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中华微生物学和免疫学杂志 2011年第10期31卷 927-930页

作者：刘兴晖周新宋惠祝成亮刘芳武汉大学中南医院基因诊断中心 430071 湖北医药院附属东风医院检验科武汉大学人民医院检验科武汉大学生命科学学院病毒学国家重点实验室

目的探讨乙型肝炎病毒（HBV）对补体C3和C4表达的影响，并探讨其调节机制。方法采用基因芯片筛选HepG2和HepG2．2．15细胞的差异表达基因，免疫比浊法检测HBV患者和健康对照者补体C3和C4血清学水平，将HBV感染性克隆pHBVl．3转染HepG2... 详细信息

目的探讨乙型肝炎病毒（HBV）对补体C3和C4表达的影响，并探讨其调节机制。方法采用基因芯片筛选HepG2和HepG2．2．15细胞的差异表达基因，免疫比浊法检测HBV患者和健康对照者补体C3和C4血清学水平，将HBV感染性克隆pHBVl．3转染HepG2细胞，RT-PCR和Westernblot法检测C3和C4表达水平的变化。结果补体C3和C4mRNA在HepG2．2．15细胞中水平降低；C3和C在慢性乙型肝炎患者和肝癌患者的血清学水平明显低于健康对照者（P〈0．05）；HBV能够在mRNA和蛋白水平下调C3和C4的表达。结论HBV能够在体内外抑制补体C3和C4的表达。

关键词：乙型肝炎病毒基因芯片补体C3 补体C4

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丙型肝炎病毒核心蛋白对低氧诱导因子-1α和血管内皮生长因子表达的影响

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中华肝脏病杂志 2011年第10期19卷 751-754页

作者：刘兴晖周新祝成亮宋惠刘芳武汉大学中南医院基因诊断中心 430071 武汉大学人民医院检验科湖北医药学院附属东风医院检验科武汉大学生命科学学院病毒学国家重点实验室

目的探讨HCV核心蛋白对低氧诱导因子1α【（HIF-1α）和血管内皮生长因子（VEGF）表达的影响。方法将HCV核心蛋白基因的真核表达载体flag2B—core和HIF-1αsiRNA转染Huh7．5．1细胞；采用RT-PCR和Westernblot法分别检0n,0HIF～1α、VEG... 详细信息

目的探讨HCV核心蛋白对低氧诱导因子1α【（HIF-1α）和血管内皮生长因子（VEGF）表达的影响。方法将HCV核心蛋白基因的真核表达载体flag2B—core和HIF-1αsiRNA转染Huh7．5．1细胞；采用RT-PCR和Westernblot法分别检0n,0HIF～1α、VEGF在mRNA和蛋白水平的表达变化，采用酶联免疫吸附试验检测细胞上清液中VEGF的含量。对各组间数据进行t检验。结果Huh7．5．1细胞转染flag2B-core后，HIF-1α和VEGF的mRNA和蛋白表达水平升高，细胞上清液中VEGF含量明显高于对照组[（654．5±43．7）pg／ml与（365．9±26．8）pg／ml，t=653．1％，P〈0．01）]；Huh7．5．1细胞共转染flag2B—core和HIF-1asiRNA后，HIF-1a和VEGF的mRNA和蛋白表达水平降低，细胞上清液VEGF含量明显低于对照组[（389．2±29．6）pg／ml与（768．8±47．3）pg／ml，t=1330．22，P〈0．01）。结论HCV核心蛋白能够上调HIE-1α和VEGF的表达；HCV可能通过核心蛋白来调节HIF-1α和VEGF的表达。

关键词：肝炎病毒丙型病毒核心蛋白质类血管生成因子低氧诱导因子1α

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野田村病毒RNA的复制机制

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微生物学通报 2011年第9期38卷 1418-1424页

作者：刘传凤张珈敏胡远扬武汉纺织大学环境工程学院湖北武汉430073 武汉大学生命科学院病毒学国家重点实验室环球生物农药武汉大学联合研发中心湖北武汉430072

野田村病毒科Nodaviradae分为2个属,分别为主要感染昆虫的α野田村病毒属(Alphanodavirus)和主要感染鱼类的β野田村病毒属(Betanodavirus)。野田村病毒的基因组由2条单链正义RNA分子(RNA1和RNA2)所组成,RNA1编码蛋白A,即病毒负责复制... 详细信息

野田村病毒科Nodaviradae分为2个属,分别为主要感染昆虫的α野田村病毒属(Alphanodavirus)和主要感染鱼类的β野田村病毒属(Betanodavirus)。野田村病毒的基因组由2条单链正义RNA分子(RNA1和RNA2)所组成,RNA1编码蛋白A,即病毒负责复制病毒两条基因组的依赖RNA的RNA聚合酶催化亚基。RNA2编码衣壳前体蛋白α,此前体蛋白α先组装成原病毒粒子,再经历一次自我催化的成熟切割成2个病毒的衣壳蛋白β和γ,就成了成熟的有感染性的病毒粒子。在RNA复制过程中,从RNA1的3′末端会合成一个不被包装进病毒粒子的亚基因组RNA3。RNA1能在无RNA2的情况下自我复制,并持续地产生亚基因组RNA3,RNA3的合成采取的是提前终止机制。本文还介绍了野田村病毒复制的调节、非结构蛋白的功能和病毒复制在细胞内的定位。

