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中国人兽共患病学报 2025年

作者：董梦娟常宇骁宁唤唤路延之康健徐铭泽代婷李嘉玲郝乐冉张琳娜柏银兰宁夏医科大学基础医学院生理学和神经生物学系空军军医大学基础医学院微生物与病原生物学教研室空军军医大学军事医学创新中心延安大学生命科学学院

目的研究c-di-AMP为佐剂的重组卡介苗（rBCG）调节小鼠附睾白色脂肪（eWAT）代谢及免疫的作用及机制。方法SPF级雄性C57BL/6小鼠经静脉免疫卡介苗（BCG）和重组卡介苗（rBCG），监测小鼠体重变化。分离并称重小鼠eWAT重量，血球仪计血... 详细信息

目的研究c-di-AMP为佐剂的重组卡介苗（rBCG）调节小鼠附睾白色脂肪（eWAT）代谢及免疫的作用及机制。方法SPF级雄性C57BL/6小鼠经静脉免疫卡介苗（BCG）和重组卡介苗（rBCG），监测小鼠体重变化。分离并称重小鼠eWAT重量，血球仪计血管基质成分（SVFs）数量。制备小鼠脂肪组织切片，HE染色后显微镜下观察和比较各组小鼠eWAT脂肪细胞大小、数量和形态以及冠状结构（CLS）形成等变化。qRT-PCR检测各组小鼠脂肪代谢相关因子、细胞因子和衰老相关基因的转录水平。结果BCG和rBCG免疫小鼠体重随时间逐渐增加，rBCG免疫诱导eWAT比重增加，SVFs数量降低。HE染色结果显示，BCG免疫促进eWAT脂肪细胞增生和rBCG免疫促进脂肪细胞肥大，BCG和rBCG免疫均可诱导eWAT中CLS形成。qRT-PCR检测结果显示，rBCG免疫可抑制eWAT脂肪分解和能量消耗相关基因表达。BCG免疫对细胞因子转录作用影响不大，而rBCG显著诱导IFN-γ和IL-1Ra，抑制IL-15和IL-2的转录，但不诱导衰老相关基因的表达。结论 rBCG免疫可诱导eWAT脂肪细胞肥大，其机制与抑制eWAT脂肪分解及调节细胞因子表达有关。

关键词：卡介苗重组卡介苗环二腺苷酸白色脂肪脂肪代谢细胞因子

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结核分枝杆菌c-di-AMP磷酸二酯酶的重组腺病毒的构建及其诱导的体液免疫应答

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中国人兽共患病学报 2025年

作者：胡家豪宁唤唤董梦娟路延之代婷张从玥徐子晴王姝予周正言柏银兰空军军医大学基础医学院微生物与病原生物学教研室空军军医大学基础医学院学员队空军军医大学军事医学创新中心宁夏医科大学基础医学院生理学和神经生物学系延安大学生命科学学院

目的构建表达结核分枝杆菌（Mtb）c-di-AMP磷酸二酯酶CnpB的重组腺病毒（rAd）并检测其诱导的体液免疫应答。方法经密码子优化的MtbCnpB编码基因克隆入质粒pcADV，获得的重组质粒pcADV-CnpB转染HEK293T细胞，并用Westernblot鉴定表达... 详细信息

目的构建表达结核分枝杆菌（Mtb）c-di-AMP磷酸二酯酶CnpB的重组腺病毒（rAd）并检测其诱导的体液免疫应答。方法经密码子优化的MtbCnpB编码基因克隆入质粒pcADV，获得的重组质粒pcADV-CnpB转染HEK293T细胞，并用Westernblot鉴定表达。重组pcADV-CnpB与骨架质粒共转染HEK293T细胞包装获得重组腺病毒rAd-CnpB，以HEK293T细胞扩增rAd-CnpB，Westernblot和免疫荧光检测rAd-CnpB表达目的蛋白。以rAd-CnpB滴鼻免疫小鼠，收集小鼠血清与肺泡灌洗液（BALF），ELISA检测抗原特异性抗体水平。结果酶切和测序鉴定表明重组质粒pcADV-CnpB构建成功，该质粒能够在真核细胞中表达。在HEK293T细胞内包装并获得rAd-CnpB，大量扩增并纯化获得滴度为5.53×1010PFU/mL的rAd-CnpB。rAd-CnpB可在HEK293T细胞中表达目的蛋白CnpB。rAd-CnpB滴鼻免疫小鼠，可诱导BALF中CnpB特异性IgG与分泌型IgA水平的增加，同时诱导血清中产生高水平的CnpB特异性IgG。结论成功构建表达Mtb c-di-AMP磷酸二酯酶CnpB的重组腺病毒rAd-CnpB，并且rAd-CnpB经黏膜免疫可诱导抗原特异性体液免疫与黏膜免疫应答，可用于结核病新疫苗策略的研究。

