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中国修复重建外科杂志 2008年第12期22卷 1470-1475页

作者：丰干钧刘浩陈晓禾李秀群赵献峰梁涛四川大学华西医院骨科成都610041 生物治疗国家重点实验室·干细胞与组织工程研究室

目的探讨人椎间盘细胞和关节软骨细胞的分子表型差异,分析hBMSCs经TGF-β3和BMP-7联合诱导后能否分化为软骨细胞和髓核细胞。方法取9例自愿捐赠者髂嵴骨髓20～40mL分离培养hBMSCs。取第4代hBMSCs行三维微球培养。根据基础培养基中加入... 详细信息

目的探讨人椎间盘细胞和关节软骨细胞的分子表型差异,分析hBMSCs经TGF-β3和BMP-7联合诱导后能否分化为软骨细胞和髓核细胞。方法取9例自愿捐赠者髂嵴骨髓20～40mL分离培养hBMSCs。取第4代hBMSCs行三维微球培养。根据基础培养基中加入的生长因子不同,实验分成4组,分别为加入10ng/mLTGF-β3组(A组)、200ng/mLBMP-7组(B组)、同时加入两种生长因子组(C组)以及空白对照组(D组)。于培养后21d,行组织学及免疫组织化学观察;于培养后4、21d进行PCR检测Ⅰ、Ⅱ、Ⅹ型胶原、蛋白多糖和SOX9基因的表达。结果培养后21d,HE染色示A组和C组细胞呈软骨细胞样形态特征,甲苯胺蓝染色及免疫组织化学染色Ⅱ型胶原表达呈阳性。B组和D组细胞形态无明显改变,PCR检测示培养后21d,A、C组SOX9、蛋白多糖、Ⅰ型胶原及Ⅱ型胶原表达较4d时明显增加(P<0.05)。B、D组Ⅰ型胶原表达较4d时明显增加(P<0.05),SOX9、蛋白多糖及Ⅱ型胶原较4d时无明显变化(P>0.05)。其中仅A组Ⅹ型胶原表达呈阳性。结论TGF-β3和BMP-7联合应用能促进hBMSCs分化更接近于椎间盘细胞,可能为椎间盘组织工程提供种子细胞。

关键词：椎间盘组织工程hBMSCs 诱导分化 BMP-7 TGF-β3 软骨形成

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猕猴组织工程骨异体植入后白细胞介素2及其受体的表达

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中国修复重建外科杂志 2005年第2期19卷 105-108页

作者：阳富春杨志明李秀群周悦婷林凡秦廷武罗静聪解慧琪四川大学华西医院生物治疗国家重点实验室:干细胞与组织工程研究室成都610041

目的　检测猕猴组织工程骨异体植入桥接节段骨缺损后体内白细胞介素 2 (interleukin 2 ,IL - 2 )及白细胞介素 2受体 (interleukin 2 receptor,IL - 2 R)的表达 ,从免疫学方面探讨同种异体细胞作为种子细胞构建组织工程骨的可行性。　... 详细信息

目的　检测猕猴组织工程骨异体植入桥接节段骨缺损后体内白细胞介素 2 (interleukin 2 ,IL - 2 )及白细胞介素 2受体 (interleukin 2 receptor,IL - 2 R)的表达 ,从免疫学方面探讨同种异体细胞作为种子细胞构建组织工程骨的可行性。　方法　用猕猴骨髓基质干细胞 (marrow stromal stem cells,MSCs)体外诱导分化为成骨细胞 ,与人源生物衍生骨材料复合培养 ,构建组织工程骨 ,植入 15只免疫功能健全的异体猕猴体内桥接桡骨节段骨缺损作为实验组 ;用单纯生物衍生骨材料桥接对侧同样大小骨缺损作为对照组 ;分别于术后 1、2、3、6和 12周抽取静脉血 ,并行双侧局部组织取材 ,组织块作低温匀浆 ,用双抗体夹心 IL ISA法检测 IL - 2及 IL - 2 R的表达。　结果　实验组和对照组术后各时间点IL - 2及 IL - 2 R水平无统计学差异 (P>0 .0 5 ) ,IL - 2及 IL - 2 R水平在术后第 2周开始增高 ,第 2～ 6周维持高水平 ,6周后随时间的延长而下降。　结论　猕猴 MSCs和生物衍生骨材料复合构建组织工程骨 ,植入异体猕猴体内引发微弱的免疫反应 ,同种异体 MSCs可选择作为构建骨组织工程的种子细胞。

