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中国修复重建外科杂志 2005年第2期19卷 95-99页

作者：蓝旭杨志明罗静聪李秀群秦廷武四川大学华西医院生物治疗国家重点实验室:干细胞与组织工程研究室成都610041

目的　探讨不同方法保存的生物衍生骨修复节段性桡骨缺损的效果。　方法　冻干生物衍生骨用两种不同保存液保存 3个月 ,以保存相同时间的冻干生物衍生骨为对照。选择 6 0只新西兰大白兔 ,制作 15 mm长的双侧桡骨节段性骨缺损模型 ,实验... 详细信息

目的　探讨不同方法保存的生物衍生骨修复节段性桡骨缺损的效果。　方法　冻干生物衍生骨用两种不同保存液保存 3个月 ,以保存相同时间的冻干生物衍生骨为对照。选择 6 0只新西兰大白兔 ,制作 15 mm长的双侧桡骨节段性骨缺损模型 ,实验根据植入不同方法保存的材料分为 A、 B和 C组。A组植入 1号保存液处理材料 ,B组植入2号保存液处理材料 ,A、B组再根据材料是否复合成骨细胞培养分为 A1 和 A2 、B1 和 B2 组 ,A1 和 B1 组于动物左侧桡骨缺损区植入组织工程生物衍生骨 ,A2 和 B2 组于右侧植入单纯材料。C组分为 C1 和 C2 组 ,于动物左侧桡骨缺损区植入冻干材料 ,右侧为空白对照。术后 4、8和 16周取材 ,摄 X线片、组织学观察、计算机图像分析和生物力学测定。　结果　术后 4、8和 16周各组骨缺损区均有新骨生成 ,成骨量随时间的推移而增加。经 X线片、组织学和生物力学评估 ,各组的成骨能力依次为 :A1 >A2 >C1 >B1 >B2 >C2 有统计学意义 (P<0 .0 0 1,P<0 .0 5 ) ,其中 A1 组成骨能力最强 ,术后 16周骨缺损完全修复 ,骨髓腔再通 ,生物力学性能接近正常骨。　结论　选择适宜的保存液对生物衍生骨支架材料的骨修复能力有一定的促进作用。

关键词：生物衍生骨植入桡骨缺损骨修复术后节段性左侧保存液动物成骨能力

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可塑形组织工程骨修复兔颅骨缺损的组织学及力学研究

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中国修复重建外科杂志 2005年第6期19卷 460-463页

作者：廖文波杨志明邓力李秀群孙天威罗静聪秦廷武解慧琪四川大学华西医院生物治疗国家重点实验室.干细胞与组织工程研究室成都610041

目的探讨用藻酸钙凝胶、成骨细胞和骨粉复合构建可塑形组织工程骨修复兔颅骨缺损后,体内成骨的组织学及生物力学特征。方法28只日本大耳白兔,随机分为A组(16只)、B组(8只)和C组(4只)。制备兔颅骨左右两侧直径1cm的骨膜-颅骨全层缺损,左... 详细信息

目的探讨用藻酸钙凝胶、成骨细胞和骨粉复合构建可塑形组织工程骨修复兔颅骨缺损后,体内成骨的组织学及生物力学特征。方法28只日本大耳白兔,随机分为A组(16只)、B组(8只)和C组(4只)。制备兔颅骨左右两侧直径1cm的骨膜-颅骨全层缺损,左侧用藻酸钙凝胶-成骨细胞-骨粉填补修复为A1组(n=16);右侧用藻酸钙凝胶-骨粉填补修复为A2组(n=16);B组骨缺损不作处理,为空白对照组(n=16);C组为正常组。术后6周和12周时,行大体观察及组织学观察;12周时行生物力学测试。结果术后6、12周时,A1组:颅骨缺损基本被硬组织所修复,镜下见材料已大部分被骨组织替代,成骨面积为40.92%±19.36%;A2组:材料部分被骨组织替代,成骨面积为18.51%±6.01%;B组:颅骨缺损边缘可见硬组织形成,镜下见修复组织以致密纤维组织为主,成骨面积为12.72%±9.46%。术后12周,生物力学测试修复组织能耐受的最大压力载荷,A1组37.33±2.95N;A2组30.59±4.65N;B组29.5±2.05N;C组41.55±2.52N;A1组明显大于A2组和B组(P<0.05)。最大载荷时应变位移,A1组1.05±0.20mm;A2组1.35±0.44mm;B组1.57±0.31mm;C组0.95±0.17mm;A1组小于B组(P<0.05)。载荷/应变比值,A1组35.82±6.48N/mm;A2组24.95±12.40N/mm;B组19.90±5.47N/mm;C组47.57±11.22N/mm;

