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以乙脑减毒活疫苗SA14-14-2为骨架的重组嵌合登革4病毒的构建与鉴定

寄生虫与医学昆虫学报 2018年第2期25卷 80-86页

作者：解东洋祝琴刘忠钰赵慧邓永强叶青李晓峰秦成峰安徽医科大学安徽合肥230032 军事科学院军事医学研究院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071 广州医科大学附属广州市第八人民医院广东广州510182

登革4型病毒近年来在我国东南沿海地区时有流行,威胁人民健康与公共卫生安全。本研究以乙脑减毒活疫苗SA14-14-2为骨架,通过反向遗传学技术构建了携带登革4型病毒主要结构蛋白prM/E基因重组嵌合病毒(ChinDENV4);进一步通过蚀斑、生长曲... 详细信息

登革4型病毒近年来在我国东南沿海地区时有流行,威胁人民健康与公共卫生安全。本研究以乙脑减毒活疫苗SA14-14-2为骨架,通过反向遗传学技术构建了携带登革4型病毒主要结构蛋白prM/E基因重组嵌合病毒(ChinDENV4);进一步通过蚀斑、生长曲线、动物实验等对其生物学特征进行了鉴定。结果显示,重组嵌合病毒Chin DENV4可高效表达登革4型病毒的结构蛋白,蚀斑大小与亲本株类似;ChinDENV4并能够在BHK-21、C6/36等细胞中高效复制,滴度分别达到1. 26×10~5和1. 58×10~6PFU/m L。更重要的是,嵌合病毒ChinDENV4在乳鼠模型中的神经毒力显著弱于亲本株。本研究成功构建了乙脑/登革4型嵌合病毒,为下一步四价嵌合登革减毒活疫苗研究奠定了重要基础。

关键词：乙脑病毒登革4型病毒反向遗传学减毒活疫苗嵌合病毒

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云南省贡山地区小型兽类几种细菌性病原体携带现况调查

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寄生虫与医学昆虫学报 2018年第1期25卷 12-17页

作者：李伶俐左曙青杜春红彭红红赵秋敏代科张久松安徽医科大学安徽合肥230022 军事科学院军事医学研究院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室媒介生物危害和自然疫源性疾病北京市重点实验室北京100071 云南省地方病防治所云南大理671000

为掌握云南贡山地区野生小型兽类的种类和主要细菌性病原体的携带情况,于2014—2015年在该地区诱捕野生小型兽类,进行种类鉴定,解剖取肺、脾等组织。采用巢式PCR对无形体Anaplasmataceae、恙虫病东方体Orientia tsutsugamushi、斑点热... 详细信息

为掌握云南贡山地区野生小型兽类的种类和主要细菌性病原体的携带情况,于2014—2015年在该地区诱捕野生小型兽类,进行种类鉴定,解剖取肺、脾等组织。采用巢式PCR对无形体Anaplasmataceae、恙虫病东方体Orientia tsutsugamushi、斑点热群立克次体(Spotted fever group rickettsiae,SFGR)以及莱姆病螺旋体Lyme disease spirochete等4类病原体进行检测。结果共捕获小兽759只,涉及14属35种,优势属为姬鼠属(29.1%)和绒鼠属(17.4%)。对其中541份标本进行无形体PCR检测,结果显示:12份新埃立克体(Candidatus Neoehrlichia mikurensis)阳性,来自姬鼠、绒鼠、鼩鼱和白腹鼠;2份沃尔巴克氏体Wolbachia阳性,来源于鼩鼱和灰腹鼠;3份巴尔通体Bartonella阳性,来源于绒鼠和大足鼠。采用56 k Da基因片段引物对恙虫病东方体进行检测,发现4份阳性标本。其中2份与Boryong血清型菌株同源性最高,均为97.0%;1份与Karp血清型同源性最高,为86.0%;另一份与Kato-related血清型同源性最高,为86.0%,系统发生树显示,其与Kato-related位于同一分支。提示这两份标本可能是恙虫病东方体Karp血清型和Kato-related血清型菌株的变异株。

