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基于miRNA-134-5p/BDNF/Akt信号通路探讨X线辐射致大鼠心肌细胞凋亡的机制

海军军医大学学报 2024年第11期45卷 1352-1361页

作者：顾静付力文韩晓斐方丹金戈董晓丽颉亚辉侯敏甘肃中医药大学基础医学院生理学教研室兰州730000 甘肃中医药大学公共卫生学院数学与卫生统计学教研室兰州730000 甘肃中医药大学基础医学院解剖学与组织胚胎学教研室兰州730000

目的探讨X线辐射对大鼠心肌细胞凋亡的影响及相关机制。方法将大鼠H9C2心肌细胞分为空白对照组、X线照射组(X-ray组)、X线照射miRNA-134-5p抑制剂组(X-inhibitor组)、X线照射miRNA-134-5p抑制剂阴性对照组(X-NC组)。最终选择以6 Gy X线... 详细信息

目的探讨X线辐射对大鼠心肌细胞凋亡的影响及相关机制。方法将大鼠H9C2心肌细胞分为空白对照组、X线照射组(X-ray组)、X线照射miRNA-134-5p抑制剂组(X-inhibitor组)、X线照射miRNA-134-5p抑制剂阴性对照组(X-NC组)。最终选择以6 Gy X线辐照大鼠H9C2心肌细胞,48 h后检测各项指标变化。采用CCK-8法检测细胞存活率,用流式细胞术和Hoechst 33342染色检测细胞凋亡率,用DCFH-DA荧光探针法检测细胞内活性氧(ROS)水平,用JC-1法检测细胞线粒体膜电位变化,用超氧化物歧化酶(SOD)和丙二醛(MDA)检测试剂盒分别测定细胞中SOD活性、MDA水平,用qPCR法检测细胞中miRNA-134-5p表达,用蛋白质印迹法检测细胞中脑源性神经营养因子(BDNF)、Akt、磷酸化Akt(p-Akt)、Bcl2、Bax蛋白的表达。结果与空白对照组相比,X-ray组大鼠心肌细胞中ROS和MDA水平上升、SOD活性下降、线粒体膜电位下降百分比增加、DNA损伤微核形成数增加、细胞凋亡率升高(均P<0.01);与X-ray组相比,X-inhibitor组上述各项指标均有所逆转(P<0.05或P<0.01),而X-NC组的以上各指标差异均无统计学意义(均P>0.05)。与空白对照组相比,X-ray组大鼠心肌细胞中miRNA-134-5p水平上调,BDNF表达及Bcl2/Bax、p-Akt/Akt比值下降(均P<0.01);与X-ray组相比,X-inhibitor组大鼠心肌细胞中miRNA-134-5p水平下降,BDNF表达及Bcl2/Bax、p-Akt/Akt比值升高(均P<0.01),X-NC组各项指标差异均无统计学意义(均P>0.05)。结论X线照射诱导了大鼠心肌细胞发生氧化应激、线粒体损伤及DNA损伤,最终导致细胞凋亡,其发生机制可能涉及miRNA-134-5p/BDNF/Akt信号通路。

关键词：放射性心脏损伤辐射心肌细胞微RNA-134-5p 细胞凋亡

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神经生长因子对正常和放化疗复合损伤小鼠粒-巨噬系血发生的影响

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四川大学学报（医学版） 2008年第5期39卷 757-762页

作者：黄晓芹祝彼得降央泽仁四川大学华西基础医学与法医学院组织胚胎学与神经生物学教研室成都610041 成都中医药大学组织胚胎学与解剖学教研室

目的探讨神经生长因子(NGF)对小鼠粒-巨噬系血细胞发生的影响。方法采用流式细胞术、祖细胞集落分析、血细胞计数、实时荧光定量PCR及酶联免疫吸附分析法(ELISA),检测注射NGF对正常和经60Coγ射线照射+腹腔注射环磷酰胺(放化疗复合损伤... 详细信息

