检索结果-内蒙古大学图书馆

武汉大学学报（医学版） 2006年第1期27卷 69-71页

作者：何静杨占秋石丽桥刘媛媛肖红武汉大学医学院病毒学研究所/病毒学国家重点实验室武汉430071

目的:明确盐酸阿比朵尔抗吸道合胞病毒(RSV)Long株的活性并探讨其抗病毒机制。方法:通过细胞病变效应(CPE)、噻唑蓝(MTT)比色法检测细胞活性,观察盐酸阿比朵尔抗RSV的作用。结果:盐酸阿比朵尔的半数毒性浓度(TD50)为85.39 mg/L,当该药... 详细信息

目的:明确盐酸阿比朵尔抗吸道合胞病毒(RSV)Long株的活性并探讨其抗病毒机制。方法:通过细胞病变效应(CPE)、噻唑蓝(MTT)比色法检测细胞活性,观察盐酸阿比朵尔抗RSV的作用。结果:盐酸阿比朵尔的半数毒性浓度(TD50)为85.39 mg/L,当该药浓度为25 mg/L时,药物抗病毒生物合成组、药物直接作用组、药物抗吸附4 h组、药物抗病毒吸附8 h组的病毒抑制率分别能达到81.61%,79.57%,40.39%和78.60%。4组相应的药物半数有效浓度(ED50)为11.52,8.74,25.36和10.40 mg/L。结论:盐酸阿比朵尔在体外能明显抑制RSV引起的CPE效应,病毒抑制率随药物浓度的增加而增高,盐酸阿比朵尔能通过多种途径发挥抗RSV的作用。

关键词：盐酸阿比朵尔呼吸道合胞病毒抗病毒作用

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蓝舌病毒HbC_3株致人宫颈癌HeLa细胞死亡方式的研究

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武汉大学学报（医学版） 2006年第5期27卷 553-555,563,i0001页

作者：陈杰董长垣胡俊张蔚英朱珺武汉大学医学院病毒学研究所/病毒学国家重点实验室武汉430071

目的:研究蓝舌病毒湖北株致人宫颈癌HeLa细胞死亡方式及其作用机制。方法:原位末端标记(TUNEL法)观察病毒诱导细胞凋亡情况;激光扫描共聚焦显微镜检测荧光标记的细胞核及内质网变化;萤光照度仪检测病毒诱导细胞Caspase-3/7,Caspase-8,Ca... 详细信息

目的:研究蓝舌病毒湖北株致人宫颈癌HeLa细胞死亡方式及其作用机制。方法:原位末端标记(TUNEL法)观察病毒诱导细胞凋亡情况;激光扫描共聚焦显微镜检测荧光标记的细胞核及内质网变化;萤光照度仪检测病毒诱导细胞Caspase-3/7,Caspase-8,Caspase-9活性变化。结果:凋亡染色未见明显凋亡细胞,共聚焦检测见细胞核膜不完整,染色质分散,有的凝集在核膜周围,部分染色质外溢,内质网分散,混浊不清,细胞与细胞之间分界不清;萤光照度仪检测酶活性可见Caspase-3/7,Caspase-8,Caspase-9活性均无明显变化。结论:蓝舌病毒湖北株诱导HeLa细胞胀亡而发挥其抑瘤作用。

关键词：溶癌病毒蓝舌病毒湖北株胀亡人宫颈癌HeLa细胞

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琼脂糖蛋白质A反向免疫共沉淀法纯化蓝舌病毒HbC_3

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武汉大学学报（理学版） 2005年第2期51卷 223-226页

作者：刘文培董长垣刘文惠郭淑芳卢莉莉王海琪武汉大学医学院/病毒学国家重点实验室湖北武汉430071

用高效液相色谱(HPLC)、透射电镜检测琼脂糖蛋白质A反向免疫共沉淀法纯化蓝舌病毒湖北株(BTV HbC3)的效果,组织培养半数感染量(TCID50)比较其纯化前后的生物学活性.结果显示,纯化过程对病毒生物学活性无明显影响,透射电镜下,纯化病毒背... 详细信息

用高效液相色谱(HPLC)、透射电镜检测琼脂糖蛋白质A反向免疫共沉淀法纯化蓝舌病毒湖北株(BTV HbC3)的效果,组织培养半数感染量(TCID50)比较其纯化前后的生物学活性.结果显示,纯化过程对病毒生物学活性无明显影响,透射电镜下,纯化病毒背景清晰, HPLC解析出纯化物仅单一病毒峰.本纯化体系用于提纯BTV HbC3 效果显著,操作简便,具备高通量高活性纯化病毒的潜能,为建立大量纯制高活性蓝舌病毒用于实验室靶向性抗癌研究和生产实践奠定技术平台.

