检索结果-内蒙古大学图书馆

大学教育 2025年第5期 12-16页

作者：徐可赵愿安周婵娟南星羽李嫣然蓝柯武汉大学病毒学国家重点实验室湖北武汉430072 武汉大学生命科学学院湖北武汉430072

随着2019年末新冠疫情的暴发,为了应对全民抗疫的新形势,并引导学生建立对病毒的科学认知和防控观念,武汉大学生命科学学院开设了核心通识课程病毒流行病与人类社会。教学团队对课程教学内容和教学方法进行了创新实践,包括建设开放性课... 详细信息

随着2019年末新冠疫情的暴发,为了应对全民抗疫的新形势,并引导学生建立对病毒的科学认知和防控观念,武汉大学生命科学学院开设了核心通识课程病毒流行病与人类社会。教学团队对课程教学内容和教学方法进行了创新实践,包括建设开放性课堂、创设多样化的学习形式、开设“行走的课堂”实践课、实施积极的激励政策以及探索多样化的课程考核方式。这些措施有效提高了学生的学习热情和学习自主性,拓宽了学生的科学视野,培养了学生的批判性思维能力,取得了显著的教学成效。

关键词：通识课程病毒流行病与人类社会病毒学教学改革与实践

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人膜补体调节蛋白MCP、CD59在稳定转染的细胞中的共表达及功能研究

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高技术通讯 2006年第11期16卷 1159-1164页

作者：刘辉徐莉李文鑫武汉大学生命科学学院病毒学国家重点实验室武汉430072

采取内核糖体进入位点（IRES）策略构建含人的膜补体调节蛋白基因MCP和CD59的cDNA的双顺反子真核表达载体pcDNA3-MCPIRESCD59，以磷酸钙沉淀法转染NIH3T3细胞，用G418筛选阳性克隆，并研究MCP和CD59双基因在稳定细胞系中的共表达及保护... 详细信息

采取内核糖体进入位点（IRES）策略构建含人的膜补体调节蛋白基因MCP和CD59的cDNA的双顺反子真核表达载体pcDNA3-MCPIRESCD59，以磷酸钙沉淀法转染NIH3T3细胞，用G418筛选阳性克隆，并研究MCP和CD59双基因在稳定细胞系中的共表达及保护功能。PCR实验结果显示双基因稳定整合在异源细胞NIH3T3的染色体上，RT-PER及Western印迹实验分别从RNA水平和蛋白质水平证实了人补体调节蛋白分子MCP和CD59在细胞系中皆获得同步表达。检测连续传代30次的NIH3T3 pcDNA3-MCPIRESCD59，结果表明人MCP和CD59基因仍稳定整合在细胞基因组中，并未随着传代而丢失，为稳定的转双基因细胞系。补体依赖的细胞毒反应表明，peDNA3-MCPIRESCD59转染细胞由于MCP和CD59的共表达获得了高于MCP或CD59单一表达时所提供的保护功效，能更好地抑制人补体依赖的细胞毒作用的发生，保护宿主细胞免受人补体的攻击。以上结果表明，所构建的双基因重组表达载体实现了不同人补体调节蛋白基因高效转移和高水平共表达，在克服超急性排斥反应的基因治疗中有潜在的应用价值。

关键词：补体调节蛋白内核糖体进入位点共表达超急性排斥反应

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CRISPR-Cas9基因编辑技术在乙型肝炎病毒治疗中的应用

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科学通报 2019年第30期64卷 3142-3150页

作者：严鲲冯姜澎熊勇陈宇武汉大学生命科学学院病毒学国家重点实验室现代病毒研究中心武汉430072 武汉大学中南医院感染科武汉430071

乙型肝炎病毒(hepatitis B virus,HBV)能引起患者慢性感染,增加肝硬化和肝癌的风险,是威胁全球健康的一个重要问题.核苷(酸)类似物(NUCs)和干扰素(IFN)是目前治疗HBV仅有的两类药物,然而这两类药物均无法清除稳定存在于细胞核中且能够... 详细信息

乙型肝炎病毒(hepatitis B virus,HBV)能引起患者慢性感染,增加肝硬化和肝癌的风险,是威胁全球健康的一个重要问题.核苷(酸)类似物(NUCs)和干扰素(IFN)是目前治疗HBV仅有的两类药物,然而这两类药物均无法清除稳定存在于细胞核中且能够作为模板产生子代病毒的闭合共价环状DNA(covalently closed circle DNA,cccDNA).此外,HBV耐药相关突变(RAM)和疫苗逃逸突变(VEM)降低了现有治疗和预防策略的成功率.因此,人们在努力开发直接靶向cccDNA,将之失活或清除以实现治愈慢性乙肝的治疗手段.特异性靶向HBV基因组保守区域的CRISPR-Cas9基因编辑系统,不仅能够有效抑制病毒复制,相比其他基因编辑工具,设计也更加简单灵活,成为了一个十分具有吸引力的治疗选择.本文将总结现有CRISPR-Cas9系统在抗乙型肝炎病毒中的研究,并探讨其可能面临的问题与潜在的解决方案.

