检索结果-内蒙古大学图书馆

中华流行病学杂志 2006年第6期27卷 526-529页

作者：牛东升陈梅玲温博海李青凤邱玲张晶波军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071

目的采用TaqMan-MGB探针建立立氏立克次体实时荧光定量聚合酶链反应(PCR)检测方法。方法依据立氏立克次体外膜蛋白B基因序列设计引物和探针,以克隆的ompB基因片段为DNA模板,在ABI 7900型荧光定量PCR检测仪上建立实时荧光定量PCR检测方... 详细信息

目的采用TaqMan-MGB探针建立立氏立克次体实时荧光定量聚合酶链反应(PCR)检测方法。方法依据立氏立克次体外膜蛋白B基因序列设计引物和探针,以克隆的ompB基因片段为DNA模板,在ABI 7900型荧光定量PCR检测仪上建立实时荧光定量PCR检测方法。结果建立的定量标准曲线Ct值与模板拷贝数呈线性关系(R2=0．996),最低检测浓度为5拷贝／μl;用荧光定量PCR方法检测其他相关立克次体和常见非立克次体病原菌,检出结果均为阴性。用该方法检测立氏立克次体感染的豚鼠血液标本、小鼠脾脏标本及细胞培养标本,检测的结果与立氏立克次体感染相关。结论研究建立的检测立氏立克次体实时荧光定量PCR方法具有高特异性和高敏感性,适用于快速检测各种样本中的立氏立克次体和立氏立克次体感染早期的实验室诊断。

关键词：立氏立克次体实时荧光定量,聚合酶链反应敏感性特异性

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多重实时PCR检测三种呼吸道病毒

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中华微生物学和免疫学杂志 2007年第9期27卷 856-859页

作者：赵海龙姜涛邓永强陈水平李晓峰于曼秦鄂德军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物与生物安全国家重点实验室北京100071

目的建立多重实时PCR检测体系可同时快速检测引起人呼吸道感染的甲型流感病毒(IAV)、呼吸道合胞病毒(RSV)和SAPS冠状病毒(SARS-CoV)。方法通过对PCR反应条件的优化,建立了同时检测IAV、RSV和SARS-CoV的多重实时PCR方法。结果经熔解曲线... 详细信息

目的建立多重实时PCR检测体系可同时快速检测引起人呼吸道感染的甲型流感病毒(IAV)、呼吸道合胞病毒(RSV)和SAPS冠状病毒(SARS-CoV)。方法通过对PCR反应条件的优化,建立了同时检测IAV、RSV和SARS-CoV的多重实时PCR方法。结果经熔解曲线分析,证实了该法可同时或分别检测3种重要呼吸道病毒。检测灵敏度分别为10^(0.7)TCID_(50)/ml、1 TCID_(50)/ml和10^(-0.5) TCID_(50)/ml。采用相同的反应体系和条件,分别对其他7种呼吸道病毒(包括乙型流感病毒,副流感病毒2型,柯萨奇病毒B3和B5血清型及腺病毒2、3和7血清型)进行扩增,均未检测出扩增产物。此种方法可在4h内完成。结论建立的多重实时PCR检测方法适用于3种重要呼吸道病毒的快速检测。

关键词：多重实时PCR 甲型流感病毒呼吸道合胞病毒 SARS冠状病毒

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人源抗狂犬病毒单链二硫键稳定抗体的重组设计与表达

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微生物学报 2007年第4期47卷 673-676页

作者：蔡昆王慧包士中史晶侯晓军荫俊军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071

以人源抗狂犬病毒糖蛋白母本单链抗体ScFv为模板,利用PCR点突变分别在重链FR可变区VH(44)和轻链FR可变区VL(100)分别引入一个半胱氨酸,成功构建了重组单链二硫键稳定抗体基因。连接pET22b(+)载体,转化入*** BL21(DE3)得到工程菌,IPTG诱... 详细信息

