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吉林大学学报（医学版） 2010年第2期36卷 349-353页

作者：郭亚雄刘艳波李德龙韩向北许多程宏赵丽晶赵丽娟董妍吉林大学基础医学院病理生理学教研室吉林长春130021 北华大学基础医学院病理生理学教研室吉林吉林132001 美国杜兰大学细胞生物学教研室美国新奥尔良la70062

目的:观察20(s)-原人参二醇(PPD)对前列腺癌RM-1细胞生长的影响,并探讨其作用机制。方法:建立前列腺癌RM-1细胞动物模型,将36只C57小鼠随机分为3组:模型组(橄榄油等体积灌胃每天1次、生理盐水等体积腹腔注射每周1次),紫杉醇(Taxol)组(**... 详细信息

目的:观察20(s)-原人参二醇(PPD)对前列腺癌RM-1细胞生长的影响,并探讨其作用机制。方法:建立前列腺癌RM-1细胞动物模型,将36只C57小鼠随机分为3组:模型组(橄榄油等体积灌胃每天1次、生理盐水等体积腹腔注射每周1次),紫杉醇(Taxol)组(***-1,腹腔注射每周1次),PPD组(***-1,灌胃每天1次),连续给药4周。每隔3d测量肿瘤体积1次,给药第4周末处死动物。观察指标:动物一般状态、肿瘤体积、瘤重、抑瘤率、死亡率,采用RT-PCR和Western blotting法检测肿瘤组织Cyclin D1蛋白表达水平。结果:PPD组小鼠一般状态明显好于模型组,表现为活泼好动、毛色光亮;而模型组小鼠步履蹒跚、行动迟缓、精神萎靡;肿瘤组织出现破溃、糜烂、出血。给药13d时,PPD组小鼠肿瘤体积明显减小(P<0.05);21d时PPD组肿瘤体积明显小于Taxol组(P<0.05)。与模型组比较,PPD组小鼠瘤质量明显降低(P<0.05),死亡率为零;与Taxol组比较,PPD组小鼠抑瘤率增高(P<0.05),死亡率降低(P<0.05)。各给药组小鼠肿瘤组织Cyclin D1基因转录、蛋白表达水平均明显低于模型组(P<0.05),与Taxol组比较,PPD组Cyclin D1基因转录明显减弱(P<0.05),而蛋白表达水平差异无显著性(P>0.05)。结论:PPD有明显抑制前列腺癌RM-1细胞生长的作用,其作用机制可能与下调Cyclin D1蛋白表达有关。

关键词： 20(s)-原人参二醇前列腺肿瘤细胞周期蛋白D1

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电刺激迷走神经对蟾蜍心率和心率变异的影响

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中国应用生理学杂志 2010年第2期26卷 229-232页

作者：王洋李亘松中国医科大学基础医学院生理学教研室辽宁沈阳110001

目的:观察不同频率迷走神经刺激对蟾蜍离体心脏的心率及心率变异的影响。方法:将蟾蜍心脏和右侧迷走交感干离体后,以不同频率电刺激神经,记录心电图曲线并作心率变异性(HRV)分析。结果:交感神经阻断后,电刺激迷走交感干,心率(HR)显著下... 详细信息

目的:观察不同频率迷走神经刺激对蟾蜍离体心脏的心率及心率变异的影响。方法:将蟾蜍心脏和右侧迷走交感干离体后,以不同频率电刺激神经,记录心电图曲线并作心率变异性(HRV)分析。结果:交感神经阻断后,电刺激迷走交感干,心率(HR)显著下降(P<0.01),全部正常心动周期的标准差(SDNN)和相邻正常心动周期差值的均方根(RMSSD)显著升高(P<0.01),不同频率刺激组之间没有明显差异;与对照组相比,各指标变化较大;给药组0.2Hz时高频(HF)显著升高(P<0.01),低频/高频比值(LF/HF)明显降低(P<0.05),0.8Hz时HF和LF/HF接近刺激前水平。结论:一定范围内增加刺激频率,迷走神经降低心率的作用增强;没有交感神经调节条件下的迷走神经对心率和心率变异的调节可能存在不同的机制。

