研究背景:烟碱型乙酰胆碱受体α7(α7n ACh R,简称α7)是胆碱能抗炎通路中发挥关键作用的受体,属配体门控离子通道受体。青藤碱(sinomenine,SIN)是中药青风藤的主要活性成分,具有抗炎、免疫抑制、镇痛等多种生物活性。本实验室前期研究...
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研究背景:烟碱型乙酰胆碱受体α7(α7n ACh R,简称α7)是胆碱能抗炎通路中发挥关键作用的受体,属配体门控离子通道受体。青藤碱(sinomenine,SIN)是中药青风藤的主要活性成分,具有抗炎、免疫抑制、镇痛等多种生物活性。本实验室前期研究揭示青藤碱对LPS刺激的巨噬细胞分泌TNF-α、IL-6及NF-κB活化的抑制作用可被选择性α7受体拮抗剂α银环蛇毒素(α-BTX)以及α7 si RNA显著抑制,提示α7n ACh R是SIN发挥抗炎作用的关键靶点。目的 :探讨青藤碱作用于α7对巨噬细胞游离Ca2+和JAK2/STAT3信号通路的调节作用,进一步阐明青藤碱靶向α7的抗炎机制。方法:采用小鼠巨噬细胞系RAW264.7,以脂多糖(LPS)诱导细胞炎症模型,给予青藤碱(SIN)和烟碱(Nic)干预,观察α7拮抗剂美加明(Mec)和α-BTX对SIN和Nic作用的影响。以ELISA法检测细胞分泌TNF-α和单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)的变化,荧光显微镜观察细胞在无Ca2+环境下胞内Ca2+的变化;观察JAK2特异性的抑制剂AG490对分泌TNF-α的影响;Western blot检测STAT3、P-STAT3蛋白的表达。结果 :SIN和Nic均能明显抑制LPS刺激下RAW264.7细胞分泌TNF-α与MCP-1(P<0.05),无Ca2+环境下LPS刺激致胞内游离Ca2+明显增加,SIN和Nic均可明显降低游离Ca2+,拮抗剂能抑制SIN和Nic的上述作用。AG490能抑制SIN和Nic对TNF-α的抑制作用,SIN和Nic能增加P-STAT3蛋白,但不影响STAT3蛋白,拮抗剂能抑制SIN和Nic的作用。结论 :SIN和Nic作用于α7n ACh R抑制巨噬细胞分泌TNF-α和MCP-1,抑制胞内钙库释放Ca2+,并激活JAK2/STAT3信号通路发挥抗炎作用。
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