关键词：可塑形组织工程骨生物力学骨缺损塑形组织学力学研究

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生物活性产品玻璃化冷冻保存研究进展

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生物医学工程学杂志 2005年第5期22卷 1070-1074页

作者：秦廷武莫湘涛杨志明四川大学华西医院生物治疗国家重点实验室干细胞和组织工程研究室成都610041

综述了有关动物细胞、胚胎、组织、器官和工程化组织的玻璃化冷冻保存问题。对玻璃化冻存技术基本原理及其在生物产品保存中的冷冻、复温方法,玻璃化液的组成、作用及其对保存产品的影响等进行了阐述。指出玻璃化冷冻保存可能是长时间... 详细信息

综述了有关动物细胞、胚胎、组织、器官和工程化组织的玻璃化冷冻保存问题。对玻璃化冻存技术基本原理及其在生物产品保存中的冷冻、复温方法,玻璃化液的组成、作用及其对保存产品的影响等进行了阐述。指出玻璃化冷冻保存可能是长时间保存有活性的生物产品简单、适用、有效的方法。同时指出玻璃化冷冻保存方法面临的问题及发展的方向。

关键词：玻璃化冷冻保存生物产品玻璃化冷冻保存生物产品生物活性长时间保存动物细胞冻存技术复温方法保存方法工程化

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低温保存的组织工程骨修复骨缺损的实验研究

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中国修复重建外科杂志 2005年第7期19卷 569-573页

作者：罗晓中杨志明邓力李秀群四川大学华西医院生物治疗国家重点实验室.干细胞与组织工程研究室

目的探讨低温保存的组织工程骨修复骨缺损的能力及低温保存的可行性。方法将人源性生物衍生骨材料复合成骨细胞构建的组织工程骨,在4℃和-196℃的温度环境中保存3个月和6个月,同时以未行低温保存的组织工程骨和生物衍生骨材料作为对照,... 详细信息

目的探讨低温保存的组织工程骨修复骨缺损的能力及低温保存的可行性。方法将人源性生物衍生骨材料复合成骨细胞构建的组织工程骨,在4℃和-196℃的温度环境中保存3个月和6个月,同时以未行低温保存的组织工程骨和生物衍生骨材料作为对照,分别修复实验兔桡骨的长段骨缺损。80只成年日本大耳白兔,随机分为4个实验组(左前肢植入材料):A3组:组织工程骨在4℃保存3个月;A6组:组织工程骨在4℃保存6个月;B3组:组织工程骨在-196℃保存3个月;B6组:组织工程骨在-196℃保存6个月。2个对照组(右前肢植入材料):C组:组织工程骨未行低温保存;D组:单纯生物衍生骨材料。于术后2、4、6和12周行大体和组织学观察,并于6周和12周行X线片检查和生物力学检测。结果术后大体观察,A3、A6、B3、B6和C组间无显著差异,D组骨痂少且断端更为明显。各时间点组织学观察,A3、A6、B3、B6和C组植入材料周围胶原及骨痂均较D组明显,术后12周组织学评分,D组与其它各组比较P值<0.05。X线片示D组植入材料皮质骨无明显变化,骨痂较少;余各组12周植入材料与自体骨融合,髓腔开通,骨折线消失,塑形好。生物力学检测D组与其它各组比较P值<0.05。结论以4℃和-196℃保存方法能有效保存组织工程骨,对修复骨缺损有明显效果,这一方法适宜推广应用。

关键词：组织工程骨低温保存骨缺损

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组织工程骨的研究成果及存在的问题

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中国修复重建外科杂志 2005年第2期19卷 87-89页