关键词：结核分枝杆菌重组腺病毒 c-di-AMP 磷酸二酯酶黏膜免疫

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结核分枝杆菌磷酸二酯酶重组腺病毒黏膜免疫诱导的免疫应答特点

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细胞与分子免疫学杂志 2025年第1期41卷 1-8页

作者：代婷路延之赵瑞华宁唤唤康健郝乐冉李嘉玲常宇骁柏银兰延安大学生命科学学院陕西延安716000 空军军医大学基础医学院微生物与病原生物学教研室陕西西安710032 空军军医大学军事医学创新中心陕西西安710032 宁夏医科大学基础医学院生理学和神经生物学系宁夏银川750001

目的结核分枝杆菌(Mtb)耐药菌株的流行加剧了结核病(TB)的全球负担,凸显了对新的TB治疗策略的需求。方法表达环二腺苷酸(c-di-AMP)分解酶磷酸二酯酶B(CnpB)的重组腺病毒疫苗(rAd-CnpB)经黏膜免疫正常小鼠,单独或联合药物免疫治疗Mtb呼... 详细信息

目的结核分枝杆菌(Mtb)耐药菌株的流行加剧了结核病(TB)的全球负担,凸显了对新的TB治疗策略的需求。方法表达环二腺苷酸(c-di-AMP)分解酶磷酸二酯酶B(CnpB)的重组腺病毒疫苗(rAd-CnpB)经黏膜免疫正常小鼠,单独或联合药物免疫治疗Mtb呼吸道感染小鼠。ELISA检测小鼠血清及肺泡灌洗液(BALF)抗体水平,实时定量PCR检测小鼠肺组织中细胞因子γ干扰素(IFN-γ)、白细胞介素10(IL-10)转录水平,流式细胞术检测肺、脾CD4^(+)、CD8^(+)T细胞亚群细胞比例,ELISA检测脾细胞抗原刺激后的细胞因子IFN-γ、IL-2、IL-10、炎症因子IL-6、肿瘤坏死因子α(TNF-α)分泌水平,平板计数法计数Mtb感染小鼠肺、脾的荷菌数。结果rAd-CnpB滴鼻免疫可诱导小鼠血清高滴度的IgG,以及BALF中IgG和IgA产生,肺、脾T淋巴细胞亚群改变。rAd-CnpB单独或联合药物治疗Mtb感染小鼠可诱导血清IgG水平、BALF中IgA和IgG水平显著增高,rAd-CnpB免疫促进Mtb感染小鼠的脾细胞CnpB抗原特异性的细胞因子和炎症因子分泌。rAd-CnpB单独或联合药物免疫治疗并不显著影响Mtb呼吸道感染小鼠肺、脾荷菌数。结论rAd-CnpB经黏膜免疫可诱导小鼠显著的黏膜、体液免疫反应,并显著增强Mtb感染小鼠中CnpB特异性细胞免疫应答。

