检索结果-内蒙古大学图书馆

植物研究 2020年第6期40卷 886-896页

作者：赵历强单春苗张声祥施圆圆马克龙吴家文安徽中医药大学研究生院合肥230012 安徽中医药大学科研实验中心、新安医学教育部重点实验室合肥230038 安徽中医药大学中西医结合学院合肥230012 安徽道地中药材品质提升协同创新中心合肥230012 安徽省中医药科学院合肥230012

为进一步理解细风轮花青素合成途径,本研究利用华大基因BGISEQ-500平台对细风轮中的根、茎、叶、花4个组织进行了转录组测序,从头组装后得到128856个Unigene。KEGG通路表明有40个Unigene编码了细风轮的花青素生物合成途径中6个关键酶。... 详细信息

为进一步理解细风轮花青素合成途径,本研究利用华大基因BGISEQ-500平台对细风轮中的根、茎、叶、花4个组织进行了转录组测序,从头组装后得到128856个Unigene。KEGG通路表明有40个Unigene编码了细风轮的花青素生物合成途径中6个关键酶。我们对其中的关键酶DFR(二氢黄酮醇还原酶)进行同源比对和空间结构模拟,结果显示DFR序列和结构均具有良好的保守性,且具有高度保守的NAD+结合位点,其二级结构主要由α螺旋和β折叠组成,在空间上α螺旋包裹着β折叠,形成“夹心饼干”样结构。

关键词：细风轮花青素转录组单基因二氢黄酮醇还原酶

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基于转录组测序的牛蒡木质素类物质生物合成途径及关键酶基因分析

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中草药 2020年第16期51卷 4300-4307页

作者：魏俊雯张声祥施圆圆单春苗马克龙吴家文安徽中医药大学中西医结合临床学院安徽合肥230012 安徽中医药大学科研实验中心、新安医学教育部重点实验室安徽合肥230038 安徽道地中药材品质提升协同创新中心安徽合肥230012 安徽中医药大学研究生院安徽合肥230012 安徽省中医药科学院安徽合肥230012

目的获得牛蒡Arctiumlappa根功能基因数据库,分析其木质素类化合物生物合成途径及关键酶基因。方法以牛蒡根为研究对象,利用华大基因BGISEQ-500测序平台进行转录组测序,通过从头组装获得Unigene,利用各种已有的核酸和蛋白质数据库对Unig... 详细信息

目的获得牛蒡Arctiumlappa根功能基因数据库,分析其木质素类化合物生物合成途径及关键酶基因。方法以牛蒡根为研究对象,利用华大基因BGISEQ-500测序平台进行转录组测序,通过从头组装获得Unigene,利用各种已有的核酸和蛋白质数据库对Unigene进行注释和分类,利用KEGG代谢途径分析木质素生物合成途径及其关键酶基因,利用三维同源建模分析苯丙氨酸解氨酶(AlPAL)的结构特点。结果通过转录组测序共获得54 215个Unigene,其中42 003个Unigene被任一数据库注释,1 668个Unigene被注释到54个转录因子家族中;KEGG途径分析鉴定了423个Unigene参与了木质素的生物合成。AlPAL空间结构模型显示其为同型四聚体,每个单体由3个结构域组成,包括4-甲基-咪唑-5-酮(MIO)结构域、核心结构域和屏蔽结构域,其中MIO结构域包含保守的三肽ASG,构成AlPAL酶的催化活性中心。结论对牛蒡根转录组进行分析,为牛蒡功能基因鉴定、次生代谢途径解析及其调控机制研究奠定了实验基础。

关键词：牛蒡转录组测序木质素功能基因苯丙氨酸解氨酶

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新藤黄酸抑制人肝癌细胞BEL-7402自噬作用研究

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安徽中医药大学学报 2020年第3期39卷 46-50页

作者：展凡王玉涵王萌郑凤苏婧婧程卉李庆林安徽中医药大学科研实验中心新安医学教育部重点实验室安徽合肥230038

目的观察新藤黄酸(gambogenic acid,GNA)对人肝癌细胞BEL-7402自噬的影响,为GNA抗肿瘤研究提供理论依据。方法体外培养人肝癌BEL-7402细胞株,采用MTT法检测GNA对人肝癌细胞BEL-7402存活率的影响;倒置显微镜观察给药前后细胞形态变化;单... 详细信息

