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多柔比星通过Stat3-Oct-4/CD44途径诱导三阴性乳腺癌4T1细胞干性的产生

中国病理生理杂志 2019年第2期35卷 360-364页

作者：钟瑾怡成丛丛徐金媛李雪松张升张宝刚王丽华史立宏潍坊医学院药学院山东潍坊261053 潍坊医学院附属医院分子肿瘤学实验室山东潍坊261053 潍坊医学院病理学教研室山东潍坊261053 潍坊医学院山东省应用药理学重点实验室山东潍坊261053

目的:观察多柔比星对三阴性乳腺癌细胞干性的诱导作用并研究其作用机制。方法:用不同终浓度(0、0.05、0.1和0.5μmol/L)多柔比星培养细胞,观察细胞形态及存活情况,筛选出最适多柔比星浓度(0.1μmol/L)用于后续实验。小鼠乳腺癌4T1细胞... 详细信息

目的:观察多柔比星对三阴性乳腺癌细胞干性的诱导作用并研究其作用机制。方法:用不同终浓度(0、0.05、0.1和0.5μmol/L)多柔比星培养细胞,观察细胞形态及存活情况,筛选出最适多柔比星浓度(0.1μmol/L)用于后续实验。小鼠乳腺癌4T1细胞和人乳腺癌MDA-MB-468细胞经多柔比星(0.1μmol/L)持续刺激4周后分别命名为4T1-DOX和MDA-MB-468-DOX细胞。通过成球实验观察细胞的干性,免疫荧光检测CD133的表达,流式细胞术检测CD44的表达,Western blot检测Stat3、p-Stat3和Oct-4的表达。结果:成球实验发现4T1-DOX细胞成球能力较4T1细胞显著增强,MDA-MB-468-DOX细胞成球能力较MDA-MB-468细胞也显著增强(P <0.05);免疫荧光结果显示CD133在4T1-DOX细胞的表达比4T1细胞明显增高(P <0.05);流式细胞术结果表明CD44在4T1-DOX中表达较4T1细胞显著增高(P <0.05);Western blot结果显示Oct-4及p-Stat3在4T1-DOX细胞中的蛋白水平增高(P <0.05),而总Stat3的表达量未见显著改变。以上结果表明在0.1μmol/L多柔比星持续诱导下4T1细胞干性特征明显增强。加入Stat3抑制剂WP1066后,CD44、Oct-4和p-Stat3的蛋白水平均下降(P <0.05)。结论:多柔比星通过激活Stat3-Oct-4信号通路,使三阴性乳腺癌细胞成球能力增强,4T1细胞干性标志物CD133及CD44表达增多,诱导乳腺癌细胞干性的产生。因此,Stat3-Oct-4通路可能成为三阴性乳腺癌治疗的新靶标。

关键词：多柔比星三阴性乳腺癌肿瘤干细胞 Stat3/Oct-4信号通路

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FZD4在骨肉瘤组织中的表达及意义

FZD4在骨肉瘤组织中的表达及意义

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中国解剖学会2019年年会

作者：王淑坤周风华丁康孙丹刘美逸潍坊医学院病理学教研室

骨肉瘤是青少年常见的恶性肿瘤之一,FZD4基因作为Frizzle基因家族的一员,编码Wnt信号通路中的受体蛋白,在骨肉瘤发生发展中发挥重要作用。探讨FZD4在骨肉瘤组织中的表达及在骨肉瘤细胞系143B细胞中的生物学功能,为FZD4在骨肉瘤预后判断... 详细信息

骨肉瘤是青少年常见的恶性肿瘤之一,FZD4基因作为Frizzle基因家族的一员,编码Wnt信号通路中的受体蛋白,在骨肉瘤发生发展中发挥重要作用。探讨FZD4在骨肉瘤组织中的表达及在骨肉瘤细胞系143B细胞中的生物学功能,为FZD4在骨肉瘤预后判断和治疗等方面的临床应用提供理论基础。本研究收集骨肉瘤和瘤旁正常组织临床样本,应用SP免疫组织化学法分别检测各组织中FZD4

关键词：骨肉瘤组织

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ALS转基因小鼠脊髓中miRNA-132表达减少BDNF表达增加

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中国组织化学与细胞化学杂志 2019年第1期28卷 14-18页