以人源抗狂犬病毒糖蛋白母本单链抗体ScFv为模板,利用PCR点突变分别在重链FR可变区VH(44)和轻链FR可变区VL(100)分别引入一个半胱氨酸,成功构建了重组单链二硫键稳定抗体基因。连接pET22b(+)载体,转化入*** BL21(DE3)得到工程菌,IPTG诱导表达。体外复性并经Ni-NTA亲和层析对目的蛋白ScdsFv进行纯化;利用荧光抗体实验和ELISA检测抗体活性及稳定性。结果表明重组ScdsFv蛋白实现了原核高效表达,通过体外复性和Ni-NTA柱纯化获得纯度大于90%的ScdsFv蛋白。荧光抗体实验和ELISA结果表明ScdsFv具有特异的抗原结合活性,与母本ScFv比较,稳定性有明显提高。这种具有特异抗原结合活性的稳定ScdsFv蛋白的获得为其进一步的功能研究提供了材料。

关键词：狂犬病毒单链二硫键稳定抗体表达

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采用高通量测序技术分析尾病毒目噬菌体基因组末端序列特点

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病毒学报 2013年第1期29卷 39-43页

作者：李莎莎范航安小平范华昊姜焕焕米志强童贻刚军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071

证明噬菌体高通量测序中高频出现的序列即是噬菌体基因组的末端序列。在T3噬菌体基因组末端连接特异性序列接头,然后进行高通量测序,同时将不加接头的T3基因组也进行高通量测序,对测序结果进行生物信息学比较分析。采用类似高通量测序... 详细信息

证明噬菌体高通量测序中高频出现的序列即是噬菌体基因组的末端序列。在T3噬菌体基因组末端连接特异性序列接头,然后进行高通量测序,同时将不加接头的T3基因组也进行高通量测序,对测序结果进行生物信息学比较分析。采用类似高通量测序技术分析N4样噬菌体的全基因组序列。加接头的序列与无接头序列中的高频序列完全一致,证明了高通量测序过程中得到的高频序列就是加接头的基因组末端序列,同时证明T4样噬菌体的末端具有序列特异性而非完全随机,此外我们还发现N4样噬菌体基因组左侧末端具有唯一序列,而其基因组右侧末端不均一。高通量测序技术方便快捷,可用于噬菌体基因组末端和全基因组序列的同时测定。

关键词：高通量测序噬菌体基因组末端序列

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突发疫情中炭疽芽孢杆菌的分离及鉴定

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微生物学报 2006年第3期46卷 460-462页

作者：王争强何君苏裕心朱虹端青宋立华军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071

对疑似炭疽感染病牛牛肉标本和牛血污染土壤标本进行了病原菌分离,经菌落形态和菌体形态观察、血清学实验和生化鉴定,证明分离到的细菌为炭疽芽孢杆菌。为进一步了解其特性,分别用保护性抗原、水肿因子和荚膜基因特异性引物对2株菌进行... 详细信息

对疑似炭疽感染病牛牛肉标本和牛血污染土壤标本进行了病原菌分离,经菌落形态和菌体形态观察、血清学实验和生化鉴定,证明分离到的细菌为炭疽芽孢杆菌。为进一步了解其特性,分别用保护性抗原、水肿因子和荚膜基因特异性引物对2株菌进行PCR扩增。结果显示,这两株菌有两个毒力相关质粒pX01和pX02,为有毒株。序列测定表明,这两株菌基因间同源性达99%,这两株菌与GenBank中炭疽芽孢杆菌A2012株、Ames Ancestor株和A16R疫苗株同源性达99%。

关键词：炭疽芽孢杆菌分离生化鉴定基因克隆 PCR扩增

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炭疽毒素保护性抗原和LFn介导的增强型绿色荧光蛋白进入HeLa细胞的研究

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中华微生物学和免疫学杂志 2008年第2期28卷 158-161页

作者：易绍琼于少洋于婷任声权刘树玲杨秀旭董大勇陈薇军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071

目的研究炭疽毒素保护性抗原（protective antigen，PA）和致死因子（lethal factor，LF）N端254个氨基酸（LFn）在辅助增强型绿包荧光蛋白（EGFP）进入细胞中的作用。方法分别扩增炭疽毒素的基因片段和EGFP的基因全长，将两片段先后克... 详细信息