作者：杨志明四川大学华西医院生物治疗国家重点实验室:干细胞与组织工程研究室成都610041

自1980年成骨细胞分离培养成功以后,大大提高了成骨细胞生物学特性的认识.以后随着医学生物材料学的发展和'组织工程'概念的提出.在体外构建有生命的组织工程骨得到了迅速发展,并已有临床初步应用的报道.经过近20年的研究历程,... 详细信息

自1980年成骨细胞分离培养成功以后,大大提高了成骨细胞生物学特性的认识.以后随着医学生物材料学的发展和'组织工程'概念的提出.在体外构建有生命的组织工程骨得到了迅速发展,并已有临床初步应用的报道.经过近20年的研究历程,逐渐使组织工程骨的研究问题集中在种子细胞优选,人工细胞外基质的三维组合,组织工程骨的体外构建技术及细胞与材料的相互作用,生物活性因子的合理应用及生长调控等方面.本期集中了有关组织工程骨的11篇研究论文,从另一个侧面反馈了我国组织工程骨研究的成果及发展趋势.

关键词：组织工程骨体外成骨细胞胞外基质生物材料学临床种子细胞人工细胞相互作用生命

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组织工程肌腱修复陈旧性跟腱断裂伴缺损的疗效观察

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中国修复重建外科杂志 2005年第8期19卷 639-641页

作者：李箭杨志明解慧琪陈刚黄富国项舟岑石强四川大学华西医院骨科成都610041 四川大学华西医院生物治疗国家重点实验室.干细胞与组织工程研究室成都610041

目的探讨应用组织工程肌腱修复陈旧性跟腱断裂伴缺损的手术方法及临床效果。方法1999年8月～2002年6月,采用同种异体肌腱来源的成纤维细胞,以5×106/ml细胞密度接种在医用碳纤维与聚羟基乙酸纤维制作的编织带上,体外培养5d后,修复... 详细信息

目的探讨应用组织工程肌腱修复陈旧性跟腱断裂伴缺损的手术方法及临床效果。方法1999年8月～2002年6月,采用同种异体肌腱来源的成纤维细胞,以5×106/ml细胞密度接种在医用碳纤维与聚羟基乙酸纤维制作的编织带上,体外培养5d后,修复跟腱缺损7例,缺损长度为5～7cm。术后踝跖屈外固定4～6周后开始功能锻炼。结果7例均获随访22～56个月,平均46.9个月。除1例术后伤口延迟愈合外,其余6例均期愈合。无全身及局部不良反应,无跟腱粘连再手术患者。按尹庆水疗效评定标准,优5例,良1例,可1例。结论组织工程肌腱修复跟腱缺损可获较好临床效果,是一种可选择的新治疗方法。

关键词：组织工程肌腱修复跟腱断裂缺损

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WO-1对成骨细胞的生物学效应研究

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中国修复重建外科杂志 2005年第10期19卷 822-825页

作者：陈旭杨志明解慧琪李胜富烟台市烟台山医院创伤骨科山东烟台264000 四川大学华西医院生物治疗国家重点实验室.干细胞与组织工程研究室华西医院病理科

目的了解WO-1在体外环境中对人成骨细胞增殖、分化的影响,为骨组织工程学研究提供更多的方法. 方法采用培养人胚成骨细胞,以生长曲线和3H-TdR法分析WO-1与成骨细胞生物学效应的量效关系,在最佳作用浓度下,以接种细胞克隆形成率,流式细... 详细信息

目的了解WO-1在体外环境中对人成骨细胞增殖、分化的影响,为骨组织工程学研究提供更多的方法. 方法采用培养人胚成骨细胞,以生长曲线和3H-TdR法分析WO-1与成骨细胞生物学效应的量效关系,在最佳作用浓度下,以接种细胞克隆形成率,流式细胞技术分析细胞周期,透射电镜观察细胞形态学,了解WO-1对细胞活性和细胞增殖的影响;以ALP活性检测,3H-Proline掺入实验,放射免疫法测骨钙素合成及I型胶原和骨钙素mRNA的表达等,从蛋白质和mRNA两个水平观察WO-1对细胞功能的影响. 结果 WO-1在高浓度时对人胚成骨细胞增殖有抑制作用,低浓度时对人胚成骨细胞增殖有促进作用,最佳作用浓度8 μg/ml,在0.25～8 μg/ml浓度范围内存在量效关系.在8 μg/ml WO-1作用下,实验组人胚成骨细胞接种克隆形成率增加,克隆体积增大;群体倍增时间明显缩短,电镜下见细胞器较对照组发达;而ALP活性、Ⅰ型胶原合成、骨钙素合成等,在蛋白质及mRNA两个水平均有增加,且与对照组比较,差异有统计学意义(P＜0.05). 结论低浓度WO-1,可促进体外培养的人胚成骨细胞活性及增殖,加强细胞合成Ⅰ型胶原、骨钙素等基质的功能,可用作成骨细胞增殖及分化的促进剂.