关键词：组织工程骨植入 IL-2R 异体生物衍生骨猕猴白细胞介素2 骨材料表达种子细胞

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修复重建外科的过去、现在与将来

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中国修复重建外科杂志 2006年第4期20卷 305-308页

作者：杨志明四川大学华西医院生物治疗国家重点实验室.干细胞与组织工程研究室成都610041

目的阐述修复重建外科的发展历程,近20年的主要进展和未来的发展方向。方法查阅相关杂志、学术会议资料汇编和相关学术专著进行综合分析。结果修复重建外科伴随现代外科学应运而生。经过20年的发展,在骨折的生物固定、生物活性材料、干... 详细信息

目的阐述修复重建外科的发展历程,近20年的主要进展和未来的发展方向。方法查阅相关杂志、学术会议资料汇编和相关学术专著进行综合分析。结果修复重建外科伴随现代外科学应运而生。经过20年的发展,在骨折的生物固定、生物活性材料、干细胞、组织工程、生物活性因子、引导/诱导组织/器官再生等方面已取得显著进展。结论修复重建外科尚需在理论创新、技术创新、康复工程等方面进行更深入的研究。

关键词：修复重建外科进展

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食管黏膜上皮细胞与SIS复合培养及生物学特性研究

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中国修复重建外科杂志 2008年第6期22卷 742-746页

作者：谭波魏人前杨志明李秀群韩平智伟解慧琪四川大学华西医院生物治疗国家重点实验室.干细胞与组织工程研究室成都610041

目的探讨体外快速培养犬食管黏膜上皮细胞(esophageal mucosa epithelial cells,EMECs)及其与SIS体外复合培养的方法,为组织工程食管研究提供实验依据。方法取2～5周龄幼犬5只,无菌获取其食管组织,采用混合酶消化法,分离培养EMECs,于倒... 详细信息

目的探讨体外快速培养犬食管黏膜上皮细胞(esophageal mucosa epithelial cells,EMECs)及其与SIS体外复合培养的方法,为组织工程食管研究提供实验依据。方法取2～5周龄幼犬5只,无菌获取其食管组织,采用混合酶消化法,分离培养EMECs,于倒置相差显微镜下观察细胞生长情况,取第2代细胞培养1～5 d绘制生长曲线并进行细胞表面标志物细胞角蛋白19(cytokeratin 19,CK-19)检测。取第2代EMECs与SIS复合培养4、8 d,行形态学、组织学及扫描电镜观察。结果倒置相差显微镜下EMSCs呈典型铺路石样。CK-19免疫组织化学染色可见细胞胞浆呈阳性染色。MTT法测定第2代细胞在传代培养2 d生长达高峰。EMECs与SIS复合培养4 d,细胞呈多角形,细胞间连接紧密,呈铺路石样排列;SIS表面形成1～2层细胞组成的复层上皮样结构。8 d时,细胞密度增大,SIS表面形成2～3层细胞组成的复层上皮样结构;扫描电镜见细胞在材料上已大量增长,呈层状排列。结论采用混合酶消化法,用含6%FBS的DKSFM培养犬EMECs,方法简便,适合推广应用。SIS与EMECs有良好的相容性,可作为构建组织工程食管的理想支架材料。

关键词：食管黏膜上皮细胞 SIS 复合培养生物学特性犬

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胎盘间充质干细胞与骨髓间充质干细胞分离培养和生物学特性研究

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中国修复重建外科杂志 2007年第9期21卷 989-993页

