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稳定表达野生型和突变型DNA聚合酶β的NIH3T3细胞系的建立及其生长特性

郑州大学学报（医学版） 2005年第5期40卷 819-822页

作者：金戈杨洪艳赵继敏黄幼田郑智敏赵国强赵勤吴景兰董子明郑州大学基础医学院生物化学教研室郑州450052 郑州大学基础医学院病理生理学教研室郑州450052 郑州大学基础医学院微生物学与免疫学教研室郑州450052 郑州大学基础医学院组织学与胚胎学教研室郑州450052

目的:建立稳定表达野生型及突变型DNA聚合酶β(polβ)的NIH3T3细胞系。方法:用脂质体转染法分别将野生型和突变型polβ真核表达载体pcDNA3.1-PW和pcDNA3.1-PM3转染入NIH3T3细胞,经G418筛选得到稳定转染细胞系。用RT-PCR、免疫印迹法检... 详细信息

目的:建立稳定表达野生型及突变型DNA聚合酶β(polβ)的NIH3T3细胞系。方法:用脂质体转染法分别将野生型和突变型polβ真核表达载体pcDNA3.1-PW和pcDNA3.1-PM3转染入NIH3T3细胞,经G418筛选得到稳定转染细胞系。用RT-PCR、免疫印迹法检测转染细胞polβmRNA和POLB蛋白的表达水平,MTT法测转染细胞生长曲线,免疫组化法测增殖细胞核抗原(PCNA),并用流式细胞仪测细胞周期。结果与结论:成功建立了稳定表达野生型及突变型polβ的NIH3T3细胞系。野生型polβ对NIH3T3细胞生长无明显影响,突变型polβ则使NIH3T3细胞生长速度加快,细胞周期发生改变,细胞多被阻滞在S期。

关键词： DNA聚合酶β NIH3T3细胞系细胞转染

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人表皮角质形成细胞的体外改良培养

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郑州大学学报（医学版） 2005年第1期40卷 113-115页

作者：张娓冯若赵飞郑州大学基础医学院组织学与胚胎学教研室郑州450052 郑州大学第一附属医院皮肤科郑州450052

目的:探讨人表皮角质形成细胞的体外改良培养方法。方法:取皮肤标本,先用 2. 5g/L胰蛋白酶 4℃浸泡 22h(冷消化法),以便于表皮真皮分离;分离后刮除真皮面 (真皮刮除法 )以获取基底细胞;收集表皮及基底细胞并混合,制成细胞悬液进行培养... 详细信息

目的:探讨人表皮角质形成细胞的体外改良培养方法。方法:取皮肤标本,先用 2. 5g/L胰蛋白酶 4℃浸泡 22h(冷消化法),以便于表皮真皮分离;分离后刮除真皮面 (真皮刮除法 )以获取基底细胞;收集表皮及基底细胞并混合,制成细胞悬液进行培养。培养至第 5d,采用人工纯化法去除成纤维细胞。其他操作同人表皮细胞常规培养法。培养结束后,以台盼蓝染色法检测细胞存活率,观察细胞生长状态,并与传统培养方法相比较。实验重复 3次。结果:改良组 3次培养细胞存活率分别为 87%, 91%和 95%,均高于对照组 ( 82%, 82%和 85% ) (P<0. 05)。改良组生长速度亦较快。结论:采用人工纯化法、冷消化法和真皮刮除法等改良方法可提高体外培养的人表皮角质细胞存活率及生长速度。

关键词：细胞培养角质形成细胞体外培养

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阿司匹林对游离脂肪酸引起的大鼠肝细胞胰岛素抵抗的保护作用

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中华内分泌代谢杂志 2005年第2期21卷 172-174页

作者：张苏河张东铭李鹏诺李青菊田晨光王转锁张钦宪李凤良郑州大学第二附属医院内分泌科 450003 海南医学院附属医院内分泌科郑州大学基础医学院组织学与胚胎学教研室

