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过表达核糖核酸酶抑制因子通过调节ILK/PI3K/AKT信号途径抑制小鼠黑色素瘤B16-F10细胞体内外生长

中国生物化学与分子生物学报 2015年第4期31卷 373-382页

作者：黄梦鸽潘湘阳陈俊霞田强泸州医学院临床医学系四川泸州646000 重庆医科大学细胞生物学与遗传学教研室重庆400016 泸州医学院医学细胞生物学与遗传学教研室四川泸州646000

核糖核酸酶抑制因子(ribonuclease inhibitor,RI)是胞浆内的一种酸性蛋白质.已有研究证明,RI与核糖核酸酶A(RNase A)和血管生成素(angiogenin,ANG)结合可抑制其活性.本室前期实验证实,RI可有效抑制某些肿瘤的生长和转移.然而,RI抑制肿... 详细信息

核糖核酸酶抑制因子(ribonuclease inhibitor,RI)是胞浆内的一种酸性蛋白质.已有研究证明,RI与核糖核酸酶A(RNase A)和血管生成素(angiogenin,ANG)结合可抑制其活性.本室前期实验证实,RI可有效抑制某些肿瘤的生长和转移.然而,RI抑制肿瘤的分子机制尚不清楚.本研究探讨RI对小鼠黑色素瘤B16-F10细胞生长和凋亡的影响及其机制.MTT法结合流式细胞术分析结果证明,RI基因稳定转染导致B16-F10黑色素瘤细胞S期阻滞,抑制B16-F10黑色素瘤细胞增殖.Annexin V/PI结合流式细胞术结果显示,RI过表达引起细胞凋亡.与此相一致,蛋白质印迹分析显示,过表达RI引起抗凋亡分子Bcl-2表达下调,而Bax上调,同时伴有Pro-casepase 3激活.C57BL/6小鼠移植成瘤实验显示,与对照相比,转染RI的B16-F10细胞形成的肿瘤重量显著减少,同时伴有肿瘤组织微血管密度降低.提示RI过表达能抑制微血管生成.此外,体内外组织/细胞免疫化学和蛋白质印迹结果揭示,过表达RI可显著抑制整合素连接激酶(integrin-linked kinase,ILK)下游靶分子Akt和GSK-3β的磷酸化,并降低β-联蛋白的表达.研究结果证明,过表达RI可通过抑制ILK/PI3K/AKT信号通路,促进细胞凋亡,引起S期阻滞,并抑制血管生成,从而显著抑制小鼠黑色素瘤B16-F10细胞在体内、外的生长.上述结果提示,RI可能是治疗黑色素瘤的有效分子靶点.

关键词：核糖核酸酶抑制因子 B16-F10细胞细胞凋亡 ILK/PI3K/AKT信号通路

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子宫内膜癌组织中hMOF蛋白和mRNA表达及其临床意义

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吉林大学学报（医学版） 2016年第6期42卷 1138-1142,I0014页

作者：文爱平汪海娇金景姬蔡勇朱继红谌伦华川北医学院附属医院妇产科四川南充637000 吉林大学第一医院妇产科吉林长春130021 吉林大学生命科学院表观遗传学教研室艾滋病国家重点实验室吉林长春130012 吉林大学第一医院生殖中心吉林长春130021

目的：探讨子宫内膜癌组织中hMOF蛋白和mRNA的表达,阐明其参与调控子宫内膜癌发生发展的可能机制。方法：采用RT-PCR和免疫组织化学染色方法检测38例子宫内膜腺癌组织及20例正常子宫内膜组织中hMOF蛋白和mRNA的表达,分析hMOF蛋白和mRNA... 详细信息

目的：探讨子宫内膜癌组织中hMOF蛋白和mRNA的表达,阐明其参与调控子宫内膜癌发生发展的可能机制。方法：采用RT-PCR和免疫组织化学染色方法检测38例子宫内膜腺癌组织及20例正常子宫内膜组织中hMOF蛋白和mRNA的表达,分析hMOF蛋白和mRNA表达水平与子宫内膜腺癌患者的临床病理特征和预后的关系。结果：免疫组织化学染色,子宫内膜腺癌组织中hMOF蛋白阳性表达率低于正常子宫内膜组织（P=0.037）;临床病理分期为Ⅰ期的患者hMOF蛋白阳性表达率高于Ⅱ期和Ⅲ-Ⅳ期患者（χ^2=6.591,P=0.037）;子宫内膜癌低分化患者hMOF蛋白阳性表达率低于中分化和高分化患者（χ^2=7.351,P=0.025）。RT-PCR检测,子宫内膜癌组织中hMOF mRNA表达上调者所占比率明显低于正常子宫内膜组织（P=0.003）。结论：hMOF蛋白可能参与了子宫内膜癌的发生发展过程,有望成为判断子宫内膜癌预后的生物学指标。