关键词：组织工程成骨细胞 WO—1 生物学

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聚醚酯共聚物表面性质对血管细胞生长的影响

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中国修复重建外科杂志 2005年第6期19卷 481-485页

作者：陈亮奚廷斐杨志明王玮刘庆阳吴英峰谷涌泉王连才冯增国四川大学华西医院生物治疗国家重点实验室.干细胞与组织工程研究室成都610041 中国药品生物制品检定所北京理工大学首都医科大学宣武医院

目的探讨不同组成的聚醚酯嵌段共聚物[poly(ethyleneglycol-terephthalate)/poly(butylene terephthalate),PEGT/PBT]的表面性质对血管细胞生长的影响。方法制备合成1000-T20(A组)、1000PEGT70/PBT30(B组)和600PEGT70/PBT30(C组)3种聚醚酯共聚物,流涎法制成薄膜。测定各组平衡吸水率和接触角。分离培养犬主动脉平滑肌细胞和颈外静脉内皮细胞,经鉴定后按1×104/个膜(面积为95mm2)分别接种平滑肌细胞和内皮细胞于A、B和C组;再将相同密度的平滑肌细胞和内皮细胞接种在24孔板内为TCPS组(D组)。于2、4、6和9d检测平滑肌细胞,1、3和5d检测内皮细胞在各组的增殖。结果各组平衡吸水率C组A组>B组,显示B组比A、C组更亲水。细胞培养显示在更为亲水的B组表面平滑肌细胞和内皮细胞生长不良,而中等亲水的A、C组上细胞生长增殖良好。结论与更亲水的1000PEGT70/PBT30相比,降低PEGT分子量和质量分数的600PEGT70/PBT30和结构改性后新的三嵌段聚醚酯1000-T20具有更好的血管细胞相容性。

关键词：聚醚酯共聚物表面性质内皮细胞平滑肌细胞

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不同方法转染绿色荧光蛋白真核表达载体pEGFP-N1转染效率的比较研究

不同方法转染绿色荧光蛋白真核表达载体pEGFP-N1转染效率的比较研...

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2005'中国修复重建外科论坛

作者：解慧琪杨志明邓力李秀群宋超罗静聪四川大学华西医院生物治疗国家重点实验室·干细胞与组织工程研究室四川大学华西医院生物治疗国家重点实验室·干细胞与组织工程研究室四川大学华西医院生物治疗国家重点实验室·干细胞与组织工程研究室四川大学华西医院生物治疗国家重点实验室·干细胞与组织工程研究室四川大学华西医院生物治疗国家重点实验室·干细胞与组织工程研究室四川大学华西医院生物治疗国家重点实验室·干细胞与组织工程研究室

目的种子细胞是组织工程研究的关键内容,细胞的生物学特性以及体内植入后的转归往往需要标记细胞。利用分子生物学手段将报告基因载体转入细胞是近年热点研究手段。本研究以小儿包皮成纤维细胞作为细胞模型,将构建的绿色荧光蛋白真核表... 详细信息