关键词：电刺激迷走神经心率心率变异性

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大鼠骨髓基质细胞的体外培养和定向诱导

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河北医科大学学报 2011年第3期32卷 252-255页

作者：魏书艳李育臣王宇张唯王佩贾战斗河北省保定市第一中心医院神经内三科河北保定071000 河北医科大学第三医院神经内科河北石家庄050051 河北大学基础医学院生理学教研室河北保定071000

目的探讨大鼠骨髓基质细胞(mesenchymal stem cells,MSCs)的体外培养生物学特性及其定向诱导分化能力。方法从大鼠双侧股骨中分离获取MSCs,体外培养扩增纯化后传代于塑料培养皿中,相差显微镜观察其形态学特点,MTT法测定绘制传代骨髓间... 详细信息

目的探讨大鼠骨髓基质细胞(mesenchymal stem cells,MSCs)的体外培养生物学特性及其定向诱导分化能力。方法从大鼠双侧股骨中分离获取MSCs,体外培养扩增纯化后传代于塑料培养皿中,相差显微镜观察其形态学特点,MTT法测定绘制传代骨髓间充质干细胞生长曲线,经成骨诱导液,20%新生牛血清(fetal bovineserum,FBS),10mmol/L β-甘油磷酸钠,8～10mmol/L地塞米松,50mg/L维生素C,神经细胞诱导液,0.06mg/L神经生长因子(nerve growth factor,NGF),20%FBS。对传至3～5代的细胞进行体外诱导分化,采用免疫细胞化学法对诱导后的细胞进行鉴定。结果大鼠MSCs在体外培养中具有增殖、分化潜能,可分化为软骨细胞、神经细胞等。结论 MSCs可在体外大量扩增,具有较强的自我更新及多向分化能力,在适宜的诱导分化条件下,可诱导为神经干细胞。

关键词：骨髓细胞细胞培养技术大鼠

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乙型肝炎病毒e抗原阴性慢性乙型肝炎与前C基因及C基因变异关联性临床研究

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河北中医 2011年第9期33卷 1424-1425页

作者：孙晓红李淑琴武宇州刘涛张旖晴张岳魏玮中国中医科学院望京医院脾胃病科北京100102 河北医科大学基础医学院病理生理教研室河北石家庄050011 河北医科大学第二医院心血管内科河北石家庄050071

目的临床观察乙型肝炎病毒e抗原(HBeAg)阴性的慢性乙型肝炎(e-CHB)与前C基因及C基因变异的关联性。方法将慢性乙型肝炎193例进行血清HBeAg、乙型肝炎病毒脱氧核糖核酸(HBV-DNA)水平、前C基因核苷酸1896G→A点突变及C基因核苷酸1762碱基A... 详细信息

目的临床观察乙型肝炎病毒e抗原(HBeAg)阴性的慢性乙型肝炎(e-CHB)与前C基因及C基因变异的关联性。方法将慢性乙型肝炎193例进行血清HBeAg、乙型肝炎病毒脱氧核糖核酸(HBV-DNA)水平、前C基因核苷酸1896G→A点突变及C基因核苷酸1762碱基A→T和1764G→A联合突变的检测。结果慢性乙型肝炎193例中,①HBeAg阴性70例(36.27%),HBeAg阳性123名(63.73%)。②HBeAg阴性前C基因变异率76%,HBeAg阳性前C基因变异率31%,二者比较差异有统计学意义(P<0.05);HBeAg阴性C基因变异率51%,HBeAg阳性C基因变异率30%,二者比较差异无统计学意义(P>0.05)。③HBeAg阳性患者中,前C基因或C基因变异群的HBV-DNA水平低于未变异群,差异比较有统计学意义(P<0.05),而HBeAg阴性患者中,前C基因或C基因变异群与非变异群比较,血清HBV-DNA水平差异比较均无统计学意义(P>0.05)。结论在e-CHB中,前C基因变异与HBeAg转阴具有密切关系,而C基因变异与HBeAg转阴关系不明确;前C基因和C基因变异不能增强病毒毒性,与疾病严重程度可能无关。

