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中国修复重建外科杂志 2010年第7期24卷 817-821页

作者：廖梅旭宁良菊陈晓禾李秀群罗静聪秦廷武四川大学华西医院生物治疗国家重点实验室.干细胞与组织工程研究室成都610041 四川省人民医院辅助生殖中心

目的研究大鼠BMSCs与小肠黏膜下层(small intestinal submucosa,SIS)复合后,施加动态应变刺激能否使BMSCs在体外分化为肌腱细胞(tenocytes,TCs)。方法取1周龄SD大鼠骨髓,采用贴壁培养法分离培养大鼠BMSCs,并用多向分化诱导法和流式细胞... 详细信息

目的研究大鼠BMSCs与小肠黏膜下层(small intestinal submucosa,SIS)复合后,施加动态应变刺激能否使BMSCs在体外分化为肌腱细胞(tenocytes,TCs)。方法取1周龄SD大鼠骨髓,采用贴壁培养法分离培养大鼠BMSCs,并用多向分化诱导法和流式细胞仪检测进行鉴定。用生物力学试验机行SIS的拉伸破坏实验,计算SIS的弹性应变。将分离纯化后的第2代BMSCs以2.5×105个/cm2细胞密度种植于3cm×1cm大小的SIS上,形成BMSCs-SIS复合物,固定于应变培养装置对其进行静态培养2d后,施加应变刺激(拉伸频率为0.02Hz,作用时间为15min/h、12h/d,应变幅度为5%)动态培养5d,作为实验组;BMSCs-SIS复合物持续静态培养作为对照组;采用组织块法分离培养SD大鼠鼠尾TCs,用第2代TCs与SIS复合,相同条件下静态培养作为阳性对照组。扫描电镜观察应变培养后BMSCs形态变化,ELISA法检测培养后细胞上清液中2种TCs标志蛋白Scleraxis和Tenomodulin的含量。结果分离培养的SD大鼠BMSCs经多向分化诱导后,可以分化为成骨细胞和脂肪细胞,且流式细胞仪检测示表面标志抗原CD34、CD45为阴性,CD90为阳性,符合BMSCs生物学特性。SIS拉伸破坏实验结果显示,SIS平均弹性应变为39.5%。扫描电镜观察示实验组材料上细胞具有类TCs形态;ELISA法检测示,实验组应变培养后细胞上清液中Scleraxis和Tenomodulin含量分别为(3.56±0.91)μmol/L和(4.27±1.10)μmol/L,阳性对照组分别为(14.73±2.30)μmol/L和(10.65±1.51)μmol/L,对照组分别为(0.23±0.14)μmol/L和(0.16±0.10)μmol/L;3组比较差异均有统计学意义(P<0.05)。结论适当的应变刺激培养可在体外诱导BMSCs向TCs方向分化,尚需进一步研究最佳的应变刺激诱导条件。

关键词：组织工程 BMSCs 肌腱细胞应变刺激

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低氧、无血清培养对人骨髓间充质干细胞增殖、凋亡的影响

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山东医药 2010年第11期50卷 1-3页

作者：蒋能刚胥劲邱琳唐莉朱鸿明李秀群陈晓禾四川大学华西医院成都610041 华西医院生物治疗国家重点实验室干细胞与组织工程研究室

目的观察人骨髓间充质干细胞(hBM-MSCs)对低氧环境的适应能力,为其临床应用提供依据。方法体外培养hBM-MSCs,根据培养条件分为四组,常氧正常血清组培养条件为20%O2及10%FBS/HD、常氧无血清组为20%O2及0%FBS/HD,低氧正常血清组为1.5%O2及... 详细信息

目的观察人骨髓间充质干细胞(hBM-MSCs)对低氧环境的适应能力,为其临床应用提供依据。方法体外培养hBM-MSCs,根据培养条件分为四组,常氧正常血清组培养条件为20%O2及10%FBS/HD、常氧无血清组为20%O2及0%FBS/HD,低氧正常血清组为1.5%O2及10%FBS/HD,低氧无血清组为1.5%O2及0%FBS/HD,细胞培养6、12、24、48、72、96 h后采用MTT法检测四组增殖状况;流式细胞术检测四组凋亡情况。结果在10%FBS培养下,48 h时低氧可显著促进细胞增殖;在整个观察时间内,低氧培养不会促进hBM-MSCs凋亡;同时无血清培养时细胞增殖受抑。结论在正常的血清培养条件下,hBM-MSCs对低氧有较好的耐受性,但是无血清培养不利于hBM-MSCs增殖,hBM-MSCs可作为缺氧相关组织修复的种子细胞。

