检索结果-内蒙古大学图书馆

南方农业学报 2025年第3期56卷 816-826页

作者：林世锋王仁刚杨志晓王自力李莉朱秀陈越男贵州省烟草科学研究院/烟草行业烟草分子遗传重点实验室贵州贵阳550081 贵州师范大学贵州贵阳550025

[目的]克隆豆伞滑刃线虫(Bursaphelenchus doui)类转甲状腺素(Transthyretin-like,TTL)基因Bd-TTL-1并进行表达特性分析,为进一步研究该基因的生物学功能打下基础。[方法]以植物寄生线虫豆伞滑刃线虫为试验材料,以其体前端cDNA为试验方... 详细信息

[目的]克隆豆伞滑刃线虫(Bursaphelenchus doui)类转甲状腺素(Transthyretin-like,TTL)基因Bd-TTL-1并进行表达特性分析,为进一步研究该基因的生物学功能打下基础。[方法]以植物寄生线虫豆伞滑刃线虫为试验材料,以其体前端cDNA为试验方,体后端cDNA为驱动方,利用固相消减杂交方法构建豆伞滑刃线虫体前端特异cDNA文库。利用反向Northern杂交和测序筛选文库,结合RACE技术获得Bd-TTL-1基因全长序列,并利用生物信息学软件及数据库对Bd-TTL-1蛋白的理化性质、信号肽、跨膜区、同源性和保守结构域进行预测分析。利用实时荧光定量PCR和原位杂交分别进行基因发育模式和表达定位分析。[结果]成功构建1个豆伞滑刃线虫体前端特异cDNA文库。通过反向Northern杂交、测序与RACE技术相结合的方法克隆获得豆伞滑刃线虫TTL全长基因Bd-TTL-1,GenBank登录号PQ276066。Bd-TTL-1基因DNA编码区全长497 bp,包括2个外显子和1个内含子;cDNA编码区全长435 bp,编码144个氨基酸。预测Bd-TTL-1蛋白的相对分子量为15.86 kD,理论等电点为9.37;Bd-TTL-1蛋白含有1个典型且保守的TTL蛋白结构域,存在信号肽但无跨膜结构域,属于分泌性蛋白。实时荧光定量PCR结果显示,Bd-TTL-1基因在豆伞滑刃线虫各发育阶段均有表达,但在虫卵期表达微弱,显著低于其他发育阶段(P<0.05)。原位杂交结果显示,Bd-TTL-1基因在豆伞滑刃线虫的食道腺特异表达。[结论]豆伞滑刃线虫Bd-TTL-1蛋白的氨基酸序列含有1个TTL蛋白保守结构域,是一种具有信号肽但无跨膜结构域的分泌性蛋白;Bd-TTL-1基因在豆伞滑刃线虫食道腺中特异表达,初步推测编码蛋白在寄生过程中通过口针释放到体外发挥作用。

关键词：豆伞滑刃线虫类转甲状腺素生物信息学表达分析原位杂交

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植物光系统Ⅱ中PsbS亚基在非光化学猝灭反应中的研究进展

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分子植物育种 2025年第1期23卷 173-181页

作者：周繁树董臣位芳郭玉双王燃郑州大学农学院郑州450001 河南工业大学生物工程学院郑州450001 贵州省烟草科学研究院烟草行业分子遗传重点实验室贵阳550081

在自然界中,光的供应并不是恒定的。植物在光能过饱和条件下,吸收超过光合作用中可利用的能量会产生活性氧成分,导致光氧化损伤和光抑制现象。非光化学猝灭(non-photochemical quenching,NPQ)是植物PSⅡ(PhotosystemⅡ)中过剩光能耗散... 详细信息

在自然界中,光的供应并不是恒定的。植物在光能过饱和条件下,吸收超过光合作用中可利用的能量会产生活性氧成分,导致光氧化损伤和光抑制现象。非光化学猝灭(non-photochemical quenching,NPQ)是植物PSⅡ(PhotosystemⅡ)中过剩光能耗散的关键方式。研究表明,PsbS蛋白是植物光系统Ⅱ蛋白复合体的组成蛋白成分之一,是非光化学猝灭(NPQ)主要成分qE激活的关键要素之一,参与植物将过量的光能转化为热能形式而耗散的光保护机制。本研究综述了近几年来植物PsbS蛋白结构特征和相关功能的研究进展,以期为不断探索NPQ分子作用机制相关的生物学功能提供参考和依据。

关键词： PsbS 非光化学猝灭(NPQ) 光系统Ⅱ(PSⅡ)