关键词：野田村病毒基因组结构复制机制复制调节复制的定位

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丙型肝炎病毒侵染机制的相关研究进展

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世界华人消化杂志 2011年第20期19卷 2133-2140页

作者：杨文祥熊威杨洁樊柏林湖北省疾病预防控制中心湖北省武汉市430079 武汉大学生命科学学院病毒学国家重点实验室湖北省武汉市430079

丙型肝炎在全世界约有1.7亿的感染人群,将近80%的患者会发展成慢性肝炎,最终导致肝硬化和肝癌.由于缺乏高效的细胞培养传代模型,使得丙型肝炎病毒(HCV)的生命周期的研究一直处于瓶颈,同时病毒自身高频突变,使得目前没有有效的疫苗药物... 详细信息

丙型肝炎在全世界约有1.7亿的感染人群,将近80%的患者会发展成慢性肝炎,最终导致肝硬化和肝癌.由于缺乏高效的细胞培养传代模型,使得丙型肝炎病毒(HCV)的生命周期的研究一直处于瓶颈,同时病毒自身高频突变,使得目前没有有效的疫苗药物进行预防和治疗.2005年Takaji Wakita,Charles ***,Francis *** 3个研究组建立了HCV cell culture体系,将HCV的研究推上新的阶段使得机制研究更加深入.本文将就HCV的基因组多样性,研究模型的进展,病毒生活周期以及相关蛋白研究方面,全面讲述HCV侵染机制的进展.

关键词：丙型肝炎病毒浸染机制基因组多样性研究模型病毒生活周期

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左旋棉酚氨基酸衍生物是有效的HIV-1侵入抑制剂

左旋棉酚氨基酸衍生物是有效的HIV-1侵入抑制剂

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2011中国科学院研究生院微生物学研究生学术论坛

作者：安泰田波吴叔文欧阳文杰潘薇郭德银李菊蓉李龙龙陈刚杨健武汉大学生命科学学院病毒学国家重点实验室现代病毒学研究中心武汉 430072 武汉大学人民医院武汉 430060

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七肽重复序列重组蛋白HR212阻断HIV-1包膜糖蛋白gp41六螺旋束的形成

七肽重复序列重组蛋白HR212阻断HIV-1包膜糖蛋白gp41六螺旋束的形...

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2011中国科学院研究生院微生物学研究生学术论坛

作者：欧阳文杰吴叔文安泰郭德银田波武汉大学生命科学学院病毒学国家重点实验室现代病毒研究中心武汉 430072 武汉大学生命科学学院病毒学国家重点实验室现代病毒研究中心武汉 430072 中国科学院微生物研究所分子病毒中心北京 100101

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乌药提取物的抗肿瘤及抗氧化活性

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武汉大学学报（理学版） 2011年第3期57卷 265-268页

作者：晏润纬彭小梅邹国林南昌大学第一附属医院消化科江西南昌330006 武汉大学生命科学学院/病毒学国家重点实验室湖北武汉430072 江西省疾病预防控制中心江西南昌330029

使用不同极性的有机溶剂分离得到了5种(石油醚、氯仿、乙酸乙酯、正丁醇、水)乌药提取物,并采用多种实验方法研究了其抗肿瘤及抗氧化活性.抗肿瘤活性研究结果显示:乌药石油醚萃取物对供试4种人癌细胞的细胞毒性最强;而HepG2细胞对乌药... 详细信息

使用不同极性的有机溶剂分离得到了5种(石油醚、氯仿、乙酸乙酯、正丁醇、水)乌药提取物,并采用多种实验方法研究了其抗肿瘤及抗氧化活性.抗肿瘤活性研究结果显示:乌药石油醚萃取物对供试4种人癌细胞的细胞毒性最强;而HepG2细胞对乌药石油醚部位的细胞毒性最为敏感,半数抑制率(IC50)为(71.9±1.1)mg·L-1;乌药石油醚萃取物是通过诱发细胞凋亡来达到其体外抗HepG2作用的.抗氧化活性研究结果显示:乌药乙酸乙酯萃取物具有最强的体外抗氧化能力.

关键词：乌药提取物抗肿瘤活性抗氧化活性

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结直肠癌中缺氧诱导因子-1α与Survivin表达的关系

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中华实验外科杂志 2011年第10期28卷 1713-1715页

作者：秦前波汪名飞江从庆刘志苏钱群邬开朗吴建国夏冰武汉大学中南医院结直肠肛门外科结直肠肛门疾病研究中心湖北省肠病医学临床研究中心 430071 武汉大学生命科学院病毒学国家重点实验室武汉大学中南医院消化内科湖北省肠病医学临床研究中心

目的探讨结肠癌LSl74T细胞及结直肠腺癌组织中缺氧诱导因子-1α（HIF-1α）的表达及与Survivin的关系。方法构建靶向HIF-1α的质粒pSilence-2．1-U6-siRNA并鉴定，采用阳离子脂质体转染法将其转染LS174T细胞，低氧培养24h，应用逆转录-... 详细信息

