检索结果-内蒙古大学图书馆

微生物学通报 2015年第12期42卷 2487-2493页

作者：朱青覃玥王业富武汉大学生命科学学院病毒学国家重点实验室湖北武汉430072

【目的】建立一种利用颜色判定的快速、简单、灵敏度高的检测方法,即可视化的逆转录环介导等温扩增(RT-LAMP)方法,并应用于人A组轮状病毒的基因检测。【方法】针对A组轮状病毒VP6基因的6个保守区域设计4条特异性引物,在64°C恒温条... 详细信息

【目的】建立一种利用颜色判定的快速、简单、灵敏度高的检测方法,即可视化的逆转录环介导等温扩增(RT-LAMP)方法,并应用于人A组轮状病毒的基因检测。【方法】针对A组轮状病毒VP6基因的6个保守区域设计4条特异性引物,在64°C恒温条件下进行核酸扩增反应1 h,在扩增前加入染料钙黄绿素(Calcein)作为反应指示剂,以钙黄绿素的颜色变化作为结果判定标准。评价该方法的特异性和灵敏度,并同时利用RT-LAMP和RT-PCR两种方法对90份临床腹泻样本中的病毒核酸进行检测。【结果】RT-LAMP方法特异性较高,灵敏度可以达到103 copies/μL RNA分子水平,比RT-PCR高出100倍。对临床标本的检出率与RT-PCR方法相当。【结论】建立的RT-LAMP法灵敏度较高,特异性强,节省时间,结果可视化,具有野外检测和现场快速检测的潜力。

关键词：可视化逆转录环介导等温扩增 A组轮状病毒检测

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TaqMan实时荧光定量PCR检测外周血中survivin

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武汉大学学报（理学版） 2016年第4期62卷 350-354页

作者：齐自慧杨梦歌王美玉王业富武汉大学生命科学学院/病毒学国家重点实验室湖北武汉430072

通过TaqMan实时荧光定量PCR（聚合酶链式反应）,建立一种快速检测凋亡抑制蛋白survivin基因的特异检测方法.选择survivin基因的保守序列设计引物和对应的探针,经PCR扩增95bp序列,经pES1002质粒克隆后转入大肠埃希氏菌*** DH5α,提取重... 详细信息

通过TaqMan实时荧光定量PCR（聚合酶链式反应）,建立一种快速检测凋亡抑制蛋白survivin基因的特异检测方法.选择survivin基因的保守序列设计引物和对应的探针,经PCR扩增95bp序列,经pES1002质粒克隆后转入大肠埃希氏菌*** DH5α,提取重组质粒,鉴定后作为模板制作TaqMan实时荧光定量PCR标准曲线,然后进行方法的重复性和灵敏度实验.结果表明,该检测方法能够检测外周血survivin基因,线性范围为1×10^7～1×10^4copies/μL,相关系数为0.998,灵敏度为1×10^2copies/μL.

关键词： TaqMan实时荧光定量PCR survivin 肿瘤外周血

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H5N1亚型禽流感病毒神经氨酸酶的表达及抗体制备

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武汉大学学报（理学版） 2007年第4期53卷 481-484页

作者：杨振华陶攀周思榆吴叔文潘兹书武汉大学生命科学学院/病毒学国家重点实验室湖北武汉430072

以禽流感病毒A/chicken/Hubei/489/2004(H5N1)NA基因全长cDNA克隆pMD-NA为模板,PCR扩增第406位至第1 353位基因片段.克隆到pET-28a表达载体,构建重组质粒pET-28/ΔNA,转化大肠杆菌,用异丙基β硫代半乳糖苷(IPTG)诱导重组蛋白表达,SDS-PAGE和Western blot分析证实,截短的NA重组蛋白获得高效表达.采用SDS-PAGE纯化重组蛋白,免疫家兔,制备特异性神经氨酸酶(NA)抗体.ELISA及间接免疫荧光检测结果显示,该抗体效价在1∶1×105以上,能与在大肠杆菌和Vero细胞中表达的NA蛋白产生特异性反应.纯化的NA重组蛋白可用作建立禽流感检测方法的诊断抗原,所制备NA抗体可用于检测禽流感基因工程疫苗中的NA抗原组分.

关键词：禽流感病毒 H5N1亚型神经氨酸酶抗体

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青木香挥发油的化学成分分析及抗菌活性

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武汉大学学报（理学版） 2005年第6期51卷 757-761页

作者：朱顺英杨扬侯洁于怀东邹国林武汉大学生命科学学院/病毒学国家重点实验室湖北武汉430072

采用 GC- MS技术利用3种不同极性的毛细管柱分析了青木香挥发油的化学组成 ,确定了26种成分的化学结构与相对含量 , 结果表明其挥发油主要由单萜组成,其中莰烯(23.98%)、异甲酸龙脑脂(19.40%)、Selina-1,3,7(11)-trien-8-one (10.24%)... 详细信息

采用 GC- MS技术利用3种不同极性的毛细管柱分析了青木香挥发油的化学组成 ,确定了26种成分的化学结构与相对含量 , 结果表明其挥发油主要由单萜组成,其中莰烯(23.98%)、异甲酸龙脑脂(19.40%)、Selina-1,3,7(11)-trien-8-one (10.24%)和龙脑(6.82%)是主要成分.对3种真菌和1 3种细菌(包括7种临床致病菌)的药敏实验表明 ,挥发油对大部分微生物均具有很好的抗菌作用,尤其对革兰氏阳性菌的抗菌活性更强,其最低抑菌浓度(MIC)为 0.04 ～ 0.31 g/L,最低杀菌浓度(MBC)为0.08～2.5 g/L.

