检索结果-内蒙古大学图书馆

Wnt信号通路与自身免疫调节因子共同参与胚胎干细胞向胸腺上皮祖细胞的分化

中国组织工程研究 2024年第13期28卷 1996-2001页

作者：文廷浩李远迪何可可宋雯茜王先斌高杰苏敏胡蓉贵州医科大学基础医学院组织学与胚胎学教研室贵州省贵阳市550025 贵州医科大学转化医学研究中心贵州省贵阳市550025 贵州医科大学细胞工程生物医药技术国家地方联合工程实验室贵州省再生医学重点实验室中国医学科学院成体干细胞转化研究重点实验室贵州省贵阳市550025

背景:自身免疫调节因子(autoimmune regulator gene,Aire)及Wnt信号通路在小鼠胚胎干细胞多能性的维持及分化中都发挥着重要作用,但Wnt信号与Aire是否参与了小鼠胚胎干细胞向胸腺上皮祖细胞的分化尚未可知。目的:探讨Wnt信号通路和自身... 详细信息

背景:自身免疫调节因子(autoimmune regulator gene,Aire)及Wnt信号通路在小鼠胚胎干细胞多能性的维持及分化中都发挥着重要作用,但Wnt信号与Aire是否参与了小鼠胚胎干细胞向胸腺上皮祖细胞的分化尚未可知。目的:探讨Wnt信号通路和自身免疫调节因子与胚胎干细胞分化的关系。方法:采用两步分化方法定向诱导小鼠胚胎干细胞分化为内胚层再分化为胸腺上皮祖细胞,然后用Aire shRNA慢病毒感染小鼠胚胎干细胞,嘌呤霉素筛选单克隆稳定株,再采用两步分化方法进行诱导分化,分别于定向诱导分化第0,3,10天,采用细胞免疫荧光、流式细胞术、Western blot、Real-Time qPCR检测相关基因及蛋白的表达变化。结果与结论:①定向诱导分化第0天,免疫荧光染色显示SSEA1、OCT4表达呈阳性;②定向诱导分化第3天,免疫荧光染色显示SOX17、FOXA2表达呈双阳性;③定向诱导分化第10天,流式细胞术结果显示EPCAM1、K5、K8表达呈阳性;④与未分化的小鼠胚胎干细胞相比,诱导分化的胸腺上皮祖细胞中Wnt7a、β-catenin、Gsk-3β蛋白表达升高,Aire蛋白表达降低;⑤与未分化的小鼠胚胎干细胞相比,诱导分化的胸腺上皮祖细胞中Wnt7a、β-catenin、Gsk-3β及Aire mRNA表达升高;⑥与正常培养的小鼠胚胎干细胞及其最终分化的胸腺上皮祖细胞相比,敲低Aire基因的小鼠胚胎干细胞及其最终分化的胸腺上皮祖细胞中Wnt7a、β-catenin、Gsk-3β蛋白表达水平降低。综上所述,Wnt信号通路和Aire共同参与了小鼠胚胎干细胞定向诱导分化为小鼠胸腺上皮祖细胞的过程。

关键词： Wnt信号通路自身免疫调节因子胚胎干细胞胸腺上皮祖细胞内胚层细胞

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抑制Gprc6a基因对染氟睾丸间质细胞睾酮生成功能的影响

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解放军医学院学报 2024年第10期45卷 1048-1053页

作者：赵雨欣赵嘉乐陈邬锦李秀梅许彭秦培钢白生宾新疆医科大学基础医学院形态中心新疆乌鲁木齐830000 新疆医科大学新疆地方病分子生物学重点实验室新疆乌鲁木齐830000 新疆医科大学第二临床医学院新疆乌鲁木齐830000 新疆医科大学基础医学院组织学与胚胎学教研室新疆乌鲁木齐830000