关键词：肝炎,乙型慢性肝炎e抗原,乙型基因,病毒

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HLA-DR1二聚体的构建及其在昆虫细胞中的表达和纯化

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华中科技大学学报（医学版） 2010年第3期39卷 305-310页

作者：宋银宏刘燕牛力翁秀芳孙伟于倩吴雄文华中科技大学同济医学院基础医学院免疫学系武汉430030 九江学院基础医学院病原生物学与免疫学教研室九江332000 九江学院基础医学院生理学与病理生理学教研室九江332000

目的构建HLA-DR1(由DRA和DRB1*01基因编码)杆状病毒表达载体,并使其在昆虫细胞内得到表达。方法采用RT-PCR方法从721.221细胞中扩增DRα和DRβ的信号肽及胞外序列,运用重叠PCR将DRα和DRβ片段分别与Fos和Jun的亮氨酸拉链序列相连,成为D... 详细信息

目的构建HLA-DR1(由DRA和DRB1*01基因编码)杆状病毒表达载体,并使其在昆虫细胞内得到表达。方法采用RT-PCR方法从721.221细胞中扩增DRα和DRβ的信号肽及胞外序列,运用重叠PCR将DRα和DRβ片段分别与Fos和Jun的亮氨酸拉链序列相连,成为DRα-Fos和DRβ-Jun,DRα和DRβ可凭借Fos和Jun的亮氨酸拉链结合形成DR1分子,再通过EcoRⅠ酶切位点将DRα-Fos和人IgG1的Fc段相连,形成DRα-Fos-Fc重组序列,2个同源的DR1分子可通过IgG1的Fc段的二硫键结合形成二聚体。分别将DRα-Fos-Fc及DRβ-Jun插入杆状病毒表达载体pFastBacTMDual的2个多克隆位点处,构建出重组载体pFastBacTMDual+[DR1/Fc]。对构建的载体进行PCR及限制性内切酶酶切鉴定和测序。采用脂质体转染方法将表达载体转入昆虫细胞系Sf9中,通过双抗夹心ELISA及Westernblot检测HLA-DR1的表达。结果 PCR及酶切鉴定和测序证实目的基因插入正确且序列与GenBank一致。ELISA和Westernblot检测表明DR1杆状病毒感染的Sf9细胞培养上清HLA-DR1表达呈阳性,且表达的HLA-DR1分子具有正确的构象。结论成功构建出杆状病毒表达载体pFastBacTMDual+[DR1/Fc],并在Sf9细胞中得到表达,为研究HLA-DR1限制性的T细胞应答奠定了基础。

关键词： HLA-DR1 二聚体杆状病毒载体昆虫细胞基因表达

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血管内皮生长因子在神经系统中的作用与机制

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神经解剖学杂志 2010年第5期26卷 561-563页

作者：李欣张君梁尚栋南昌大学基础医学院生理学教研室南昌330006

血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)是一种强的血管生成肽,也是目前发现的最强烈的增加血管通透性物质之一。在神经组织中,VEGF可表达于神经细胞、星形胶质细胞和血管内皮细胞,不但能促进新生血管形成,还具有... 详细信息

血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)是一种强的血管生成肽,也是目前发现的最强烈的增加血管通透性物质之一。在神经组织中,VEGF可表达于神经细胞、星形胶质细胞和血管内皮细胞,不但能促进新生血管形成,还具有直接的神经营养和神经保护作用,促进神经再生。[第一段]

关键词：血管内皮生长因子神经营养神经保护神经再生凋亡

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左心室舒张功能评价方法的研究

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生物医学工程学杂志 2010年第2期27卷 270-273页