目的研究炭疽毒素保护性抗原（protective antigen，PA）和致死因子（lethal factor，LF）N端254个氨基酸（LFn）在辅助增强型绿包荧光蛋白（EGFP）进入细胞中的作用。方法分别扩增炭疽毒素的基因片段和EGFP的基因全长，将两片段先后克隆至pET-21a（＋），构建成重组表达质粒pET-LFn-EGFP，在大肠杆菌中诱导表达，并对融合蛋白LFn-EGFP进行纯化。利用荧光共聚焦显微镜和流式细胞术研究LFn-EGFP融合蛋白进入细胞的情况。结果获得较高纯度的融合蛋白LFn-EG-FP，纯度可达90％以上，体外实验显示该融合蛋白保留了LFn与PA结合的活性，并且能够进入到HeLa细胞中。结论LFn-EGFP蛋白本身电会以未知的机制进入细胞，在PA辅助时，LFn-EGFP进入细胞的效率会有所增加。

关键词：致死因子炭疽毒素保护性抗原增强型绿色荧光蛋白 HeLa细胞炭疽杆菌

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大肠杆菌小RNASgrS单分子原位成像方法的建立

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科学通报 2017年第24期62卷 2804-2813页

作者：王净韩延平杨瑞馥河北北方学院动物科技学院张家口075131 军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071

为了确定单分子Sgr S的空间定位,在野生株Escherichia coli MG1655基础上,构建敲除株(35)sgr S和过表达株(35)sgr S-p BAD-Sgr S,并以3株菌为供试菌株建立了定位大肠杆菌Sgr S的单分子荧光原位杂交(sm FISH)方法.优化条件为:杂交后细菌... 详细信息

为了确定单分子Sgr S的空间定位,在野生株Escherichia coli MG1655基础上,构建敲除株(35)sgr S和过表达株(35)sgr S-p BAD-Sgr S,并以3株菌为供试菌株建立了定位大肠杆菌Sgr S的单分子荧光原位杂交(sm FISH)方法.优化条件为:杂交后细菌洗涤次数为5次,涂片时加入Slow Fade Diamond Antifade Mountant防淬灭,细菌在杂交液和探针的混合液中经40℃杂交3 h,杂交前探针置98℃变性10 min,Alexa-555 WGA染料用来标记细胞壁.sm FISH操作步骤确定为:固定-洗涤-透化-预杂交-杂交-洗涤-染细胞壁-洗涤-涂片,最后使用N-SIM超分辨率显微镜观察成像.定位结果显示,Sgr S呈绿色点状荧光弥散分布于细菌胞浆中,Alexa-555 WGA染料标记细胞壁呈红色,从而完整地定位了大肠杆菌的形态.sm FISH方法和超分辨显微技术的结合可为深入研究细菌模式基因s RNA的定位以及s RNA介导的调控机制提供线索和技术支持.

关键词：大肠杆菌 sRNA SgrS 单分子荧光原位杂交超分辨率显微镜 Alexa-555 WGA

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蜱中玫瑰单胞菌菌株的分离与鉴定

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中华微生物学和免疫学杂志 2009年第1期29卷 29-32页

作者：邱尔臣张芳刘玮吴晓明杨红曹务春军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071

目的确定从蜱中分离的、使用常规方法不能鉴定的3株粉红色细菌的分类学位置。方法使用16SrDNA序列分析和同源性检索方法及细菌的形态学、生化特性及脂肪酸分析等鉴定方法。结果3株细菌为粉红色的革兰阴性需氧小球杆菌，最适生长温度为3... 详细信息

目的确定从蜱中分离的、使用常规方法不能鉴定的3株粉红色细菌的分类学位置。方法使用16SrDNA序列分析和同源性检索方法及细菌的形态学、生化特性及脂肪酸分析等鉴定方法。结果3株细菌为粉红色的革兰阴性需氧小球杆菌，最适生长温度为37℃，在含有5％以上NaCl的培养基中不能生长。该菌能发酵葡萄糖、利用棕檬酸盐，接触酶试验阳性、脲酶试验阳性、紫外（UV）吸收试验阳性。主要脂肪酸成分为C16：0、C17：0、C18：1 ω9c和C19：0cyc。16SrDNA序列分析和同源性检索发现3株细菌与颈玫瑰单胞菌（Roseomonas cervicalis）同源性最高，达99．1％。结论这3株细菌在分类学上属于玫瑰单胞菌（Roseomonas），但是和已经报道的种都不相同，可能是一个变种。蜱可能是其潜在的媒介宿主。