关键词：骨髓间充质干细胞低氧增殖凋亡

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BMSCs种植双相复合支架修复兔关节软骨及软骨下骨缺损

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中国修复重建外科杂志 2010年第1期24卷 87-93页

作者：刘明项舟裴福兴黄富国岑石强钟刚范红松肖玉梅孙静高宇四川大学华西医院骨科成都610041 四川大学华西医院生物治疗国家重点实验室.干细胞与组织工程研究室成都610041 四川大学华西医院国家生物医学材料工程技术研究中心成都610041

目的关节软骨的病变常伴有软骨下骨缺损,其修复重建一直是骨科难题。探讨BMSCs-双相支架复合物修复骨软骨缺损的可行性,比较其与植入单纯双相支架及动物自身修复效果的差别具有重要意义。方法以聚乳酸/聚羟基乙酸共聚物(poly-lactic-co-... 详细信息

目的关节软骨的病变常伴有软骨下骨缺损,其修复重建一直是骨科难题。探讨BMSCs-双相支架复合物修复骨软骨缺损的可行性,比较其与植入单纯双相支架及动物自身修复效果的差别具有重要意义。方法以聚乳酸/聚羟基乙酸共聚物(poly-lactic-co-glycolic acid,PLGA)、羟基磷灰石(hydroxyapatite,HA)为原料制备由软骨相和骨相构成的三维支架,提取天然Ⅰ型胶原(collagen typeⅠ,ColⅠ)涂于表面制成PLGA-HA-ColⅠ双相支架。取新西兰乳兔骨髓分离培养获得的第2代BMSCs,以1×106个/mL接种于双相支架,扫描电镜观察支架结构和细胞分布。取30只6月龄新西兰大白兔,建立股骨远端关节面骨软骨缺损模型,随机均分为3组,A、B组分别于缺损区植入单纯双相支架和BMSCs-双相支架复合物,C组作为空白对照组未植入支架材料。于术后1、3、6、9个月取材行大体及组织学观察,术后9个月对A、B组标本行大体评分比较、micro CT扫描定量分析及免疫组织化学染色观察。结果扫描电镜示双相支架孔隙连通性好,软骨相和骨相孔径不同,BMSCs在双相支架内生长良好。大体观察示术后9个月内A组关节表面逐渐形成类软骨样组织,部分出现塌陷或不规则缺损;B组关节面无塌陷或碎裂,新生组织质地更接近正常组织;C组缺损一直存在。大体评分显示3组修复效果比较差异均有统计学意义(P<0.001),B组优于A组,C组最差。micro CT扫描示A、B组软骨下骨得到良好的修复重建,定量分析示B组骨组织体积分数、结构模型指数及骨小梁数目均高于A组,但差异无统计学意义(P>0.05)。组织学观察示术后1个月A、B组缺损区存在炎性反应;术后3个月新生组织长入;术后6个月支架完全降解,新生组织在植入物及缺损边缘爬行生长;术后9个月形成大量胶原纤维,表面多为纤维软骨。C组观察期内缺损持续存在。术后9个月免疫组织化学染色示A、B组标本缺损区ColⅡ染色呈弱阳性,ColⅠ染色阳性。结论PLGA-HA-ColⅠ双相支架具备较适宜的一体化修复骨软骨缺损的物理特性,接种BMSCs后整体修复效果更好。

关键词：组织工程 BMSCs 双相支架骨软骨缺损修复兔

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丹参对人脐静脉内皮细胞的保护机制

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华西药学杂志 2010年第5期25卷 615-617页

作者：唐莉邓力四川大学华西药学院四川成都610041 四川大学华西医院生物治疗国家重点实验室干细胞与组织工程研究室四川成都610041

综述近年来丹参对人脐静脉内皮细胞的保护机制和临床研究进展。

关键词：丹参人脐静脉内皮细胞保护机制综述

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PKH26与BrdU体外双重标记兔BMSCs在心肌补片中的实验研究