作者：欧颖张小兵郑鸣之包家立陈莹莹沈岳浙江大学基础医学国家理科人才培养基地杭州310058 浙江大学医学院生理教研室杭州310058

目前国内缺乏能够全面而简单地评价左心室舒张功能的方法。为了解决这个问题,我们根据一定的数学模型,建立了算法,从而提出一种新方法,通过采用MATLAB语言编写的程序来实现。这种方法主要是根据左心室内压P的变化,得到P-dP/dT环,并计算... 详细信息

目前国内缺乏能够全面而简单地评价左心室舒张功能的方法。为了解决这个问题,我们根据一定的数学模型,建立了算法,从而提出一种新方法,通过采用MATLAB语言编写的程序来实现。这种方法主要是根据左心室内压P的变化,得到P-dP/dT环,并计算出左心室舒张末压(LVEDP)、最大左心室舒张速率(-(dP/dt)max)、等容舒张期时间常数(τ)和室腔僵硬度常数(Kd)这四个重要指标。从离体心脏缺血/再灌注实验得到的结果证明了这种方法的可行性和有效性。因此这种使用τ和Kd指标的方法对评价左心室舒张功能是敏感而有效的,可以应用于左心室舒张功能异常的早期检测。

关键词： MATLAB 左心室舒张功能等容舒张期时间常数室腔僵硬度常数

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染铝对断乳大鼠学习记忆及海马细胞内Ca2＋及磷脂酶和N-甲基-D-天冬氨酸受体α表达的影响

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中华劳动卫生职业病杂志 2010年第9期28卷 648-651页

作者：靳翠红巫生文周平刘秋芳逯晓波时利德蔡原中国医科大学公共卫生学院毒理教研室沈阳110001 沈阳基础医学院生理学教研室

目的研究亚慢性染铝对断乳大鼠学习记忆和海马细胞内Ca2＋及磷脂酶C（phospholipase C,PLC）、N-甲基-D-天冬氨酸受体α（NMDARα）表达的影响,以探讨铝损伤发育中大鼠学习记忆的可能机制.方法刚断乳Wistar大鼠40只,随机分为4组：对... 详细信息

目的研究亚慢性染铝对断乳大鼠学习记忆和海马细胞内Ca2＋及磷脂酶C（phospholipase C,PLC）、N-甲基-D-天冬氨酸受体α（NMDARα）表达的影响,以探讨铝损伤发育中大鼠学习记忆的可能机制.方法刚断乳Wistar大鼠40只,随机分为4组：对照组、低剂量组（饮用含0.2%AlCl3的蒸馏水溶液）、中剂量组（饮用含0.4%AlCl3的蒸馏水溶液）、高剂量组（饮用含0.6%AlCl3的蒸馏水溶液）,每组10只.通过饮水亚慢性连续染毒90 d,跳台试验检测仔鼠学习记忆能力,荧光分光光度计法测定细胞内Ca2＋浓度,免疫印迹（Western blot）法测定PLC、NMDARα的表达.结果随着染铝剂量的增加,大鼠跳台试验的潜伏期明显缩短,低、中、高剂量组分别为（232.20±57.45）、（35.00±9.37）、（16.10±5.57）s,而错误次数明显增加,低、中、高剂量组分别为（1.10±0.74）、（2.20±0.92）、（3.40±1.51）次,与对照组[分别为（300.00±0.00）s、（0.00±0.00）次]比较,差异均有统计学意义（P〈0.05）;而海马细胞内[Ca2＋]i浓度明显下降,差异亦有统计学意义（P〈0.05）;低、中、高剂量铝暴露组PLC、NMDARα的表达水平分别为0.30±0.06、0.18±0.04、0.16±0.03,0.38±0.03、0.32±0.02、0.25±0.02,较对照组（分别为0.47±0.07、0.48±0.04）明显降低,差异均有统计学意义（P〈0.01）.结论亚慢性铝暴露可以引起发育中学习记忆能力的损害,抑制NMDARα及PLC的表达,降低海马细胞内Ca2＋水平,推测Ca2＋信号系统的紊乱可能是铝损害学习记忆能力的机制之一.