关键词： CRISPR-Cas9 基因治疗脱靶效应乙型肝炎病毒(HBV) cccDNA

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翻译后修饰调控TRPV亚家族通道功能的研究进展

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生物化学与生物物理进展 2021年第2期48卷 171-183页

作者：杨冰洁田泉魏鑫张豪姚镜武汉大学生命科学学院病毒学国家重点实验室免疫与代谢前沿科学中心武汉430072

瞬时受体势(transient receptor potential,TRP)通道广泛分布于神经和非神经系统中,响应温度、化学和机械等多种刺激,在机体对外界环境的精确感知中发挥重要功能.根据蛋白质序列的相似性,哺乳动物中TRP通道家族的27个成员分属TRPA、TRPC... 详细信息

瞬时受体势(transient receptor potential,TRP)通道广泛分布于神经和非神经系统中,响应温度、化学和机械等多种刺激,在机体对外界环境的精确感知中发挥重要功能.根据蛋白质序列的相似性,哺乳动物中TRP通道家族的27个成员分属TRPA、TRPC、TRPM、TRPML、TRPP和TRPV 6个亚家族.其中TRPV亚家族包含了6个成员,分别为温度敏感型的TRPV1~4通道,以及对Ca2+具有高选择通透能力的TRPV5和TRPV6通道.研究结果表明,TRPV亚家族通道参与调控细胞内的离子稳态和信号传导,在温度感知和血管扩张等生理过程中发挥作用,并与癌症、心血管等多种疾病的发生和发展密切相关.翻译后修饰(post-translational modifications,PTMs)是翻译中或者翻译后在蛋白质特定氨基酸上添加或删减修饰官能团的过程.越来越多的研究结果表明,TRPV亚家族通道同样可以发生翻译后修饰,并对通道功能产生重要影响.本文综述了目前已报道的磷酸化、糖基化、泛素化、SUMO化和共价修饰等多种翻译后修饰调控TRPV亚家族成员功能的主要研究进展,以期为进一步研究翻译后修饰对TRPV通道的功能调节提供参考,丰富我们对蛋白质翻译后修饰与生理或病理活动相关性的认识.

关键词： TRPV通道翻译后修饰钙信号

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离子通道在免疫细胞和免疫应答反应中的功能研究进展

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生理学报 2019年第6期71卷 894-904页

作者：张婷婷姚镜武汉大学生命科学学院病毒学国家重点实验室

离子通道是一类介导各种无机离子通过疏水性细胞脂膜的膜蛋白,它们广泛分布在各种细胞和组织中,通过调节细胞内外的离子浓度参与细胞膜电位建立并在各种生理活动中行使功能,其结构和功能正常是维持生命过程的基础。分子克隆、蛋白结构... 详细信息

离子通道是一类介导各种无机离子通过疏水性细胞脂膜的膜蛋白,它们广泛分布在各种细胞和组织中,通过调节细胞内外的离子浓度参与细胞膜电位建立并在各种生理活动中行使功能,其结构和功能正常是维持生命过程的基础。分子克隆、蛋白结构解析和膜片钳等科学技术的快速发展推进了离子通道生物物理学研究,同时也极大地促进了离子通道与病理生理学之间关系的研究。免疫系统由免疫细胞、免疫组织和它们所分泌的免疫活性物质构成,在维护机体稳态,保护身体不受病毒、细菌和其它入侵者的干扰中发挥至关重要的作用。研究表明,离子通道在免疫细胞中大量表达并参与调节免疫反应,在免疫系统中发挥重要作用。本文综述了目前离子通道在免疫系统中的主要研究进展,包括离子通道在免疫细胞中的表达及其所参与的免疫细胞活性调节,离子通道介导离子流调控的淋巴细胞发育,以及离子通道在天然免疫应答和适应性免疫应答中的功能与作用机制。此外,本文还对目前相关研究中尚待回答的关键科学问题进行了分析与展望,以期为未来进一步探究离子通道在免疫系统中的功能提供参考。