作者：卢遥邓力李秀群智伟杨志明解慧琪四川大学华西医院生物治疗国家重点实验室.干细胞与组织工程研究室成都610041

目的探讨兔胎盘问充质干细胞（placenta—derived mesenchymal stem cells，PMSCs）和兔骨髓间充质干细胞（bone marrow—derived MSCs，BMSCs）体外分离培养、增殖，对其生物学性状进行比较观察。方法取足月待产新西兰大耳白兔1只，采... 详细信息

目的探讨兔胎盘问充质干细胞（placenta—derived mesenchymal stem cells，PMSCs）和兔骨髓间充质干细胞（bone marrow—derived MSCs，BMSCs）体外分离培养、增殖，对其生物学性状进行比较观察。方法取足月待产新西兰大耳白兔1只，采用密度梯度离心法及贴壁培养技术从兔胎盘对PMSCs进行分离、纯化和传代培养。取2周龄新西兰大耳白兔1只，采用直接贴壁法从后肢骨髓中对BMSCs进行分离、纯化和传代培养。用倒置相差显微镜观察两种细胞形态。免疫组织化学染色对第3代细胞表面标志（CD44、CD105、CD34、CD40L）进行鉴定。将BMSCs与PMSCs第2代细胞分别与生物衍生骨进行复合培养5d，每条材料接种（1．0～1．5）×10^6个细胞，苏木素染色观察细胞与材料复合培养情况。扫描电镜观察两种细胞分别与材料复合培养3d和8d的情况。结果在倒置相差显微镜下观察，两种细胞均为贴壁生长，形态为均一成纤维细胞样。PMSCs增殖力强，细胞的增殖能力随传代次数的增加而有所下降，细胞体外培养10代后，生长速度减慢。两种细胞均表达CD44、CD105，不表达CD34、CD40L。复合培养5d，PMSCs和BMSCs在生物衍生骨表面生长，大量黏附，细胞积聚成团，相互连接成网状，孔隙内也可见细胞生长和增殖，并分泌基质。扫描电镜观察：复合培养3d，可见较多量的细胞在生物衍生骨上黏附，呈梭形或多角形；8d两种细胞均已大量增长，呈层状排列，细胞连接紧密，分泌大量基质，细胞周围有较多的网状胶原形成。结论PMSCs与BMSCs有相似的生物学特性，可作为组织工程的另一成体干细胞来源。

关键词：组织工程胎盘间充质干细胞骨髓间充质干细胞生物学特性兔

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骨髓基质干细胞与生物衍生骨复合修复山羊胫骨缺损的研究

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中国修复重建外科杂志 2005年第2期19卷 90-94页

作者：戚超杨志明黄富国秦廷武李秀群罗静聪蔡琰四川大学华西医院生物治疗国家重点实验室:干细胞与组织工程研究室成都610041

目的　探讨骨髓基质干细胞 (marrow stromal stem cells,MSCs)与生物衍生骨复合修复山羊胫骨的长段骨 -骨膜缺损的可行性。　方法　将 12月龄山羊 35只双侧胫骨制备成中段 2 0 mm的骨 -骨膜缺损 ,其中 33只 ,将MSCs与生物衍生骨于体外... 详细信息

目的　探讨骨髓基质干细胞 (marrow stromal stem cells,MSCs)与生物衍生骨复合修复山羊胫骨的长段骨 -骨膜缺损的可行性。　方法　将 12月龄山羊 35只双侧胫骨制备成中段 2 0 mm的骨 -骨膜缺损 ,其中 33只 ,将MSCs与生物衍生骨于体外复合培养后 ,将其植入右侧缺损处 ,常规钢板螺钉内固定作为实验组 ,以单纯生物衍生骨植入左侧作为对照组 ,另 2只为空白组不植入任何材料 ,在 2、4、6、8、12、16及 2 4周各时间点分别行大体标本、组织学观察 ,以及生物力学测试 ,比较 3组骨缺损修复的能力。　结果　 4周时实验组支架材料部分吸收 ,植入物表面有纤维骨痂形成 ,对照组支架材料少量吸收 ,植入物表面有少量骨样组织形成 ;8周时 ,大体标本、组织学观察 ,实验组中的支架材料已完全降解 ,骨缺损部分修复 ,对照组中植入物两端少量新骨形成 ,材料中为纤维骨样组织 ,但 8周时 ,实验组与对照组的生物力学强度差异无统计学意义 (P>0 .0 5 ) ;12周时 ,实验组骨缺损完全修复 ,对照组植入物两端有新骨包绕 ,与骨端连接紧密。 12～ 2 4周实验组弯曲应力大于对照组有统计学意义 (P<0 .0 5 ) ;2 4周时空白组骨缺损未修复。　结论　所构建的组织工程骨修复能力较强 ,成骨迅速 ,且量大。

