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中国毒理学会免疫毒理专业委员会2018年学术会议

作者：管博文苏路路李程程董银萍王月英李德冠孟爱民中国医学科学院医学实验动物研究所北京协和医学院比较医学中心卫生部人类疾病比较医学重点实验室北京市人类重大疾病实验动物模型工程技术研究中心北京 100021 中国医学科学院放射医学研究所天津市放射医学与核医学重点实验室天津300192

目的：前期研究显示，亚致死剂量照射可以引起造血干细胞损伤，导致造血免疫功能的远期损伤。之前多是观察照射后1个月和2个月。本实验观察亚致死剂量全身照射后4个月和6个月的小鼠造血免疫功能。

关键词：

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GSDMC基因在饥饿诱导的肠癌发生发展过程中的作用

GSDMC基因在饥饿诱导的肠癌发生发展过程中的作用

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中国细胞生物学学会2017年全国学术大会

作者：邹玉洁史培良陈秦林兆宇高翔疾病动物模型教育部重点实验室南京大学模式动物研究所中国江苏省南京市学府路12号

Gasdermin是一类特异性表达在在上消化道和皮肤中的蛋白.Gsdm家族的成员包括8个鼠源基因,分别是Gsd-ma1-3,Gsdmc1-4,Gsdmd和4个人源基因GSDMA,GSDMB,GSDMC,GSDMD.近来,该家族因GSDMD被证明是炎性caspase诱导细胞焦亡的直接执行者,且这... 详细信息

Gasdermin是一类特异性表达在在上消化道和皮肤中的蛋白.Gsdm家族的成员包括8个鼠源基因,分别是Gsd-ma1-3,Gsdmc1-4,Gsdmd和4个人源基因GSDMA,GSDMB,GSDMC,GSDMD.近来,该家族因GSDMD被证明是炎性caspase诱导细胞焦亡的直接执行者,且这些功能域保守的蛋白具有在膜上打孔进而破坏细胞膜的功能而受到广泛关注.GSDMC是gsdm家族基因的成员之一,但目前其功能尚不明确.通过qPCR分析病人的直肠癌样本中Gsdmc的表达水平,我们发现与癌旁组织相比较,Gsdmc在癌组织的表达量是下调的,Western Blot的结果也验证了这点.我们还通过qPCR和western blot发现小鼠饥饿24h后,gsdmc在结肠中的表达量显著下调.

关键词： GSDMC 饥饿诱导结肠直肠癌

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布鲁菌铁转录调控因子rirA基因突变株的构建与鉴定

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动物医学进展 2017年第10期38卷 1-7页

作者：王震王勇张倩陈创夫郭飞李天森张辉王远志刘志强石河子大学兵团动物疾病防控重点实验室新疆石河子832000 石河子大学新疆地方与民族高发病教育部重点实验室新疆石河子832000 新疆畜牧科学院兽医研究所新疆乌鲁木齐830000

为了构建牛布鲁菌S2308(简称S2308)的铁转录调控因子rirA基因突变株(S2308ΔrirA),探讨该基因对自身生长的影响以及其对不同类型细胞黏附侵袭和胞内繁殖的作用。利用同源重组和抗性替换的方法,以卡那抗性基因替换rirA基因,获得突变株S2... 详细信息

为了构建牛布鲁菌S2308(简称S2308)的铁转录调控因子rirA基因突变株(S2308ΔrirA),探讨该基因对自身生长的影响以及其对不同类型细胞黏附侵袭和胞内繁殖的作用。利用同源重组和抗性替换的方法,以卡那抗性基因替换rirA基因,获得突变株S2308ΔrirA。将亲本株S2308、疫苗株RB51和突变株S2308ΔrirA在相同营养条件下培养,观察其振荡培养时的生长变化趋势和静置培养时的聚集状态。将各菌株侵染人胚胎滋养层细胞(HPT-8)和小鼠巨噬细胞(RAW264.7),分别检测其黏附侵袭能力和胞内生存能力。结果显示,成功获得了布鲁菌rirA基因突变株且10代内未发生回复性突变;与亲本株相比,S2308ΔrirA在相同体外培养条件下其生长趋势未发生明显改变,且其凝集状态与亲本株类似;黏附侵袭试验显示,S2308ΔrirA对HPT-8细胞的黏附侵袭能力显著强于亲本株,而其对RAW264.7的黏附侵袭能力在一定程度上弱于亲本株;布鲁菌胞内生存试验发现,布鲁菌侵染HPT-8细胞24h后,其胞内细菌数量显著升高,而侵染巨噬细胞24h后,S2308ΔrirA的繁殖能力明显低于亲本株。这些结果表明,铁转录调控因子rirA基因参与了布鲁菌胞内寄生的过程,并与菌株的毒力强弱存在密切联系。