背景氟化物从多种途径诱导异常成骨细胞活化,促进骨钙素(osteocalcin,OCN)表达,过量氟会降低睾丸间质细胞中睾酮的产生,睾丸间质细胞中表达的骨钙素特异性受体Gprc6a与骨钙素结合能够调节睾酮的生物合成。目的探究Gprc6a基因对NaF干... 详细信息

背景氟化物从多种途径诱导异常成骨细胞活化,促进骨钙素(osteocalcin,OCN)表达,过量氟会降低睾丸间质细胞中睾酮的产生,睾丸间质细胞中表达的骨钙素特异性受体Gprc6a与骨钙素结合能够调节睾酮的生物合成。目的探究Gprc6a基因对NaF干预睾丸间质细胞睾酮生成的影响。方法采用正常小鼠睾丸间质TM3细胞系和Gprc6a^(-/-)TM3细胞系,分为TM3组、Gprc6a^(-/-)TM3组、TM3 (NaF)组、Gprc6a^(-/-)TM3 (NaF)组、TM3 (NaF)+OCN组、Gprc6a^(-/-)TM3 (NaF)+OCN组,检测各组细胞活性,并在干预48 h时,以倒置荧光显微镜观察其细胞形态,荧光定量PCR检测Creb、Star、Cyp11a1和3β-HSD基因转录的表达,酶联免疫检测细胞分泌睾酮的表达。结果 MTT法检测细胞增殖活性显示Gprc6a^(-/-)TM3各实验组较TM3相应各组细胞活性减弱(P<0.05),TM3 (NaF)+OCN和Gprc6a^(-/-)TM3 (NaF)+OCN组细胞较TM3 (NaF)组细胞活性增强;荧光显微镜下观察到Gprc6a抑制仅影响TM3细胞增殖数量,不影响细胞形态,单一NaF刺激后,Gprc6a^(-/-)TM3细胞更易脱壁,部分细胞回缩明显;荧光定量PCR检测基因显示,与TM3 (NaF)组相比,Gprc6a^(-/-)TM3 (NaF)组Creb、Star、Cyp11a1基因表达下调(P=0.032);与TM3 (NaF)+OCN组相比,Gprc6a^(-/-)TM3 (NaF)+OCN组Creb、Star、Cyp11a1、3β-HSD基因表达下调(P=0.029);与Gprc6a^(-/-)TM3 (NaF)组相比,Gprc6a^(-/-)TM3 (NaF)+OCN组Star、Cyp11a1、3β-HSD基因表达上调(P=0.012);加入OCN干预后,原本被抑制的Gprc6a基因表达上调(P=0.010)。酶联免疫法检测细胞分泌睾酮表达结果显示,正常培养时,Gprc6a^(-/-)TM3组睾酮量分泌少于TM3组(P=0.004);NaF刺激后,各组细胞睾酮分泌量减少(P=0.001);NaF+OCN刺激,TM3组睾酮分泌量回升(P=0.003);Gprc6a^(-/-)TM3细胞与同种刺激的TM3组细胞相比睾酮分泌量降低(P=0.007)。结论抑制Gprc6a基因会促进过量氟诱导的睾丸间质细胞睾酮生成减少;Gprc6a参与过量氟-骨钙素对睾丸间质细胞生成睾酮的调控。

关键词： Gprc6a 氟化钠睾丸间质细胞睾酮骨钙素氟中毒

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基于PINK1/Parkin通路探讨灵芝孢子对糖尿病肾病模型大鼠肾脏细胞凋亡的影响

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中国老年学杂志 2022年第11期42卷 2805-2811页

作者：周广旭齐亚灵周少波吴可佳张莹石瑞平秦丽微王淑湘付宏扬张欣王淑秋佳木斯大学基础医学院黑龙江佳木斯154007 海南医学院组织学与胚胎学教研室贝德福德大学生命科学学院生物与环境科学与技术研究所佳木斯大学附属第一医院

