检索结果-内蒙古大学图书馆

解剖学报 2007年第3期38卷 334-338页

作者：战军唐军民唐岩北京大学基础医学院组织学与胚胎学教研室北京100083

目的观察电转染人肝癌细胞RNA前后未成熟树突状细胞(imDCs)的表面形态学变化。方法取人外周血,纯化获取单核细胞后诱导其成为imDCs,然后通过电转染方法将人肝癌细胞RNA导入其内;用7种特异性抗体的免疫细胞化学技术对电转染前后的树突状... 详细信息

目的观察电转染人肝癌细胞RNA前后未成熟树突状细胞(imDCs)的表面形态学变化。方法取人外周血,纯化获取单核细胞后诱导其成为imDCs,然后通过电转染方法将人肝癌细胞RNA导入其内;用7种特异性抗体的免疫细胞化学技术对电转染前后的树突状细胞鉴定后,进行扫描电镜观察。结果电转染人肝癌细胞RNA后imDCs内TERT表达显著增加,其他分子表达无显著改变。电转染前,imDCs多呈圆形、椭圆形或不规则形,体积较单核细胞大,但大小不均,在细胞表面可见长短不一的微绒毛,或/和许多泡状、面纱状或云朵状细胞突起;电转染后,可在imDCs表面见到由于电转染所造成的孔,并有一定数量的细胞融合和细胞死亡,但绝大多数细胞可恢复至正常结构状态。结论电转染打孔可为外源物质(如肝癌细胞RNA或其他肿瘤细胞RNA)导入细胞内提供可行性,并为进一步利用imDCs制作肿瘤疫苗,开展肿瘤的生物治疗提供一种可行方案。

关键词：电转染肝癌细胞RNA 未成熟树突状细胞扫描电镜人

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人早期胚中CD20阳性细胞的免疫组织化学定位

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解剖学报 2007年第2期38卷 238-240页

作者：刘影唐军民唐岩常昕莹李枫北京大学基础医学院组织学与胚胎学教研室北京100083

目的探索CD20阳性细胞在人早期胚中的分布及意义。方法用免疫组织化学SP法对10例6—7周人早期胚内CD20阳性细胞进行定位观察。结果 ***20阳性细胞局限于人早期胚肝内；2．在人胚肝内，CD20阳性颗粒主要局限于B细胞的细胞核内，呈不均... 详细信息

目的探索CD20阳性细胞在人早期胚中的分布及意义。方法用免疫组织化学SP法对10例6—7周人早期胚内CD20阳性细胞进行定位观察。结果 ***20阳性细胞局限于人早期胚肝内；2．在人胚肝内，CD20阳性颗粒主要局限于B细胞的细胞核内，呈不均质的颗粒状分布，细胞质和细胞膜呈阴性反应。结论在人早期胚内，CD20定位于肝内的B细胞，并分布在细胞核内；该研究结果为深入探讨CD20阳性细胞的功能和作用机制提供了重要线索。

关键词： CD20 B细胞免疫组织化学人早期胚

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SARS患者脾树突状细胞和巨噬细胞的免疫组织化学观察

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解剖学报 2007年第2期38卷 200-204页

作者：战军唐军民唐岩李枫梅芳王国涛顾江北京大学基础医学院组织学与胚胎学教研室北京100083

目的对严重急性呼吸综合征(SARS)患者脾树突状细胞、巨噬细胞数量和巨噬细胞大小进行定量分析,为SARS的病理变化和发病机制的探讨提供证据。方法通过免疫组织化学技术对6例SARS死亡患者脾和6例意外死亡者正常脾S-100+、CD68+、HLA-DR+、... 详细信息

目的对严重急性呼吸综合征(SARS)患者脾树突状细胞、巨噬细胞数量和巨噬细胞大小进行定量分析,为SARS的病理变化和发病机制的探讨提供证据。方法通过免疫组织化学技术对6例SARS死亡患者脾和6例意外死亡者正常脾S-100+、CD68+、HLA-DR+、CD83+细胞的分布进行观察,并采用图像分析系统对阳性细胞数量或体积进行分析。结果SARS死亡患者脾内白髓中S-100+树突状细胞数较正常平均减少80.49%,有的甚至完全消失;脾红髓中CD68+巨噬细胞数量较正常平均减少39.48%,体积是正常平均值的2.21倍。脾白髓中HLA-DR+抗原呈递细胞明显减少。SARS死亡患者脾与正常脾中均无CD83+成熟树突状细胞。结论SARS患者免疫系统中抗原呈递系统遭到严重破坏,支持SARS是一种病毒性免疫缺陷病。SARS病毒不能引发树突状细胞成熟。巨噬细胞的体积增大处于激活状态,提示巨噬细胞在SARS发病机制中起一定作用。