目的探讨神经生长因子(NGF)对小鼠粒-巨噬系血细胞发生的影响。方法采用流式细胞术、祖细胞集落分析、血细胞计数、实时荧光定量PCR及酶联免疫吸附分析法(ELISA),检测注射NGF对正常和经60Coγ射线照射+腹腔注射环磷酰胺(放化疗复合损伤)小鼠骨髓细胞(BMC)增殖周期、粒-巨噬系祖细胞集落(CFU-GM)产率、外周白细胞总数、骨髓细胞粒-巨噬系集落刺激因子(GM-CSF)mRNA的表达及血清中GM-CSF和IL-3浓度的影响。并观察在体外培养体系中加入不同浓度的NGF时CFU-GM集落产率的变化及与GM-CSF的关系。结果在体外CFU-GM培养中,加入重组小鼠GM-CSF(rmGM-CSF)时,NGF剂量依赖性地提高集落产率。注射NGF7.5μg/(kg.d)或10μg/(kg·d)持续7d,正常和放化疗复合损伤小鼠外周血白细胞总数、小鼠骨髓细胞中S+G2/M期细胞比例、CFU-GM集落产率显著高于注射生理盐水的对照组;放化疗复合伤小鼠血清中的GM-CSF和IL-3也显著升高。结论NGF可与体外培养体系中的造血刺激因子协同作用,促进正常和放化疗复合损伤小鼠CFU-GM的形成。NGF在体内可促进正常和放化复合损伤小鼠骨髓细胞进入有丝分裂,促进造血干细胞向粒-巨噬系方向分化,促进CFU-GM的形成,提高外周血白细胞数;NGF还可刺激放化疗复合损伤小鼠体内GM-CSF和IL-3的分泌,这可能是NGF促进放化疗复合损伤后粒-巨噬系造血恢复的途径之一。

关键词：神经生长因子细胞增殖周期祖细胞集落分析造血生长因子基因表达

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黄芪注射液对贫血小鼠巨核系造血的作用及其机理的研究

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华西医科大学学报 2001年第4期32卷 590-592页

作者：祝晓玲祝彼得华西医科大学基础医学院组织胚胎学教研室成都610041 成都中医药大学解剖学教研室

目的　研究黄芪注射液 (AMI)对贫血小鼠巨核系造血的影响及其作用机制。方法　制备贫血小鼠模型 ,随机分为给药组和对照组 ,分别腹腔注射 AMI〔2 0 m g/ (ml· 2 0 g)〕或等量生理盐水 q.d× 6 ,于给药后第8、11、14天常规方法... 详细信息

目的　研究黄芪注射液 (AMI)对贫血小鼠巨核系造血的影响及其作用机制。方法　制备贫血小鼠模型 ,随机分为给药组和对照组 ,分别腹腔注射 AMI〔2 0 m g/ (ml· 2 0 g)〕或等量生理盐水 q.d× 6 ,于给药后第8、11、14天常规方法检测外周血血小板数、骨髓有核细胞数 ,同时用体外巨核系祖细胞 (CFU- Meg)培养方法检测CFU- Meg,采集血清作巨核细胞系集落刺激活性 (Meg- CSA)测定。结果　贫血小鼠给药组和对照组比较 ,血清Meg- CSA明显升高 ,给药后第 11天所测各项指标均恢复正常 ,恢复时间明显缩短。结论　 AMI能够升高血清Meg- CSA。

关键词：黄芪注射液巨核细胞造血血清贫血

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五味子醇甲诱导缺血半影区神经元自噬提高脑卒中后神经保护

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中国生物化学与分子生物学报 2020年第5期36卷 544-551页

作者：臧瑞杨继苹郭涛褚鑫张雪玉武煜明邓仪昊云南中医药大学基础医学院人体解剖与组织胚胎学教研室昆明650500 昆明理工大学医学院解剖学教研室昆明650500

五味子醇甲(Schisandra A,Sch A)是五味子中具有生物活性的木脂素化合物,其神经保护作用已在多种神经系统疾病动物模型中得到验证。然而,五味子醇甲是否能通过影响大鼠脑缺血半影区神经元自噬活性对脑缺血再灌注大鼠模型产生神经保护作... 详细信息

五味子醇甲(Schisandra A,Sch A)是五味子中具有生物活性的木脂素化合物,其神经保护作用已在多种神经系统疾病动物模型中得到验证。然而,五味子醇甲是否能通过影响大鼠脑缺血半影区神经元自噬活性对脑缺血再灌注大鼠模型产生神经保护作用,尚缺乏系统研究。为探究Sch A对大鼠脑卒中后神经损伤及缺血半影区神经元自噬活性的影响,本研究将90只SD雄性大鼠随机分为假手术(Sham)组、模型组(MCAO)、Sch A低剂量组(40μg/kg)、Sch A中剂量组(80μg/kg)、Sch A高剂量组(160μg/kg),每组18只。线栓法制备大鼠大脑中动脉梗塞(middle cerebral artery occlusion,MCAO)模型,脑缺血持续90 min后进行再灌注,立即侧脑室给药,1/d,连续给药7 d。各组分别取6只大鼠进行神经功能评分后,取脑进行TTC染色检测脑梗死体积。另有6只大鼠取缺血半影区脑组织,通过Western印迹检测自噬相关蛋白质Beclin1、LC3-Ⅱ的表达水平。剩余6只大鼠脑组织用于免疫荧光双标,对Sch A改变的自噬活性进行细胞表达定位。研究结果显示,MCAO组大鼠脑梗死体积及神经功能损伤评分均显著高于Sham组(P<0.05),且Beclin1及LC3-Ⅱ的表达显著增加(P<0.05)。各Sch A治疗组大鼠脑梗死体积较未给药组显著减少(P<0.05),神经功能损伤得到明显改善(P<0.05)。同时,Sch A给药组Beclin1及LC3蛋白质表达水平明显升高(P<0.05),且免疫荧光双标显示该自噬活性改变主要呈现于神经元。以上结果表明,Sch A可显著减轻大鼠脑缺血再灌注损伤,该神经保护作用与其提高缺血半影区神经元自噬活性密切相关。