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中国修复重建外科杂志 2010年第7期24卷 828-833页

作者：张珏智伟谭美云陈晓禾李秀群邓力四川大学华西医院生物治疗国家重点实验室.干细胞与组织工程研究室成都610041 四川大学华西药学院药理系遵义医药高等专科学校药学系西南交通大学材料先进技术教育部重点实验室材料科学与工程学院泸州医学院附属医院骨与关节外科

目的观察PKH26与BrdU体外双重标记兔BMSCs的生物学特性,并体外构建组织工程心肌补片。方法取6月龄新西兰大白兔分离培养BMSCs,并用细胞膜荧光染料PKH26和细胞核标记物BrdU对BMSCs进行标记,通过倒置相差显微镜、荧光显微镜、流式细胞仪、... 详细信息

目的观察PKH26与BrdU体外双重标记兔BMSCs的生物学特性,并体外构建组织工程心肌补片。方法取6月龄新西兰大白兔分离培养BMSCs,并用细胞膜荧光染料PKH26和细胞核标记物BrdU对BMSCs进行标记,通过倒置相差显微镜、荧光显微镜、流式细胞仪、MTT法观察细胞生长状态和荧光标记前后细胞生物学特性的变化;ALP、茜素红、油红O染色及骨钙素、Ⅰ型胶原蛋白等免疫细胞化学技术检测,观察和评价标记前后BMSCs体外分化为成骨细胞和成脂细胞的能力。将标记细胞与小肠黏膜下层(small intestinal submucosa,SIS)复合后共培养5～7d构建组织工程心肌补片,在倒置相差显微镜、荧光显微镜和扫描电镜下观察细胞在SIS上的生长情况,并做活体及石蜡包埋HE染色观察。结果标记后细胞生长状态良好,基本生长特性无明显改变;荧光显微镜下可见标记后细胞膜上红色荧光呈颗粒状分布;细胞表面干细胞标志性抗原表达与标记前无明显差异。标记后的BMSCs成骨诱导后,ALP、茜素红染色阳性,细胞表达骨钙素及Ⅰ型胶原蛋白;成脂诱导后,细胞胞浆内出现明显的脂滴。标记细胞与SIS共培养5～7d后,标记细胞生长状态良好,在材料上呈现出多层细胞结构。活体及石蜡包埋后HE染色可见细胞生长状态良好。结论兔BMSCs能被PKH26和BrdU稳定标记;标记的细胞在体外具有自我更新和多向分化的能力;标记的BMSCs与SIS体外复合培养可以构建组织工程心肌补片。

关键词： BMSCs PKH26 BrdU 双重标记组织工程心肌补片兔

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盐酸四环素缓释微球对大鼠成骨细胞活性的影响

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华西药学杂志 2010年第1期25卷 1-3页

作者：张珏陈晓禾李莉李驯虎智伟朱鸿明邓力四川大学华西药学院四川成都610041 四川大学华西医院生物治疗国家重点实验室干细胞与组织工程研究室四川成都610041 北京德得创业科技有限公司北京100085

目的观察盐酸四环素缓释微球对体外培养的成骨细胞活性的影响。方法体外分离培养SD大鼠成骨细胞并通过形态学观察、碱性磷酸酶(ALP)钙-钴法染色鉴定其细胞生物学特征;将盐酸四环素聚乳酸-聚羟基乙酸共聚物(PLGA)微球、盐酸四环素分别与... 详细信息

目的观察盐酸四环素缓释微球对体外培养的成骨细胞活性的影响。方法体外分离培养SD大鼠成骨细胞并通过形态学观察、碱性磷酸酶(ALP)钙-钴法染色鉴定其细胞生物学特征;将盐酸四环素聚乳酸-聚羟基乙酸共聚物(PLGA)微球、盐酸四环素分别与成骨细胞共培养,采用四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测各实验组成骨细胞的增殖情况,通过碱性磷酸酶活性测定法检测各实验组成骨细胞中ALP的活性,免疫组化Ⅰ型胶原蛋白(ColⅠtype)染色观察各实验组成骨细胞中I型胶原的表达情况。结果盐酸四环素-PLGA微球能显著促进SD大鼠成骨细胞的增殖,同时增强了ALP的表达,其效应持续时间高于盐酸四环素组和空白对照组,Ⅰ型胶原在3组细胞中的表达无显著差异。结论制备的盐酸四环素-PLGA微球具有缓释促进成骨细胞增殖和增加ALP活性的作用,在骨创伤的修复重建治疗中具有潜在的应用价值。