目的观察新藤黄酸(gambogenic acid,GNA)对人肝癌细胞BEL-7402自噬的影响,为GNA抗肿瘤研究提供理论依据。方法体外培养人肝癌BEL-7402细胞株,采用MTT法检测GNA对人肝癌细胞BEL-7402存活率的影响;倒置显微镜观察给药前后细胞形态变化;单丹磺酰尸胺(monodansylcadaverine,MDC)染色,荧光显微镜观察细胞自噬小体;透射电子显微镜进一步观察自噬小体;Western blot法检测自噬相关蛋白微管相关蛋白1轻链3(microtubule associated protein 1light chain 3,LC3)和p62、Beclin1的表达水平及加入自噬诱导剂雷帕霉素(rapamycin,Rap)和自噬抑制剂氯喹(chloroquine,CQ)后自噬相关蛋白的表达情况。结果 GNA能显著抑制人肝癌细胞BEL-7402的增殖并呈时效及量效关系;倒置显微镜观察结果显示GNA组细胞随药物浓度增大,细胞悬浮增多,高浓度给药组细胞出现碎片化;荧光显微镜下观察结果显示,随药物浓度的增加,荧光点状聚集增多;透射电子显微镜观察发现,随GNA浓度的增加,细胞内自噬空泡数量增多,与对照组比较,加入自噬诱导剂Rap后,自噬空泡数量显著增多;Western blot法检测结果显示,随GNA浓度的增加,Beclin1、p62、LC3-Ⅱ蛋白表达水平均增加(P<0.05),LC3-Ⅰ无明显变化,表明BEL-7402细胞自噬前期被激活,后期进程被抑制。结论 GNA能抑制人肝癌细胞BEL-7402的增殖,其机制可能部分是通过抑制自噬后期自噬体与溶酶体的融合,抑制人肝癌BEL-7402细胞的保护性自噬。

关键词：新藤黄酸肝癌 BEL-7402细胞细胞自噬

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吡拉格雷钠对脑缺血再灌注损伤模型大鼠神经功能的改善作用及机制研究

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中国药房 2019年第7期30卷 889-895页

作者：孙翔李庆林安徽中医药大学科研实验中心/新安医学教育部重点实验室合肥230038

目的:研究吡拉格雷钠对脑缺血再灌注损伤模型大鼠神经功能的改善作用及相关机制。方法:将72只SD大鼠随机分为假手术组、模型组、阳性对照组(地佐环平0.8 mg/kg)和吡拉格雷钠低、中、高剂量组(20、30、45 mg/kg),每组12只。除假手术组大... 详细信息

目的:研究吡拉格雷钠对脑缺血再灌注损伤模型大鼠神经功能的改善作用及相关机制。方法:将72只SD大鼠随机分为假手术组、模型组、阳性对照组(地佐环平0.8 mg/kg)和吡拉格雷钠低、中、高剂量组(20、30、45 mg/kg),每组12只。除假手术组大鼠行假手术外,其余各组大鼠均采用大脑中动脉结扎诱导脑缺血再灌注损伤模型。术后2 h尾静脉注射相应药物,假手术组和模型组大鼠注射等量生理盐水,连续给药6 d,给药间隔均为24 h。再灌注24 h和末次给药后,评估大鼠的神经功能缺陷评分和姿势反射评分,采用微正电子发射断层扫描评估脑损伤情况(包括全脑、岛状皮层、壳核、纹状体、体细胞皮层、杏仁核、运动皮层)。然后处死大鼠,2,3,5-氯化三苯基四氮唑(TTC)染色后观察脑梗死情况并计算脑梗死体积,酶联免疫吸附试验检测其脑组织中Na^+-K^+-ATP酶、Ca^(2+)-ATP酶活性和谷氨酸(Glu)含量。结果:与假手术组比较,模型组大鼠缺血再灌注后24 h和末次给药后的神经功能缺陷评分、姿势反射评分均明显升高(P<0.05或P<0.01),脑缺血再灌注24 h与末次给药后脑组织的SUV、全脑及各不同脑区的右左脑SUV比值均明显降低(P<0.01);末次给药后脑梗死体积百分数明显升高(P<0.01),脑组织中Na^+-K^+-ATP酶和Ca^(2+)-ATP酶活性明显降低(P<0.01),Glu含量明显升高(P<0.01)。与模型组比较,吡拉格雷钠低、中、高剂量组和阳性对照组大鼠上述指标均明显改善(P<0.05或P<0.01)。结论:吡拉格雷钠对大鼠脑缺血再灌注损伤和神经功能有改善作用,这可能与上调脑组织中Na^+-K^+-ATP酶和Ca^(2+)-ATP酶活性和下调Glu含量有关。