关键词：布鲁菌铁转录调控因子人胚胎滋养层细胞小鼠巨噬细胞

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阿拉善戈壁驼与沙漠驼骨骼肌纤维类型的比较研究

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黑龙江畜牧兽医 2018年第21期 201-205页

作者：文芳包花尔杨惠徐斯日古楞齐旺梅图雅敖特根巴雅尔白永明格日勒图额尔敦木图内蒙古农业大学食品科学与工程学院/乳品生物技术与工程教育部重点实验室呼和浩特010018 内蒙古农业大学兽医学院/农业农村部动物疾病临床诊疗技术重点实验室呼和浩特010018 阿拉善盟农牧业综合行政执法支队内蒙古阿拉善750306 鄂尔多斯市鄂托克旗农牧业局内蒙古鄂尔多斯016100 巴彦淖尔市兽医事业管理局内蒙古巴彦淖尔015000

为了探索阿拉善戈壁驼与沙漠驼骨骼肌纤维类型差异,随机选取6,8,10齿龄的健康阿拉善戈壁驼与沙漠驼,每个品种、每个齿龄各6峰,共36峰,分别采集臂三头肌、背最长肌、股二头肌组织,采用组织切片ATP酶染色法对阿拉善戈壁驼与沙漠驼骨骼肌... 详细信息

为了探索阿拉善戈壁驼与沙漠驼骨骼肌纤维类型差异,随机选取6,8,10齿龄的健康阿拉善戈壁驼与沙漠驼,每个品种、每个齿龄各6峰,共36峰,分别采集臂三头肌、背最长肌、股二头肌组织,采用组织切片ATP酶染色法对阿拉善戈壁驼与沙漠驼骨骼肌纤维类型及组织学性状进行比较研究,用LAS 4. 0软件分析图片,采用SAS软件进行方差分析。结果表明：6,8,10齿龄阿拉善戈壁驼MyHCⅠ型、MyHCⅡa型、My HCⅡb型肌纤维含量与阿拉善沙漠驼相比差异显著或极显著（P〈0. 05或P〈0. 01）。阿拉善戈壁驼MyHCⅠ型、MyHCⅡa型、MyHCⅡb型肌纤维直径与横截面积均显著或极显著小于阿拉善沙漠驼（P〈0. 05或P〈0. 01）,而单肌纤维密度、肌纤维平均密度、肌纤维总密度显著或极显著大于阿拉善沙漠驼（P〈0. 05或P〈0. 01）。说明阿拉善戈壁驼产肉量大于阿拉善沙漠驼,与肌纤维类型、含量、直径和密度差异有关,其中MyHCⅡb型肌纤维对产肉量的影响最大,其肌纤维直径最小,单肌纤维密度最大;在阿拉善沙漠驼中,MyHCⅡb型肌纤维直径最大,而单肌纤维密度最小。

关键词：戈壁驼沙漠驼 ATP酶染色骨骼肌肌纤维类型肌纤维组织学性状

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修饰壳聚糖包裹的猪IL-2和IL-4/6共表达对小鼠免疫效应的影响

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四川畜牧兽医 2018年第6期45卷 29-32页

作者：肖永乐杨璐一梁歌万小平罗公民吕学斌王泽洲高荣四川大学生命科学学院生物资源与生态环境教育部重点实验室动物疾病防控与食品安全重点实验室四川成都610064 四川省畜牧科学研究院四川成都610066 四川省动物疫病预防控制中心四川成都610041

为了进一步研究多种白细胞介素共同作用时发挥的生物学效应,本试验构建了共表达猪白细胞介素2和猪融合白细胞介素4/6基因的重组质粒,利用修饰壳聚糖进行分子包裹制备纳米颗粒,肌注小鼠,然后定时称重小鼠,并采血,检测CD4、CD8分子含量和... 详细信息