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烟草氧甲基转移酶(OMT)家族全基因组鉴定及表达分析

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分子植物育种 2025年

作者：杨潇然黄兰张金召李洪勋郑国兵王玉川黄玉春彭华伟西南大学农学与生物科技学院贵州省烟草公司毕节市公司江苏中烟工业有限责任公司贵州省烟草科学研究院烟草行业山地烤烟品质与生态重点实验室

氧甲基转移酶(O-methyltransferase， OMT)是催化生成多种次级代谢产物的重要酶，在植物生长发育、抗逆等方面发挥重要作用。鉴定烟草中OMT基因家族成员，分析其表达特征，可以为烟草新品种选育提供参考。本研究首先利用生物信息学方法... 详细信息

氧甲基转移酶(O-methyltransferase， OMT)是催化生成多种次级代谢产物的重要酶，在植物生长发育、抗逆等方面发挥重要作用。鉴定烟草中OMT基因家族成员，分析其表达特征，可以为烟草新品种选育提供参考。本研究首先利用生物信息学方法在烟草基因中系统鉴定OMT家族成员，对候选基因的染色体定位、系统发育关系、基因结构、启动子顺式元件进行系统分析；并通过‘云烟87’和‘韭菜坪2号’的转录组数据分析OMT家族成员的表达特征。本研究在烟草基因中共鉴定到56个OMT基因家族成员；系统进化树分析将该家族分为COMT和CCoAOMT两个亚家族；基因和蛋白质结构分析显示同一亚家族内成员间具有相似的基因结构和保守氨基酸基序；微共线性分析表明，烟草和拟南芥间存在6对共线性基因，且大部分OMT基因进化过程中受到净化选择；启动子顺式作用元件分析表明，烟草OMT基因的启动子区域存在许多与环境、抗逆性相关的顺式作用元件，暗示相关基因的胁迫诱导表达特点；时空发育表达谱表达分析结果显示，NtCOMT02、NtCOMT09、NtCOMT11、NtCOMT21、NtCOMT35、NtCCoAOMT01、NtCCoAOMT04、NtCCoAOMT14、NtCCoAOMT15基因在叶中表达水平较高，可能在烟叶形态建成、抗逆性等方面发挥重要作用。本研究结果为深入研究OMT家族成员在烟草生长发育、抗逆等过程的分子功能提供了重要基因资源。

关键词：氧甲基转移酶(O-methyltransferase, OMT) 品种形成烟草(Nicotiana tabacum L.)

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基于毛细管电泳的TILLING实验技术的建立

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中国烟草学报 2014年第4期20卷 75-78页

作者：付强邹颉张吉顺王轶任学良贵州省烟草科学研究院烟草行业分子遗传重点实验室

CEL I内切酶特异识别并切断错配碱基,是建立TILLING实验技术平台的关键之一。本文从贵州省贵阳市当地种植的西芹中获得CEL I酶粗提物,利用一对具有已知单碱基差异的质粒作为底物验证所提CEL I酶粗提物的酶切活性,通过琼脂糖电泳和毛细... 详细信息

CEL I内切酶特异识别并切断错配碱基,是建立TILLING实验技术平台的关键之一。本文从贵州省贵阳市当地种植的西芹中获得CEL I酶粗提物,利用一对具有已知单碱基差异的质粒作为底物验证所提CEL I酶粗提物的酶切活性,通过琼脂糖电泳和毛细管电泳对酶切产物进行检测,表明所获芹菜粗提物具有CEL I活性。本实验建立了适宜烟草TILLING实验的CEL I粗提物酶切体系:酶切温度42℃,酶切时间60 min,酶切反应总体积15μL,包括8μL PCR产物、4.5μL ddH2O、1.5μL酶切缓冲液(pH 7.5,500 mmol/L KCL,100 mmol/L Tris-Cl,15 mmol/L MgCl2)和1μL CEL I酶(稀释为原始粗提液0.05倍)。

关键词： TILLING 芹菜CEL I核酸酶 ABI遗传分析仪毛细管电泳

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多重实时荧光定量PCR分析转基因烟草外源基因拷贝数

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中国烟草学报 2017年第4期23卷 92-97页

作者：余婧邹颉付强郭玉双林世锋赵杰宏贵州省烟草科学研究院烟草行业烟草分子遗传重点实验室

【目的】采用多重实时荧光定量PCR方法在一个反应内同时检测转基因烟草中插入外源基因35S、NOS、NPT II的拷贝数。【方法】将转基因阳性参照烟草基因组DNA经梯度稀释,通过多重荧光定量PCR反应同时获得烟草内源参照基因NR、外源基因35S、... 详细信息