关键词：青木香挥发油抗菌气相色谱-质谱法

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不同复性条件对重组人组织纤溶酶原激活剂复性的影响

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武汉大学学报（理学版） 2008年第4期54卷 462-466页

作者：吴正辉郜金荣佘应龙叶力叶林柏武汉大学生命科学学院/病毒学国家重点实验室湖北武汉430072

大肠杆菌生产菌株诱导表达产生的无活性重组人组织纤溶酶原激活剂(tissue-type plasminogen acti-vator,tPA)包涵体蛋白,溶解于尿素中变性后进行复性.通过单因子试验和正交试验考察了不同复性条件下透析复性对tPA包涵体蛋白复性效率的影... 详细信息

大肠杆菌生产菌株诱导表达产生的无活性重组人组织纤溶酶原激活剂(tissue-type plasminogen acti-vator,tPA)包涵体蛋白,溶解于尿素中变性后进行复性.通过单因子试验和正交试验考察了不同复性条件下透析复性对tPA包涵体蛋白复性效率的影响.结果表明蛋白质浓度、复性温度、pH值、复性介质、还原剂浓度对tPA的复性效果都有不同程度的影响,当0.5 g/L tPA包涵体蛋白溶解于pH 9.5的7 mol/L的尿素,加入5 mmol/Lβ-巯基乙醇,在20℃、pH 8.0的双蒸水条件下复性时,可以取得最高的复性效率(2.0×107IU/g).通过对稀释复性、透析复性和凝胶过滤层析复性3种方法比较,建立了适宜工业化生产tPA的复性方法.

关键词： tPA蛋白包涵体复性正交试验

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口蹄疫病毒3D基因的真核表达及其表达产物的功能分析

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中国兽医科学 2006年第10期36卷 800-804页

作者：鲁彬武汉大学生命科学学院病毒学国家重点实验室湖北武汉430072

利用RT-PCR技术扩增口蹄疫病毒(FMDV)编码RNA依赖的RNA聚合酶的3D基因,经测序确认后将其克隆到真核表达质粒载体pcDNA3.1(+)中,重组质粒pcDNA3.1(+)-3D经HindⅢ、XbaⅠ双酶切后转染至BHK-21细胞,用纯化的目的蛋白进行Western-blotting鉴... 详细信息

利用RT-PCR技术扩增口蹄疫病毒(FMDV)编码RNA依赖的RNA聚合酶的3D基因,经测序确认后将其克隆到真核表达质粒载体pcDNA3.1(+)中,重组质粒pcDNA3.1(+)-3D经HindⅢ、XbaⅠ双酶切后转染至BHK-21细胞,用纯化的目的蛋白进行Western-blotting鉴定,并预测该3D基因表达产物的三级结构。结果显示,获得分子质量约55 ku的单一3D基因表达产物,其三级结构较为保守。利用RNA细胞内复制体系和荧光定量RT-PCR技术,证明3D基因表达产物在细胞内可促进口蹄疫病毒基因组的复制。

关键词：口蹄疫病毒 RNA依赖的RNA聚合酶真核表达链特异性荧光定量RT—PCR

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检测犬抗狂犬病毒抗体的胶体金免疫层析法的建立及应用

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中国预防兽医学报 2009年第9期31卷 705-708页

作者：廖园园钱金宏唐利军王业富武汉大学生命科学学院/病毒学国家重点实验室湖北武汉430070

为建立一种简便快速的胶体金免疫层析方法(GICA)以用于检测犬抗狂犬病毒抗体,本研究运用间接反应一步法原理,采用柠檬酸三钠还原法制备胶体金颗粒用以标记抗犬IgG抗体形成金-抗犬IgG抗体复合物,制成金标结合垫,加上包被有狂犬病毒糖蛋... 详细信息

为建立一种简便快速的胶体金免疫层析方法(GICA)以用于检测犬抗狂犬病毒抗体,本研究运用间接反应一步法原理,采用柠檬酸三钠还原法制备胶体金颗粒用以标记抗犬IgG抗体形成金-抗犬IgG抗体复合物,制成金标结合垫,加上包被有狂犬病毒糖蛋白的硝酸纤维膜,即制成胶体金免疫层析试纸条。样品中狂犬病毒抗体与金标记抗体结合后沿硝酸纤维素膜移动,与膜上的糖蛋白特异结合形成肉眼可见的红色线条。试验结果显示,GICA试纸条与抗狂犬病毒抗体有特异性反应,与犬瘟热病毒、犬细小病毒等的抗体无交叉反应;GICA与标准ELISA法比较的总符合率为99.4%。结果表明,GICA试纸条检测抗狂犬病毒抗体特异性强、成本低,操作简便,不需任何仪器,特别适用于野外以及现场使用。