关键词：五味子醇甲脑缺血再灌注自噬神经保护

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17β-雌二醇对鲫鱼肝细胞VTG诱导及血清Ca^2＋浓度变化的实验研究

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环境科学与技术 2009年第B12期32卷 147-150页

作者：金春峰李春日蔡玉文辽宁中医药大学基础医学院解剖学与组织胚胎学教研室辽宁沈阳110032

在实验室驯养鲫鱼腹腔注射不同浓度的17β-雌二醇，检测血清中卵黄蛋白原（VTG）浓度及Ca^2＋之间的相关性。实验结果，在不同剂量E2暴露组暴露2周后，ELISA法测定雄性、雌性鲫鱼血清中VTG与对照组相比有显著增长（P〈0．01）；在不同剂... 详细信息

在实验室驯养鲫鱼腹腔注射不同浓度的17β-雌二醇，检测血清中卵黄蛋白原（VTG）浓度及Ca^2＋之间的相关性。实验结果，在不同剂量E2暴露组暴露2周后，ELISA法测定雄性、雌性鲫鱼血清中VTG与对照组相比有显著增长（P〈0．01）；在不同剂量E2暴露组暴露14d后，ELISA法测定雄性、雌性鲫鱼血清中VTG与血清钙含量进行测定，血清中VTG和钙含量与E2暴露剂量具剂量-效应关系（R^2=0．768）。对鲫鱼血清中的钙含量进行测定，能够间接地确定鱼体血清中的VTG含量，进而可监测鱼类污染的状况，为研究环境内分泌干扰物致毒机理提供实验依据。

关键词：环境内分泌干扰物卵黄蛋白原钙离子

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体外诱导外周血单核细胞表达淋巴管内皮细胞表型

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解剖学杂志 2011年第5期34卷 593-595,679页

作者：王长明田铧张立平扈燕来徐蕴邰浩清丁海玲王雪颖南京中医药大学基础医学院解剖学与组织胚胎学教研室南京210046 山东大学医学院解剖与组织胚胎学研究所济南250012 山东杏林科技职业学院济南250012 济宁医学院解剖学教研室济宁272013

目的：探讨单核细胞在体外转分化为淋巴管内皮细胞的可能性。方法：取成人新鲜外周血，分离单核细胞，分别在层粘连蛋白（FN）铺板或血管内皮生长因子-C（VEGF-C）、白介素-3（IL-3）、白介素-7（IL-7）刺激下诱导培养24h，通过形态学... 详细信息

目的：探讨单核细胞在体外转分化为淋巴管内皮细胞的可能性。方法：取成人新鲜外周血，分离单核细胞，分别在层粘连蛋白（FN）铺板或血管内皮生长因子-C（VEGF-C）、白介素-3（IL-3）、白介素-7（IL-7）刺激下诱导培养24h，通过形态学分析、RT-PCR和免疫荧光细胞化学分析方法检测单核细胞中淋巴管内皮特异性标志物LYVE1、 podoplanin、 Prox1及内皮细胞共同抗原vWF、 eNOS的表达。在此基础上，进一步用内皮细胞培养基-2（EGM-2）、 VEGF-C和FN铺板联合诱导单核细胞向淋巴管内皮细胞转分化。结果：单核细胞经FN、 VEGF-C、 IL-3、 IL-7短暂诱导即能表达LYVE-1、 podoplanin、 Prox1，而不表达vWF、 eNOS。结论：单核细胞在炎症或者内皮细胞生长环境中可以表达淋巴管内皮细胞标志物，但尚不能证实转化为真正的淋巴管内皮细胞。

关键词：单核细胞转分化淋巴管内皮细胞体外培养

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神经生长因子对小鼠红系造血的影响及内在机制研究(英文)