为了进一步研究多种白细胞介素共同作用时发挥的生物学效应,本试验构建了共表达猪白细胞介素2和猪融合白细胞介素4/6基因的重组质粒,利用修饰壳聚糖进行分子包裹制备纳米颗粒,肌注小鼠,然后定时称重小鼠,并采血,检测CD4、CD8分子含量和细胞因子的表达水平,利用ELISA检测抗体水平。结果表明,共表达的猪IL-2和IL-4/6可有效促进猪淋巴母细胞的增殖,上调IL-2和IL-4基因的表达水平,增加Th和Tc细胞数量,也使体重有所增加。

关键词：猪融合白细胞介素共表达小鼠免疫效应壳聚糖纳米颗粒

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金黄色葡萄球菌表面烯醇化酶的研究进展

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黑龙江畜牧兽医 2017年第2期 72-74页

作者：何静乌云额尔敦么宏强玉斯日古楞内蒙古农业大学食品工程学院乳品生物技术与工程教育部重点实验室呼和浩特010018 内蒙古农业大学兽医学院农业部动物疾病临床诊疗技术重点实验室呼和浩特010018

金黄色葡萄球菌是人和动物重要致病菌,常引起肺炎、脑膜炎、败血症、食物中毒等多种疾病。目前的研究发现,金黄色葡萄球菌有许多致病机理,因此迫切需要寻找一种替代预防或治疗金黄色葡萄球菌的试剂。近年来,人们对金黄色葡萄球菌表面烯... 详细信息

金黄色葡萄球菌是人和动物重要致病菌,常引起肺炎、脑膜炎、败血症、食物中毒等多种疾病。目前的研究发现,金黄色葡萄球菌有许多致病机理,因此迫切需要寻找一种替代预防或治疗金黄色葡萄球菌的试剂。近年来,人们对金黄色葡萄球菌表面烯醇化酶参与侵染过程的研究日益重视。烯醇化酶可以作为纤溶酶原和层黏连蛋白来调节细菌黏附和侵袭作用。文章就金黄色葡萄球菌表面烯醇化酶的研究进展做一简单的综述。

关键词：烯醇化酶纤溶酶原层黏连蛋白金黄色葡萄球菌作用

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藏猪白细胞介素-12基因表达对猪圆环病毒2疫苗的免疫增强效应

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四川大学学报（自然科学版） 2017年第6期54卷 1345-1350页

作者：宋婷玉肖永乐曾光志陈祎李金海万小平王泽洲方鹏飞高荣四川大学生命科学学院生物资源与环境教育部重点实验室动物疾病防控和食品安全四川省重点实验室成都610064 四川省华派生物制药有限公司成都610026 四川省动物疫病预防控制中心成都610035

为研究IL-12基因在猪体内表达对PCV2疫苗免疫应答的调控作用,本研究将藏猪IL-12基因克隆至VR1020载体,壳聚糖包裹重组质粒制备成壳聚糖纳米颗粒(VRIL-12-CNP)并与PCV2疫苗共同接种21日龄断奶仔猪.接种后第0d、7d、14d和28d采集猪前腔静... 详细信息

为研究IL-12基因在猪体内表达对PCV2疫苗免疫应答的调控作用,本研究将藏猪IL-12基因克隆至VR1020载体,壳聚糖包裹重组质粒制备成壳聚糖纳米颗粒(VRIL-12-CNP)并与PCV2疫苗共同接种21日龄断奶仔猪.接种后第0d、7d、14d和28d采集猪前腔静脉血进行血细胞分析、PCV2抗体检测和相关免疫基因表达量检测,并记录体重.结果显示:接种VRIL-12-CNP和PCV2疫苗的实验组猪的CD3^+、CD4^+、CD8^+T细胞和PCV2抗体显著增长(P<0.05),TLR2/7、IL-12/4/6/15、STAT1/3和Bcl-2基因的表达量显著高于对照组(P<0.05);试验期间实验组体重净增长也明显高于对照组(P<0.05).结果表明:VRIL12-CNP能增强PCV2疫苗的先天性和获得性体液、细胞免疫应答,是安全、有效的PCV2疫苗佐剂.

