检索结果-内蒙古大学图书馆

应用 PCR-RFLP 及 PCR-SSCP技术研究我国水稻条纹病毒RNA4基因间隔区的变异

农业生物技术学报 2000年第1期8卷 41-44页

作者：魏太云林含新吴祖建林奇英谢联辉福建农业大学植物病毒研究所!福州350002

应用反转录－聚合酶链式反应（ＲＴ－ＰＣＲ）及限制性片段长度多态性（ＲＦＬＰ）和单链构象多态性（ＳＳＣＰ）分析技术，快速检测我国水稻条纹病毒（Ｒｉｃｅｓｔｒｉｐｅ　ｖｉｒｕｓ，ＲＳＶ）ＲＮＡ４基因间隔区（ｉｎｔｅｒ... 详细信息

应用反转录－聚合酶链式反应（ＲＴ－ＰＣＲ）及限制性片段长度多态性（ＲＦＬＰ）和单链构象多态性（ＳＳＣＰ）分析技术，快速检测我国水稻条纹病毒（Ｒｉｃｅｓｔｒｉｐｅ　ｖｉｒｕｓ，ＲＳＶ）ＲＮＡ４基因间隔区（ｉｎｔｅｒｓｅｎｉｃｒｅｇｉｏｎ，ＩＲ）的变异。ＩＲ经ＲＴ－ＰＣＲ扩增后得到一段长约６８０ｂｐ的片段，ＲＳＶ７个分离物之间片段大小相同，应用ＡｌｕＩ、ＮｄｅＩ在它们之间检测到ＲＦＬＰ，其中ＢＳ、ＪＤ、ＬＹ、ＹＬ分离物完全一致，而ＳＱ、ＰＪ、ＪＮ分离物各不相同。ＲＳＶ７个分离物的ＳＳＣＰ泳动带型证实了ＲＦＬＰ分析结果。这是我国ＲＳＶ分子变异的首次报道。

关键词：水稻条纹病毒 PCR-RFLP PCR-SSCP 变异

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应用PCR-SSCP技术快速检测我国水稻条纹病毒的分子变异

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中国病毒学 2001年第2期16卷 166-169页

作者：林含新魏太云吴祖建林奇英谢联辉福建农业大学植物病毒研究所福建福州350002

应用PCR SSCP技术快速检测我国水稻条纹病毒病害特异性蛋白 (SP)基因和外壳蛋白 (CP)基因的分子变异。结果发现我国水稻条纹病毒 7个分离物之间存在广泛的变异 ,其中 ,PJ分离物的SP基因和JD分离物的CP基因不能扩增出来 ,能扩增出的 6个... 详细信息

应用PCR SSCP技术快速检测我国水稻条纹病毒病害特异性蛋白 (SP)基因和外壳蛋白 (CP)基因的分子变异。结果发现我国水稻条纹病毒 7个分离物之间存在广泛的变异 ,其中 ,PJ分离物的SP基因和JD分离物的CP基因不能扩增出来 ,能扩增出的 6个分离物的CP基因变性电泳后带型各不相同 ,但SP基固表现出 5种带型 ,其中云南省的YL和BS分离物带型一样。

关键词：水稻条纹病毒 PCR-SSCP 分子变异

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中国猕猴桃细菌性花腐病菌的鉴定

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植物病理学报 1998年第2期28卷 175-181页

作者：胡方平方敦煌谢联辉福建农业大学植保系云南省烟科所福建农业大学病毒研究所

从福建、湖南和湖北猕猴桃病花上分离到能引起花腐病的３２个细菌菌株，经细菌学和ＢｉｏｌｏｇＧＮ测试板测定，可以看出中国的猕猴桃细菌性花腐病菌与新西兰的猕猴桃花腐病菌、丁香假单胞菌丁香致病变种Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓｓｙｒ... 详细信息

从福建、湖南和湖北猕猴桃病花上分离到能引起花腐病的３２个细菌菌株，经细菌学和ＢｉｏｌｏｇＧＮ测试板测定，可以看出中国的猕猴桃细菌性花腐病菌与新西兰的猕猴桃花腐病菌、丁香假单胞菌丁香致病变种Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓｓｙｒｉｎｇａｅｐｖ．ｓｙｒｉｎｇａｅ和绿黄假单胞菌Ｐ．ｖｉｒｉｄｉｆｌａｖａ相似，与萨氏假单胞菌Ｐ．ｓａｖａｓｔａｎｏｉ和猕猴桃溃疡病菌Ｐ．ｓｙｒｉｎｇａｅｐｖ．ａｃｔｉｎｉｄｉａｅ有更多的不同，但是ＤＮＡ／ＤＮＡ同源性测定结果却显示出中国的菌株可分为２个类型：第１个类型与新西兰猕猴桃花腐病菌和萨氏假单胞菌有很高的同源性，第２类型与绿黄假单胞菌有很高的同源性，说明中国菌株分别属于这２个种。第１类型来自于福建和湖北，第２类型来自于湖南。