关键词：贡山小型兽类细菌性病原体 PCR

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携带氨基糖苷类耐药基因aacC2的质粒pA1137耐药机制研究

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军事医学 2017年第12期41卷 973-977页

作者：占喆冯娇殷喆赵禹宗蒋晓圆罗文博曾利军沈杨高波周冬生安徽医科大学合肥230032 军事科学院军事医学研究院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071

目的对携带氨基糖苷类耐药基因aacC2的阴沟肠杆菌质粒pA1137全序进行分析并研究其耐药机制。方法 PCR实验检测相关菌株耐药基因,接合转移实验验证质粒pA1137是否具备可转移特性,抗生素敏感实验检测相关菌株耐药谱,采用全基因组测序分析... 详细信息

目的对携带氨基糖苷类耐药基因aacC2的阴沟肠杆菌质粒pA1137全序进行分析并研究其耐药机制。方法 PCR实验检测相关菌株耐药基因,接合转移实验验证质粒pA1137是否具备可转移特性,抗生素敏感实验检测相关菌株耐药谱,采用全基因组测序分析质粒基因环境、移动元件,并研究其耐药机制。结果阴沟肠杆菌A1137同时携带碳青霉烯酶耐药基因blaIMP-8和氨基糖苷类耐药基因aacC2和aacA4。blaIMP-8和aac A4基因均位于染色体上,而aacC2基因则位于pA1137质粒上。pA1137是大小为68.97 kb的IncFⅡ型质粒,GenBank登录号为MF190369。该质粒含有典型的多复制子结构且有完整的接合转移区,可通过接合转移方式进入受体菌EC600并表达相应的耐药谱。结论 IncFⅡ型质粒pA1137有一个外源插入区,是首次发现基于Tn5403转座子的aacC2-tmrB相关耐药区,可稳定遗传并介导阴沟肠杆菌A1137对氨基糖苷类抗生素耐药。

关键词：阴沟肠杆菌 pA1137 aacC2

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肠出血性大肠杆菌z5150毒素基因在细胞黏附过程中的作用

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军事医学 2017年第12期41卷 978-982页

作者：何志利谭琳琳王建新李崭陈芳红李涛王慧安徽医科大学合肥230032 军事科学院军事医学研究院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071

目的通过体内过度表达验证z5150基因毒性,利用Red重组系统构建肠出血性大肠杆菌(EHEC)z5150基因缺失突变株并探究其致病力。方法在菌体内过度表达z5150基因,测定细菌生长曲线验证其毒性。应用PCR技术扩增出含有卡那霉素抗性基因的目的... 详细信息

目的通过体内过度表达验证z5150基因毒性,利用Red重组系统构建肠出血性大肠杆菌(EHEC)z5150基因缺失突变株并探究其致病力。方法在菌体内过度表达z5150基因,测定细菌生长曲线验证其毒性。应用PCR技术扩增出含有卡那霉素抗性基因的目的基因上下游同源臂片段,电转入含有p KD46质粒的EHEC中,在阿拉伯糖诱导下使打靶片段重组到基因组。卡那霉素基因的两端包含FRT位点,p FLP2质粒可介导FLP位点专一性重组去除抗性标记。经DNA测序验证目的基因缺失后,通过菌株感染HT29细胞和BALB/c雌鼠检测缺失株细胞黏附能力和毒力的改变。结果与结论成功构建EHEC△z5150缺失突变株。z5150的缺失不影响细菌的正常生长,但过度表达后明显抑制细菌生长,发挥毒素效应。与野生株相比,EHEC△z5150缺失突变株对肠上皮细胞黏附能力明显增强;小鼠致死率增高,提示其致病力增强。该研究为EHEC基因功能研究提供了基因敲除技术,证明了Rel E家族z5150参与EHEC细胞黏附,并增强菌株毒力,为进一步研究EHEC致病机制奠定了基础。