关键词：猪 IL-12基因免疫圆环病毒2型疫苗壳聚糖纳米颗粒

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旋毛虫成虫DNaseⅡ—T3223-7基因的克隆及其表达特性鉴定

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中国兽医学报 2017年第1期37卷 87-91页

作者：王安琪丁静王楠王兆国胡晓祥吴秀萍刘明远廖成水吉林大学人兽共患病研究所/人兽共患病研究教育部重点实验室吉林长春130062 中国疾病预防控制中心寄生虫病预防控制所上海200025 河南科技大学动物疫病与公共安全重点实验室河南洛阳471003

利用RT-PCR技术从旋毛虫成虫得到T3223-7基因,并进行扩增克隆到原核克隆载体pMD18-T中,将重组质粒转入克隆菌DH5α,提取质粒进行酶切和测序鉴定,连接至pET-28a表达载体,最后转入表达菌Rosetta(DE3)。用1mmol/L IPTG诱导培养重组表达菌,... 详细信息

利用RT-PCR技术从旋毛虫成虫得到T3223-7基因,并进行扩增克隆到原核克隆载体pMD18-T中,将重组质粒转入克隆菌DH5α,提取质粒进行酶切和测序鉴定,连接至pET-28a表达载体,最后转入表达菌Rosetta(DE3)。用1mmol/L IPTG诱导培养重组表达菌,对菌体裂解物进行SDS-PAGE分析,发现重组蛋白以包涵体的形式表达,约为40 000,与理论值相符。将纯化后的重组蛋白免疫家兔,制备兔抗T3223-7蛋白多克隆抗体,间接ELISA测定多抗效价达1∶320 000,Western blot检测表明制备的多克隆抗体能与T3223-7抗原发生特异性反应,并能识别和结合旋毛虫成虫排泄分泌物(ES)。

关键词：旋毛虫原核表达多克隆抗体 DNaseⅡ

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天然免疫在非典型性猴免疫缺陷病毒(SIV)感染中的作用机制探讨

天然免疫在非典型性猴免疫缺陷病毒(SIV)感染中的作用机制探讨

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2017第十九届中国科协年会

作者：熊圣文王卫丛喆薛婧陈霆魏强秦川北京协和医学院比较医学中心中国医学科学院医学实验动物研究所卫生部人类疾病比较医学重点实验室国家中医药管理局人类疾病动物模型三级实验室新发再发传染病动物模型研究北京市重点实验室北京100021

背景在不同的个体中,人免疫缺陷病毒(HIV-1)感染导致差异性的疾病进程.95％以上的感染者出现典型性疾病进程,还有约5％HIV-1 感染者出现非典型疾病进程,表现为病毒感染后,病毒载量水平维持在检测线以下或出现较晚,CD4+ T 细胞绝对数下...

背景在不同的个体中,人免疫缺陷病毒(HIV-1)感染导致差异性的疾病进程.95％以上的感染者出现典型性疾病进程,还有约5％HIV-1 感染者出现非典型疾病进程,表现为病毒感染后,病毒载量水平维持在检测线以下或出现较晚,CD4+ T 细胞绝对数下降不明显,疾病进程呈现不典型性.在小剂量多次粘膜感染艾滋病猴模型研究中,研究人员也发现类似情况.部分恒河猴被猴免疫缺陷病毒(SIV)/猴-人免疫缺陷病毒(SHIV)感染后,血浆病毒载量出现明显的延迟和(或)峰值下降现象.目前研究发现细胞免疫、中和抗体等特异性免疫在非典型性SIV 感染中的作用十分有限,而天然免疫一直被认为是病毒感染早期的一种重要防御机制,包括巨噬细胞的吞噬作用、NK 细胞的ADCC 作用以及树突细胞的抗原提呈作用等;但在非典型艾滋病毒感染过程中,天然免疫发挥作用及作用机制目尚不清楚.

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CD45异构体对HIV-1gp120蛋白诱导T细胞凋亡的影响

CD45异构体对HIV-1gp120蛋白诱导T细胞凋亡的影响

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2017第十九届中国科协年会

作者：李克雷薛婧丛喆陈霆魏强秦川北京协和医学院比较医学中心中国医学科学院医学实验动物研究所卫生部人类疾病比较医学重点实验室国家中医药管理局人类疾病动物模型三级实验室新发再发传染病动物模型研究北京市重点实验室北京100021

HIV感染可通过多种机制引起机体内T细胞凋亡,其中,病毒的编码蛋白可以根据其在靶细胞内的表达水平调节细胞凋亡.gp120蛋白作为HIV包膜蛋白的主要组成部分,既可以在细胞外与细胞表面的CD4分子结合导致靶细胞和旁观者细胞凋亡,又可以在细...