探讨游离脂肪酸和阿司匹林对大鼠肝细胞胰岛素受体底物2(IRS -2)的蛋白质含量及其酪氨酸残基磷酸化水平的影响,结果提示游离脂肪酸可能通过抑制IRS- 2酪氨酸残基磷酸化和降低IRS -2蛋白质含量引起肝细胞胰岛素抵抗,阿司匹林能防治游离... 详细信息

探讨游离脂肪酸和阿司匹林对大鼠肝细胞胰岛素受体底物2(IRS -2)的蛋白质含量及其酪氨酸残基磷酸化水平的影响,结果提示游离脂肪酸可能通过抑制IRS- 2酪氨酸残基磷酸化和降低IRS -2蛋白质含量引起肝细胞胰岛素抵抗,阿司匹林能防治游离脂肪酸引起的肝细胞胰岛素抵抗。

关键词：阿司匹林游离脂肪酸大鼠肝细胞胰岛素抵抗蛋白质酪氨酸

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冷冻保存对人卵母细胞的影响

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现代妇产科进展 2005年第6期14卷 502-504页

作者：刘军霞黄国宁王亚平重庆医科大学基础医学院组织学与胚胎学教研室重庆400016 重庆市妇产科医院生殖遗传研究所

卵母细胞冷冻解冻后因存活率低、受精率低、胚胎发育能力差等,影响了它在辅助生殖医学中的应用。卵母细胞在冷冻过程中由于受到温度改变、渗透压改变、冷冻保护剂作用、冰晶形成等影响,可能会出现纺锤体分布和结构异常,染色体非整倍体... 详细信息

卵母细胞冷冻解冻后因存活率低、受精率低、胚胎发育能力差等,影响了它在辅助生殖医学中的应用。卵母细胞在冷冻过程中由于受到温度改变、渗透压改变、冷冻保护剂作用、冰晶形成等影响,可能会出现纺锤体分布和结构异常,染色体非整倍体和多倍体发生,透明带硬化,线粒体变化,细胞膜破裂等。研究并解决上述问题有助于提高卵母细胞冷冻技术。

关键词：低温保存卵母细胞辅助生殖医学细胞冷冻技术

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食管癌组织中hMSH2基因启动子区甲基化检测

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中华肿瘤杂志 2005年第9期27卷 541-543页

作者：张功员马春晓刘秋亮乐晓平丁一张钦宪河南省分子医学重点学科开放实验室郑州大学基础医学院组织学与胚胎学教研室郑州450052 平顶山市第一人民医院郑州大学第一附属医院

目的检测食管癌组织中hMSH2基因启动子区甲基化状态,探讨与食管癌发生、发展的关系.方法 32例食管癌患者术前均未接受放疗、化疗等其他治疗,手术切除后30 min内,在癌组织及正常食管黏膜组织各取约1.0 cm×1.0 cm×1.0 cm大小的... 详细信息

目的检测食管癌组织中hMSH2基因启动子区甲基化状态,探讨与食管癌发生、发展的关系.方法 32例食管癌患者术前均未接受放疗、化疗等其他治疗,手术切除后30 min内,在癌组织及正常食管黏膜组织各取约1.0 cm×1.0 cm×1.0 cm大小的组织块标本,立即储存于-80℃冰箱中,冻存备提DNA.采用甲基化特异PCR法(MSP法)检测食管癌及正常食管黏膜组织中错配修复基因hMSH2启动子区甲基化的表达.结果 32例食管癌组织中,hMSH2启动子区甲基化发生率为34.4% (11/32),正常食管黏膜组织未发现甲基化,两组甲基化阳性率相比较,差异有统计学意义(P﹤0.01).高龄患者(≥70岁)癌组织中启动子区hMSH2甲基化发生率(85.7%)明显高于较低龄患者(﹤70岁,20.0%;P<0.05).病理组织学Ⅲ～Ⅳ级食管癌组织中,hMSH2启动子区甲基化发生率(70.0%)明显高于Ⅰ～Ⅱ级(18.2%,P<0.05).结论食管癌组织中,hMSH2基因启动子区甲基化与年龄和病理组织学分级可能有关.