关键词：乙酰基转移酶类子宫内膜肿瘤腺癌聚合酶链反应免疫组织化学

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基于“知识-能力-素质”的组织学与胚胎学绪论教学设计探讨

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中国组织化学与细胞化学杂志 2015年第5期23卷 494-497页

作者：李雅娜白咸勇时彦赵伟李红星刘鲁英倪艳波滨州医学院组织学与胚胎学教研室滨州医学院基础医学院教学科研办公室烟台264003

为实现高等医学教育改革,坚持知识、能力和素质协调发展的要求,逐步实现从注重知识传授向重视能力和素质培养转变,组织学与胚胎学作为一门重要的医学基础课程,教学中不断探索教学改革。我们在组织学与胚胎学教学改革中尝试以绪论教学为... 详细信息

为实现高等医学教育改革,坚持知识、能力和素质协调发展的要求,逐步实现从注重知识传授向重视能力和素质培养转变,组织学与胚胎学作为一门重要的医学基础课程,教学中不断探索教学改革。我们在组织学与胚胎学教学改革中尝试以绪论教学为基点,重视开篇第一讲,巧妙设计教学内容,着重从"学什么?"、"为什么学?"、"怎么学?"三方面进行讲授。根据教学内容选择灵活多变的教学方法,激发学生学习热情,培养学生自主学习能力。除传授理论知识和实验技能以外,还通过绪论教学对学生进行职业道德修养和人文素质培养等育人工作,达到知识、能力、素质全面发展、共同提高的教育教学目标。

关键词：组织学与胚胎学绪论教学知识能力素质

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幽门螺杆菌感染对LAIR-1影响的实验研究

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中国病原生物学杂志 2015年第8期10卷 689-692页

作者：孙辉杜东龙张莹张艳丽陈醒醒李波清滨州医学院病原生物学教研室山东烟台264003

目的通过构建小鼠感染模型,研究幽门螺杆菌(Hp)感染对白细胞相关免疫球蛋白样受体-1(LAIR-1)表达的影响。方法将32只C57BL/6小鼠随机分为对照组和感染组。感染组通过Hp菌液灌胃建立小鼠感染模型,对照组以PBS灌胃。6周后处死小鼠,采用胃... 详细信息

目的通过构建小鼠感染模型,研究幽门螺杆菌(Hp)感染对白细胞相关免疫球蛋白样受体-1(LAIR-1)表达的影响。方法将32只C57BL/6小鼠随机分为对照组和感染组。感染组通过Hp菌液灌胃建立小鼠感染模型,对照组以PBS灌胃。6周后处死小鼠,采用胃黏膜分离培养、革兰染色、PCR及生化反应检查Hp定植情况,采用流式细胞术检测小鼠外周血单个核细胞(PBMC)中单核细胞和淋巴细胞表面LAIR-1的表达。结果感染组小鼠Hp感染率为91.3%(21/23)。感染组和对照组小鼠PBMC中单核细胞比例分别为(22.85±3.56)%和(49.85±0.35)%,淋巴细胞比例分别为(40.93±10.05)%和(30.15±0.35)%,差异均有统计学意义(t=5.845和2.137,P<0.05)。感染组和对照组小鼠PBMC表面LAIR-1表达率分别为(70.16±7.75)%和(83.4±0.1)%,淋巴细胞表面LAIR-1表达率分别为(56.81±11.37)%和(72.3±0.6)%,差异均有统计学意义(t=3.761和2.491,P<0.05)。结论 Hp感染下调了小鼠PBMC中单核细胞及LAIR-1的表达,上调淋巴细胞比例但下调其LAIR-1的表达。

关键词：幽门螺杆菌 C57BL/6小鼠白细胞相关免疫球蛋白样受体-1

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顺铂对LTEP-a-2细胞中miR-34b、Bcl-2、Smad3表达的影响