HIV感染可通过多种机制引起机体内T细胞凋亡,其中,病毒的编码蛋白可以根据其在靶细胞内的表达水平调节细胞凋亡.gp120蛋白作为HIV包膜蛋白的主要组成部分,既可以在细胞外与细胞表面的CD4分子结合导致靶细胞和旁观者细胞凋亡,又可以在细胞内上调Fas、FasL、TNF-α、TRAIL受体DR4和DR5的表达诱导细胞凋亡,还可以使细胞滞留在G2期导致胞内ROS升高促进凋亡.研究显示,CD45分子在HIV-1gp120蛋白介导的CD4+T细胞凋亡中发挥调节作用,在gp120蛋白的作用下,CD45分子通过调节FasL的表达参与细胞凋亡.作为Ⅰ型跨膜糖蛋白,CD45分子主要以CD45RABC、CD45RO、CD45RA、CD45RB和CD45RC等异构体形式表达于淋巴细胞,其胞外结构域糖基化形式的差异对CD45异构体活性和功能具有重要影响.目前,CD45异构体在HIV感染引起的细胞凋亡方面研究甚少,为加深对CD45异构体在细胞凋亡过程中作用的理解,本研究通过构建稳定表达CD45异构体的细胞系,比较了CD45异构体在调节gp120蛋白介导的CD4+T细胞凋亡过程中的差异,并进一步分析了其下游分子Lck的活性变化.在本研究中,我们首先比较了CD45+的Jurkat细胞和CD45－的J45.01细胞受到gp120诱导时凋亡率的变化.结果显示,Jurkat细胞可发生明显凋亡现象,J45.01细胞不发生凋亡,说明CD45分子在gp120介导的凋亡过程发挥了调节作用;随后,我们构建了5种稳定表达CD45异构体的细胞系,并比较了这5种异构体在gp120介导T细胞凋亡过程中的作用.结果发现,CD45RO可以明显调节细胞凋亡,其他异构体对细胞凋亡无调节作用;接下来,我们分析了CD45的糖基化形式对细胞凋亡的影响.O-聚糖存在于除CD45RO以外的异构体上,我们通过O-糖基化抑制剂去除这几种异构体细胞表面的O-糖基化.gp120蛋白诱导凋亡处理后,去除O-糖基化后的CD45RA-J45.01细胞表现出凋亡特性,其它异构体细胞未发生明显凋亡.说明O-聚糖对HIV-1gp120蛋白介导的细胞凋亡有一定的抑制作用,但在各异构体中发挥的作用大小并不一致,这可能与CD45异构体的空间结构有关.为了进一步说明CD45异构体在调节细胞凋亡中的功能差异,在HIV-1gp120蛋白诱导各个细胞系后,我们分析了CD45异构体酪氨酸磷酸酶的活性变化.通过比较CD45对其底物Lck的活性抑制位点Tyr505的去磷酸化程度,发现CD45RO可使Lck Tyr505发生明显的去磷酸化,说明HIV-1 gp120 蛋白处理细胞后,CD45RO 的活性增强;Lck Tyr394 是Lck 的活化位点,该位点磷酸化程度增强代表Lck 活性增强.通过比较该位点磷酸化程度变化,发现在CD45RO-J45.01 细胞中Lck Tyr394 磷酸化程度增强,说明在HIV-1 gp120 蛋白处理细胞后CD45RO 促进了Lck 的活化;Lck 的活化在胞内信号转导中具有重要作用,于是我们利用Lck的特异性抑制剂PP2 处理CD45RO-J45.01 细胞和Jurkat 细胞,再经HIV-1 gp120 蛋白诱导凋亡处理,发现PP2可抑制CD45RO-J45.01 细胞和Jurkat 细胞凋亡,说明Lck 的活化参与HIV-1 gp120 蛋白介导的T 细胞凋亡.综上所述,本研究明确了CD45 异构体在调节HIV-1 gp120 蛋白介导的T 细胞凋亡中存在的差异,揭示了这一凋亡过程主要是CD45RO 通过活化Lck 促使凋亡信号向胞内传导,进而对细胞凋亡起调节作用.本研究结果为HIV-1 感染引起的旁观者细胞凋亡奠定了理论基础.

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