作者：孙丹王淑坤丁康刘美逸蒋欣陈燕春周风华潍坊医学院病理学教研室潍坊医学院生物科学与技术学院潍坊医学院组织学与胚胎学教研室潍坊261053

目的研究miRNA-132和脑源性神经营养因子(brain derived neurotrophic factor,BDNF)在肌萎缩侧索硬化症(amyotrophic lateral sclerosis,ALS)转基因小鼠脊髓中的表达变化,探讨miRNA-132、BDNF在ALS发病中的作用。方法取SOD1-G93A ALS转基因鼠发病早期(95d)、中期(108d)和晚期(122d)脊髓组织,应用qRT-PCR及原位杂交(hybridization in situ, ISH)技术检测miRNA-132的表达及定位,应用qRT-PCR及Western blot技术检测BDNF在mRNA及蛋白水平变化,免疫荧光技术检测BDNF在脊髓中的表达及分布,以同窝野生型鼠作为对照。结果与野生型鼠比较,miRNA-132在ALS转基因鼠脊髓组织表达下降,miRNA-132阳性信号主要定位脊髓前角细胞胞体;在ALS转基因鼠脊髓组织BDNF mRNA及蛋白水平均增高,BDNF免疫阳性细胞主要表达于脊髓前角神经元,表达信号明显增强。结论 miRNA-132、BDNF可能在ALS发病过程中发挥了重要作用。

关键词：肌萎缩侧索硬化症转基因鼠 miRNA-132 脑源性神经营养因子

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MiR-206与ANXA2的3'UTR靶向结合抑制乳腺癌侵袭

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中国生物化学与分子生物学报 2018年第4期34卷 434-439页

作者：王瑞鸽颜子千邓梓坤于京福张宝刚潍坊医学院病理学教研室山东潍坊261053 潍坊医学院麻醉学系山东潍坊261053

膜联蛋白A2(annexin A2,ANXA2)可促进人结直肠癌的侵袭和迁移。然而,ANXA2在乳腺癌中的作用以及调节机制尚缺乏系统的研究。本研究旨在探讨微小RNA-206(microRNA-206,miR-206)如何调节ANXA2基因的表达,进而影响乳腺癌的侵袭。通过基因... 详细信息

膜联蛋白A2(annexin A2,ANXA2)可促进人结直肠癌的侵袭和迁移。然而,ANXA2在乳腺癌中的作用以及调节机制尚缺乏系统的研究。本研究旨在探讨微小RNA-206(microRNA-206,miR-206)如何调节ANXA2基因的表达,进而影响乳腺癌的侵袭。通过基因预测软件Target Scan(Target Scan V5.2)找到与ANXA2的3'UTR区互补结合的miR-206。运用实时定量PCR(qRTPCR)检测不同乳腺癌细胞系中miR-206的表达水平,发现低侵袭性乳腺癌MCF-7细胞株miR-206表达量明显高于高侵袭性乳腺癌细胞株MDA-231、MDA-435和T47D。运用转染技术将miR-206质粒及miR-206抑制剂转入乳腺癌细胞系MDA-231后,qRT-PCR检测转染后各组细胞中miR-206的表达情况,结果显示转染成功。用Western印迹法检测各组细胞中ANXA2的表达情况,结果显示,miR-206负向调控ANXA2蛋白的表达。qRT-PCR显示,过表达乳腺癌细胞内miR-206后,ANXA2 mRNA基本没有变化。结果显示,miR-206是在翻译水平上影响ANXA2蛋白的表达。荧光素酶实验显示:miR-206能特异性地与ANXA2 mRNA的3'UTR结合,抑制其荧光素酶活性。Transwell侵袭实验检测各组细胞的侵袭能力。结果显示,过表达miR-206后,乳腺癌细胞体外侵袭能力明显减弱。综上所述,miR-206通过靶向结合癌基因ANXA2 mRNA的3'UTR区,抑制ANXA2蛋白翻译,从而抑制了乳腺癌细胞的侵袭。因此,miR-206有望成为抑制乳腺癌侵袭与治疗乳腺癌的新靶点和生物学标记物。

关键词：乳腺癌侵袭 microRNA-206 膜联蛋白A2

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miR-125a-5p通过PI3K/Akt/MMP信号通路抑制乳腺癌细胞的侵袭与转移

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中国药理学通报 2018年第8期34卷 1145-1149页

作者：杨玉玲王照岩杨志一李洪利尹崇高刘雨清潍坊医学院临床医学院病理学教研室山东潍坊261053 潍坊医学院医学研究实验中心山东潍坊261053 潍坊医学院护理学院山东潍坊261053