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中国实验血液学杂志 2008年第6期16卷 1365-1371页

作者：黄晓芹祝彼得四川大学华西基础医学院与法医学院组织胚胎学与神经生物学教研室四川成都610041 成都中医药大学组织胚胎学与解剖学教研室四川成都610041

本研究探讨神经生长因子(NGF)对红系造血的影响及内在机制。采用流式细胞术、祖细胞集落测定、血细胞计数、实时荧光定量PCR及酶联免疫吸附分析法(ELISA),对经大腿肌肉注射NGF一定时间后小鼠骨髓细胞的(BMC)增殖周期、BFU-E、CFU-E集落... 详细信息

本研究探讨神经生长因子(NGF)对红系造血的影响及内在机制。采用流式细胞术、祖细胞集落测定、血细胞计数、实时荧光定量PCR及酶联免疫吸附分析法(ELISA),对经大腿肌肉注射NGF一定时间后小鼠骨髓细胞的(BMC)增殖周期、BFU-E、CFU-E集落产率、外周血红细胞相关指标、肾脏EPO水平、骨髓细胞GM-CSF、脾脏EPO受体(EPOR)mRNA的表达及血清中EPO,GM-CSF和IL-1浓度进行检测,并观察培养体系中加入不同浓度的NGF时BFU-E、CFU-E集落产率的变化及与EPO、IL-3的关系。结果表明:注射NGF(7.5μg/kg)持续7天,骨髓细胞中S+G2/M期细胞比例、CFU-E和BFU-E集落产率、脾EPOR mRNA量显著高于注射生理盐水的对照组。持续13到19天,外周血网织红细胞比例、红细胞数、血红蛋白含量也有升高;在体外CFU-E培养中,无论是否加入EPO,加入的NGF均能剂量依赖性地促进集落的形成,且只加入NGF组的集落产率显著高于只加入EPO组。在BFU-E培养中加入NGF和IL-3时,集落产率显著高于加入EPO和IL-3组。结论:NGF可能通过提高造血细胞对EPO的反应性并可激活造血细胞上与EPO作用后一样的信号通路,进而促进骨髓细胞进入有丝分裂,促进造血干细胞向红系方向分化,促进BFU-E和CFU-E的形成,增加外周血中网织红细胞、红细胞、血红蛋白含量。

关键词：神经生长因子红系造血红系祖细胞集落分析造血生长因子 EPO GM—CSF

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小鼠颌下腺组织培养上清液影响红系造血的实验研究

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华西医科大学学报 2000年第4期31卷 536-539页

作者：潘克俭祝彼得吴岩华西医科大学基础医学院生物学和细胞生物学教研室成都610041 成都中医药大学解剖学教研室华西医科大学基础医学院组织胚胎学教研室

为了研究颌下腺是否合成造血因子以及合成的造血因子的可能种类 ,进一步研究颌下腺对血发生的调控 ,采用造血祖细胞体外培养和流式细胞术检测细胞表面标记物。结果显示 ,小鼠颌下腺组织培养上清液(SGCM)在体外培养中 ,对早期和晚期红系... 详细信息

为了研究颌下腺是否合成造血因子以及合成的造血因子的可能种类 ,进一步研究颌下腺对血发生的调控 ,采用造血祖细胞体外培养和流式细胞术检测细胞表面标记物。结果显示 ,小鼠颌下腺组织培养上清液(SGCM)在体外培养中 ,对早期和晚期红系造血祖细胞有促进增殖和分化的作用 ,实验组集落数远远高于阴性对照组 (P<0 .0 5 ) ;晚期红系祖细胞 (CFU- E)培养体系雄性小鼠颌下腺组织培养上清液组集落数明显高于雌性组 (P<0 .0 5 ) ,早期红系祖细胞 (BFU- E)培养体系没有明显差异 (P>0 .0 5 ) ,贫血模型小鼠颌下腺促进 BFU- E和 CFU- E增殖和分化的活性高于正常小鼠 (P<0 .0 5 ) ,IL- 3与 SGCM有协同刺激作用 ,说明小鼠颌下腺确能合成和分泌促进红系造血的细胞因子 ,雄性小鼠颌下腺促进 CFU- E增殖和分化细胞因子的活性高于雌性小鼠。本实验为进一步研究小鼠颌下腺合成造血因子和其与造血调控的关系提供了实验依据。

关键词：小鼠颌下腺红系造血祖细胞造血因子

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受致死剂量照射模型小鼠输注骨骼肌卫星细胞后造血功能的变化(英文)

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中国组织工程研究与临床康复 2007年第42期11卷 8618-8620页