关键词：肠出血性大肠杆菌 Red重组系统毒素 Rel E 致病性

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检测6种常见儿童化脓性脑膜炎病原菌的PCR阵列方法的建立与评价

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军事医学 2017年第11期41卷 902-905页

作者：赵成娜张超郑玉玲刘鹏姜永强安徽医科大学合肥230032 军事科学院军事医学研究院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071

目的建立同时检测肺炎链球菌(Streptococcus pneumoniae,SP)、大肠杆菌(Escherichia coli,EC)、流感嗜血杆菌B型(Haemophilus influenzae type B,HIB)、脑膜炎奈瑟球菌(Neisseria meningitidis,NM)、无乳链球菌(Streptococcus agalactiae,GBS)、单核细胞增生李斯特菌(Listeria monocytogenes,LM)6种常见儿童化脓性脑膜炎病原菌的PCR阵列方法,为快速检测临床常见的化脓性脑膜炎病原菌提供新技术。方法用6种病原菌核酸评价PCR阵列方法的扩增效率,最低检出限(LOD)及各病原引物探针之间是否存在交叉反应;利用模拟脑脊液样本评价PCR阵列方法的灵敏度与特异性,并收集临床脑脊液样本考察PCR阵列方法与临床脑脊液培养金标准方法的一致性。结果PCR阵列中各病原菌的引物探针特异性良好,无交叉反应,LOD可达10 cfu/ml。在模拟样本的评价中,PCR阵列方法灵敏度与特异性均可达到95%,且与临床金标准方法有较好的一致性。结论 PCR阵列方法可实现2.5 h内对6种常见儿童化脓性脑膜炎病原菌的同时检测,且灵敏度和特异性高,可为临床儿童化脓性脑膜炎病原学诊断提供参考。

关键词：化脓性脑膜炎病原菌 PCR阵列实时荧光定量PCR 脑脊液

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登革1型和2型病毒混合感染样本的一步法实时荧光定量PCR检测方法的建立

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寄生虫与医学昆虫学报 2018年第1期25卷 23-27页

作者：孙爱娟林立丰兰策介刘钦梅高剑周洁李春晓石清明邢丹张恒端董言德郭晓霞赵彤言安徽医科大学安徽合肥230032 军事科学院军事医学研究院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室媒介生物危害和自然疫源性疾病北京市重点实验室北京100071 广东省疾病预防控制中心广东广州511430

本文旨在建立检测登革1型和2型病毒的一步法实时荧光定量PCR方法,为登革热的诊断和预测提供技术支撑。依据登革1型和2型病毒的保守区序列设计引物和探针,建立了同时检测两个血清型登革病毒的一步法实时荧光定量PCR方法。特异性实验结果... 详细信息

本文旨在建立检测登革1型和2型病毒的一步法实时荧光定量PCR方法,为登革热的诊断和预测提供技术支撑。依据登革1型和2型病毒的保守区序列设计引物和探针,建立了同时检测两个血清型登革病毒的一步法实时荧光定量PCR方法。特异性实验结果显示,该方法可检测出登1型和2型病毒,与登革3型、4型病毒、黄热病毒、流感H3N2病毒均无交叉反应,具有较好的特异性。对登革1型和登革2型的灵敏度均为102copies/μL。应用该方法,可检测出登革1型和2型病毒混合感染C6/36后不同时间点病毒复制动态。在两个血清型登革病毒混合感染C6/36细胞72~120 h登革2型病毒的拷贝数与单独感染时登革2型病毒的拷贝数相比显著下降。上述研究证实建立的一步法实时荧光定量PCR方法具有特异性好灵敏度高、重复性好等特点,能够用于登革型和2型病毒混合感染样本的检测。

关键词：登革1型病毒登革2型病毒一步法实时荧光定量PCR

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γ射线终末辐照对同种异体肌腱病毒灭活效果及生物力学性能影响的研究