关键词：病毒纯化反向免疫共沉淀蓝舌病毒

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湖北省武汉地区啮齿动物汉坦病毒S基因的特征分析

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中华流行病学杂志 2012年第8期33卷 828-831页

作者：刘东瀛刘婧李金林陈文罗凡李晴杨占秋武汉大学医学病毒学研究所病毒学国家重点实验室430071 武汉大学医学病毒学研究所医学微生物学教研室430071 南通大学医学院厦门大学医学院基础医学部

目的了解湖北省武汉地区啮齿动物自然感染汉坦病毒（HV）情况以及流行的基因型和亚型。方法2000--2003年、2009--2011年秋冬季在武汉地区新洲、江夏区野外及居民区采用夹夜法捕鼠。对捕获的动物进行分类鉴定并取肺脏用间接免疫荧光法检... 详细信息

目的了解湖北省武汉地区啮齿动物自然感染汉坦病毒（HV）情况以及流行的基因型和亚型。方法2000--2003年、2009--2011年秋冬季在武汉地区新洲、江夏区野外及居民区采用夹夜法捕鼠。对捕获的动物进行分类鉴定并取肺脏用间接免疫荧光法检测病毒抗原。抗原阳性的样本，采用RT-PCR方法扩增部分S片段核苷酸序列，构建系统发生树并进行基因分型。结果2000--2003年捕获啮齿类动物437只，HV抗原阳性鼠肺标本24份，病毒携带率为5．49％。2009--2011年捕获啮齿类动物173只，HV抗原阳性鼠肺标本7份，病毒携带率为4．05％。褐家鼠为当地的优势鼠种。22份标本成功地用汉滩病毒（HTNV）、汉城病毒（SEOV）特异引物扩增部分S基因片段并测序。17只（13只褐家鼠，4只黑线姬鼠）鼠肺标本中扩增出SEOV部分S基因片段（nt588-1147），分别属于第3亚型和2个新的基因亚型。5只黑线姬鼠的鼠肺标本中扩增出HTNV部分S基因片段（nt615～1141），分别属于第7亚型和1个新的亚型。结论武汉地区流行的HV为SEOV和HTNV，并发现新的基因亚型，SEOV可能“溢出”感染黑线姬鼠。

关键词：汉坦病毒啮齿动物基因系统发生分析

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湖北地区汉滩病毒与普马拉病毒及多布拉伐病毒的血清学交叉反应研究

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免疫学杂志 2008年第4期24卷 438-441页

作者：李晴罗凡杨占秋厦门大学医学院基础医学部福建厦门361005 武汉大学医学院病毒学研究所病毒学国家重点实验室武汉430071

目的研究湖北地区汉滩病毒(hantaan virus,HTNV)与普马拉病毒(Puumala virus,PUUV)、多布拉伐病毒(Dobrava virus,DOBV)血清学交叉反应。方法以酵母菌表达的PUUV、DOBV、HTNV重组核衣壳蛋白(recombinant nucleocapsid protein,rNP)为包被抗原,ELISA法定性、定量分析湖北地区HTN型急性/恢复期血清中IgA、IgG、IgM抗体,比较疾病早晚期血清学交叉反应变化。结果DOB-rNP与HTN型血清中IgA、IgG、IgM抗体交叉反应性较高,PUU-rNp对HTN型血清交叉反应很低;IgA、IgG抗体交叉反应在恢复期血清中均增高,且IgA抗体交叉反应更多更强。结论湖北地区HTN型血清与DOBV存在广泛交叉反应,与PUUV交叉反应少。各交叉反应在恢复期增高对汉滩病毒血清学研究具重要意义。

关键词：汉滩病毒普马拉病毒多布拉伐病毒 ELISA 血清学交叉反应

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高内涵筛选结合活细胞实时成像技术分析谷氨酸诱导的小鼠神经瘤母细胞N2a凋亡