作者：汪涛王晓玲赵舒武唐军民天津中医药大学基础医学院组胚教研室天津市300193 北京大学基础医学院人体解剖学与组织胚胎学系北京市100083

背景:骨骼肌卫星细胞是一种具有增殖、分化潜能的肌源性干细胞。近年,国外已有报道骨骼肌细胞具可被某种特定微环境因子激活分化为造血干细胞,从而具有造血重建的潜能。目的:初步验证肌源性的成体干细胞-骨骼肌卫星细胞分化为造血干细... 详细信息

背景:骨骼肌卫星细胞是一种具有增殖、分化潜能的肌源性干细胞。近年,国外已有报道骨骼肌细胞具可被某种特定微环境因子激活分化为造血干细胞,从而具有造血重建的潜能。目的:初步验证肌源性的成体干细胞-骨骼肌卫星细胞分化为造血干细胞的能力。设计:验证性动物实验。单位:天津中医药大学基础医学院组胚教研室。材料:选用雌性昆明种成年小鼠65只,体质量25～28g。出生5d昆明种乳鼠5只,均由北京大学医学部实验动物中心提供。方法:实验于2001-08/2003-08在北京大学医学部人体解剖学与组织胚胎学系细胞培养室完成。胶原酶、胰蛋白酶消化分离5只乳鼠骨骼肌卫星细胞,分离5只成年昆明种小鼠骨髓单个核细胞。取成年雌性小鼠60只作为受体,用60Coγ8.0Gy照射,然后随机分为4组:对照组不做任何处理;培养液输注组小鼠尾静脉注射DMEM/F-12培养液;卫星细胞输注组小鼠尾静脉注射卫星细胞悬液0.3mL(细胞浓度1×109L-1);骨髓细胞输注组小鼠尾静脉注射骨髓细胞悬液0.3mL(细胞浓度1×109L-1)。主要观察指标:①观察各组小鼠14d存活率。②照射后14d处死存活下来的受体小鼠:肉眼计数脾脏表面结节数;对骨髓单个核细胞涂片进行Wright-Gimesa染色。结果:①脾集落形成单位的测定:照射后14d,卫星细胞注射组小鼠脾结节数与骨髓细胞注射组比较,差异无显著性意义(P>0.05)。②骨髓单个核细胞组织学鉴定结果:卫星细胞输注组与骨髓细胞输注组骨髓单个核细胞涂片中有相对较多的早期造血细胞出现,其形态符合早期造血细胞的生物学特性。③被照射鼠的存活情况:对照组和培养液输注组小鼠在被照射后9～13d全部死亡。照射后14d,卫星细胞输注组和骨髓细胞输注组分别有8和13只鼠存活。结论:骨骼肌卫星细胞具有诱导分化为造血干细胞的功能。

关键词：造血重建卫星细胞造血干细胞小鼠

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黄芪体外作用对贫血小鼠骨髓基质细胞分泌SCF的影响

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细胞与分子免疫学杂志 2002年第4期18卷 396-398页

作者：祝晓玲祝彼得四川大学华西医学中心基础医学与法医学院组织胚胎学教研室四川成都610041 成都中医药大学解剖学教研室

目的　研究黄芪注射液 (AMI)对贫血小鼠骨髓基质细胞分泌干细胞因子 (SCF)的影响。方法　在贫血小鼠骨髓基质细胞培养体系中 ,分别加入 0 .1mL不同浓度的AMI(终浓度分别为 4 0mg/L、4 0 0mg/L)作为药物 1组、药物 2组 ,对照组加入等量的... 详细信息

目的　研究黄芪注射液 (AMI)对贫血小鼠骨髓基质细胞分泌干细胞因子 (SCF)的影响。方法　在贫血小鼠骨髓基质细胞培养体系中 ,分别加入 0 .1mL不同浓度的AMI(终浓度分别为 4 0mg/L、4 0 0mg/L)作为药物 1组、药物 2组 ,对照组加入等量的IMDM培养液 ,检测各实验组培养体系中骨髓成纤维细胞集落 (CFU F)数。同时 ,分别收集培养上清液 ,透析浓缩成冻干粉 ,经IMDM液稀释后作为条件培养液 ,分别加入到高增殖潜能的集落形成细胞 (HPP CFC)培养体系中 ,检测各实验组培养上清液中所含SCF的水平。结果　与对照组相比较 ,药物组的CFU F数及骨髓基质细胞条件培养液 (BMSCM )中SCF的水平均明显升高。结论一定浓度的AMI可促进贫血小鼠骨髓CFU F增殖。

关键词：干细胞因子骨髓基质细胞黄芪贫血小鼠

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