关键词：对照组生物衍生骨修复骨缺损植入支架材料骨髓基质干细胞复合培养吸收组织学观察

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大鼠骨骼肌脱细胞处理方法的优化研究

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中国修复重建外科杂志 2009年第7期23卷 836-839页

作者：卿泉秦廷武四川大学华西医院生物治疗国家重点实验室.干细胞与组织工程研究室成都610041

目的探讨SD大鼠骨骼肌脱细胞的优化处理方法。方法SD大鼠16只,雌雄不限,体重180～200g。取其中10只大鼠36条骨骼肌肌束,随机分为3组,正常组(A组,n=4):不作脱细胞处理;时间组(T组)及浓度组(C组)按照低渗-去垢剂方法进行脱细胞处理(n=16)... 详细信息

目的探讨SD大鼠骨骼肌脱细胞的优化处理方法。方法SD大鼠16只,雌雄不限,体重180～200g。取其中10只大鼠36条骨骼肌肌束,随机分为3组,正常组(A组,n=4):不作脱细胞处理;时间组(T组)及浓度组(C组)按照低渗-去垢剂方法进行脱细胞处理(n=16),其中T组十二烷基磺酸钠(sodium dodecyl sulfate,SDS)浓度均为1.0%,根据处理时间不同(24、48、72、96h),分为T1、T2、T3、T4组(n=4);C组处理时间均为48h,根据SDS浓度不同(0.5%、1.0%、1.5%、2.0%)分为C1、C2、C3、C4组(n=4)。取各组材料行HE染色观察及羟脯氨酸含量检测,并根据结果筛选最优脱细胞处理条件。另取6只SD大鼠14条完整肌束,随机取7条按照最优条件进行脱细胞处理(实验组),余7条作为正常对照(对照组),对肌束行大体观察、Masson染色及生物力学检测。结果HE染色显示T1、T2、C1、C2、C3组肌纤维与A组无差异;C4组肌纤维部分脱除;T3组肌纤维完全脱除且基膜结构保留完整;T4组肌纤维完全脱除但基膜结构部分被破坏。羟脯氨酸含量检测:A组与C1、C2、C3、T1及T2组比较,差异无统计学意义(P>0.05);A组与C4、T3和T4组比较,差异有统计学意义(P<0.05);C4组与T3、T4组比较,差异有统计学意义(P<0.05);T3组和T4组比较,差异无统计学意义(P>0.05)。根据HE染色及羟脯氨酸含量检测实验结果筛选出最优脱细胞处理条件为4℃、1.0%SDS、72h。大体观察:实验组与对照组比较肌束颜色变浅,呈半透明状,且结构相对较松散。Masson染色观察:实验组胶原纤维连续性良好,较对照组结构疏松。生物力学测试:实验组及对照组最大破坏载荷分别为(1.38±0.35)N及(1.98±0.77)N,最大拉伸位移分别为(3.19±3.23)mm及(3.56±2.17)mm,两组以上指标差异均无统计学意义(P>0.05)。结论应用1.0%SDS,于4℃条件下对大鼠骨骼肌经震荡处理72h可得到完全去除肌纤维且ECM保留完好的脱细胞基质。

关键词：骨骼肌脱细胞羟脯氨酸生物力学大鼠

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血小板凝胶在修复重建外科中的作用

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中国修复重建外科杂志 2005年第11期19卷 928-931页

作者：范伟杰杨志明邓力罗静聪四川大学华西医院生物治疗国家重点实验室.干细胞与组织工程研究室成都610041

目的回顾近10年来血小板凝胶(plateletgel,PG)用于修复重建外科基础和临床研究的成果。方法通过文献检索获取国内外有关PG应用于多种组织和器官病变修复重建方面的相关资料,总结分析PG在修复重建组织器官功能、形态方面的作用。结果PG... 详细信息