关键词：结核分枝杆菌(Mtb) 环核苷酸磷酸二酯酶B(CnpB) 重组腺病毒免疫治疗

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刺激室旁核及加压素对大鼠胃缺血-再灌注损伤的保护作用

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生理学报 2002年第2期54卷 133-138页

作者：张建福张咏梅阎长栋周秀萍祁友键徐州医学院生理学教研室神经生物学教研室徐州221002 徐州医学院生理学教研室徐州医学院神经生物学教研室徐州221002

采用夹闭大鼠腹腔动脉 30min ,松开动脉夹血流复灌 1h的胃缺血再灌注损伤 (gastricischemia reperfu sioninjury ,GI RI)模型 ,观察了电或化学刺激室旁核 (paraventricularnucleus,PVN)及外源性加压素 (arginine vasopres sion ,AVP)对GI RI的影响 ,并对PVN的调控通路进行了初步分析。结果表明 :电或化学刺激PVN后 ,GI RI显著减轻 ;损毁双侧孤束核 (nucleustractussolitarius,NTS)或一侧NTS内注射AVP V1受体阻断剂 ,均能取消电刺激PVN对GI RI的效应 ;去除脑垂体后不影响PVN的作用 ;切断膈下迷走神经或切除腹腔交感神经节 ,则能加强电刺激PVN对GI RI的影响 ;PVN内注射不同剂量的AVP同样能减轻大鼠GI RI损伤。结果提示 :PVN及AVP对大鼠GI RI具有保护作用 ;PVN的这种作用可能是因电或化学刺激后 ,激活了其中的加压素能神经元 ,经其下行投射纤维释放AVP作用于NTS神经元的AVP V1受体 ,并通过迷走和交感神经介导 ,从而影响GI RI;而似与PVN

关键词：刺激室旁核加压素大鼠胃缺血-再灌注损伤保护作用孤束核脑垂体

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Beclin-1 shRNA对低氧诱导的SH-SY5Y细胞自噬的影响

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中国应用生理学杂志 2018年第5期34卷 464-469页

作者：卢娜李成长罗晓秋杨坤丽新乡医学院生理学与神经生物学教研室河南新乡453003

目的:构建Beclin-1基因短发夹干扰RNA(shRNA)慢病毒载体,感染人SH-SY5Y细胞,观察沉默Beclin-1基因后低氧对SH-SY5Y细胞自噬的影响。方法:构建特异性靶向Beclin-1基因的shRNA慢病毒表达载体和阴性对照序列慢病毒载体;再将载体转染入SH-S... 详细信息

目的:构建Beclin-1基因短发夹干扰RNA(shRNA)慢病毒载体,感染人SH-SY5Y细胞,观察沉默Beclin-1基因后低氧对SH-SY5Y细胞自噬的影响。方法:构建特异性靶向Beclin-1基因的shRNA慢病毒表达载体和阴性对照序列慢病毒载体;再将载体转染入SH-SY5Y细胞; RT-PCR检测Beclin-1的mRNA表达; Western blot检测Beclin-1蛋白表达; CCK-8法测定Beclin-1 shRNA对SH-SY5Y细胞活力的影响。再将空白对照、阴性对照、转染型三种细胞分别以21%常氧及5%低氧培养,Western blot检测各组细胞LC3蛋白表达;电镜观察自噬小体。结果:Beclin-1 shRNA能明显抑制SH-SY5Y细胞Beclin-1的mRNA及蛋白的表达;沉默Beclin-1基因后,Beclin-1 shRNA组细胞存活率与阴性对照组相比无差异;成功建立了稳定表达Beclin-1 shRNA的SH-SY5Y细胞。5%低氧处理后,与阴性对照组相比较,Beclin-1 shRNA组细胞中LC3Ⅱ/LC3Ⅰ比值下调,细胞内自噬小体数量减少。结论:慢病毒介导的Beclin-1shRNA对SH-SY5Y细胞的活力无影响,但可以抑制低氧诱导的自噬。

关键词： SH-SY5Y Beclin-1 自噬短发夹RNA

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大鼠新生期注射谷氨酸单钠成年后应激时的镇痛效应和血浆皮质酮反应

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生理学报 1994年第2期46卷 193-197页

作者：陈起亮李金华刘惠慈顾风印其章苏州医学院生理学教研室神经生物学研究室

在大鼠新生期注射谷氨酸单钠（ＭＳＧ），观察动物成年后应激时的镇痛效应和血浆皮质酮反应。以新生期注射１０％ＮａＣｌ作为等渗对照。ＭＳＧ组大鼠下丘脑弓状核（ＡＲＣ）的β－内啡肽（βＥＮＤ）免疫反应细胞减少６０．７％，痛阈... 详细信息