关键词：铝磷脂酶C 受体,N-甲基-D-天冬氨酸

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TIMP3、E-Cadherin基因在食管癌细胞系EC1和EC9706中的甲基化及蛋白表达

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世界华人消化杂志 2010年第4期18卷 379-383页

作者：赵璇李沛马俊芬赵继敏杨洪艳董子明郑州大学基础医学院病理生理教研室河南省郑州市450052

目的:观察食管癌细胞系EC1和EC9706中TIMP3、E-Cadherin基因甲基化的水平及蛋白表达,以及去甲基化药物5-Aza-CdR对其的影响.方法:应用甲基化特异性PCR(MSP)和免疫细胞化学的方法,分别检测体外培养的食管癌细胞系EC1和EC9706中TIMP3和E-C... 详细信息

目的:观察食管癌细胞系EC1和EC9706中TIMP3、E-Cadherin基因甲基化的水平及蛋白表达,以及去甲基化药物5-Aza-CdR对其的影响.方法:应用甲基化特异性PCR(MSP)和免疫细胞化学的方法,分别检测体外培养的食管癌细胞系EC1和EC9706中TIMP3和E-Cadherin基因甲基化水平及蛋白表达.用5μmol/L5-Aza-CdR处理两种细胞系后,用同样的方法检测其甲基化水平及蛋白表达,观察药物的影响.结果:TIMP3基因在食管癌细胞系EC1和EC9706中均表现为非甲基化,蛋白呈现弱表达;而E-Cadherin基因在EC1中发生甲基化,E C9706中发生半甲基化,蛋白表达均缺失.5-Aza-CdR作用后的两种细胞系中,TIMP3基因仍为非甲基化,而蛋白表达似有所曾强;但E-Cadherin基因甲基化得到了逆转,蛋白表达由原来的不表达,转变为强表达.结论:5-Aza-CdR能够有效逆转E-Cadherin基因甲基化,并使其蛋白恢复表达;TIMP3基因的失活似与甲基化机制无关,5-Aza-CdR对其蛋白表达的恢复作用微弱.

关键词：食管癌甲基化 5-Aza-CdR TIMP3 E—Cadherin

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曲古菌素A通过抑制MAPK/ERK通路上调食管癌EC1细胞CAR的表达

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中国肿瘤生物治疗杂志 2010年第2期17卷 139-143页

作者：马俊芬刘康栋刘霞杨洪艳黄幼田赵明耀董子明郑州大学基础医学院病理生理学教研室河南郑州450052

目的:观察曲古菌素A(trichostatin A,TSA)对人食管癌细胞EC1膜表面柯萨奇病毒-腺病毒受体(Coxsachievirus and adenovirus receptor,CAR)表达水平的影响,探讨MAPK/ERK信号通路在TSA上调CAR表达中的作用。方法:0.3、0.5、1.0μmol/L的TSA处理EC1细胞48h,采用免疫荧光、RT-PCR、Western blotting检测CAR的表达。以1.0μmol/LTSA作用EC1细胞1、6、12、24、48h,Western blotting检测p-ERK、CAR表达水平的变化,分析CAR表达和p-ERK水平变化的相关性。结果:0.3、0.5、1.0μmol/LTSA处理EC1细胞后,CAR蛋白和mRNA水平均明显增加(P<0.05),并呈剂量依赖关系。1.0μmol/LTSA作用EC1细胞6、12、24、48h后,CAR蛋白表达较对照组均明显增加(P<0.05);p-ERK表达水平均明显下降(P<0.05),两者变化呈显著负相关(r=-0.886,P<0.01)。结论:TSA能够上调人食管癌EC1细胞膜表面CAR的表达水平,其机制可能与其抑制MAPK/ERK通路有关。

关键词：食管癌细胞曲古菌素A 柯萨奇病毒-腺病毒受体细胞外信号调节激酶

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