关键词：盐酸四环素微球缓释成骨细胞活性

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以脱细胞牛软骨基质为支架体外构建组织工程软骨的实验研究

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华西医学 2010年第11期25卷 2028-2031页

作者：高博孔清泉项舟杨志明罗静聪李秀群四川大学华西医院骨科成都610041 四川大学华西医院生物治疗国家重点实验室.干细胞与组织工程研究室成都610041

目的以脱细胞牛软骨基质(acellular cartilaginous matrix,ACM)作支架体外构建组织工程软骨,了解其作为软骨组织工程支架的可行性。方法 2003年1月-2005年12月联合应用冻干-反复冻融-酶消化法对牛软骨基质行脱细胞处理。将体外培养扩增... 详细信息

目的以脱细胞牛软骨基质(acellular cartilaginous matrix,ACM)作支架体外构建组织工程软骨,了解其作为软骨组织工程支架的可行性。方法 2003年1月-2005年12月联合应用冻干-反复冻融-酶消化法对牛软骨基质行脱细胞处理。将体外培养扩增的2～5代兔软骨细胞接种在材料上,体外培养3周,观察软骨细胞在支架材料上的生长分布情况。结果软骨细胞在制备的ACM上可较好地黏附生长,并且分泌大量Ⅱ型胶原和葡萄糖胺聚糖;但软骨细胞不能长入ACM内部,只能在表层生长,少量软骨细胞分布在ACM孔隙中。结论 ACM支架材料具有良好的细胞相容性和活性,并且能促进软骨细胞增殖和维持软骨细胞表型。

关键词：组织工程软骨脱细胞牛软骨基质软骨细胞体外构建

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成肌分化因子和5-氮杂胞苷体外诱导大鼠骨髓间充质干细胞向骨骼肌细胞的分化(英文)

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中国组织工程研究与临床康复 2010年第40期14卷 7597-7600页

作者：陈振强孙占胜智伟聊城市人民医院骨科山东省聊城市252000 山东省立医院创伤骨科山东省济南市250021 四川大学华西医院生物治疗国家重点实验室·干细胞与组织工程研究室四川省成都市610000

背景:传统治疗肌组织缺损的方法是肌肉转位替代疗法,这样就造成了另一块肌组织的损伤。在这种背景下,作者设计了该课题,寻找肌肉原位修复的方法。目的:探讨大鼠骨髓间充质干细胞在体外诱导分化为骨骼肌细胞的条件。方法:分离培养大鼠骨... 详细信息

背景:传统治疗肌组织缺损的方法是肌肉转位替代疗法,这样就造成了另一块肌组织的损伤。在这种背景下,作者设计了该课题,寻找肌肉原位修复的方法。目的:探讨大鼠骨髓间充质干细胞在体外诱导分化为骨骼肌细胞的条件。方法:分离培养大鼠骨髓间充质干细胞,取第3代骨髓间充质干细胞,应用5-氮杂胞苷、成肌分化因子、转化生长因子β1、胰岛素样生长因子1联合进行诱导,使之分化。在诱导后的第9天,收集细胞,免疫组织化学法对细胞进行鉴定。结果与结论:原代培养的骨髓间充质干细胞呈贴壁、集落样生长,5～7d后有多突成纤维细胞、扁平多角形细胞、多角形细胞和三角形细胞。12d后,见细胞融合,铺满瓶底,骨髓间充质干细胞的形态变化不明显。经5-氮杂胞苷诱导后细胞,起初部分细胞死亡,生长缓慢。7d后见细胞明显生长,体积逐渐增大,呈椭圆形、梭形或不规则形状。14d后,大量增殖的长梭形细胞开始增多。18～22d后,肌管数量增多,体积增大,核数亦明显增多,初生肌管与长梭形成肌细胞呈平行排列,间隔分布。骨髓间充质/干细胞免疫组化法测定见CD44反应阳性,胞质呈棕褐颗粒,核周明显,CD34呈阴性反应。诱导后骨髓间充质干细胞免疫组化法测定见结蛋白、骨骼肌特异肌球蛋白均为阳性表达。结果提示在体外,成肌分化因子和5-氮杂胞苷可以诱导骨髓间充质干细胞向骨骼肌细胞定向分化,并伴有结蛋白和骨骼肌肌球蛋白阳性表达。