关键词：吡拉格雷钠脑缺血再灌注损伤神经功能大鼠机制

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表儿茶素对四氯化碳诱导肝纤维化大鼠的干预作用

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安徽中医药大学学报 2020年第1期39卷 50-55页

作者：王玉涵展凡程卉郑凤谢忠稳李庆林安徽中医药大学科研实验中心新安医学教育部重点实验室安徽合肥230038 安徽农业大学茶树生物资源与利用国家重点实验室安徽合肥230031

目的研究表儿茶素对四氯化碳诱导大鼠肝纤维化的保护作用。方法将80只雄性SD大鼠随机分为正常对照组、模型组、秋水仙碱组(0.1mg/kg)、表儿茶素高剂量组(100mg/kg)、表儿茶素低剂量组(25mg/kg)。除正常对照组腹腔注射橄榄油外,其余各组... 详细信息

目的研究表儿茶素对四氯化碳诱导大鼠肝纤维化的保护作用。方法将80只雄性SD大鼠随机分为正常对照组、模型组、秋水仙碱组(0.1mg/kg)、表儿茶素高剂量组(100mg/kg)、表儿茶素低剂量组(25mg/kg)。除正常对照组腹腔注射橄榄油外,其余各组均腹腔注射四氯化碳(CCl4)建立肝纤维化模型。复制模型的同时开始给药,各给药组大鼠灌胃相应药物,正常对照组和模型组大鼠灌胃等容积生理盐水,每日1次,连续6周。末次给药后,称取肝湿质量,计算肝脏指数;采用微板法检测大鼠血清中天冬氨酸氨基转移酶(aspartate aminotransferase,AST)、丙氨酸氨基转移酶(alanine aminotransferase,ALT)水平;苏木精-伊红染色和Masson胶原染色观察肝脏病理学变化;Western blot法检测肝脏中平滑肌肌动蛋白(alpha smooth muscle actin,α-SMA)、Ⅰ型胶原(typeⅠcollagen,collα1)蛋白的表达水平。结果与模型组相比,表儿茶素能显著降低大鼠的肝脏指数和血清ALT、AST的含量;显著降低肝组织中α-SMA、collα1蛋白的表达;肝组织病理学指标明显改善。结论表儿茶素对四氯化碳诱导的大鼠肝纤维化有一定的保护作用,其机制可能与抑制α-SMA、collα1的表达有关。

关键词：表儿茶素肝纤维化平滑肌肌动蛋白 Ⅰ型胶原

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辽宁中医药大学学报 2020年第7期22卷 44-47页

作者：王堃黄日龙吴生兵蔡荣林邹国蓉周美启安徽中医药大学新安医学教育部重点实验室安徽合肥230038 安徽中医药大学科研实验中心安徽合肥230038 安徽中医药大学第一附属医院安徽合肥230031 安徽中医药大学亳州中医药研究所安徽亳州236800

目的观察电针内关预处理对心肌缺血(AMI)大鼠心肌自噬相关蛋白的影响。方法大鼠随机分成伪手术组、模型组、电针预处理组;构建AMI大鼠模型,造模前电针刺激14 d,刺激电流1 mA,频率为2 Hz,30 min/d。运用PowerLab 16导生理记录仪记录分析... 详细信息