【目的】采用多重实时荧光定量PCR方法在一个反应内同时检测转基因烟草中插入外源基因35S、NOS、NPT II的拷贝数。【方法】将转基因阳性参照烟草基因组DNA经梯度稀释,通过多重荧光定量PCR反应同时获得烟草内源参照基因NR、外源基因35S、NOS、NPT II的相关性标准曲线方程,将待测株系外源基因的Ct值代入标准曲线方程后估算其拷贝数。【结果】获得了上述4个基因的标准曲线,其R2均接近于1,相关性较高。在检测的六个转基因株系中初筛到3株3个外源基因均为单拷贝的株系。【结论】可使用该方法对转基因烟草外源基因插入拷贝数进行估算,为获得稳定遗传材料提供初筛依据。

关键词：转基因烟草多重实时荧光定量PCR 外源基因拷贝数

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植物侧枝发育的调控研究进展

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生物技术通报 2023年第5期39卷 14-22页

作者：王兵赵会纳余婧余世洲雷波贵州省烟草科学研究院烟草行业分子遗传重点实验室贵阳550081

植物侧枝的发育在植物形态建成中具有十分重要的地位,侧枝的形态直接影响植物的产量。侧枝的发育由生长点干细胞持续分裂和分化形成,包括侧生分生组织特化,侧生分生组织起始和侧生分生组织外生。侧枝的发育受到内部生长因子和外部环境... 详细信息

植物侧枝的发育在植物形态建成中具有十分重要的地位,侧枝的形态直接影响植物的产量。侧枝的发育由生长点干细胞持续分裂和分化形成,包括侧生分生组织特化,侧生分生组织起始和侧生分生组织外生。侧枝的发育受到内部生长因子和外部环境信号的共同调节。文中总结了侧枝发育过程中侧生生长点干细胞起源、形成和休眠等过程的基本问题,综述了转录因子、激素、表观遗传、外界环境共同决定侧生分生组织形成和发育中的作用机制,为探讨植物侧枝的形成机理提供参考。

关键词：侧枝转录因子植物激素环境因素表观遗传

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一个受青枯病菌诱导的烟草功能基因NtCNGC1的克隆与表达分析

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中国烟草学报 2018年第6期24卷 90-96页

作者：林世锋王仁刚余婧任学良张洁余世洲贵州省烟草科学研究院烟草行业分子遗传重点实验室贵州贵阳550081

前期转录组研究发现1个环核苷酸门控离子通道(CNGC)基因在抗青枯病烟草品种DB101中上调表达,推测可能参与抵抗烟草青枯病菌侵染的防卫反应。为进一步研究该基因在烟草诱导防御反应中的作用,本研究采用PCR扩增法从DB101中获得烟草CNGC基... 详细信息

前期转录组研究发现1个环核苷酸门控离子通道(CNGC)基因在抗青枯病烟草品种DB101中上调表达,推测可能参与抵抗烟草青枯病菌侵染的防卫反应。为进一步研究该基因在烟草诱导防御反应中的作用,本研究采用PCR扩增法从DB101中获得烟草CNGC基因的cDNA和基因组序列,命名为NtCNGC1基因。生物信息学和基因表达分析表明,该基因含有8个外显子和7个内含子,编码区(CDS)全长2154 bp,编码717个氨基酸,蛋白分子量为83 kD,理论等电点为9.35。在NtCNGC1基因起始密码子上游1500 bp的核苷酸序列区间预测到防御与应激反应、病原菌应答、水杨酸响应、真菌激发子响应及伤口响应等应答元件。NtCNGC1基因在烟草根中表达最高、茎中其次、叶中最低。受青枯病菌诱导后,NtCNGC1基因在抗病品种(DB101)中的表达量明显高于感病品种(红花大金元)。初步证实NtCNGC1为烟草青枯病抗性相关基因。

关键词：烟草抗青枯病 NtCNGC1 基因克隆表达分析

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两个烟草Nup96基因的分子克隆及其表达分析

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中国烟草学报 2016年第4期22卷 83-88页

作者：林世锋王仁刚史跃伟张孝廉邹颉任学良余婧贵州省烟草科学研究院烟草行业分子遗传重点实验室贵州贵阳550081

为研究烟草低温早花的分子机理,采用RT-PCR结合RACE法,从烟草品种NC82中克隆到2个Nup96基因c DNA全长序列,分别命名为Nt Nup96a和Nt Nup96b,Gen Bank登陆号分别为KU558693和KU558694。序列分析表明2个基因均编码1037个氨基酸残基的蛋白... 详细信息