目的基于PTEN诱导假定激酶(PINK)1/帕金森病蛋白(Parkin)通路研究灵芝孢子对糖尿病肾病(DN)模型大鼠的肾脏细胞凋亡的影响。方法32只SPF级雄性SD大鼠(180~200 g),随机分成正常对照(NC)组、高脂高糖(HF)组、DN模型(DN)组和灵芝孢子(GLSP... 详细信息

目的基于PTEN诱导假定激酶(PINK)1/帕金森病蛋白(Parkin)通路研究灵芝孢子对糖尿病肾病(DN)模型大鼠的肾脏细胞凋亡的影响。方法32只SPF级雄性SD大鼠(180~200 g),随机分成正常对照(NC)组、高脂高糖(HF)组、DN模型(DN)组和灵芝孢子(GLSP)组。除NC组外,其余各组均采用高脂、高糖饲养,同时DN组和GLSP组均联合腹腔注射2%链脲佐菌素(STZ,50 mg/kg)。GLSP组每日灌胃给予灵芝孢子〔300 mg/(kg•d)〕持续3个月,其余组均灌胃给予等量生理盐水〔10 ml/(kg•d)〕。每周测定各组空腹血糖。12 w后评估肾脏功能,用试剂盒检测尿素氮、血清肌酐、24 h尿蛋白等生化指标。苏木素-伊红(HE)、过碘酸希未反应(PAS)和Masson染色用于检查肾脏病理学。通过TUNEL法观察大鼠肾脏组织凋亡细胞的分布及凋亡率情况。通过免疫组化检测肾脏组织中P62、B细胞淋巴瘤(Bcl)-2、Bcl-2相关X蛋白(Bax)的表达水平。Western印迹检测PINK1/Parkin通路涉及的关键蛋白PINK1、Parkin及微管相关蛋白1轻链(LC)3、P62、含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶(Caspase)3、激活型半胱氨酸天冬氨酸蛋白水解酶(Cleaved)-Caspase3、Bax、Bcl-2表达水平。结果与NC组相比,DN组尿中出现大量尿蛋白,血清肌酐及尿素氮水平明显升高(P<0.01),肾小体直径增大、肾小囊腔变小、肾小球内细胞数增多并有糖原累积、肾小球内含有大量的胶原纤维,肾组织中PINK1、Parkin、LC3的蛋白表达显著降低、P62表达显著升高,凋亡相关蛋白Caspase3、Cleaved-Caspase3表达明显升高,Bcl-2/Bax表达明显降低(P<0.01),肾脏凋亡荧光强度明显增加(P<0.01)。与DN组相比,GLSP组肾脏滤过功能明显改善(P<0.01),肾脏病理损伤缓解,肾小球体积有明显减小、肾组织胶原纤维覆盖面积明显降低、糖原明显减少;肾组织中PINK1、Parkin表达明显升高、LC3Ⅱ/LC3Ⅰ比值明显增加,P62表达明显下降,且凋亡相关蛋白Caspase3、Cleaved-Caspase3表达明显下降,Bcl-2/Bax表达明显升高(P<0.01),肾脏凋亡荧光强度明显降低(P<0.01)。结论灵芝孢子可能调控PINK1/Parkin途径,激活肾脏细胞自噬有关,抑制重要的促凋亡蛋白的表达,减轻高糖水平对肾脏的损害,抑制细胞凋亡。

关键词：灵芝孢子 PTEN诱导假定激酶(PINK)1/帕金森病蛋白(Parkin)通路糖尿病肾病自噬凋亡

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别孕烯醇酮对6-羟基多巴胺损伤的细胞系SH-SY5Y的保护作用

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解剖学报 2021年第1期52卷 5-13页

作者：王彤彤叶鑫边维陈治池杜娟娟傅维达陈梦娇李俊楠孙臣友温州医科大学基础医学院人体解剖学教研室浙江温州325035 台州职业技术学院医学与制药工程学院护理教研室浙江台州318000 温州医科大学基础医学院神经科学研究所浙江温州325035 温州医科大学基础医学院组织学胚胎学教研室浙江温州325035 温州医科大学第一临床医学院、医学影像学本科浙江温州325035