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中国骨与关节杂志 2018年第5期7卷 389-393页

作者：赵彦涛刘思扬尹惠琼白玉龙韩丽伟胡先同朱加亮衷鸿宾解放军总医院第一附属医院骨科北京市骨科植入医疗器械工程技术研究中心北京100048 军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071 军事医学研究院卫生勤务与血液研究所北京100850

目的研究γ射线终末辐照灭菌对同种异体肌腱病毒灭活的效果及对肌腱生物力学性能的影响。方法采用细胞培养法,检测γ射线辐照(照射剂量25 kGy)灭活PRV、VSV、PPV、EMCV、HIV-1病毒的效果。取正常供体手部肌腱12根,直径4~5 mm,随机分为... 详细信息

目的研究γ射线终末辐照灭菌对同种异体肌腱病毒灭活的效果及对肌腱生物力学性能的影响。方法采用细胞培养法,检测γ射线辐照(照射剂量25 kGy)灭活PRV、VSV、PPV、EMCV、HIV-1病毒的效果。取正常供体手部肌腱12根,直径4~5 mm,随机分为实验组(辐照组)和对照组(新鲜不处理),进行病毒滴度检测,MTS力学试验机检测两组极限拉伸载荷。结果经过γ射线辐照可使污染在同种异体肌腱上的病毒滴度下降超过4 Log值,且盲传3代无病毒检出。辐照前后,同种异体肌腱极限拉伸载荷和组织结构差异无统计学意义(P>0.05)。结论终末辐照灭菌(照射剂量25 kGy)是同种异体肌腱病毒灭活的有效方法,可避免引入其它化学试剂,且该工艺不会影响肌腱的极限拉伸载荷和组织结构。

关键词：同种异体移植物病毒灭活灭菌生物力学现象

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嗜麦芽窄食单胞菌外膜蛋白OmpA的生物信息学分析

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军事医学 2017年第12期41卷 987-990页

作者：李燕赵尊全刘鹏尚学义汤雪萍李艳安徽医科大学解放军307医院临床学院合肥230032 军事科学院军事医学研究院附属医院重症医学科北京100071 军事科学院军事医学研究院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071

目的对嗜麦芽窄食单胞菌外膜蛋白A(OmpA)的结构和功能进行预测与分析。方法利用生物信息学软件和生物数据库对OmpA蛋白的理化性质、信号肽、跨膜区、亚细胞定位、二级与三级结构、同源性、保守结构域及抗原决定簇进行预测分析。结果 Omp... 详细信息

目的对嗜麦芽窄食单胞菌外膜蛋白A(OmpA)的结构和功能进行预测与分析。方法利用生物信息学软件和生物数据库对OmpA蛋白的理化性质、信号肽、跨膜区、亚细胞定位、二级与三级结构、同源性、保守结构域及抗原决定簇进行预测分析。结果 OmpA蛋白为亲水性蛋白,其1~22位氨基酸为信号肽序列,无跨膜结构并定位于细胞膜外;二级结构中含无规则卷曲、α-螺旋、β-转角和β-片层比例分别为50.27%、24.59%、9.29%和15.85%;三级结构预测OmpA蛋白为桶状蛋白;OmpA蛋白在不同嗜麦芽窄食单胞菌株间高度保守,而与人、小鼠的蛋白序列进行比对分析未找到同源序列;OmpA蛋白保守结构域在N端为OM膜通道蛋白超家族,在C端为OmpA_C超家族;OmpA蛋白含有11个优势抗原决定簇区域。结论通过对OmpA进行生物信息学分析获得该蛋白的特性,不仅为进一步研究该蛋白的结构与功能提供参考资料,也为研制相关亚单位疫苗提供理论依据。