目的探讨结肠癌LSl74T细胞及结直肠腺癌组织中缺氧诱导因子-1α（HIF-1α）的表达及与Survivin的关系。方法构建靶向HIF-1α的质粒pSilence-2．1-U6-siRNA并鉴定，采用阳离子脂质体转染法将其转染LS174T细胞，低氧培养24h，应用逆转录-聚合酶链反应（RT—PCR）、West。eTnblot检测siRNA对HIF-1α的抑制作用。WesternMot检测Survivin蛋白表达。应用免疫组织化学方法检测69例人结直肠腺癌组织中HIF-1α、Survivin蛋白的表达。结果LSl74T细胞转染靶向HIF-1α的siRNA表达载体后，HIF-1α、Survivin表达显著下降。69例结直肠腺癌组织中，HIF-1α、Survivin蛋白的阳性表达率为66．7％（46／69）和56．5％（39／69）。腺癌组HIF-1α蛋白阳性表达率显著高于腺瘤组（P〈0．01）。Ⅲ期腺癌HIF-1α蛋白表达显著高于Ⅰ～Ⅱ患者（P〈0．05）。结直肠腺癌中HIF-1α表达与Survivin显著正相关。结论结直肠腺癌发展过程中HIF-1α与Survivin表达密切相关。

关键词：缺氧诱导因子-1α Survivin 小干扰RNA 结直肠癌

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纳米金层析免疫法快速检测黄热病病毒

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武汉大学学报（医学版） 2010年第6期31卷 766-770页

作者：秦红龚睿王汉华罗静马锐钟江华谢芳李兰湖北国际旅行卫生保健中心国家口岸传染病检测重点实验室湖北武汉430070 武汉大学生命科学学院病毒学国家重点实验室湖北武汉430072

目的:探索快速、简便、高效、灵敏、低廉地检测黄热病病毒感染的方法。方法:用纳米金免疫层析试验原理研制了一种快速诊断试纸。将制备的纳米金颗粒用SPA标记形成金-SPA复合物,其复合物结合在聚酯膜上制成金标结合释放垫;通过基因工程... 详细信息

目的:探索快速、简便、高效、灵敏、低廉地检测黄热病病毒感染的方法。方法:用纳米金免疫层析试验原理研制了一种快速诊断试纸。将制备的纳米金颗粒用SPA标记形成金-SPA复合物,其复合物结合在聚酯膜上制成金标结合释放垫;通过基因工程技术在大肠杆菌中克隆和表达黄热病E蛋白,经纯化的抗原蛋白被固定在硝酸纤维素膜上,然后滴加待测血清,样品中的病毒抗体通过免疫反应与膜上的抗原蛋白结合,待其渗过膜片后,与金-SPA复合物结合形成肉眼可见的红色线条。结果:用已确证的21份黄热病阳性血清和30份阴性血清进行了试验,该快速检测方法与ELISA方法无显著差异。结论:该检测方法不需任何仪器,仅凭肉眼即可判定结果,整个检测过程不超过5min。与传统的ELISA法相比,具有方便快速、成本低廉、应用范围广等优点。

关键词：黄热病纳米金免疫层析包膜蛋白E

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Lys121-Ile的定点突变对人尿胰蛋白酶抑制剂热稳定性的影响

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武汉大学学报（理学版） 2010年第1期56卷 75-80页

作者：范汉东杨扬晏润纬杨一兵郭建军邹国林武汉大学生命科学学院/病毒学国家重点实验室/武汉大学纳米与科学技术中心湖北武汉430072 江西省科学院微生物研究所江西南昌330029

为检验人尿胰蛋白酶抑制剂(UTI)两个结构域中的盐键的稳定性对UTI热变性可逆性的影响,将UTI中的Lys121突变成Ile以中断Glu69与Lys121之间形成的盐键,并命名为?UTI.然后对?UTI进行表达纯化和热解折叠实验.结果显示,?UTI在大肠杆菌中成功... 详细信息

为检验人尿胰蛋白酶抑制剂(UTI)两个结构域中的盐键的稳定性对UTI热变性可逆性的影响,将UTI中的Lys121突变成Ile以中断Glu69与Lys121之间形成的盐键,并命名为?UTI.然后对?UTI进行表达纯化和热解折叠实验.结果显示,?UTI在大肠杆菌中成功表达,纯化复性后经园二色谱测定三级结构与UTI基本相似,酶学测定表明恢复胰蛋白酶抑制剂活性.热变性实验表明:在pH低于7.4的缓冲溶液中?UTI的热解折叠是可逆的,与UTI的结果(pH<4.2)相比,pH值提高了3.结合以前对UTI在酸性条件下可逆热解折叠而在中性与碱性条件下不可逆热解折叠的机制的研究结果,认为多结构域蛋白解折叠的曲线除考虑各个结构域单独形成的多个S曲线的叠加外,还要考虑到结构域之间相互作用强度的影响.

关键词：尿胰蛋白酶抑制剂突变热稳定性

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