关键词：骨髓间充质干细胞 5-氮杂胞苷诱导分化骨骼肌细胞肌肉原位修复

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碱性成纤维细胞生长因子对许旺细胞在小肠黏膜下层支架上黏附及增殖的影响

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中国组织工程研究与临床康复 2010年第21期14卷 3827-3831页

作者：张开伟肖睿段宏项舟李秀群四川大学华西医院骨科四川省成都市610041 宜宾市第一人民医院骨科四川省宜宾市644000 四川大学华西医院生物治疗国家重点实验室干细胞与组织工程研究室四川省成都市610041

背景:许旺细胞复合小肠黏膜下层是构建人工神经的可行方法,碱性成纤维细胞生长因子有促进许旺细胞增殖的作用。目的:验证碱性成纤维细胞生长因子对许旺细胞在小肠黏膜下层支架材料表面的细胞增殖及黏附状态的影响。方法:将体外分离培养... 详细信息

背景:许旺细胞复合小肠黏膜下层是构建人工神经的可行方法,碱性成纤维细胞生长因子有促进许旺细胞增殖的作用。目的:验证碱性成纤维细胞生长因子对许旺细胞在小肠黏膜下层支架材料表面的细胞增殖及黏附状态的影响。方法:将体外分离培养的2代SD乳鼠许旺细胞接种于小肠黏膜下层支架材料上并加入50μg/L的碱性成纤维细胞生长因子复合培养为实验组,以单纯的许旺细胞复合小肠黏膜下层作为对照组,分别用MTT法测定细胞增殖能力,细胞黏附率检测细胞在支架上的黏附情况,用流式细胞仪测定细胞分裂周期,并用苏木精-伊红染色及描电镜观察细胞形态及与材料的贴附情况。结果与结论:MTT显示实验组的细胞增殖吸光度值明显高于对照组(P<0.05),实验组的细胞黏附率为(69.47±3.17)%,对照组为(44.58±1.76)%(P<0.05),细胞周期显示实验组比对照组的G2/M+S期细胞百分含量高(P<0.05),培养7d后的苏木精-伊红染色及扫描电镜显示实验组比对照组材料上聚集的细胞数量多,细胞形态伸展更明显,细胞贴附力更好。因此碱性成纤维细胞生长因子可明显地改善许旺细胞在小肠黏膜下层上的增殖及黏附能力,能促进许旺细胞与小肠黏膜下层支架的复合而构建人工神经导管。

关键词：碱性成纤维细胞生长因子许旺细胞小肠黏膜下层增殖黏附

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BMSCs在肿瘤治疗中的研究进展

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中国修复重建外科杂志 2009年第1期23卷 34-40页

作者：罗静聪杨志明四川大学华西医院生物治疗国家重点实验室.干细胞与组织工程研究室成都610041

目的综述BMSCs在肿瘤治疗中的研究进展。方法广泛查阅近年国内外相关文献,对BMSCs肿瘤趋向性、与肿瘤组织生长的相互关系以及作为肿瘤治疗运载细胞的研究进行回顾性总结与分析。结果BMSCs对肿瘤组织具有体内定向迁移能力,可抑制或促进... 详细信息

目的综述BMSCs在肿瘤治疗中的研究进展。方法广泛查阅近年国内外相关文献,对BMSCs肿瘤趋向性、与肿瘤组织生长的相互关系以及作为肿瘤治疗运载细胞的研究进行回顾性总结与分析。结果BMSCs对肿瘤组织具有体内定向迁移能力,可抑制或促进肿瘤组织生长,可以作为肿瘤基因治疗的运载细胞;但BMSCs具有向肿瘤转化的可能。结论BMSCs可能成为肿瘤治疗的良好运载细胞,但尚需进一步研究,以加强其在肿瘤治疗中的安全性。

关键词： BMSCs 肿瘤治疗恶性转化

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