关键词：离子通道钙离子淋巴细胞天然免疫系统适应性免疫系统

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人补体调节蛋白DAF、MCP在哺乳动物细胞中的共表达及协同作用研究

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生物工程学报 2008年第2期24卷 220-225页

作者：徐莉赵舟宙刘辉蒋达和李文鑫武汉大学生命科学学院病毒学国家重点实验室

利用双启动子构建含人补体调节蛋白DAF和MCP cDNA的双顺反子重组表达载体pcDNA3-DAFMCP-DP,以磷酸钙沉淀法转染NIH3T3细胞,用G418筛选获得NIH3T3 pcDNA3-DAFMCP-DP转化细胞。PCR实验结果显示人补体调节蛋白基因DAF和MCP整合在转化的异... 详细信息

利用双启动子构建含人补体调节蛋白DAF和MCP cDNA的双顺反子重组表达载体pcDNA3-DAFMCP-DP,以磷酸钙沉淀法转染NIH3T3细胞,用G418筛选获得NIH3T3 pcDNA3-DAFMCP-DP转化细胞。PCR实验结果显示人补体调节蛋白基因DAF和MCP整合在转化的异源细胞的染色体上。RT-PCR和Western blot印迹实验分别从RNA水平和蛋白质水平证实了人补体调节蛋白分子DAF和MCP在细胞系中皆获得同步表达。检测连续传代30次的NIH3T3 pcDNA3-DAFMCP-DP结果表明人DAF和MCP基因仍稳定整合在细胞基因组中,并未随着传代而丢失,为稳定的转双基因细胞系。补体依赖的细胞毒反应表明,pcDNA3-DAFMCP-DP转染细胞系由于DAF和MCP的共表达获得较DAF或MCP单一表达时更强的保护能力,能更好地抑制人补体依赖的细胞毒作用的发生,保护宿主细胞免受人补体的攻击。以上结果表明,DAF和MCP双基因重组表达载体实现了人补体调节蛋白基因高效转移和高水平共表达,为获得表达多种人补体调节蛋白的理想供体提供了有效策略。而且共表达的DAF和MCP具有协同效应,能更有效地阻止补体激活造成的细胞损伤,在克服超急性排斥反应的基因治疗中具有潜在的临床应用价值。

关键词：人补体调节蛋白双基因重组表达载体共表达协同作用超急性排斥反应

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丙型肝炎病毒功能基因在CHO细胞中的表达研究

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生物工程学报 2007年第6期23卷 995-999页

作者：郭佳鄢然徐国东郑从义武汉大学生命科学学院病毒学国家重点实验室武汉430072

丙型肝炎病毒(HCV)与宿主细胞因子的相互作用已经成为国内外研究的热点和难点。近期研究已经证实HCV的感染对宿主多种途径中基因的转录均能产生影响。为了进一步研究究竟是HCV中的哪些功能基因在与特定细胞因子的相互作用中起主导作用,... 详细信息

丙型肝炎病毒(HCV)与宿主细胞因子的相互作用已经成为国内外研究的热点和难点。近期研究已经证实HCV的感染对宿主多种途径中基因的转录均能产生影响。为了进一步研究究竟是HCV中的哪些功能基因在与特定细胞因子的相互作用中起主导作用,构建了分别含有HCV Core、E1、E2、p7、NS2、NS3、NS4A、NS4B、NS5A和NS5B基因的真核表达质粒,分别转入宿主细胞CHO-K1中,在G418的选择压力下筛选获得稳定表达HCV单个蛋白的细胞系(10株)。PCR和RT-PCR可分别从稳定细胞系中检测到相应的HCV基因的DNA和mRNA,冻存和复苏不会造成HCV基因的丢失。Western-blot检测到稳定细胞系中表达E1,E2和NS5B蛋白,说明HCV基因在CHO-K1中已经形成稳定表达。薄层层析(TLC)结果显示,含有不同HCV基因的稳定传代细胞系中,UDP-葡萄糖神经酰胺葡萄糖基转移酶(UGCG)活性均发生了不同程度的变化,其中E2和p7的表达使胞内UGCG的活性提高了约1倍,NS2和NS5A则使UGCG的酶活提高了约0.6倍。该稳定细胞系的建立为研究病毒与宿主因子的相互作用及药物筛选奠定了基础。