在大鼠新生期注射谷氨酸单钠（ＭＳＧ），观察动物成年后应激时的镇痛效应和血浆皮质酮反应。以新生期注射１０％ＮａＣｌ作为等渗对照。ＭＳＧ组大鼠下丘脑弓状核（ＡＲＣ）的β－内啡肽（βＥＮＤ）免疫反应细胞减少６０．７％，痛阈和血浆皮质酮的基础值未受影响。在不可躲避的持续电刺激四肢脚底３０ｍｉｎ后，ＭＳＧ组动物应激镇痛效应明显降低，但应激仍可使血浆皮质酮水平明显升高（Ｐ＜０．０１）。实验结果提示，ＡＲＣ的β－ＥＮＤ能神经元参与应激镇痛，而对垂体－肾上腺皮质系统应激的血浆皮质酮反应影响不大。

关键词：谷氨酸单钠应激镇痛血浆皮质酮

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Janus激酶3通过影响钙池操纵性钙通道促进乳腺癌细胞的迁移

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生理学报 2019年第6期71卷 874-882页

作者：刘夏魏婷高招娣赵修粱吴慧晴严静济宁医学院基础医学院生理学教研室新乡医学院基础医学院生理学与神经生物学教研室

本研旨在探讨Janus激酶3 (JAK3)对乳腺癌细胞迁移能力的影响以及其作用机制。利用si RNA (si JAK3)沉默乳腺癌MCF-7细胞JAK3的表达,用划痕实验检测细胞迁移能力,用荧光钙成像技术检测钙池操纵性钙通道(store-operatedcalcium channel,SO... 详细信息

本研旨在探讨Janus激酶3 (JAK3)对乳腺癌细胞迁移能力的影响以及其作用机制。利用si RNA (si JAK3)沉默乳腺癌MCF-7细胞JAK3的表达,用划痕实验检测细胞迁移能力,用荧光钙成像技术检测钙池操纵性钙通道(store-operatedcalcium channel,SOCC)活性,用Westernblot和RT-PCR检测钙池操纵性钙内流(store-operatedcalciumentry,SOCE)过程中的重要分子Orai1和STIM1表达水平。结果显示,SOCC抑制剂2-APB对MCF-7细胞的迁移能力有抑制作用。si JAK3转染可显著抑制MCF-7细胞的迁移能力,降低SOCC活性,下调Orai1和STIM1的m RNA和蛋白表达水平。在JAK3沉默细胞中过表达Orai1或STIM1,可使MCF-7细胞迁移力恢复。上述结果提示,JAK3通过影响SOCC促进乳腺癌细胞的迁移。

关键词： Ca2+ 钙池操纵性钙内流 Orai1 Janus激酶3

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孕酮对脑缺氧缺血新生鼠海马葡萄糖转运蛋白表达的影响

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中国应用生理学杂志 2008年第3期24卷 353-355,I0003页

作者：李东亮韩华新乡医学院生理学与神经生物学教研室河南新乡453003

目的:观察新生大鼠缺氧缺血后脑内葡萄糖转运蛋白1(GLUT1)和葡萄糖转运蛋白3(GLUT3)的表达情况以及孕酮对其的影响。方法:新生SD大鼠40只,随机分成4组:正常组、假手术组、缺氧缺血组和孕酮组。建立新生鼠缺氧缺血性脑病模型,免疫组化方... 详细信息

目的:观察新生大鼠缺氧缺血后脑内葡萄糖转运蛋白1(GLUT1)和葡萄糖转运蛋白3(GLUT3)的表达情况以及孕酮对其的影响。方法:新生SD大鼠40只,随机分成4组:正常组、假手术组、缺氧缺血组和孕酮组。建立新生鼠缺氧缺血性脑病模型,免疫组化方法检测新生大鼠海马部位GLUT1及GLUT3的表达。结果:正常组和假手术组新生大鼠海马可见少量GLUT1和GLUT3的表达,两组间无显著差异(P>0.05);缺氧缺血组GLUT1和GLUT3表达均明显高于假手术组(P<0.05);孕酮组GLUT的表达不仅明显高于假手术组(P<0.01),而且明显高于缺氧缺血组(P<0.05)。结论:孕酮通过上调GLUT1和GLUT3的表达以维持脑组织的能量供给,增强神经元对缺氧缺血的耐受性。

关键词：孕酮缺氧缺血性脑病葡萄糖转运蛋白新生鼠

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杏仁核谷氨酸受体对创伤后应激障碍模型大鼠心血管功能的作用