目的回顾近10年来血小板凝胶(plateletgel,PG)用于修复重建外科基础和临床研究的成果。方法通过文献检索获取国内外有关PG应用于多种组织和器官病变修复重建方面的相关资料,总结分析PG在修复重建组织器官功能、形态方面的作用。结果PG含有多种生长因子,能促进皮肤、骨等多种组织再生。结论PG具有易获得、近乎天然、对多种组织的再生有促进作用特点,基础和临床研究以及临床应用将更加广泛和深入。

关键词：血小板凝胶生长因子修复重建

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脱细胞异种角膜基质的制备及细胞相容性

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中国医学科学院学报 2005年第6期27卷 670-673,i0006页

作者：张姝江杨志明邓力罗静聪李秀群四川大学华西医院生物治疗国家重点实验室干细胞与组织工程研究室成都610044

目的用牛角膜制备脱细胞基质,作为组织工程角膜的载体,为细胞提供贴附生长的支持物。方法选取新鲜牛角膜9个,每个分层剥离为2片组织。用0.25%胰蛋白酶,37℃下分为20、40、60min消化,漂洗。每组取样本分别做扫描电镜观察和HE染色观察。... 详细信息

目的用牛角膜制备脱细胞基质,作为组织工程角膜的载体,为细胞提供贴附生长的支持物。方法选取新鲜牛角膜9个,每个分层剥离为2片组织。用0.25%胰蛋白酶,37℃下分为20、40、60min消化,漂洗。每组取样本分别做扫描电镜观察和HE染色观察。其余冻干处理后消毒备用。将消毒后冻干牛角膜基质常规培养基浸泡24h,取浸提液原液,稀释101、102、103倍培养人成纤维细胞,观察细胞生长情况。将冻干牛角膜基质复水,常规培养基浸泡24h,以2×105个/cm2接种兔角膜缘细胞,培养7d后,标本扫描电镜检查、HE染色观察。结果电镜观察各组牛角膜片表层细胞均被脱去,60min组基质胶原间细胞碎片残留较少,20min组较多,胶原纤维有序排列以60min组破坏最大。浸提液的各稀释倍数及原液所培养人成纤维细胞生长良好,各组间差异无显著性。电镜及HE染色观察复合材料培养的兔角膜缘干细胞,均见细胞在材料表面贴附生长,材料部分表面呈多层生长。结论以酶消化法和冻干处理的脱细胞牛角膜基质可以作为细胞的载体在体外与细胞复合培养。

关键词：组织工程角膜角膜缘干细胞异种角膜基质

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功能性组织工程肌腱的研究和应用

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中国修复重建外科杂志 2010年第7期24卷 850-853页

作者：宁良菊秦廷武四川大学华西医院生物治疗国家重点实验室.干细胞与组织工程研究室成都610041

目的总结功能性组织工程肌腱(functional tissue engineered tendons,FTETs)的研究和应用。方法查阅近年来国内外有关FTETs研究的相关文献,并进行综合分析。结果功能性组织工程(functional tissue engineering,FTE)作为一种新方法 ,强... 详细信息

目的总结功能性组织工程肌腱(functional tissue engineered tendons,FTETs)的研究和应用。方法查阅近年来国内外有关FTETs研究的相关文献,并进行综合分析。结果功能性组织工程(functional tissue engineering,FTE)作为一种新方法 ,强调了机械应力对于成功构建组织工程复合物的重要性以及对体内组织重塑的影响。在组织工程肌腱的研究中引入FTE方法 ,通过测量正常肌腱组织的体内载荷,利用这些信息指导设计能承受体内载荷的合适的组织工程肌腱复合物,可望解决修复肌腱缺损的组织工程肌腱生物力学功能不能满足体内力学环境需要的问题。结论 FTETs对于治疗肌腱缺损具有广阔的应用前景。

关键词：功能性组织工程肌腱生物力学功能力学刺激

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