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滨州医学院学报 2016年第2期39卷 81-84页

作者：郑瑛李有杰王萍玉庞敏张菡菡阎云飞谢书阳滨州医学院基础医学院生物化学与分子生物学教研室山东省高校肿瘤分子生物学重点实验室烟台264003 蓬莱市人民医院检验科

目的探讨顺铂对LTEP-a-2细胞内miR-34b、Bcl-2、Smad3表达的影响,明确顺铂的抗癌机制。方法体外培养LTEP-a-2细胞,实验组加入不同浓度顺铂,阴性对照组为不加顺铂的细胞;倒置显微镜观察各组细胞形态,台盼蓝染色法计算细胞存活率,MTT法测... 详细信息

目的探讨顺铂对LTEP-a-2细胞内miR-34b、Bcl-2、Smad3表达的影响,明确顺铂的抗癌机制。方法体外培养LTEP-a-2细胞,实验组加入不同浓度顺铂,阴性对照组为不加顺铂的细胞;倒置显微镜观察各组细胞形态,台盼蓝染色法计算细胞存活率,MTT法测定顺铂对LTEP-a-2细胞的抑制率;实时定量PCR检测miR-34b;western blot方法分析细胞中Bcl-2及Smad3蛋白的表达变化。结果随着顺铂作用剂量的增加,LTEP-a-2细胞凋亡增加,miR-34b在顺铂作用后的细胞中的表达呈上升趋势,Bcl-2及Smad3的表达显著下降。结论顺铂可能通过上调miR-34b的表达,进一步抑制Bcl-2及Smad3的表达,导致LTEP-a-2细胞的凋亡。

关键词： miR-34b Bcl-2 Smad3 肺癌顺铂

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UHRF2通过其PHD结构域与组蛋白H3K9乙酰化相互作用

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重庆医科大学学报 2015年第11期40卷 1485-1490页

作者：张婷赵灵琳曾盛源段昌柱重庆医科大学基础医学院细胞生物学遗传学教研室重庆400016

目的:探讨UHRF2蛋白与组蛋白组蛋白H3第9位赖氨酸残基乙酰化(Histone H3 Lys9 acetylation,H3K9ac)的相互作用及两者相互作用结合区域的测定。方法:在LO2和Hep G2细胞中转染p CMV-FLAG-UHRF2,激光共聚焦分别检测UHRF2与组蛋白H3、H3K9ac... 详细信息

目的:探讨UHRF2蛋白与组蛋白组蛋白H3第9位赖氨酸残基乙酰化(Histone H3 Lys9 acetylation,H3K9ac)的相互作用及两者相互作用结合区域的测定。方法:在LO2和Hep G2细胞中转染p CMV-FLAG-UHRF2,激光共聚焦分别检测UHRF2与组蛋白H3、H3K9ac和H3K14ac在细胞内的共定位。采用免疫沉淀技术分别检测UHRF2与组蛋白H3、H3K9ac和组蛋白H3第14位赖氨酸基乙酰化(Histone H3 Lys14 acetylation,H3K14ac)在细胞中的相互作用,以及用UHRF2的不同缺失体层粒分别与组蛋白H3K9ac相结合方法来检测UHRF2与之相互作用的功能性结合区域。结果:(1)UHRF2与组蛋白H3、H3K9ac和H3K14ac在LO2和Hep G2细胞中存在共定位现象。(2)在LO2和Hep G2细胞中,UHRF2与H3K9ac相互结合。(3)在正常肝细胞LO2中,UHRF2与H3K9ac相互作用的结合区域为PHD结构域。而在肝癌细胞Hep G2中,除了PHD结构域以外,YDG/SRA结构域也是UHRF2与H3K9ac的关键结构域。结论:UHRF2通过其PHD结构域与H3K9ac相互作用。

关键词： UHRF2 组蛋白H3 组蛋白H3K9乙酰化组蛋白H3K14乙酰化表观遗传学

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电子垃圾拆解区学龄前儿童铅暴露与红细胞免疫功能分析

电子垃圾拆解区学龄前儿童铅暴露与红细胞免疫功能分析

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第三届生态毒理学学术研讨会

作者：代逸凤霍霞杨天章宇李明慧徐锡金汕头大学医学院环境医学与发育毒理学实验室汕头515041 汕头大学医学院环境医学与发育毒理学实验室汕头515041 汕头大学医学院细胞生物学与遗传学教研室汕头515041