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生理学报 2023年第5期75卷 611-622页

作者：吴亚洋蔡坤宜吴雨洁郑超汪萌芽张环环皖南医学院心理生理学研究室芜湖241002 皖南医学院细胞电生理研究室芜湖241002 皖南医学院神经生物学研究室芜湖241002

创伤后应激障碍(post-traumatic stress disorder,PTSD)会增加心血管疾病患病率,而杏仁核在调控心血管功能中发挥重要作用。本研究旨在探究PTSD模型大鼠杏仁核谷氨酸受体对心血管活动的调节作用。采用电刺激与单次延长应激相结合的复合... 详细信息

创伤后应激障碍(post-traumatic stress disorder,PTSD)会增加心血管疾病患病率,而杏仁核在调控心血管功能中发挥重要作用。本研究旨在探究PTSD模型大鼠杏仁核谷氨酸受体对心血管活动的调节作用。采用电刺激与单次延长应激相结合的复合应激方法制备PTSD模型,通过分析造模前后体重变化差异以及高架十字迷宫实验进行模型检测。用荧光金(FluoroGold,FG)逆行示踪技术观察逆行标记神经元分布。用Western blot检测杏仁核谷氨酸受体含量变化。分别在PTSD大鼠中央杏仁核(the central nucleus of the amygdala,CeA)微量注射人工脑脊液、非选择性谷氨酸受体阻断剂KYN、AMPA受体阻断剂CNQX,用在体多通道同步记录技术观察注射药物后各项指标的变化。结果显示,PTSD组大鼠体重增长明显小于对照组(P<0.01),开放臂停留时间占比明显降低(P<0.05)。在延髓头端腹外侧区(rostral ventrolateral medulla,RVLM)注射FG后,在CeA内观察到逆行标记神经元。PTSD组杏仁核AMPA受体含量低于对照组(P<0.05),CeA注射ACSF后,PTSD大鼠RVLM神经元放电频率、心率并无明显变化(P>0.05),而注射KYN或CNQX后,PTSD大鼠RVLM神经元放电频率、心率均加快(P<0.05)。以上结果提示,杏仁核AMPA受体可能通过抑制性通路参与PTSD大鼠心血管活动调节。

关键词：创伤后应激障碍杏仁核延髓头端腹外侧区谷氨酸受体心血管功能

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孕酮对缺氧缺血性脑损伤新生大鼠血脑屏障通透性及脑水肿的影响

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中国药理学通报 2011年第3期27卷 364-367页

作者：李新娟李爽李东亮新乡医学院生理学与神经生物学教研室河南新乡453003

目的研究孕酮(PROG)对缺氧缺血性脑损伤(HIBD)新生大鼠血脑屏障(BBB)通透性和脑水肿的作用,并进一步探讨其潜在的机制。方法 7 d龄SD大鼠96只,随机分成4组:正常组、假手术组、缺氧缺血(HI)组和PROG组。建立HIBD动物模型,HI后24 h,伊文... 详细信息

目的研究孕酮(PROG)对缺氧缺血性脑损伤(HIBD)新生大鼠血脑屏障(BBB)通透性和脑水肿的作用,并进一步探讨其潜在的机制。方法 7 d龄SD大鼠96只,随机分成4组:正常组、假手术组、缺氧缺血(HI)组和PROG组。建立HIBD动物模型,HI后24 h,伊文思蓝示踪剂检测BBB;干/湿法测定脑含水量;免疫组织化学法观察大脑皮质水孔通道蛋白4(AQP4)表达。结果正常组和假手术组BBB通透性、脑含水量和脑皮质AQP4的表达差异无显著性(P>0.05);HI组BBB通透性、脑含水量和脑皮质AQP4的表达明显高于假手术组(P<0.01);PROG组BBB通透性、脑含水量和脑皮质AQP4的表达明显低于HI组(P<0.05)。结论 PROG通过减轻BBB破坏和脑水肿对HIBD新生大鼠起脑保护作用,PROG的脑保护作用可能与下调新生大鼠脑皮质AQP4的表达有关。

关键词：孕酮缺氧缺血血脑屏障脑水肿水通道蛋白大鼠

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