关键词：狂犬病毒抗体胶体金免疫层析

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东亚钳蝎短链K^+通道毒素BmP05基因多态性分析

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武汉大学学报（理学版） 2005年第4期51卷 477-480页

作者：刘辉曹志贱吕猛徐秀玲吴英亮毛歆蒋达和李文鑫武汉大学生命科学学院/病毒学国家重点实验室湖北武汉430072

基于从东亚钳蝎中鉴定的低电导Ca2+激活K+通道毒素BmP05的蛋白质和前体核苷酸序列,采用5′和3′RACE(rapidamplificationofcDNAends)技术,成功地从东亚钳蝎毒腺组织中分离到了一系列与BmP05前体核苷酸序列高同源性的cDNA序列.它们含有... 详细信息

基于从东亚钳蝎中鉴定的低电导Ca2+激活K+通道毒素BmP05的蛋白质和前体核苷酸序列,采用5′和3′RACE(rapidamplificationofcDNAends)技术,成功地从东亚钳蝎毒腺组织中分离到了一系列与BmP05前体核苷酸序列高同源性的cDNA序列.它们含有完整开放阅读框(openreadingframe,ORF),彼此同源性很高,有的突变导致编码不同氨基酸,有的只是沉默突变.基因组克隆结果进一步显示,尽管来源不同个体蝎的BmP05基因组的结构相同,但它们的基因组序列并不完全一致,在第二个外显子和内含子区域发生许多突变.BmP05在cDNA水平的多态性与其在基因组水平的多态性一致.所有结果表明,东亚钳蝎的毒素基因存在个体多态性.

关键词：东亚钳蝎蝎毒素多态性

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载体表达siRNA抑制HBV复制与基因表达

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武汉大学学报（理学版） 2006年第4期52卷 466-470页

作者：吴浩邬开朗朱应吴建国杨复华武汉大学生命科学学院/病毒学国家重点实验室湖北武汉430072

用载体表达siRNA的方法并通过RNA干扰达到抑制乙型肝炎病毒(HBV)的复制及其基因的表达.针对HBV的S基因选取4个靶位点,并将目的基因与荧光素酶报道基因构成快速筛选系统,从4个位点中筛选到一个有效的作用位点.用半定量RT-PCR、ELISA、Wes... 详细信息

用载体表达siRNA的方法并通过RNA干扰达到抑制乙型肝炎病毒(HBV)的复制及其基因的表达.针对HBV的S基因选取4个靶位点,并将目的基因与荧光素酶报道基因构成快速筛选系统,从4个位点中筛选到一个有效的作用位点.用半定量RT-PCR、ELISA、Western blot和荧光定量PCR等方法对筛选到的有效位点进行了验证,结果表明,siRNA成功降解了HBV S基因的mRNA,降低了S蛋白的表达水平,有效地抑制了HBV的复制.

关键词： RNA干扰小分子干扰RNA 乙型肝炎病毒

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环加氧酶2基因的原核表达、抗体制备及其在肝癌中的表达

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武汉大学学报（理学版） 2006年第2期52卷 197-201页

作者：古春芳孟佳吴建国朱应武汉大学生命科学学院/病毒学国家重点实验室湖北武汉430072

用PCR技术扩增环加氧酶2(COX-2)基因的C末端777 bp的片段,插入到pET-28b(+)中,构建原核表达载体.转入大肠杆菌BL21(DE3),经IPTG诱导产生包涵体形式his-COX-2融合蛋白.用镍离子螯合柱(Ni-NTA)纯化融合蛋白,获得纯度较高的原核表达蛋白.... 详细信息

用PCR技术扩增环加氧酶2(COX-2)基因的C末端777 bp的片段,插入到pET-28b(+)中,构建原核表达载体.转入大肠杆菌BL21(DE3),经IPTG诱导产生包涵体形式his-COX-2融合蛋白.用镍离子螯合柱(Ni-NTA)纯化融合蛋白,获得纯度较高的原核表达蛋白.纯化后的蛋白免疫家兔制备多克隆抗体,用ELISA及West-ern blotting分别检测抗体.用此抗体Western blotting检测肝癌组织中的环加氧酶2的表达.ELISA及Westernblotting结果显示免疫家兔所得的环加氧酶2抗体具有很高的效价,并能够特异性的识别真核细胞中的环加氧酶2.用此抗体检测肝癌组织中的环加氧酶2的表达,证实肝癌组织中伴随有环加氧酶2的大量表达.同时所得的环加氧酶2抗体具有很高的效价和特异性,为进一步研究环加氧酶2的功能提供了条件.

关键词：环加氧酶2(COX-2) 原核表达抗体制备肝癌

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