粗放式不规范的电子垃圾拆解活动会释放出多种重金属和持续性有机污染物,环境中的铅暴露会造成当地儿童生长发育迟缓、认知能力减退和免疫力下降等.红细胞是人体血液中数量最多的一种血细胞,同时也是运送氧气的最主要的媒介.红细胞表面... 详细信息

粗放式不规范的电子垃圾拆解活动会释放出多种重金属和持续性有机污染物,环境中的铅暴露会造成当地儿童生长发育迟缓、认知能力减退和免疫力下降等.红细胞是人体血液中数量最多的一种血细胞,同时也是运送氧气的最主要的媒介.红细胞表面具有许多与免疫有关的物质，其中CR1可以与免疫复合物上的C3b受体连接，对清除体内的循环免疫复合物起到主要作用。血液中的红细胞不仅仅是铅的储藏室而且也是铅毒性攻击的主要目标，因此，通过分析儿童红细胞铅水平和细胞表面CR1表达量，探讨环境铅暴露对儿童红细胞免疫功能的影响。

关键词：生态毒理学铅暴露红细胞免疫功能学龄前儿童

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吡喹酮治疗后日本血吸虫感染小鼠滤泡辅助性T细胞及其表面分子的研究

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中国寄生虫学与寄生虫病杂志 2016年第2期34卷 99-104页

作者：张玉梅王燕娟刘华姜岩岩徐馀信郑力胡媛沈玉娟曹建平中国疾病预防控制中心寄生虫病预防控制所卫生部寄生虫病原与媒介生物学重点实验室科技部国家级热带病国际联合研究中心世界卫生组织热带病合作中心上海200025 滨州医学院病原生物学教研室烟台264003 湖北省疾病预防控制中心武汉430000

目的观察日本血吸虫(Schistosoma japonicum)感染小鼠肝脏、脾脏的病变情况及经吡喹酮治疗后小鼠外周血及脾脏中滤泡辅助性T细胞(Tfh)及其表面分子的变化。方法将15只6~8周龄C57BL/6雌性小鼠随机分为吡喹酮治疗感染组(治疗组)、未治疗... 详细信息

目的观察日本血吸虫(Schistosoma japonicum)感染小鼠肝脏、脾脏的病变情况及经吡喹酮治疗后小鼠外周血及脾脏中滤泡辅助性T细胞(Tfh)及其表面分子的变化。方法将15只6~8周龄C57BL/6雌性小鼠随机分为吡喹酮治疗感染组(治疗组)、未治疗感染组(未治疗组)和未感染组,每组5只。治疗组和未治疗组每只小鼠经腹部皮肤感染日本血吸虫尾蚴20条;治疗组小鼠于感染后6周给予200 mg/(kg·d)吡喹酮灌胃治疗,连续3 d;未感染组和未治疗组不治疗。于治疗后4周解剖各组小鼠,观察小鼠肝脏和脾脏病变情况,计算减虫率和肝脏减卵率。采用流式细胞术检测各组小鼠外周血和脾脏Tfh占CD4^+T细胞的比例,检测其表面分子可诱导T细胞共刺激分子(ICOS)和程序性死亡受体1(PD-1)的表达情况。采用ELISA检测小鼠血清中可溶性虫卵抗原(SEA)特异性IgG抗体水平。结果与未治疗组比较,治疗组小鼠的肝脏和脾脏病变明显较轻,减虫率和肝脏减卵率分别为84.1%和69.1%(P<0.01)。治疗组、未治疗组和未感染组外周血和脾脏Tfh细胞的比例分别是14.7%~18.0%和15.6%~25.0%、13.7%~16.7%和12.4%~18.2%、2.5%~6.8%和4.9%~8.0%,治疗组和未治疗组明显高于未感染组(P<0.01),治疗组和未治疗组差异无统计学意义(P>0.05)。治疗组、未治疗组和未感染组外周血和脾脏中ICOS的表达水平分别为0.7%~1.1%和1.8%~6.8%、1.3%~3.2%和4.1%~7.0%、0.2%~0.3%和0.5%~0.8%,未治疗组高于治疗组和未感染组(P<0.01);治疗组脾脏ICOS的表达水平明显高于未感染组(P<0.01),而外周血的表达水平与未感染组差异无统计学意义(P>0.05)。治疗组、未治疗组和未感染组外周血和脾脏中Tfh细胞PD-1水平分别为0.5%~1.5%和4.5%~8.9%、0.8%~1.9%和4.1%~10.7%、0.4%~0.8%和1.2%~1.8%,未治疗组明显高于未感染组(P<0.01),治疗组与未治疗组差异无统计学意义(P>0.05)。吡喹酮治疗后4周,治疗组、未治疗组和未感染组的SEA特异性IgG水平(A450值)分别为2.015±0.061、1.969±0.038和0.139±0.128,治疗组与未治疗组差异无统计学意义(P>0.05)。结论吡喹酮治疗后,日本血吸虫感染小鼠肝脏、脾脏组织病变明显减轻,外周血和脾脏Tfh细胞ICOS的表达比未治疗组显著降低。