目的观察电针内关预处理对心肌缺血(AMI)大鼠心肌自噬相关蛋白的影响。方法大鼠随机分成伪手术组、模型组、电针预处理组;构建AMI大鼠模型,造模前电针刺激14 d,刺激电流1 mA,频率为2 Hz,30 min/d。运用PowerLab 16导生理记录仪记录分析各组大鼠心电图,Western Blot检测心肌组织微管相关蛋白轻链3Ⅰ(LC3Ⅰ)、微管相关蛋白轻链3Ⅱ(LC3Ⅱ)、Beclin 1基因(Beclin 1)、缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)水平,PCR检测LC3ⅠmRNA、LC3ⅡmRNA、Beclin 1 mRNA、HIF-1ɑmRNA。结果与伪手术组比较,模型组LC3Ⅱ、Beclin 1蛋白及mRNA表达水平升高,LC3Ⅱ/LC3Ⅰ比值上升(P<0.01),LC3Ⅰ、HIF-1α蛋白及mRNA表达水平显著下降(P<0.01);与模型组相比,电针组LC3Ⅱ、Beclin 1蛋白及mRNA表达水平明显下降,LC3Ⅱ/LC3Ⅰ比值降低(P<0.01),LC3Ⅰ、HIF-1α蛋白及mRNA水平升高(P<0.01)。结论针刺预处理对AMI大鼠心肌保护作用可能与下调LC3Ⅱ、Beclin 1及LC3Ⅱ/LC3Ⅰ比值,上调LC3Ⅰ、HIF-1α表达有关。

关键词：电针预处理心肌缺血 LC3Ⅰ LC3Ⅱ Beclin 1

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异叶天南星查尔酮合成酶和异构酶基因的克隆及蛋白的结构性质分析

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中国中药杂志 2019年第9期44卷 1799-1807页

作者：张声祥施圆圆王晨凯赵德蕊杨青山马克龙吴家文安徽中医药大学研究生院安徽合肥230012 安徽中医药大学科研实验中心新安医学教育部重点实验室安徽合肥230038 安徽中医药大学药学院安徽合肥230012 安徽道地中药材品质提升协同创新中心安徽合肥230012 安徽省中医药科学院安徽合肥230012 安徽中医药大学中西医结合学院安徽合肥230012

查尔酮合成酶(CHS)和查尔酮异构酶(CHI)是黄酮类物质生物合成途径中的关键酶,该研究从中药异叶天南星(Arisaema heterophyllum Blume,Ah)转录组数据库中筛选出查尔酮合成酶基因(Ah CHS)和查尔酮异构酶基因(Ah CHI),利用RT-PCR技术克隆... 详细信息

查尔酮合成酶(CHS)和查尔酮异构酶(CHI)是黄酮类物质生物合成途径中的关键酶,该研究从中药异叶天南星(Arisaema heterophyllum Blume,Ah)转录组数据库中筛选出查尔酮合成酶基因(Ah CHS)和查尔酮异构酶基因(Ah CHI),利用RT-PCR技术克隆了它们的开放阅读框(ORF)部分,并对其编码蛋白Ah CHS和Ah CHI的理化性质、表达及结构特点进行分析。Ah CHS的ORF长度为1 176 bp,编码392个氨基酸的蛋白质;而Ah CHI的ORF长度为630 bp,编码蛋白含209个氨基酸。Ah CHS作为对称同二聚体,N端螺旋互相交换,每个单体由2个亚结构域组成,位于2个亚结构域之间交界处的4个保守的氨基酸残基构成了酶的活性中心; Ah CHI的三级结构采用了开放的β-三明治褶皱,1个大的β折叠片层(β4～β11)和1个α螺旋片层(α1～α7)组成其核心结构,其中β4,β5,α4和α6在不同物种间高度保守,部分疏水氨基酸形成了酶的活性位点。系统进化树分析发现Ah CHS与火鹤花CHS亲缘关系最近;而Ah CHI与紫牡丹CHI亲缘关系最近。表达分析表明编码Ah CHS的基因在根和块茎中的表达量明显比叶多,而编码Ah CHI的基因在块茎部位的表达量最高。该研究为Ah CHS和Ah CHI功能的进一步研究及植物黄酮类化合物生物合成途径的解析提供了基础。

关键词：异叶天南星基因克隆查尔酮合成酶查尔酮异构酶生物信息学分析

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蕲蛇毒腺的转录组分析及蛇毒蛋白功能基因的挖掘

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中国中药杂志 2019年第22期44卷 4820-4829页