关键词：严重急性呼吸综合征(SARS) 树突状细胞巨噬细胞免疫组织化学脾人

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巨噬细胞条件培养液对原代培养小鼠成肌细胞生长的影响

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解剖学报 2007年第3期38卷 320-324页

作者：舒丹毅唐军民唐岩李枫北京大学基础医学院组织学胚胎学教研室北京100083

目的观察小鼠巨噬细胞条件培养液对小鼠成肌细胞生长的影响。方法小鼠腹腔内连续3d注射肌匀浆和淀粉混合物,然后分离小鼠腹腔巨噬细胞,在无血清培养液中培养48h后收集上清。取生后5d小鼠的成肌细胞,在含10%血清的DMEM/F12培养液中培养36... 详细信息

目的观察小鼠巨噬细胞条件培养液对小鼠成肌细胞生长的影响。方法小鼠腹腔内连续3d注射肌匀浆和淀粉混合物,然后分离小鼠腹腔巨噬细胞,在无血清培养液中培养48h后收集上清。取生后5d小鼠的成肌细胞,在含10%血清的DMEM/F12培养液中培养36-48h后,将血清浓度降低至0.5%。将巨噬细胞培养上清加入低浓度血清培养的成肌细胞中,作用72h后收集细胞,通过Wright染色、LDH细胞化学和免疫细胞化学方法观察成肌细胞的生长情况。结果巨噬细胞条件培养液能够在低浓度血清的条件下维持成肌细胞的正常形态和活性,并促进成肌细胞增殖。实验组LDH阳性细胞与对照组相比,其平均吸光度与积分吸光度均存在极显著性差异(分别为P<0.001和P<0.000 1)。免疫细胞化学显示,实验组desmin阳性细胞数明显多于对照组。结论巨噬细胞条件培养液中含有促进小鼠成肌细胞生长的因子。

关键词：巨噬细胞成肌细胞体外培养免疫细胞化学小鼠

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胚胎干细胞源性表皮干细胞对小鼠全层皮肤缺损的修复

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解剖学报 2007年第3期38卷 296-299页

作者：刘爱军黄锦桃李海标中山大学基础医学院组织学胚胎学教研室广州510080

目的研究129小鼠胚胎干细胞(ES cell)源性表皮干细胞在同种小鼠全层皮肤缺损的生长和分化,探讨ES细胞源性表皮干细胞对全层皮肤缺损的修复作用。方法以生物膜为载体,将羊膜诱导后带有核荧光标记的ES细胞源性表皮干细胞直接覆盖小鼠全层... 详细信息

目的研究129小鼠胚胎干细胞(ES cell)源性表皮干细胞在同种小鼠全层皮肤缺损的生长和分化,探讨ES细胞源性表皮干细胞对全层皮肤缺损的修复作用。方法以生物膜为载体,将羊膜诱导后带有核荧光标记的ES细胞源性表皮干细胞直接覆盖小鼠全层皮肤缺损创面。术后1-8周连续取材,HE染色,β1整合素、CK15、CK19、CK10、CEA免疫组织化学和荧光双标显色。结果术后2周,创面完全长合,较厚的新生皮覆盖创面,基底层细胞增生,形成许多大小不一的细胞柱伸向真皮层,真皮层中可见管腔样结构,免疫荧光双标显示,1-3周新生表皮中可见核标记的细胞呈β1整合素、CK15阳性,真皮层中带有核标记的管状或泡状结构呈β1整合素、CK15阳性;4周后新生表皮开始变薄,基底层细胞呈CK19、CK10阳性,汗腺样结构呈CEA阳性,6-8周新生表皮下可见毛囊样、汗腺样、皮脂腺样等结构。结论ES细胞源性表皮干细胞植入小鼠全层皮肤缺损创面,可修复缺损的表皮,并在其下真皮层内具有分化为汗腺样、毛囊样和皮脂腺样结构的潜能。

关键词：胚胎干细胞表皮干细胞定向分化皮肤附属结构免疫组织化学人羊膜小鼠

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羊膜上皮细胞对6-OHDA所致PC12细胞损伤的保护作用

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中国老年学杂志 2007年第15期27卷 1433-1435页