关键词：日本血吸虫吡喹酮滤泡辅助性T细胞小鼠

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研究型教学与合作学习模式的创建与实践

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重庆医学 2015年第21期44卷 3011-3013页

作者：刘岚赵矫曾永秋陈绍坤税青林泸州医学院医学生物学与遗传学教研室四川泸州646000

如何培养学生解决实际问题的能力和创新能力是当前高等教育改革的重要课题之一。创新能力是在创造性解决问题的过程中培养出来的综合能力[1]。启发学生主动实践,是创新能力培养的关键所在。医学是一门不断创新与发展的学科。高等医学院... 详细信息

如何培养学生解决实际问题的能力和创新能力是当前高等教育改革的重要课题之一。创新能力是在创造性解决问题的过程中培养出来的综合能力[1]。启发学生主动实践,是创新能力培养的关键所在。医学是一门不断创新与发展的学科。高等医学院校在培养学生的过程中,不仅要培养学生的专业知识水平,而且要培养学生的自学能力及敏捷的科学思维[2]。

关键词：合作学习模式研究型教学专业知识水平教学实施过程医学院校自主学习教师教学质量学习过程大班授课网上评教

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精神分裂症候选基因GABRB2遗传与表观调控机制研究

精神分裂症候选基因GABRB2遗传与表观调控机制研究

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中华医学会第十五次全国医学遗传学学术会议暨中国医师协会医学遗传医师分会第一届全国学术会议暨2016年浙江省医学遗传学年会

作者：宗璐南方医科大学基础医学院医学遗传学教研室广州市第一人民医院精神心理科

目的精神分裂症是发病率约为1%的多基因遗传性精神疾病。位于抑制性神经递质伽玛氨基丁酸传输通道中的A型伽玛氨基丁酸受体beta2亚基,其基因GABRB2的DNA变异已发现与精神分裂症相关联,该基因在疾病状态下的表观修饰水平尚未有研究报道... 详细信息

目的精神分裂症是发病率约为1%的多基因遗传性精神疾病。位于抑制性神经递质伽玛氨基丁酸传输通道中的A型伽玛氨基丁酸受体beta2亚基,其基因GABRB2的DNA变异已发现与精神分裂症相关联,该基因在疾病状态下的表观修饰水平尚未有研究报道。方法本项研究基于279例精神分裂症患者和256健康个体的外周血DNA样本,进行全基因组及G ABRB2启动子区域的甲基化和羟甲基化检测,通过Sanger测序法进行启动子区域SNP检测,在细胞水平,通过5-氮杂胞苷(5-azacytidine,5-aza)处理人源神经母细胞瘤细胞系IMR-32,检测GABRB2启动子区域甲基化与表达水平。结果氯氮平的使用可显著增加精神分裂症患者的总甲基化水平;男性患者总羟甲基化水平显著升高,而女性患者总羟甲基化水平却显著低于正常女性;rs72815526、rs3811996和rs3811997都参与调控启动子区域的甲基化及羟甲基化水平;在细胞实验中,启动子区域低甲基化水平可引起G ABRB2的高表达。结论本项目从基因水平、DNA甲基化表观调控及表达水平揭示精神分裂症易感基因GABRB2的表观调控机制。

关键词：精神分裂症启动子 DNA 羟甲基化 GABRB2 候选基因机制研究

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