目的探讨miR-125a-5p抑制乳腺癌细胞侵袭与转移的潜在机制。方法采用实时荧光定量PCR检测组织及细胞中miR-125a-5p的表达量;利用瞬时转染技术将过表达质粒转染到MDA231中,Transwell侵袭实验检测miR-125a-5p对各组细胞侵袭的影响;Western... 详细信息

目的探讨miR-125a-5p抑制乳腺癌细胞侵袭与转移的潜在机制。方法采用实时荧光定量PCR检测组织及细胞中miR-125a-5p的表达量;利用瞬时转染技术将过表达质粒转染到MDA231中,Transwell侵袭实验检测miR-125a-5p对各组细胞侵袭的影响;Western blot检测各组细胞Akt的磷酸化情况,以及基质金属蛋白酶2(matrix metalloproteinase 2,MMP-2)、MMP-9的表达量。结果通过临床标本的相关检测发现,miR-125a-5p在乳腺癌组织中的表达量明显低于癌旁相对正常组织,并且与淋巴结转移等有关。体外细胞培养实验发现,过表达miR-125a-5p细胞组的侵袭能力明显降低,Akt的磷酸化明显减弱,并且MMP-2和MMP-9表达量下降;而同时过表达GRB相关蛋白2(GRB-associated binding protein2,GAB2)和miR-125a-5p细胞组的侵袭能力明显增强,Akt的磷酸化明显增强,并且MMP-2和MMP-9表达量明显升高,揭示了GAB2和miR-125a-5p共同通过PI3K/Akt通路影响MMP-2和MMP-9的表达。结论 miR-125a-5p能够通过PI3K/Akt/MMP信号通路,抑制乳腺癌细胞的侵袭与转移。

关键词：乳腺癌 miR-125a-5p PI3K/Akt MMP-2 MMP-9 侵袭转移

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MiR-186-5p通过靶向调控RAB2A在乳腺癌细胞阿霉素耐药性中的逆转作用机制

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中国药理学通报 2018年第12期34卷 1668-1673页

作者：孙玉国王照岩杨玉玲杨志一尹崇高李洪利潍坊医学院附属医院药学部山东潍坊261053 潍坊医学院病理学教研室山东潍坊261053 潍坊医学院护理学院山东潍坊261053 潍坊医学院医学研究实验中心山东潍坊261053

目的探讨miRNA-186-5p在乳腺癌细胞阿霉素耐药性逆转作用中的分子机制。方法采用阿霉素诱导人乳腺癌细胞系MCF-7,建立阿霉素耐药性细胞株,命名为MCF-7/ADR;采用双荧光素酶实验检测miR-186-5p与RAB2A的靶向结合情况;采用qRT-PCR和Western... 详细信息

目的探讨miRNA-186-5p在乳腺癌细胞阿霉素耐药性逆转作用中的分子机制。方法采用阿霉素诱导人乳腺癌细胞系MCF-7,建立阿霉素耐药性细胞株,命名为MCF-7/ADR;采用双荧光素酶实验检测miR-186-5p与RAB2A的靶向结合情况;采用qRT-PCR和Western blot分别检测细胞中miR-186-5p、RAB2A mRNA的表达及RAB2A蛋白的表达情况;特异性上调MCF-7/ADR中的miR-186-5p,下调MCF-7中的miR-186-5p后,采用CCK-8和Western blot分别检测乳腺癌细胞增殖情况以及RAB2A蛋白的表达;采用Western blot和CCK-8分别检测共转染后,细胞增殖情况的变化及PI3K/Akt信号通路的激活情况。结果双荧光素酶实验结果显示,RAB2A是miR-186-5p的直接靶点;qRT-PCR结果显示,在MCF-7/ADR细胞中miR-186-5p mRNA表达明显下调,而RAB2A mRNA表达没有明显变化,RAB2A的蛋白表达明显上调。特异性上调MCF-7/ADR中的miR-186-5p,其增殖能力明显下降,RAB2A蛋白的表达明显下调;下调MCF-7中的miR-186-5p,其增殖能力明显增加,RAB2A蛋白的表达明显上调。Western blot和CCK-8结果显示,过表达miR-186-5p使PI3K/Akt信号通路表达明显减弱,且上调RAB2A逆转了上调miR-186-5p所致的增殖能力的减弱。结论 miR-186-5p通过靶向调控RAB2A,经PI3K/Akt信号通路调控乳腺癌细胞的阿霉素耐药和增殖。