关键词：食管肿瘤 hMSH2基因启动子甲基化基因启动子区甲基化食管癌组织 hMSH2 检测病理组织学黏膜组织

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成年大鼠肝细胞的细胞动力学研究

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河南医学研究 2005年第2期14卷 126-128页

作者：金辉冯若丁一邢文英史学义郑州大学基础医学院组织学与胚胎学教研室河南郑州450052

目的:研究成年大鼠肝细胞的细胞增生、衰老与凋亡的动力学过程。方法:应用HE染色、衰老相关-β-半乳糖苷酶组织化学染色、增殖细胞核抗原(PCNA)免疫组织化学方法、末端转移酶dUTP缺口末端标记(TUNEL)原位细胞凋亡检测方法探讨正常大鼠... 详细信息

目的:研究成年大鼠肝细胞的细胞增生、衰老与凋亡的动力学过程。方法:应用HE染色、衰老相关-β-半乳糖苷酶组织化学染色、增殖细胞核抗原(PCNA)免疫组织化学方法、末端转移酶dUTP缺口末端标记(TUNEL)原位细胞凋亡检测方法探讨正常大鼠肝细胞的细胞动力学。结果:肝细胞呈现多种方式的无丝分裂像。增殖细胞核抗原阳性细胞散在分布于肝小叶内,成群分布于门管区。衰老细胞散在分布于肝小叶内,以肝小叶周边部较多。凋亡细胞分布于中央静脉周围和门管区周围。结论:成年大鼠肝细胞呈现细胞增殖、生长、衰老和凋亡的细胞动力学过程。

关键词：肝细胞细胞动力学细胞增值细胞衰老细胞凋亡免疫组织化

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CEA真核表达载体的瞬时表达及检测

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河南医学研究 2005年第4期14卷 306-308页

作者：袁云宋晓妍张娓闫志勇张钦宪郑州大学基础医学院组织学与胚胎学教研室河南郑州450052

目的:检测含癌胚抗原(CEA)的真核表达质粒pWACEA在体外的瞬时表达。方法:用脂质体包裹含CEA的真核表达质粒pWACEA转染MCF7细胞,采用原位杂交和免疫组化技术检测CEA的表达。结果:转染细胞原位杂交和免疫组化均为阳性;对照标本未见阳性信... 详细信息

目的:检测含癌胚抗原(CEA)的真核表达质粒pWACEA在体外的瞬时表达。方法:用脂质体包裹含CEA的真核表达质粒pWACEA转染MCF7细胞,采用原位杂交和免疫组化技术检测CEA的表达。结果:转染细胞原位杂交和免疫组化均为阳性;对照标本未见阳性信号。结论:真核表达质粒pWACEA在体外可表达CEA分子,为进一步建立CEA阳性动物肿瘤细胞模型及研究CEA阳性肿瘤的免疫防治提供了基础。

关键词：癌胚抗原质粒表达原位杂交

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雷公藤多甙对局灶性脑缺血再灌注大鼠脑组织单胺类递质含量的影响mwilfo

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郑州大学学报（医学版） 2005年第6期40卷 1061-1064页

作者：张艳贾丹辉刘宗文何美霞张钦宪郑州大学基础医学院药理学教研室郑州450052 河南省肿瘤病理重点实验室郑州450052 河南省医学科学研究所药理室郑州450003 郑州大学基础医学院组织学与胚胎学教研室郑州450052