作者：张声祥施圆圆单春苗王涛汪振兴汪胜松吴家文安徽中医药大学安徽省中医药科学院安徽合肥230012 安徽祁门蛇伤研究所安徽黄山245600 安徽中医药大学科研实验中心新安医学教育部重点实验室安徽合肥230038 安徽道地中药材品质提升协同创新中心安徽合肥230012

蕲蛇是一种传统名贵中药材,具有免疫调节、抗肿瘤、抗炎、镇痛等药理作用,临床主要用于治疗类风湿性关节炎、强直性脊柱炎、干燥综合征和肿瘤等疾病。蕲蛇毒腺中分泌的蛇毒蛋白具有凝血、抗癌、抗栓、改善微循环和神经毒性等功能。为挖... 详细信息

蕲蛇是一种传统名贵中药材,具有免疫调节、抗肿瘤、抗炎、镇痛等药理作用,临床主要用于治疗类风湿性关节炎、强直性脊柱炎、干燥综合征和肿瘤等疾病。蕲蛇毒腺中分泌的蛇毒蛋白具有凝血、抗癌、抗栓、改善微循环和神经毒性等功能。为挖掘蕲蛇中蛇毒蛋白功能基因,利用基因工程技术在体外实现大量蛇毒蛋白的表达和纯化,该研究利用高通量测序平台对蕲蛇毒腺进行了转录组测序,组装获得了32862条unigene,其中26589条被公共数据库成功注释,2695条被注释到62个转录因子家族中,并且预测出5920个SSR位点。对分泌性磷脂酶A2和C型凝集素进行序列分析和同源建模,结果显示分泌性磷脂酶A2是同源二聚体,每个单体中包含5个保守的氨基酸构成了酶的催化活性中心;C型凝集素则有一个保守的糖基化结合位点,可以特异结合N-乙酰-D-葡萄糖胺。该研究对蕲蛇毒腺进行转录组测序,为蕲蛇毒腺中蛇毒蛋白功能的研究奠定了基础,将促进蕲蛇基因资源的开发和利用。

关键词：蕲蛇毒腺转录组蛇毒蛋白功能基因分泌性磷脂酶A2 C型凝集素

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艾灸督脉调控PI3K/Akt/mTOR信号通路增强APP/PS1双转基因AD小鼠自噬水平的研究

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中国针灸 2019年第12期39卷 1313-1319页

作者：张利达韩为朱才丰宋小鸽程卉杨坤秦晓凤张君宇桂林安徽中医药大学研究生院合肥230038 安徽中医药大学第二附属医院脑病科合肥230061 安徽中医药大学第二附属医院老年病科合肥230061 安徽中医药大学针灸经络研究所安徽中医药大学科研实验中心新安医学教育部重点实验室

目的:基于上游磷脂酰肌醇-3激酶(phosphoinositide 3-kinases,PI3K)/蛋白激酶B(protein kinase B,AKT)/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mammalian target of rapamycin,mTOR)信号通路观察艾灸"百会""风府""大椎"... 详细信息