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复旦学报（医学版） 2015年第4期42卷 538-542页

作者：乔可崔士超胡捷先陈献华复旦大学基础医学院医学分子病毒学教育部/卫生部重点实验室上海200032 复旦大学基础医学院医学分子病毒学教育部医学神经生物学国家重点实验室上海200032

目的利用高内涵筛选(high-content screening,HCS)技术结合活细胞实时成像技术研究谷氨酸诱导的小鼠神经瘤母细胞N2a凋亡的形态学变化特征。方法用HCS技术分析摸索不同浓度谷氨酸诱导的N2a细胞早期凋亡百分比的变化,同时结合活细胞实时... 详细信息

目的利用高内涵筛选(high-content screening,HCS)技术结合活细胞实时成像技术研究谷氨酸诱导的小鼠神经瘤母细胞N2a凋亡的形态学变化特征。方法用HCS技术分析摸索不同浓度谷氨酸诱导的N2a细胞早期凋亡百分比的变化,同时结合活细胞实时成像技术追踪谷氨酸诱导的N2a凋亡的形态学变化特征。结果当谷氨酸浓度为750μg/mL时,发生早期凋亡的N2a细胞比例达到峰值(42.07%)。对同一谷氨酸浓度,随着拍摄追踪时间的增加,凋亡细胞数目逐渐增多,胞核荧光强度的变异系数逐渐增大,胞核面积逐渐缩小,胞核逐渐出现碎片化。结论使用HCS结合活细胞实时成像技术能直观清晰地捕捉谷氨酸诱导N2a细胞凋亡的形态学变化特征,是一种体外追踪单一细胞凋亡形态学变化的可靠方法。该方法也可应用于药物对细胞凋亡的促进或抑制作用的形态学变化特征的研究。

关键词：谷氨酸神经瘤母细胞N2a 高内涵筛选变异系数

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靶向B细胞并特异结合其分泌IL-10的重组融合蛋白的构建、表达和初步鉴定

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中国生物工程杂志 2018年第2期38卷 1-6页

作者：赵荣陈含宇黄春章晓联潘勤武汉大学基础医学院免疫学系病毒学国家重点实验室湖北省过敏及免疫相关疾病重点实验室

目的：CD19单链抗体可变区（single-chain fragment variable）sc Fv能特异性识别结合B细胞表面的CD19分子,白细胞介素-10（interleukin-10,IL-10）是调节性B细胞（Breg）的主要特征之一。旨在构建CD19sc Fv和IL-10受体1（IL-10R1）胞外段的重组融合蛋白,拟用该融合蛋白捕捉和封闭Breg细胞分泌的IL-10。方法：CD19sc Fv和IL-10R1胞外段克隆到p ET-28a原核质粒上,*** BL21（DE3）工程菌表达蛋白通过镍柱富集和纯化蛋白,SDS-PAGE和Western blot对表达蛋白进行鉴定,Pull down实验验证蛋白与CD19分子和IL-10细胞因子的结合。结果：成功表达CD19sc Fv-IL-10R1融合蛋白,该融合蛋白能在体外同时结合CD19和IL-10分子。结论：CD19sc Fv-IL-10R1融合蛋白在体外可以同时结合CD19分子和IL-10分子,具有潜在应用前景可作为特异性抑制Breg的生物小分子。

关键词： IL-10 调节性B细胞 IL-10受体1 CD19单链抗体可变区

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乙型肝炎病毒X基因真核表达的载体构建及鉴定

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武汉大学学报（医学版） 2007年第1期28卷 1-3,15页

作者：朱珺刘军董长垣郭淑芳陈杰武汉大学医学院病毒学研究所/病毒学国家重点实验室湖北武汉430071

目的:构建HBV X基因与pCDNA3.1相融合的高效真核表达载体,为进一步研究HBV X基因的功能奠定基础。方法:设计并合成HBV X基因的引物,以HBV DNA阳性血清PCR扩增得到HBV X基因全序列;将X基因连接到真核表达载体pCDNA3.1上后,酶切图谱分析、... 详细信息