目的:观察雷公藤多甙(TWP)对大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤脑组织单胺类神经递质含量的影响。方法:Wistar大鼠60只,随机均分为6组。假手术组、缺血再灌注组每d灌胃生理盐水,尼莫地平(Nim)组、雷公藤多甙高、中、低剂量组,分别给予Nim10mg/... 详细信息

目的:观察雷公藤多甙(TWP)对大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤脑组织单胺类神经递质含量的影响。方法:Wistar大鼠60只,随机均分为6组。假手术组、缺血再灌注组每d灌胃生理盐水,尼莫地平(Nim)组、雷公藤多甙高、中、低剂量组,分别给予Nim10mg/kg,TWP45mg/kg、30mg/kg、15mg/kg,灌胃给药,1次/d,连用5d。末次给药后1h,采用线栓法制作大鼠大脑中动脉局灶性缺血再灌注模型,用荧光分光光度计测定缺血2h再灌注1h时各组大鼠大脑皮层及纹状体去甲肾上腺素(NE)、多巴胺(DA)、5羟色胺(5HT)含量。结果:缺血再灌注组大鼠大脑皮层及纹状体NE、DA、5HT含量均较假手术组降低;与缺血再灌注组比较,雷公藤多甙各组及尼莫地平组大鼠大脑皮层及纹状体NE、DA、5HT含量均升高(P<0.05)。结论:雷公藤多甙可减少缺血再灌注期间单胺类神经递质的释放。

关键词：雷公藤多甙脑缺血再灌注去甲肾上腺素多巴胺 5-羟色胺大鼠

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人表皮细胞的体外改良培养

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河南医学研究 2005年第2期14卷 129-130页

作者：冯若金辉杨继要郑州大学基础医学院组织学与胚胎学教研室河南郑州450052

目的:探讨人工纯化法去除成纤维细胞对人表皮细胞生长的影响。方法:原代培养人表皮细胞第5天时,采用人工纯化法即用0.25%胰蛋白酶+0.04%EDTA(1∶1)消化细胞2～10min,除去成纤维细胞后,观察表皮细胞生长情况并用台盼蓝染色检测其存活率... 详细信息

目的:探讨人工纯化法去除成纤维细胞对人表皮细胞生长的影响。方法:原代培养人表皮细胞第5天时,采用人工纯化法即用0.25%胰蛋白酶+0.04%EDTA(1∶1)消化细胞2～10min,除去成纤维细胞后,观察表皮细胞生长情况并用台盼蓝染色检测其存活率。结果:细胞存活率为87%,存活率较高。生长状态较传统方法培养的表皮细胞生长状态好。结论:人工纯化法除去成纤维细胞为原代培养表皮细胞的方法改良,有利于表皮细胞更好的生长。

关键词：细胞培养表皮细胞改良方法人工纯化法成纤维细胞

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胃癌组织β-catenin基因的表达

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河南肿瘤学杂志 2005年第3期18卷 163-164页

作者：刘兴涛张娓丁一王一菱曲亚辉张钦宪郑州大学基础医学院组织学与胚胎学教研室河南郑州450052

目的探讨βcatenin基因的表达与胃癌浸润转移的关系。方法应用免疫组化方法检测48例胃癌及癌旁组织βcatenin的表达。结果胃癌组织βcatenin的表达明显高于癌旁组织(P<0.01);低分化癌组织βcatenin表达较高、中分化组织高(P<0.01)... 详细信息

目的探讨βcatenin基因的表达与胃癌浸润转移的关系。方法应用免疫组化方法检测48例胃癌及癌旁组织βcatenin的表达。结果胃癌组织βcatenin的表达明显高于癌旁组织(P<0.01);低分化癌组织βcatenin表达较高、中分化组织高(P<0.01);浸润越深βcatenin表达越高(P<0.01);有淋巴结转移组织比无淋巴结转移的高(P<0.01)。结论βcatenin和胃癌的浸润、转移关系密切,对胃癌的预后可能具有重要意义。

关键词：胃癌 β-catenin 免疫组化表达

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