目的种子细胞是组织工程研究的关键内容,细胞的生物学特性以及体内植入后的转归往往需要标记细胞。利用分子生物学手段将报告基因载体转入细胞是近年热点研究手段。本研究以小儿包皮成纤维细胞作为细胞模型,将构建的绿色荧光蛋白真核表达载体pEGFP-N1采用脂质体法(4种转染试剂)和电穿孔法转染细胞,荧光显微镜下观察转染效率,进行比较研究。方法分离培养小儿包皮成纤维细胞,扩增后分别采用4种脂质体试剂盒,Transfection Reagent Selector Kit(Qiagen),Lipofectin Reagent(Invitrogen),LipogeneTM(Invivogen),Transfection(天为时代),Amaxa TM核酸转染仪转染细胞。转染后不同时间在荧光显微镜下观察,判断转染效率,转染后2天加入G418筛选。结果采用TransfectionReagent Selector Kit(Qiagen)24小时转染效率约为35%,48小时转染效率约为45%;Lipofectin Reagent(Invitrogen)24小时转染效率约为50%,48小时转染效率约为60%;LipogeneTM(Invivogen)24小时转染效率约为30%,48小时转染效率约为40%;国产天为时代。Transfection试剂盒,24小时转染效率约为45%,48小时转染效率约为60%;采用Amaxa公司核酸转移仪,使用U-30程序,24小时solution R转染效率约为85%以上,solution T转染效率约为65%,solution V转染效率约为60%以上,但solution T和solution V细胞存活率仅为40%左右,48小时solution RTV转染效率与24小时无明显差异。结论绿色荧光蛋白基因是常用的报告基因载体,荧光强度高且较稳定,可以进行实时分析,表达荧光可直接在转染细胞中进行检测,不影响细胞内蛋白的分布,便于观察。绿色荧光蛋白真核表达载体pEGFP-N1转染细胞系或原代细胞,评价不同转染方法的转染效率,有助于选择其他报告基因或功能基因的体内/体外干涉手段,为进一步研究组织工程种子细胞的生物学特性以及体内植入后的转归和功能奠定基础。

关键词：成纤维细胞基因转染绿色荧光蛋白脂质体转染效率

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不同保存方法对生物衍生肌腱的组织学影响

不同保存方法对生物衍生肌腱的组织学影响

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2005'中国修复重建外科论坛

作者：郝鹏罗静聪项舟杨志明四川大学华西医院生物治疗国家重点实验室·干细胞与组织工程研究室四川大学华西医院生物治疗国家重点实验室·干细胞与组织工程研究室四川大学华西医院生物治疗国家重点实验室·干细胞与组织工程研究室四川大学华西医院生物治疗国家重点实验室·干细胞与组织工程研究室

目的通过比较深低温冷冻干燥保存和普通低温保存液保存生物衍生肌腱植入体内后的组织学观察来寻找一种更简单实用的肌腱材料保存方法,为大规模临床应用和组织工程肌腱的开发研究做铺垫。方法将人肌腱分丝后行去细胞、去抗原、去部分蛋...

目的通过比较深低温冷冻干燥保存和普通低温保存液保存生物衍生肌腱植入体内后的组织学观察来寻找一种更简单实用的肌腱材料保存方法,为大规模临床应用和组织工程肌腱的开发研究做铺垫。方法将人肌腱分丝后行去细胞、去抗原、去部分蛋白处理,-78℃深低温冷冻干燥后分装灭菌,制备成生物衍生肌腱。部分肌腱继续在-78℃保存,部分转入F12保存液中于4℃普通冰箱中保存,12个月后作体内实验。羊膜亦经深低温冷冻干燥处理。动物实验采用法国罗曼鸡趾深屈肌腱缺损模型,分别予A组:冻干肌腱、B组:冻干肌腱+羊膜包裹、C组:保存液肌腱、D组:保存液肌腱+羊膜包裹、E组:自体肌腱移植修复,术后1、2、4、8和12周分别取材检测。结果在同一时间点,各组间肌腱粘连评分无统计学差异。光镜下A、C组之间和B、D组之间在胶原纤维密度、成纤维细胞长入程度、周围组织的炎性反应程度均无显著差异,但均不如E组。B、D组材料植入8周内所有的细胞都被羊膜阻隔在外,无法长入,12周时细胞长入水平相当与A、C组2周水平。12周时电镜观察各组材料中细胞内质网丰富,细胞分泌功能活跃。结论普通低温保存液保存生物衍生肌腱不需要深低温冰箱等特殊设备,使用时避免复水时间过短,可以作为深低温冷冻干燥保存方法的替代推广方法。羊膜在防止肌腱粘连中的作用有待进一步研究。

关键词：

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