烟变化趋势及影响因素,为政府部门以及相关机构采取针对性措施提供依据。方法采取多阶段分层抽样方法,于2017年、 2021年对在芝罘区居住6个月及以上,且年龄大于或等于18岁的男性居民进行横断... 详细信息

目的了解烟台市成年居民2017年、 2021年吸烟变化趋势及影响因素,为政府部门以及相关机构采取针对性措施提供依据。方法采取多阶段分层抽样方法,于2017年、 2021年对在芝罘区居住6个月及以上,且年龄大于或等于18岁的男性居民进行横断面调查,由经过统一培训的调查员采用问卷调查、以面对面询问的方式进行。单因素分析采用Wilcoxon秩和检验和卡方检验,多因素分析采用logistic回归分析。结果 2021年各年龄段吸烟率较2017年均有所下降,标化后整体吸烟率由2017年的37.89%降低为2021年的30.80%(χ^(2)=12.669,P<0.001);logistic回归结果显示,文化水平、吸烟致病风险认知、职业、饮酒情况、早餐食用情况为吸烟的独立影响因素。学历越低,吸烟率越高,以本科及以上学历为参考,小学及以下(OR=2.161, 95%CI=1.077~4.335)和初中大专(OR=1.795, 95%CI=1.132~2.848)吸烟率更高;饮酒频率越高,吸烟的概率越高(OR=1.196, 95%CI=1.047~1.367);过量饮酒频率越高,吸烟的概率越高(OR=1.445, 95%CI=1.184~1.764);吸烟致病风险认知越高,吸烟概率越低(OR=0.877, 95%CI=0.806~0.954);职业方面,以当前未就业者/专业技术人员为参考,商业/服务业人员吸烟概率较大(OR=1.761, 95%CI=1.241~2.499);每周早餐次数越多,吸烟概率越低(OR=0.660, 95%CI=0.541~0.805)。结论烟台市居民控烟效果整体较好,但部分人群吸烟率仍然很高,要针对重点人群采取针对性的控烟措施。

关键词：吸烟影响因素变化趋势烟草控制健康教育

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基于氟化聚乙烯亚胺构建高效递送载体实现Cdh23全长质粒在HEI-OC1细胞中的转染

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中国生物化学与分子生物学报 2025年

作者：李冰倩李木兰夏淼刘真王兰马朋滨州医学院特殊教育与康复学院听觉言语康复科学研究院滨州医学院附属医院耳鼻咽喉头颈外科滨州医学院基础医学院遗传学与细胞生物学教研室

CDH23基因是Usher综合征中USH1D亚型的致病突变基因，本研究构建2种不同启动子的野生型Cdh23全长质粒（～16 kb），利用氟化聚乙烯亚胺（fluorinated-polyethyleneimine， FPEI）作为递送载体对小鼠听觉细胞系（house ear institute-org... 详细信息

CDH23基因是Usher综合征中USH1D亚型的致病突变基因，本研究构建2种不同启动子的野生型Cdh23全长质粒（～16 kb），利用氟化聚乙烯亚胺（fluorinated-polyethyleneimine， FPEI）作为递送载体对小鼠听觉细胞系（house ear institute-organ of corti 1， HEI-OC1）进行转染，通过评价体外转染效果，获得最佳表达质粒。首先，利用傅里叶变换红外吸收光谱对FPEI的合成结果进行分析，证明FPEI的成功合成。之后，通过琼脂糖凝胶阻滞实验、Zeta电位实验、动态光散射实验分别对FPEI的质粒包裹能力、形成复合物的表面电位和水合直径进行表征，证明FPEI具有良好的质粒包裹能力，在高质量比时FPEI质粒复合物均带正电，粒径分布在100～300 nm之间。通过Cell Counting Kit-8 (CCK-8)和流式细胞术验证了FPEI在HEI-OC1细胞中的低细胞毒性和高转染效率。同时将FPEI与Lipofectamine 3000及不同质量的PEI（25K、40K）转染试剂比较，发现FPEI的转染效率显著优于上述试剂。实时定量聚合酶链反应（quantitative real-time polymerase chain reaction， qRT-PCR）及Western 印迹结果表明，CAG启动子效果优于CMV启动子，可作为最佳表达质粒进行后续体内研究。此外，细胞免疫荧光染色证实过表达的CDH23主要分布于细胞质中。以上结果证明，FPEI可作为以Cdh23为代表的大基因体外过表达的高效递送载体，这为后续USH1D综合征体内基因治疗提供了重要的实验依据。

关键词：氟化聚乙烯亚胺 Cdh23基因大基因过表达 HEI-OC1细胞 USH1D综合征

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