关键词：丙型肝炎病毒真核表达稳定细胞系 UDP-葡萄糖神经酰胺葡萄糖基转移酶

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锌指基因ZNF268两个新的差异剪接本克隆及鉴定

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遗传 2006年第5期28卷 513-517页

作者：孙翀赵舟宙高立孙燕邵焕杰李文鑫武汉大学生命科学学院病毒学国家重点实验室武汉430072

ZNF268是一个典型的KRAB类锌指基因，含有24个C2H2型锌指基序和一个KRAB功能域，它在人胚胎发育早期表达，并与胚胎肝脏的发育相关。通过免疫组化的方法，发现ZNF268在3—5周龄人胚的造血干细胞中有表达；进一步通过RT—PCR的方法检测发... 详细信息

ZNF268是一个典型的KRAB类锌指基因，含有24个C2H2型锌指基序和一个KRAB功能域，它在人胚胎发育早期表达，并与胚胎肝脏的发育相关。通过免疫组化的方法，发现ZNF268在3—5周龄人胚的造血干细胞中有表达；进一步通过RT—PCR的方法检测发现ZNF268在健康成人全血细胞中也有表达，并且表达有4个差异剪接本，从中克隆得到两个新的ZNF268差异剪接本ZNF268c和ZNF268d。推测ZNF268和血细胞生长发育相关。

关键词： ZNF268 锌指基因血细胞差异剪接本

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东亚钳蝎毒素BmαTX14的基因组克隆、真核表达纯化及功能的初步研究

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生物工程学报 2005年第6期21卷 853-857页

作者：吕猛王昆曹志贱蒋达和毛歆李文鑫武汉大学生命科学学院病毒学国家重点实验室武汉430072

以东亚钳蝎(Buthus martensii Karsch,BmK)BmαTX14全长cDNA序列设计引物,克隆BmαTX14成熟肽,插入毕赤酵母表达载体pPIC9K中,转化酵母,诱导表达。Tricine-SDS-PAGE和Westernblot分析显示,表达产物以可溶性分子形式存在于培养上清中,诱... 详细信息

以东亚钳蝎(Buthus martensii Karsch,BmK)BmαTX14全长cDNA序列设计引物,克隆BmαTX14成熟肽,插入毕赤酵母表达载体pPIC9K中,转化酵母,诱导表达。Tricine-SDS-PAGE和Westernblot分析显示,表达产物以可溶性分子形式存在于培养上清中,诱导84h时的表达量达到高峰,约为120mgL。通过Ni金属螯合层析柱亲和层析、聚乙二醇沉淀、凝胶分子筛层析获得纯化的rBmαTX14融合蛋白,经毒性实验表明,具有明显的抗昆虫活性。同时以蝎基因组总DNA为模板进行PCR扩增,得到BmαTX14基因克隆,序列分析显示:BmαTX14在编码信号肽的基因序列中有1个长408bp的内含子,其基因组织结构具有α型Na+通道毒素的特征。从功能活性和基因组织结构两个角度证实BmαTX14为α型Na+通道毒素。

关键词：蝎毒素 BmαTX14 基因组织结构毕赤酵母真核表达

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毕赤酵母表达的HBV全长Pres蛋白的分离纯化

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生物工程学报 2005年第5期21卷 708-712页

作者：韩雪叶林柏李宝宗佘应龙叶力郑竑高博郜金荣吴正辉病毒学国家重点实验室武汉大学生命科学学院武汉430072

巴斯德毕赤酵母工程菌株GS115PreS经发酵在甲醇诱导下可高效表达分泌型全长PreS蛋白。Westernblot证明发酵液中存在着可溶性的分子量为48kD的PreS蛋白和蛋白质颗粒,蛋白质颗粒主要成分为48kD的全长Pres蛋白和28kD的S蛋白,电镜观察发现... 详细信息

巴斯德毕赤酵母工程菌株GS115PreS经发酵在甲醇诱导下可高效表达分泌型全长PreS蛋白。Westernblot证明发酵液中存在着可溶性的分子量为48kD的PreS蛋白和蛋白质颗粒,蛋白质颗粒主要成分为48kD的全长Pres蛋白和28kD的S蛋白,电镜观察发现蛋白质颗粒直径为30nm。发酵液经过脱盐、浓缩处理后,上清液经DEAESFF阴离子交换柱得到纯化的PreS蛋白;超速离心和蔗糖密度梯度离心得到蛋白颗粒。该颗粒的主要组分为全长PreS蛋白(PreS1+PreS2+S),还有少量的主蛋白(S)。ELISA检测证明全长PreS蛋白和蛋白颗粒有着良好的抗原性,PN显示蛋白颗粒的抗原性比PreS蛋白的抗原性高。

关键词： HBV全长PreS蛋白发酵分离纯化免疫原性

来源：评论

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