目的明确别孕烯醇酮(APα)对6-羟多巴胺(6-OHDA)损伤的SH-SY5Y细胞系的保护作用,并阐明可能的分子机制。方法向体外培养的SH-SY5Y细胞系中分别加入6-OHDA、APα、γ-氨基丁酸A受体(GABAAR)拮抗剂荷包牡丹碱(Bic)和电压门控L型Ca^(2+)通... 详细信息

目的明确别孕烯醇酮(APα)对6-羟多巴胺(6-OHDA)损伤的SH-SY5Y细胞系的保护作用,并阐明可能的分子机制。方法向体外培养的SH-SY5Y细胞系中分别加入6-OHDA、APα、γ-氨基丁酸A受体(GABAAR)拮抗剂荷包牡丹碱(Bic)和电压门控L型Ca^(2+)通道拮抗剂硝苯地平(nifedipine),采用免疫荧光细胞化学染色方法观察不同组别酪氨酸羟化酶(TH)阳性细胞的变化,Western blotting检测胞质钙调蛋白(CaM)、钙离子-钙调蛋白依赖性蛋白激酶Ⅱδ3(Ca MKⅡδ3),胞核Ca MKⅡδ3、脑源性神经营养因子(BDNF)和细胞周期蛋白依赖性激酶(CDK1)表达的变化,采用蛋白质免疫共沉淀验证Ca MKⅡδ3与CDK1/BDNF的相互作用。结果APα作用后,6-OHDA损伤的SH-SY5Y细胞TH和5-溴脱氧尿嘧啶核苷(BrdU)阳性细胞数目均明显增加,而TH/Brd U双阳性细胞数目无显著变化;同时Western blotting结果表明,SH-SY5Y细胞胞质和胞核上述蛋白的表达与单纯6-OHDA组相比也明显上升,经Bic处理后各蛋白增加更为明显。免疫共沉淀结果表明,Ca MKⅡδ3与CDK1/BDNF存在相互作用。结论APα对6-OHDA损伤的SH-SY5Y细胞的保护中,GABAAR发挥负性调控作用,通过稳定细胞的内环境达到增加TH阳性神经元数量的目的,其中Ca^(2+)-Ca M-CaMKⅡδ3信号通路和BDNF与CDK1发挥了关键作用。

关键词：别孕烯醇酮 γ-氨基丁酸A受体多巴胺能神经元钙/钙调蛋白依赖性蛋白激酶Ⅱ 脑源性神经营养因子免疫印迹法

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基于网络药理学研究方法分析天麻素有效靶点及抗血管性痴呆作用机制

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世界最新医学信息文摘（连续型电子期刊） 2024年第3期24卷 88-94页

作者：王智新闫鸣洋吴丹张海燕齐齐哈尔医学院附属第二医院黑龙江齐齐哈尔齐齐哈尔医学院基础医学院黑龙江齐齐哈尔齐齐哈尔医学院医学技术学院黑龙江齐齐哈尔齐齐哈尔医学院组织学与胚胎学教研室黑龙江齐齐哈尔

目的基于网络药理学研究方法分析天麻素有效靶点及抗血管性痴呆(VascularDementia,VD)作用机制.方法通过TCMSP数据库检索天麻素潜在靶点,运用GeneCards数据库查找VD的靶点,取交集作为天麻素抗VD的作用靶点.将上述分析得到靶点导入STR... 详细信息