关键词：玫瑰单胞菌草原革蜱分离鉴定

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汉滩病毒M片段噬菌体表位文库的构建及筛选

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中华微生物学和免疫学杂志 2006年第8期26卷 752-755页

作者：罗保君石英常国辉张秀娟周育森军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071

目的通过构建汉滩病毒M片段的噬菌体展示文库,筛选汉滩病毒包膜蛋白的抗原表位。方法DNaseⅠ随机消化的M片段与载体pComb3连接,转化宿主XL-1Blue,在辅助噬菌体VCSM13存在的条件下,获得M片段的随机噬菌体文库。利用纯化的恢复期病人血清... 详细信息

目的通过构建汉滩病毒M片段的噬菌体展示文库,筛选汉滩病毒包膜蛋白的抗原表位。方法DNaseⅠ随机消化的M片段与载体pComb3连接,转化宿主XL-1Blue,在辅助噬菌体VCSM13存在的条件下,获得M片段的随机噬菌体文库。利用纯化的恢复期病人血清对M片段噬菌体文库进行3轮淘洗,通过ELISA、序列分析对所获得的克隆进行鉴定。并对其中2个阳性克隆的目的片段进行了原核表达和免疫原性分析。结果筛选获得的5个阳性噬菌体克隆均位于G1蛋白编码区,原核表达的2个阳性克隆片段蛋白免疫兔,免疫兔血清能与病毒抗原发生特异反应。结论本技术路线可用于汉滩病毒包膜蛋白抗原表位的研究,为汉滩病毒诊断试剂的研制、亚单位疫苗的设计提供了数据。

关键词：构建及筛选汉滩病毒M片段噬菌体文库

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H221Y突变在HIV-1B ＇亚型毒株中的流行状况及突变模式

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中华医学杂志 2012年第4期92卷 250-253页

作者：李韩平郭伟刘永健鲍作义李林庄道民刘思扬王晓林李敬云军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071

目的探讨人类免疫缺陷病毒（ HIV）逆转录酶区H221Y突变在抗病毒治疗失败人群HIV-1B’亚型毒株中的流行状况及突变模式.方法提取我国中部地区多个省份1205例抗病毒治疗失败及158例未抗病毒治疗的艾滋病患者血浆样本RNA,扩增HIV B’亚... 详细信息

目的探讨人类免疫缺陷病毒（ HIV）逆转录酶区H221Y突变在抗病毒治疗失败人群HIV-1B’亚型毒株中的流行状况及突变模式.方法提取我国中部地区多个省份1205例抗病毒治疗失败及158例未抗病毒治疗的艾滋病患者血浆样本RNA,扩增HIV B’亚型毒株聚合酶区（pol区）基因序列提交斯坦福大学HIV-1耐药数据库,根据数据库比对结果,分析H221Y突变在2组人群中发生频率及发生模式.结果 H221Y突变在抗病毒治疗失败人群中流行率（6.59％）显著高于未治疗人群（0.60％）（x2=6.59,P=0.027）.该突变的发生常伴随逆转录酶区位点T215、M184、K103、Y181突变的出现,突变模式以TAMs/H221 Y/Y181C/I为主.5种抗病毒治疗方案中,齐多夫定（AZT）/去羟肌苷（ddI）/奈韦拉平（NVP）治疗方案的H221Y突变发生率显著高于其他4种治疗方案（14.6％比3.5％、4.9％、2.3％、2.6％,均P ＜0.01）.结论使用一线方案治疗失败的艾滋病患者中H221Y突变有一定流行,该突变的发生以特有的突变模式出现.

关键词： HIV-1 突变抗药性 H221Y

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