关键词：乳腺癌 miR-186-5p RAB2A 阿霉素耐药增殖 PI3K/Akt

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香椿子正丁醇提取物通过激活Nrf2改善高糖引起的肾小球内皮细胞氧化应激

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中国组织化学与细胞化学杂志 2019年第3期28卷 197-203页

作者：仲玉鑫胡珊王婷婷张雨淼李万忠于丽刘雨清张红霞潍坊医学院临床医学院临床病理学系潍坊261053 潍坊医学院神经疾病与再生修复实验室潍坊261053 潍坊医学院组织学与胚胎学教研室潍坊261053 潍坊医学院附属医院肾内科潍坊261053 潍坊医学院药学院药剂学教研室潍坊261053

目的探讨香椿子正丁醇提取物(n-butyl alcohol extract of toona sinensis,NBAE)对高糖引起的肾小球内皮细胞氧化应激的影响及机制。方法分别以高糖(high glucose,HG)、HG+NBAE刺激人肾小球内皮细胞,采用DCFDA法检测细胞内活性氧(reacti... 详细信息

目的探讨香椿子正丁醇提取物(n-butyl alcohol extract of toona sinensis,NBAE)对高糖引起的肾小球内皮细胞氧化应激的影响及机制。方法分别以高糖(high glucose,HG)、HG+NBAE刺激人肾小球内皮细胞,采用DCFDA法检测细胞内活性氧(reactive oxygenspecies,ROS)生成情况,Nitrate/Nitrite Colorimetric法检测细胞内NO的含量,Western blot检测Nrf2、NQO1及HO-1的蛋白表达,免疫荧光方法检测Nrf2、P47phox在细胞内的定位及表达。结果高糖刺激肾小球内皮细胞后出现氧化应激损伤,ROS升高,NO减少,p47phox表达量增高,Nrf2及下游蛋白NQO1、HO-1表达减少;NBAE可明显提高Nrf2的表达,并增加下游蛋白NQO1和HO-1的表达,从而抑制高糖导致的ROS升高,抑制p47phox的表达,并稳定NO的含量。结论NBAE通过激活Nrf2及其下游靶蛋白来改善高糖对肾小球内皮细胞造成的氧化应激损伤。

关键词：香椿子正丁醇提取物 Nrf2 肾小球内皮细胞氧化应激

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miR-125a-5p通过GSK-3β/Snail信号通路抑制乳腺癌细胞的上皮-间充质转化

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中国病理生理杂志 2018年第6期34卷 1008-1013页

作者：王照岩杨玉玲杨志一尹崇高李洪利刘雨清潍坊医学院病理学教研室山东潍坊261053 潍坊医学院护理学院山东潍坊261053 潍坊医学院医学研究实验中心山东潍坊261053

目的:探讨微小RNA-125a-5p(miR-125a-5p)通过GSK-3β/Snail信号通路对乳腺癌细胞上皮-间充质转化(EMT)的影响。方法:RT-qPCR检测人正常乳腺上皮细胞与乳腺癌细胞中miR-125a-5p的表达量,同时检测miR-125a-5p质粒在人乳腺癌MDA-MB-231细... 详细信息

目的:探讨微小RNA-125a-5p(miR-125a-5p)通过GSK-3β/Snail信号通路对乳腺癌细胞上皮-间充质转化(EMT)的影响。方法:RT-qPCR检测人正常乳腺上皮细胞与乳腺癌细胞中miR-125a-5p的表达量,同时检测miR-125a-5p质粒在人乳腺癌MDA-MB-231细胞中的转染效率;趋化运动实验与Transwell侵袭实验检测趋化运动能力和侵袭能力;Western blot检测EMT相关标志物的变化,同时检测磷酸化糖原合成酶激酶3β(p-GSK-3β)的蛋白水平及Snail的转核情况。结果:乳腺癌细胞中miR-125a-5p的表达量明显低于人正常乳腺上皮细胞(P<0.05);miR-125a-5p在转染miR-125a-5p质粒的MDA-MB-231细胞中表达水平明显增高;MDA-MB-231细胞的趋化运动能力在表皮生长因子(EGF)浓度为10μg/L时最强;在EGF刺激下,与MDA-MB-231/NC细胞组相比,MDAMB-231/miR-125a-5p细胞组的侵袭能力明显降低,上皮钙黏着蛋白(E-cadherin)表达量升高,波形蛋白(vimentin)和p-GSK-3β的蛋白水平明显降低,同时Snail转核受到明显抑制;与MDA-MB-231/miR-125a-5p+Con细胞组相比,MDA-MB-231/miR-125a-5p+GAB2细胞组的侵袭能力明显增强,E-cadherin表达量降低,vimentin和p-GSK-3β的蛋白水平明显升高,同时促进Snail转核。结论:miR-125a-5p可通过GSK-3β/Snail信号通路抑制乳腺癌细胞的EMT,进而抑制乳腺癌细胞的侵袭能力。