目的基于网络药理学研究方法分析天麻素有效靶点及抗血管性痴呆(VascularDementia,VD)作用机制.方法通过TCMSP数据库检索天麻素潜在靶点,运用GeneCards数据库查找VD的靶点,取交集作为天麻素抗VD的作用靶点.将上述分析得到靶点导入STRING平台,获得网络关系后进行分析.利用Metascape数据库运行GO功能富集分析及KEGG通路富集分析.结果天麻素潜在的靶点69个,VD相关靶点5935个,获得44个共有靶点.PPI网络包含ESR1、CASP3、HSPA8、CCNA2、LDHB、PLAU等44个蛋白.GO富集分析结果得到20个生物过程,12个细胞组成,14个分子功能.KEGG通路富集分析后知存在信号通路12条(P<0.05),包括淀粉和蔗糖代谢、AMPK信号通路、细胞周期、氨基糖和核苷酸糖的代谢、胰岛素信号通路、雌激素信号通路、细胞衰老、代谢途径、糖酵解/糖异生、催乳素信号通路、IL-17信号通路、苯丙氨酸.结论天麻素可能通过调控代谢通路、细胞衰老和雌激素信号通路影响ESR1、CASP3等靶点基因的表达,发挥治疗VD的作用.

关键词：血管性痴呆天麻素网络药理学作用机制

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超薄切片传统液滴漂浮染色法改进

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解剖学研究 2022年第1期44卷 92-94页

作者：张向红王立言郭雨霁王富武郝晶张晓丽山东大学基础医学院实验核医学与电镜中心山东济南250012 山东大学基础医学院组织学与胚胎学教研室山东济南250012

利用传统的液滴漂浮法进行超薄切片染色,难以避免铅染液造成的污染。通过裸网捞片,我们对液滴漂浮法的操作进行改进,使超薄切片的两面同时进行染色,此方法不仅缩短了染色时间,提高了工作效率,还可以最大程度避免染液与切片及空气的接触... 详细信息

利用传统的液滴漂浮法进行超薄切片染色,难以避免铅染液造成的污染。通过裸网捞片,我们对液滴漂浮法的操作进行改进,使超薄切片的两面同时进行染色,此方法不仅缩短了染色时间,提高了工作效率,还可以最大程度避免染液与切片及空气的接触,减少了染色污染的发生机率。

关键词：透射电镜超薄切片染色

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思维导图在组织学与胚胎学教学中的应用

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基础医学教育 2021年第11期23卷 754-759页

作者：蔡佩玲黄婵张珍崔珈宁张毅豪靳光浩叶鹏成都大学基础医学院组织学与胚胎学教研室成都610106

采用思维导图法对临床医学生的组织学与胚胎学理论教学进行试验。与非思维导图班相比,思维导图班的期末及总评成绩有显著提高。期末卷面与总评成绩的相关系数接近1。性别、思维导图对期中、期末成绩有显著影响,且二者存在交互作用。思... 详细信息

采用思维导图法对临床医学生的组织学与胚胎学理论教学进行试验。与非思维导图班相比,思维导图班的期末及总评成绩有显著提高。期末卷面与总评成绩的相关系数接近1。性别、思维导图对期中、期末成绩有显著影响,且二者存在交互作用。思维导图班男生的期中、期末及总评成绩,女生的期末、总评成绩显著高于非思维导图班。思维导图法有利于提高临床医学生的组织学与胚胎学的理论教学成绩,男生对该方法效果较女生更好。

关键词：组织学与胚胎学思维导图教学改革

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增龄对大鼠缺血后肢侧支血管生长的影响

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中国组织工程研究 2021年第20期25卷 3156-3161页

作者：董丽萍罗怀青袁衡龙娟许少辉长沙医学院院士工作站长沙医学院功能核酸基础与临床湖南省重点实验室湖南省长沙市410219 长沙医学院基础医学院组织学与胚胎学教研室湖南省长沙市410219 中南大学研究生院湖南省长沙市410012

背景:以往动物实验发现,将血管生成细胞或生长因子注入实验动物可显著促进侧支血管的生长。然而,临床随机对照试验包括给予重症下肢缺血或心肌梗死患者血管生成细胞均显示没有改善缺血组织血流恢复。对比动物实验的显著效果和令人失望... 详细信息