目的:基于上游磷脂酰肌醇-3激酶(phosphoinositide 3-kinases,PI3K)/蛋白激酶B(protein kinase B,AKT)/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mammalian target of rapamycin,mTOR)信号通路观察艾灸"百会""风府""大椎"穴对淀粉样前体蛋白/早老素1(amyloid precursor protein/presenili1,APP/PS1)双转基因阿尔茨海默病(Alzheimer’s disease,AD)小鼠脑内β-淀粉样蛋白(amyloidβ-peptide,Aβ)清除作用的影响。方法:将60只APP/PS1双转基因AD小鼠随机分为模型组、艾灸组、雷帕霉素组、艾灸+抑制剂组,每组15只,15只同龄同背景C57BL/6J雄性小鼠作为对照组。艾灸组小鼠实按灸"百会"、温和灸"风府"和"大椎",每次20 min,每日1次,治疗2周;雷帕霉素组用雷帕霉素(rapamycin)腹腔注射给药,2 mg·kg^-1·d^-1,治疗2周;艾灸+抑制剂组在艾灸组治疗基础上同时予以3-甲基腺嘌呤(3-methyladenine,3-MA)腹腔注射给药,1.5 mg·kg^-1·d^-1,治疗2周;对照组和模型组动物常规饲养2周,不进行任何干预。用免疫组化技术检测小鼠皮质和海马脑区Aβ1-42表达水平,透射电镜观察小鼠海马脑区自噬体的形成,免疫印迹法检测小鼠海马组织PI3K、Akt、p-Akt、mTOR、p-m TOR的蛋白表达。结果:与对照组比较,模型组皮质区和海马脑区Aβ1-42蛋白表达增多(P<0.01);与模型组比较,艾灸组、雷帕霉素组和艾灸+抑制剂组皮质区和海马脑区Aβ1-42蛋白表达减少(P<0.01);与艾灸组比较,雷帕霉素组皮质区和海马脑区Aβ1-42蛋白表达差异无统计学意义(P>0.05),艾灸+抑制剂组皮质区和海马脑区Aβ1-42蛋白表达增多(P<0.01);与雷帕霉素组比较,艾灸+抑制剂组皮质区和海马脑区Aβ1-42蛋白表达增多(P<0.01)。模型组神经细胞胞质内自噬泡和细胞器减少;艾灸组自噬泡较多,可见不规则变形、萎缩的细胞器;雷帕霉素组可看到较多自噬泡,尚有变形的细胞器;艾灸+抑制剂组偶可观察到少量的自噬泡,可见较多变形、萎缩的细胞器。与对照组比较,模型组PI3K、Akt、p-Akt、m TOR、p-m TOR蛋白表达显著升高(P<0.01);与模型组比较,艾灸组、雷帕霉素组和艾灸+抑制剂组小鼠PI3K、Akt、p-Akt、mTOR、p-mTOR蛋白表达均明显下降(P<0.01);与艾灸组比较,雷帕霉素组小鼠PI3K、Akt、p-mTOR蛋白表达略有升高(P<0.01),艾灸+抑制剂组PI3K、Akt、p-Akt、mTOR、p-mTOR蛋白表达显著升高(P<0.01);与雷帕霉素组比较,艾灸+抑制剂组小鼠PI3K、Akt、p-Akt、mTOR、p-mTOR蛋白表达显著升高(P<0.01)。结论:艾灸督脉可加速自噬清除APP/PS1双转基因AD小鼠脑内的Aβ1-42蛋白异常沉积,其作用机制可能与艾灸督脉抑制PI3K/Akt/mTOR信号通路异常激活有关。

关键词：阿尔茨海默病艾灸督脉细胞自噬 β-淀粉样蛋白 PI3K/Akt/mTOR信号通路

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新藤黄酸诱导脑胶质瘤细胞U87自噬的研究

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安徽中医药大学学报 2019年第2期38卷 72-76页

作者：王巧雪程卉李庆林安徽中医药大学科研实验中心新安医学教育部重点实验室

目的观察不同浓度新藤黄酸(gambogenic acid,GNA)对脑胶质瘤细胞U87增殖及自噬的影响。方法倒置显微镜下观察细胞形态变化,采用噻唑蓝法检测细胞的存活率,单丹磺酰尸胺(monodansylcadaverine,MDC)染色法检测自噬泡的形成,吖啶橙(acridin... 详细信息

目的观察不同浓度新藤黄酸(gambogenic acid,GNA)对脑胶质瘤细胞U87增殖及自噬的影响。方法倒置显微镜下观察细胞形态变化,采用噻唑蓝法检测细胞的存活率,单丹磺酰尸胺(monodansylcadaverine,MDC)染色法检测自噬泡的形成,吖啶橙(acridine orange,AO)染色流式细胞仪观察酸性囊泡细胞器的数量变化,Westernblot法检测自噬相关蛋白微管相关蛋白1轻链3(microtubule associated protein 1 light chain 3,LC3)-Ⅱ/LC3-Ⅰ以及Beclin-1的表达变化。结果 GNA在1~32 μmol/L浓度范围抑制U87细胞的增殖;MDC染色表明GNA促进U87细胞内自噬泡的形成;AO染色表明GNA增加U87细胞内酸性囊泡细胞器的数量;Western blot结果显示,GNA作用U87细胞后,LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ比值增大,Beclin-1的表达增加,提示细胞内自噬活性增强。结论 GNA在一定剂量和时间范围内抑制脑胶质瘤细胞U87细胞的增殖可能与诱导U87细胞自噬的发生有关。

关键词：新藤黄酸胶质瘤 U87细胞自噬

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