作者：朱梅陈东张际绯孟晓婷广东医学院组织学与胚胎学教研室牡丹江医学院组织学与胚胎学教研室黑龙江牡丹江157011 吉林大学基础医学院组织学与胚胎学教研室

目的探讨羊膜上皮细胞(HAEC)对6-羟基多巴胺(6-OHDA)所致PC12细胞损伤的保护作用机制。方法采用MTT检测、AO活体荧光素标记和流式细胞仪检测技术,观察加入终浓度分别为30、40、50μmol/L的6-OHDA24h后,HAEC培养液上清对6-OHDA所致的PC1... 详细信息

目的探讨羊膜上皮细胞(HAEC)对6-羟基多巴胺(6-OHDA)所致PC12细胞损伤的保护作用机制。方法采用MTT检测、AO活体荧光素标记和流式细胞仪检测技术,观察加入终浓度分别为30、40、50μmol/L的6-OHDA24h后,HAEC培养液上清对6-OHDA所致的PC12细胞损伤的保护作用。结果随着6-OHDA浓度的增大,PC12细胞活力逐渐降低,受损伤细胞的数量逐渐增加,终浓度为50μmol/L的6-OHDA损害组可见细胞凋亡样改变;HAEC培养液上清可明显拮抗6-OHDA的毒性作用,使PC12细胞的存活率增加,受损伤细胞的数量降低。结论HAEC培养液上清能拮抗6-OHDA所致的PC12细胞损伤。

关键词： 6-羟基多巴胺 PC12细胞羊膜上皮细胞帕金森病

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以转染白血病抑制因子基因的人胚肺成纤维细胞为饲养层培养人胚胎生殖细胞

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解剖学报 2007年第3期38卷 310-314页

作者：李芳菲刘永刚王建伟王莎莉王亚平重庆医科大学基础医学院组织学胚胎学教研室重庆400016

目的以转染白血病抑制因子(LIF)基因的人胚肺成纤维细胞为饲养层培养人胚胎生殖细胞,为建立无动物成分污染的人胚胎生殖细胞培养体系奠定基础。方法将LIF真核表达载体pcDNA3.1(+)-LIF转染到人胚肺成纤维细胞中,通过筛选和鉴定获得表达LI... 详细信息

目的以转染白血病抑制因子(LIF)基因的人胚肺成纤维细胞为饲养层培养人胚胎生殖细胞,为建立无动物成分污染的人胚胎生殖细胞培养体系奠定基础。方法将LIF真核表达载体pcDNA3.1(+)-LIF转染到人胚肺成纤维细胞中,通过筛选和鉴定获得表达LIF的阳性细胞。将原始生殖细胞(PGCs)种植到转染后细胞制备而成的饲养层上,在不添加外源性LIF的条件下培养,并对PGCs来源的细胞集落进行鉴定。结果经RT-PCR及Western blotting鉴定证实,转染pcDNA3.1(+)-LIF的人胚肺成纤维细胞表达LIF基因。在转染后人胚肺成纤维细胞上生长的PGCs可形成典型的鸟巢状集落,经检测集落碱性磷酸酶活性呈强阳性,表达胚胎阶段特异性抗原SSEA-1、SSEA-4、TRA-1-60、TRA-1-81,及未分化标志Oct-4。结论用转染LIF基因后的人胚肺成纤维细胞作为饲养层能支持PGCs来源人胚胎生殖细胞的生长,维持自我更新。

关键词：人胚肺成纤维细胞白血病抑制因子饲养层逆转录聚合酶链反应免疫印迹法人胚胎生殖细胞

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人外周血单核细胞分化为树突状细胞过程中核转录因子-κBp50的表达及柴胡皂苷a的影响

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解剖学报 2007年第6期38卷 681-686页

作者：张丽唐军民唐岩李枫苏安英北京大学基础医学院组织学与胚胎学教研室北京100083 河北工程大学临床医学院邯郸056029

目的观察人外周血单核细胞分化为树突状细胞(DC)过程中,核转录因子-κB p50(NF-κB p50)的表达以及柴胡皂苷a对单核细胞分化为树突状细胞的影响。方法非连续密度梯度离心获取人外周血单核细胞;用含粒单细胞刺激因子(GM-CSF)、IL-4、肿... 详细信息