背景:以往动物实验发现,将血管生成细胞或生长因子注入实验动物可显著促进侧支血管的生长。然而,临床随机对照试验包括给予重症下肢缺血或心肌梗死患者血管生成细胞均显示没有改善缺血组织血流恢复。对比动物实验的显著效果和令人失望的临床试验结果可能反映出一个事实,即在多数实验室研究用的是年轻动物,而缺血性心血管疾病患者大多数都是老年人。目的:利用成年和老年大鼠股动脉结扎的后肢缺血模型探讨增龄对大鼠缺血后肢侧支血管生长的影响。方法:健康成年大鼠(6月龄)和老年大鼠(20月龄)各12只,均分为假手术组和结扎组。结扎组大鼠行股动脉结扎手术建立后肢缺血模型。大鼠术后存活1周,每组3只大鼠取后肢带侧支血管的肌肉做冰冻切片用于免疫荧光组织化学染色法检测内皮型一氧化氮合酶,Ki67和基质金属蛋白酶2的表达;另外每组3只使用明胶四氧化三铅进行血管造影再用X射线拍照观察侧支血管的生长情况。结果与结论:(1)与同月龄假手术组的大鼠相比,结扎组的大鼠后肢的侧支血管数量、Ki67阳性细胞数量、内皮型一氧化氮合酶和基质金属蛋白酶2的表达也显著增强(P<0.01);(2)与成年大鼠结扎组相比,老年大鼠结扎组后肢的侧支血管数量和Ki67阳性细胞数量少(P<0.01),内皮型一氧化氮合酶和基质金属蛋白酶2的表达显著减弱(P<0.05);(3)结果证实,增龄可导致大鼠缺血后肢侧支血管生长受损。

关键词：老化侧支血管血管造影下肢缺血血管结扎因子大鼠

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正常肺上皮细胞致瘤性转化中抑癌基因的全基因组筛选及数据库验证

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陆军军医大学学报 2022年第6期44卷 503-512页

作者：赵斌瑜张俊磊王加琪阮艳张月刘恋恋蹇锐熊加祥姚忠祥陆军军医大学(第三军医大学)基础医学院生理学教研室重庆400038 陆军军医大学(第三军医大学)基础医学院组织学与胚胎学教研室重庆400038 陆军军医大学(第三军医大学)基础医学院教学实验中心重庆400038 陆军军医大学(第三军医大学)第一附属医院眼科重庆400038

目的利用CRISPR/Cas9敲除文库在人正常肺上皮细胞致瘤性转化过程中进行全基因组筛选,以发现新的人肺癌抑癌基因,并利用临床非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)样本数据库进行初步验证。方法构建稳定表达Cas9蛋白的人正常... 详细信息

目的利用CRISPR/Cas9敲除文库在人正常肺上皮细胞致瘤性转化过程中进行全基因组筛选,以发现新的人肺癌抑癌基因,并利用临床非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)样本数据库进行初步验证。方法构建稳定表达Cas9蛋白的人正常肺上皮BEAS-2B细胞系,在该细胞中感染含有77441个单链向导RNA(sgRNA)、靶向19114个人类基因的Brunello慢病毒文库,于裸鼠皮下移植。提取全瘤体细胞(Tumor)及移植前细胞(Input)的全基因组DNA,扩增sgRNA序列,建库进行深度测序。通过分析Tumor中sgRNA读数占比及Tumor与Input中sgRNA读数差异倍数的改变,筛选功能缺失后诱导BEAS-2B细胞致瘤性转化的抑癌基因,并利用公共数据平台进行初步验证。结果成功在稳定表达Cas9蛋白的BEAS-2B细胞中进行了文库感染及裸鼠皮下成瘤实验。只有感染文库的细胞在部分接种位点成瘤。测序结果显示Tumor中只检测到少数sgRNA,选取sgRNA的读数占总读数的比例>1%或有2个及以上sgRNA被显著富集的38个基因为有效的人肺癌候选抑癌基因,包括NF2、PTEN等已知抑癌基因及未在肺癌中报道过的候选抑癌基因,如AP2M1、PSENEN等。富集分析发现候选抑癌基因在Notch和Hippo信号等参与癌症发生的关键生物学通路中富集。应用临床NSCLC样本数据库证实38个候选抑癌基因在NSCLC样本中均发生了突变,其中突变率>2%的17个基因中有14个与KRAS或TP53发生共突变,3个突变与预后相关;30个基因在NSCLC样本中的表达水平与正常癌旁组织有明显差异,17个基因的表达水平与患者的预后密切相关。结论利用体内全基因组CRISPR/Cas9技术筛选出38个人肺癌候选抑癌基因,并在临床NSCLC样本数据库中得到了初步验证。

