目的探讨IL-10基因修饰的BMSCs对大鼠脑缺血再灌注损伤(ischemia reperfusion injury,IRI)炎性因子及神经细胞凋亡的影响。方法取SD大鼠骨髓,采用贴壁培养法分离培养BMSCs,经免疫组织化学染色鉴定后,取第3代BMSCs以重组腺病毒(recombinant adenovirus,Ad)介导IL-10基因转染(Ad IL-10-BMSCs)。取40只清洁级成年SD雄性大鼠,采用线栓法制备大脑中动脉阻塞模型后随机分为4组,每组10只。模型制备后3 h于各组大鼠尾静脉注射1 m L含10%FBS的L-DMEM培养液(A组)、61.78 ng IL-10(B组)、1 m L BMSCs悬液(细胞浓度为2×10~6个/m L,C组)、1 m L Ad IL-10-BMSCs悬液(细胞浓度2×10~6个/m L,D组)。C、D组细胞移植前采用Brd U标记。7 d后大鼠经颈总动脉灌注处死取脑组织,免疫染色法检测小胶质细胞(OX42)表达,ELISA法测定TNF-α、IL-1β含量,TUNEL法检测神经细胞凋亡;取C、D组组织行Brd U免疫荧光染色观察。结果C、D组脑组织中均见呈绿色荧光的Brdu阳性细胞,主要分布于梗死区周围的纹状体、大脑皮质、皮质下等。免疫组织化学染色示,B、C、D组OX42阳性细胞数明显少于A组,D组少于B、C组,比较差异有统计学意义(P<0.05)。ELISA检测示D组大鼠脑组织中TNF-α、IL-1β含量较其余3组明显降低(P<0.05)。TUNEL法检测各组凋亡细胞(TUNEL阳性细胞)主要见于梗死灶周围的纹状体及额顶皮质下脑组织(相当于缺血半暗带),D组与A、B、C组比较差异有统计学意义(P<0.05)。结论Ad IL-10-BMSCs能通过抑制小胶质细胞分泌促炎性因子TNF-α、IL-1β,抑制梗死灶周围脑组织神经细胞凋亡,对大鼠脑IRI起保护作用。
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