目的观察人外周血单核细胞分化为树突状细胞(DC)过程中,核转录因子-κB p50(NF-κB p50)的表达以及柴胡皂苷a对单核细胞分化为树突状细胞的影响。方法非连续密度梯度离心获取人外周血单核细胞;用含粒单细胞刺激因子(GM-CSF)、IL-4、肿瘤坏死因子(TNF-α)和柴胡皂苷a的RPMI-1640培养液分别对细胞因子组、柴胡皂苷组、联合培养组的单核细胞进行体外培养;应用倒置相差显微镜、瑞氏染色和CD14、CD83、HLA-DR、S-100的免疫细胞化学法鉴定单核细胞和DC;动态观察单核细胞分化为DC过程中不同时间点的NF-κB p50的表达,并进行图像分析。结果CD14、CD83、HLA-DR、S-100免疫细胞化学法证实所获单核细胞和DC符合各自的形态和表型特征。在含GM-CSF和IL-4的RPMI-1640培养液培养7d时,单核细胞分化成未成熟DC(imDC);在含GM-CSF、IL-4和TNF-a的RPMI-1640培养液继续培养3d时,imDC分化为成熟DC(mDC),两者的细胞核内NF-κB p50表达具有显著性差异(P<0.05)。单纯用只含柴胡皂苷a的RPMI-1640培养液培养单核细胞至7d时,可见其细胞核呈NF-κBp50阳性,但未见其分化为DC。若用含GM-CSF、IL-4和柴胡皂苷a的RPMI-1640培养液联合培养7d时,则该单核细胞分化为imDC;加入TNF-α后继续培养3d,imDC的细胞核呈NF-κB p50强阳性,免疫细胞化学法证实imDC已经分化为mDC。联合培养组细胞的表型表达均强于只加细胞因子组(P<0.05)。结论人外周血单核细胞分化为imDC和mDC过程中,细胞核内NF-κB p50表达逐渐增强。单纯用低浓度柴胡皂苷a不能刺激单核细胞分化为DC,但联合细胞因子GM-CSF、IL-4和TNF-α培养时,可使其分化为imDC和mDC。

关键词：树突状细胞细胞表面抗原核转录因子-κB p50 柴胡皂苷a 免疫细胞化学人

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混合组织切片标本的制作技巧及应用

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解剖学杂志 2007年第1期30卷 38-38,95页

作者：张栩胤赵荧北京大学基础医学院组织学与胚胎学教研室北京100083

组织学是医学中一门重要的基础课程,是藉助于显微镜来观察人体微细结构,即观察各种组织器官切片标本的一门学科。在整个组织学实习教学过程中,混合切片标本作为一种促进教学质量的提高和检验学生知识掌握程度的方法而被引入教学课程中... 详细信息

组织学是医学中一门重要的基础课程,是藉助于显微镜来观察人体微细结构,即观察各种组织器官切片标本的一门学科。在整个组织学实习教学过程中,混合切片标本作为一种促进教学质量的提高和检验学生知识掌握程度的方法而被引入教学课程中。另外,混合切片标本在科研上也表现出了一定的优势。[第一段]

关键词：组织切片标本制作混合切片基础课程微细结构组织器官教学过程

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树突状细胞电转染的优化条件及影响因素

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解剖学报 2007年第2期38卷 209-212页

作者：唐岩唐军民战军刘影常昕莹王国涛单铁英苏安英北京大学基础医学院组织学与胚胎学教研室北京100083 河北工程大学临床医学院邯郸056029

目的探讨树突状细胞(DC)电转染的方法、优化条件以及影响DC电转染率和存活率的主要因素。方法提取人肝癌细胞(Bel 7402)RNA,利用淋巴细胞分离液密度梯度法分离人外周血单个核细胞(PBMC),并通过贴壁法获取单核细胞作为树突状细胞前体(pDC... 详细信息

目的探讨树突状细胞(DC)电转染的方法、优化条件以及影响DC电转染率和存活率的主要因素。方法提取人肝癌细胞(Bel 7402)RNA,利用淋巴细胞分离液密度梯度法分离人外周血单个核细胞(PBMC),并通过贴壁法获取单核细胞作为树突状细胞前体(pDC)。将pDC置含rhGM-CSF和rIL-4的RPMI-1640培养液内联合培养诱导7d,使之充分分化为未成熟的DC(imDC)。应用电穿孔仪(electroporation apparatus)分别将人肝癌细胞总RNA和绿色荧光蛋白(GFP)电转染至imDC,并设定不同的电压、脉冲时间、细胞浓度、温度和电转染缓冲液等条件。荧光镜下和光镜下分别计算绿色荧光阳性细胞数和总细胞数。电转染1d后,用0.4%锥虫蓝染色分别计算其电转染率和存活率。结果当imDC浓度为5×106/ml与40μg的人肝癌细胞总RNA混合,设定电转染仪电压为300V、脉冲时间为500μs时,其电转染率达到最高值,imDC存活率约49.07%。结论电转染提供了一种使人肝癌细胞RNA电转染至imDC的可行技术。影响imDC电转染率的最主要因素是受体细胞imDC的生长状况、电转染的电压及脉冲时间。

关键词：电转染人肝癌细胞RNA 树突状细胞电转染率人

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