关键词：致瘤性转化 CRISPR/Cas9 抑癌基因全基因组筛选肺癌

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解剖学报 2023年第5期54卷 538-545页

作者：何可可李远迪文廷浩朱婕高杰胡蓉韩锋苏敏贵州医科大学基础医学院组织学与胚胎学教研室贵阳550025 贵州医科大学细胞工程生物医药技术国家地方联合工程实验室贵州省再生医学重点实验室中国医学科学院成体干细胞转化研究重点实验室贵阳550025 贵州医科大学转化医学研究中心贵阳550025 贵州医科大学附属医院神经外科贵阳550004

目的探讨小鼠实验性自身免疫性脑脊髓炎(EAE)模型中,外源性和内源性红细胞膜相关蛋白(ERMAP)通过白细胞介素6/信号转录及转录激活因子3(IL-6/STAT3)/维甲酸相关孤核受体γt/(ROR-γt)信号通路对辅助性T细胞17(Th17)细胞分化的影响。方... 详细信息

目的探讨小鼠实验性自身免疫性脑脊髓炎(EAE)模型中,外源性和内源性红细胞膜相关蛋白(ERMAP)通过白细胞介素6/信号转录及转录激活因子3(IL-6/STAT3)/维甲酸相关孤核受体γt/(ROR-γt)信号通路对辅助性T细胞17(Th17)细胞分化的影响。方法流式细胞术验证不同浓度ERMAP-Ig融合蛋白功能;琼脂糖凝胶电泳鉴定ERMAP基因敲除小鼠。流式细胞术检测ERMAP-Ig融合蛋白在体外对Th17细胞分化影响。40只6周龄普通C57BL/6小鼠随机分为2组建立EAE模型:对照(control)-Ig和ERMAP-Ig组,每组20只;记录临床评分;流式细胞术检测EAE小鼠体内Th17细胞分化情况。40只6周龄已鉴定的野生型和ERMAP基因敲除小鼠分为2组建立EAE模型:ERMAP^(+/+)和ERMAP^(-/-)组,每组20只。记录临床评分;脊髓HE和固蓝(LFB)染色并进行组织学半定量评分。流式细胞术检测IL-17A+CD4+T细胞百分比;Western blotting检测IL-6、白细胞介素17(IL-17)、STAT3、磷酸化STAT3(p-STAT3)、ROR-γt蛋白水平表达;Real-time PCR检测IL-17、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、IL-6、STAT3和ROR-γt的mRNA表达;ELISA检测细胞水平IL-17和TNF-α的表达。结果1.外源性ERMAP-Ig融合蛋白抑制体内外Th17细胞分化且减轻小鼠EAE症状。2.与对照组相比,ERMAP^(-/-)组EAE小鼠炎性浸润和脱髓鞘症状加重,Th17分泌IL-17A增加。3.内源性ERMAP基因敲除后,IL-17、TNF-α、IL-6、STAT3及ROR-γt表达均增加。差异均有统计学意义(P<0.05)。结论ERMAP可能通过IL-6/STAT3/ROR-γt信号通路调控Th17细胞分化,参与小鼠EAE发生发展。

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