为研究烟草低温早花的分子机理,采用RT-PCR结合RACE法,从烟草品种NC82中克隆到2个Nup96基因c DNA全长序列,分别命名为Nt Nup96a和Nt Nup96b,Gen Bank登陆号分别为KU558693和KU558694。序列分析表明2个基因均编码1037个氨基酸残基的蛋白,氨基酸序列一致性为97%,与拟南芥Nup96蛋白(NP_178183)的序列一致性为60%;2个基因编码蛋白具有典型的植物Nup96结构特性,包含1个Nup96结构域和1个自酶解结构域。荧光定量PCR分析表明:在正常的生长条件下,Nt Nup96a和Nt Nup96b在烟草各组织中均有表达,在叶片中的表达量较弱,且随着植株生长其表达量显著下降;在12℃处理10天后,在烟草叶片中2基因的表达都出现了明显的下调,这一结果提示Nup96可能是烟草开花时间调控的抑制因子,其受低温诱导下调表达可能与NC82低温敏感,易早花特性相关。

关键词：烟草 Nup96 基因克隆表达分析

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烟叶DNA甲基化特征与化学成分的相关性

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烟草科技 2014年第4期47卷 93-98页

作者：赵杰宏史跃伟杨志晓王志红任学良贵州省烟草科学研究院烟草行业分子遗传重点实验室贵阳观山湖区云潭北路550081

为明确烟叶DNA甲基化的特征与化学成分的关系,利用烤烟DNA甲基化DArT芯片,分析了K326、红花大金元(红大)和遵烟6号在贵定和兴义两个试点,3个部位烟叶在不同发育时期的DNA甲基化特征和化学成分含量。结果显示,烤烟DNA甲基化水平变异较高... 详细信息

为明确烟叶DNA甲基化的特征与化学成分的关系,利用烤烟DNA甲基化DArT芯片,分析了K326、红花大金元(红大)和遵烟6号在贵定和兴义两个试点,3个部位烟叶在不同发育时期的DNA甲基化特征和化学成分含量。结果显示,烤烟DNA甲基化水平变异较高,最高为64%,最低为35.4%,平均为47.61%,变幅为28.6%。品种间的甲基化模式差异最大,其次是生长部位。DNA甲基化水平与12种物质代谢关键酶活性和76种致香成分的相关分析发现,DNA甲基化与这些酶活性和化学成分呈极显著相关(p<0.01),在3个品种中同步呈现极显著相关(p<0.0001)的酶及化学成分有34个,不同品种中也呈现出受特异性调控的化学物质。

关键词：烤烟甲基化 DArT芯片化学成分相关分析

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烟草牻牛儿基牻牛儿基焦磷酸合成酶小亚基基因的克隆及组织表达谱

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烟草科技 2014年第2期47卷 70-75页

作者：林世锋王仁刚张孝廉邹颉钟晓武郭玉双付强赵杰宏任学良贵州省烟草科学研究院烟草行业烟草分子遗传重点实验室贵阳市观山湖区云潭北路550081

为揭示牻牛儿基牻牛儿基焦磷酸合成酶(GGPPS)小亚基在烟草(Nicotiana tabacum)中的生理功能,采用电子克隆的方法,结合RT-PCR和SMART RACE技术,从烟草中克隆到1个牛儿基牛儿基焦磷酸合成酶小亚基基因的cDNA序列,命名为NtGGPPS5(GenBank... 详细信息

为揭示牻牛儿基牻牛儿基焦磷酸合成酶(GGPPS)小亚基在烟草(Nicotiana tabacum)中的生理功能,采用电子克隆的方法,结合RT-PCR和SMART RACE技术,从烟草中克隆到1个牛儿基牛儿基焦磷酸合成酶小亚基基因的cDNA序列,命名为NtGGPPS5(GenBank登陆号:KF316932)。该基因全长1320 bp,编码332个氨基酸,与番茄(Solanum lycopersicum,XP_004246572)及其野生种(Solanum pennellii,ADZ24721)的GGPPS小亚基的氨基酸序列一致性均为92%,具有一个特征性的异戊二烯合成酶保守的天门冬氨酸富集区。进化分析表明,植物GGPPS分为大亚基和小亚基两个分支,而且NtGGPPS5属于小亚基。实时荧光定量PCR试验表明,NtGGPPS5基因在烟草根、茎、叶和芽中均有表达,表达量为芽>叶>茎>根。

关键词：烟草牻牛儿基牻牛儿基焦磷酸合成酶小亚基基因克隆组织表达

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