关键词：乳腺癌微小RNA-125a-5p 上皮-间充质转化肿瘤侵袭 GSK-3β/Snail信号通路

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Wnt7a及其受体Fzd5在大肠癌中的表达及意义

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中国老年学杂志 2018年第19期38卷 4726-4729页

作者：孙丹王淑坤苗玉娟卢强侯琛宋妍周风华潍坊医学院病理学教研室山东潍坊261053 潍坊医学院生物科学与技术学院

目的探讨Wnt7a及其受体Frizzled(Fzd) 5在大肠癌中的表达及关系,揭示大肠癌发生发展的可能机制。方法收集大肠癌标本80例,以癌旁正常组织作为对照。qRT-PCR技术检测Wnt7a及其受体Fzd5在大肠癌及癌旁正常组织中mRNA水平的变化。Western... 详细信息

目的探讨Wnt7a及其受体Frizzled(Fzd) 5在大肠癌中的表达及关系,揭示大肠癌发生发展的可能机制。方法收集大肠癌标本80例,以癌旁正常组织作为对照。qRT-PCR技术检测Wnt7a及其受体Fzd5在大肠癌及癌旁正常组织中mRNA水平的变化。Western印迹方法检测Wnt7a及其受体Fzd5在蛋白水平的变化,免疫组化检测Wnt7a及其受体Fzd5的表达变化及分布特点,同时观察Wnt7a及其受体Fzd5与大肠癌临床病理参数的关系。结果与癌旁正常组织比较,大肠癌组织中Wnt7a及其受体Fzd5在mRNA及蛋白水平均明显增高(P<0. 05);免疫组化及Western印迹结果显示,Wnt7a及其受体Fzd5均在细胞质表达,且大肠癌组织的表达强度明显高于癌旁正常组织(P<0. 05)。相关性分析表明,Wnt7a与受体Fzd5的表达均与大肠癌的体积、Duke分级及是否伴有淋巴结转移具有明显的相关性(P<0. 05),且Wnt7a与受体Fzd5两者之间呈正相关。结论 Wnt7a可能通过与受体Fzd5的结合激活Wnt信号,参与了大肠癌的发生与发展。

关键词： Wnt7a Fzd5 大肠癌

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香椿子正丁醇提取物通过激活Nrf2改善高糖引起的肾小球内皮细胞氧化应激

香椿子正丁醇提取物通过激活Nrf2改善高糖引起的肾小球内皮细胞氧...

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中国解剖学会2019年年会

作者：仲玉鑫胡珊王婷婷张雨淼李万忠于丽张红霞潍坊医学院神经疾病与再生修复实验室潍坊医学院临床医学院临床病理学系潍坊医学院组织胚胎学教研室潍坊医学院附属医院肾内科潍坊医学院药学院药剂学教研室

＜正＞探讨香椿子正丁醇提取物（n-butyl alcohol extract of Toona sinensis,NBAE）对高糖引起的肾小球内皮细胞氧化应激作用及机制。本实验分别以高糖、高糖+NBAE刺激人肾小球内皮细胞,采用DCFDA法检测细胞内活性氧（reactive oxygens...

＜正＞探讨香椿子正丁醇提取物（n-butyl alcohol extract of Toona sinensis,NBAE）对高糖引起的肾小球内皮细胞氧化应激作用及机制。本实验分别以高糖、高糖+NBAE刺激人肾小球内皮细胞,采用DCFDA法检测细胞内活性氧（reactive oxygenspecies,ROS）生成情况,Nitrate/Nitrite Colorimetric法检测细胞内NO的含量,Western blotting检测Nrf2、NQO1及HO-1的蛋白表达,免疫荧光方法检测Nrf2、

关键词：

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