关键词：嗜麦芽窄食单胞菌外膜蛋白A 生物信息学结构功能抗原决定簇

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低温等离子体空气消毒机对微生物气溶胶杀灭效果的评价

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中国消毒学杂志 2017年第10期34卷 902-904,908页

作者：于龙李娜靳爱军张柯胡凌飞李亮亮曹杰于洋海军疾病预防控制中心北京101113 军事科学院军事医学研究院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室国家生物防护装备工程技术中心宁夏石嘴山市第三中学

目的观察低温等离子体空气消毒机对空气中细菌和病毒气溶胶的灭活效果。方法使用气溶胶发生器在密闭气溶胶暴露柜内分别发生细菌和病毒气溶胶,采用六级Andersen采样器采集柜内空气,评价该空气消毒机对人工发生的细菌和病毒气溶胶的灭活... 详细信息

目的观察低温等离子体空气消毒机对空气中细菌和病毒气溶胶的灭活效果。方法使用气溶胶发生器在密闭气溶胶暴露柜内分别发生细菌和病毒气溶胶,采用六级Andersen采样器采集柜内空气,评价该空气消毒机对人工发生的细菌和病毒气溶胶的灭活效果。结果该低温等离子体空气消毒机对金黄色葡萄球菌、藤黄微球菌和噬菌体Phi X174气溶胶的净化效率(除菌率)分别为99.98%、99.98%和99.95%。结论该低温等离子体空气消毒机对密闭空间内空气中细菌和病毒气溶胶灭活效果较好。

关键词：低温等离子体空气消毒机微生物气溶胶杀灭效果

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军用帐篷滞留喷洒处理杀灭蚊虫的新方法研究

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中华卫生杀虫药械 2017年第6期23卷 508-510页

作者：邢丹张恒端褚宏亮姜友法沈阳贾炜李春晓华益林钱健陆长华吴小群吴志明田野张育富陈红娜张洪杰高剑孙爱娟周明浩董言德赵彤言军事科学院军事医学研究院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071 江苏省疾病预防控制中心江苏南京210009 江苏扬农化工股份有限公司江苏扬州225009 江苏优士化学有限公司江苏扬州211999 宜兴市疾病预防控制中心江苏宜兴214206

目的探索军用帐篷滞留喷洒杀虫剂杀灭蚊虫的方法。方法在野外现场设置军用帐篷,采用氯氰·氯氟醚菊酯可湿性粉剂(10%高效氯氰菊酯和2%氯氟醚菊酯)和可湿性粉剂加附着扩展剂两种方法,对军用帐篷内壁进行滞留喷洒,处理的有效成分剂量... 详细信息

目的探索军用帐篷滞留喷洒杀虫剂杀灭蚊虫的方法。方法在野外现场设置军用帐篷,采用氯氰·氯氟醚菊酯可湿性粉剂(10%高效氯氰菊酯和2%氯氟醚菊酯)和可湿性粉剂加附着扩展剂两种方法,对军用帐篷内壁进行滞留喷洒,处理的有效成分剂量为30 mg/m2。处理一段时间后,将雌蚊放入帐篷,观察处理后实验组和对照组军用帐篷中蚊虫的击倒和死亡情况,计算蚊虫击倒率和致死率。结果单独使用可湿性粉剂进行帐篷内壁滞留喷洒,杀虫剂不能挂壁,处理1 d后放入蚊虫,蚊虫的击倒率和死亡率均在30%左右。使用加入附着扩展剂的可湿性粉剂对帐篷内壁进行滞留喷洒,1 d后的蚊虫击倒率和死亡率均在90%以上,1个月后,死亡率仍可保持在80%以上,2个月后,蚊虫死亡率降至不足30%。结论对野外军用帐篷使用拟除虫菊酯类杀虫剂进行滞留喷洒时,首先应加入附着扩展剂以便于杀虫剂附着;另外,最长的处理间隔不长于1个月,以便维持较好的蚊虫防治效果。

关键词：军用帐篷室内滞留喷洒蚊虫

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