目的:构建HBV X基因与pCDNA3.1相融合的高效真核表达载体,为进一步研究HBV X基因的功能奠定基础。方法:设计并合成HBV X基因的引物,以HBV DNA阳性血清PCR扩增得到HBV X基因全序列;将X基因连接到真核表达载体pCDNA3.1上后,酶切图谱分析、PCR检测和扩增产物序列分析等,鉴定所构建的真核表达载体。结果:以重组载体为模板扩增得到的片段大小与已知HBV X基因大小相同,酶切也得到目的基因片段,测序结果也显示与已知X基因序列相同。结论:成功构建了HBV X基因的真核表达载体,为进一步研究HBVX基因及其产物的功能奠定了基础。

关键词：乙型肝炎病毒 X基因真核表达载体 pCDNA3.1

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荔枝核黄酮类化合物的体外抗腺病毒作用

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武汉大学学报（医学版） 2014年第1期35卷 41-45页

作者：杨艳彭璇朱薿陈清宙陈文罗凡冯勇侯炜病毒学国家重点实验室/武汉大学基础医学院医学病毒研究所武汉大学食品与药品评价研究中心湖北武汉430071

目的:探讨荔枝核提取物成分黄酮类化合物(FLC)体外抑制腺病毒(AdV)增殖的作用。方法:采用细胞病变效应(CPE)、四甲基偶氮唑盐微量酶反应比色法(MTT)等方法检测不同浓度的FLC分别作用于AdV复制周期的3个阶段的抗病毒作用。结果:FLC可在... 详细信息

目的:探讨荔枝核提取物成分黄酮类化合物(FLC)体外抑制腺病毒(AdV)增殖的作用。方法:采用细胞病变效应(CPE)、四甲基偶氮唑盐微量酶反应比色法(MTT)等方法检测不同浓度的FLC分别作用于AdV复制周期的3个阶段的抗病毒作用。结果:FLC可在病毒感染后通过抗病毒生物合成方式抑制AdV增殖,其半数细胞毒性浓度(TC50)和半数有效抑制浓度(IC50)分别为116.83mg/L,15.46mg/L,且FLC在1.25-40mg/L浓度范围内随药物浓度增加,其抗病毒作用越明显,病毒抑制率最高达84.31%,治疗指数为7.56。但研究未发现FLC具有抗病毒吸附和直接杀伤病毒的作用。结论:FLC体外可通过抗病毒生物合成的方式明显抑制AdV在人喉癌细胞(HEp-2)中的增殖。FLC有望成为一种新的有效抗腺病毒药物。

关键词：荔枝核黄酮类腺病毒抗病毒作用

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结核分枝杆菌H37Rv刺激巨噬细胞后差异表达lncRNA分析及鉴定

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中国生物工程杂志 2018年第5期38卷 1-9页

作者：谭杨刘胜罗凤玲章晓联武汉大学基础医学院病毒学国家重点实验室湖北省过敏及免疫相关疾病重点实验室和医学研究院

分析毒性结核分枝杆菌（Mycobacterium tuberculosis,***）H37Rv刺激RAW264.7巨噬细胞的表达谱芯片以及筛选和鉴定*** H37Rv感染巨噬细胞RAW264.7后差异表达的lncRNA。首先,分析热灭活的H37Rv刺激RAW264.7细胞24h后lncRNA表达谱芯片,并对差异表达的lncRNA和mRNA进行生物信息分析,然后采用实时定量聚合酶链反应对16条在芯片中差异表达的lncRNA进行细胞水平验证;进一步在H37Rv感染小鼠的脾脏和肺脏中检测差异表达的lncRNA。结果显示,表达谱芯片中4 730条lncRNA的表达水平上调,9 558条lncRNA的表达水平下调。生物信息分析筛选的16条lncRNA,其染色体定位于附近蛋白质编码基因的基因间区或者与外显子区域有重叠,mRNA功能注释显示差异表达的mRNA主要集中于转录调节、磷酸化、凋亡等生化过程以及丝裂原活化蛋白激酶（MAPK）等抗结核的信号通路中。在H37Rv作用下的细胞水平和动物感染模型的组织中RT-q PCR验证出与芯片结果相同的4条lncRNA,其中上调的有3条,下调的有1条。研究中异常表达的lncRNA可为巨噬细胞在结核分枝杆菌感染中的功能紊乱提供线索,为后续的研究奠定基础,进一步的研究将集中于发掘lncRNA在宿主调控中发挥的功能。

关键词：结核分枝杆菌(M.tb) 巨噬细胞长链非编码RNA mRNA 芯片分析

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