关键词：猕猴桃细菌性花腐病菌 DNA DNA同源性

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水稻条纹病毒病害特异蛋白的提纯及血清学特性

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中国病毒学 1999年第3期14卷 222-229页

作者：林含新林奇田吴祖建林丽明林奇英谢联辉福建农业大学植物病毒研究所福建省植物病毒学重点实验室福州350002

应用差别ｐＨ值沉淀蛋白质的原理，建立了水稻条纹病毒病特异蛋白（ＳＰ）的两种提纯方法。这两种方法都可以从病叶中提纯到大量的ＳＰ，其粗提纯量分别为０．８和２．０ｍｇ／ｇ病叶。通过ＳＤＳ ＰＡＧＥ分离后... 详细信息

应用差别ｐＨ值沉淀蛋白质的原理，建立了水稻条纹病毒病特异蛋白（ＳＰ）的两种提纯方法。这两种方法都可以从病叶中提纯到大量的ＳＰ，其粗提纯量分别为０．８和２．０ｍｇ／ｇ病叶。通过ＳＤＳ ＰＡＧＥ分离后得到了精提纯的蛋白，其分子量为２０．１ｋＤａ。将粗提纯和精提纯的ＳＰ分别免疫兔子，制备出效价为５１２００和６４００的抗血清。将效价为６４００的高度特异性的抗血清用于研究ＲＳＶ ＳＰ与ＲＳＶ ＣＰ及同属的水稻草状矮化病毒（ＲＧＳＶ）ＳＰ、ＣＰ之间的血清学关系，结果表明，ＲＳＶ ＳＰ的抗血清与ＲＧＳＶ ＣＰ、ＲＳＶ ＣＰ之间无反应，但可与ＲＧＳＶ ＳＰ微弱反应；而ＲＧＳＶ ＳＰ、ＣＰ及ＲＳＶ ＣＰ的抗血清与ＲＳＶ ＳＰ之间都无血清学反应。结果证实了ＲＳＶ和ＲＧＳＶ

关键词：水稻条纹病毒病害特异蛋白提纯血清学

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水稻草矮病毒血清学和分子检测方法的比较

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中国病毒学 2000年第4期15卷 361-366页

作者：张春嵋林奇英谢联辉福建省植物病毒学重点实验室福建农业大学植物病毒研究所福州350002

将间接ELISA、非放射性分子杂交和RT PCR三种方法应用于水稻草矮病毒 (RGSV)的检测。结果表明 ,利用自制的融合蛋白GST NC的抗血清检测RGSV的灵敏度为 1mg鲜重的病株叶片或 84ng提纯病毒 ,利用地高辛 (DIG)标记的DNA探针NC的点杂交方法... 详细信息

将间接ELISA、非放射性分子杂交和RT PCR三种方法应用于水稻草矮病毒 (RGSV)的检测。结果表明 ,利用自制的融合蛋白GST NC的抗血清检测RGSV的灵敏度为 1mg鲜重的病株叶片或 84ng提纯病毒 ,利用地高辛 (DIG)标记的DNA探针NC的点杂交方法检测RGSV的灵敏度为 50 μg病叶或 6ng病毒 ,而RT PCR的检测灵敏度则为 10 μg病叶或 2ng的病毒 ,对上述三种方法的灵敏度和可操作性也进行了比较。

关键词：水稻草矮病毒血清学检测分子检测

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水稻条纹病毒两个分离物RNA4基因间隔区的序列比较

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中国病毒学 2000年第2期15卷 156-162页

作者：魏太云林含新吴祖建林奇英谢联辉福建农业大学植物病毒研究所福建省植物病毒学重点实验室福州350002

通过RT PCR扩增了我国水稻条纹病毒 (RSV)山东济宁 (JN)、云南宜良 (YL)两个分离物RNA4基因间隔区 (intergenicregion ,IR)序列 ,并克隆于 pGEM Teasy载体上。序列分析结果表明 :JN、YL两分离物RNA4IR均由 6 5 4个核苷酸组成 ,两者之间... 详细信息

通过RT PCR扩增了我国水稻条纹病毒 (RSV)山东济宁 (JN)、云南宜良 (YL)两个分离物RNA4基因间隔区 (intergenicregion ,IR)序列 ,并克隆于 pGEM Teasy载体上。序列分析结果表明 :JN、YL两分离物RNA4IR均由 6 5 4个核苷酸组成 ,两者之间的同源率为 92 %。JN、YL两个分离物RNA4IR在AU碱基富集处可形成两个明显的发夹结构 ,其中一个序列比较保守 ,形成的发夹结构稳定 ;但另一个由于碱基变异导致所形成的发夹结构的稳定性在各个分离物中差异较大。

关键词：水稻条纹病毒 RNA4基因间隔区序列

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应用改进的多克隆抗体Western blot技术研究柑桔速衰病毒蛋白(英文)

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植物病理学报 2000年第3期30卷 250-256页

作者：林尤剑谢联辉 PhyllisA.Rundell CharlesA.Powell 福建农业大学植物病毒研究所福州350002 佛罗里达大学印第安那河研究和教育中心

本文利用多克隆抗体发展了一种无背景的 Western blot技术并用于研究柑桔速衰病毒( CTV)的蛋白。结果表明 ,利用 CTV兔多克隆抗体 12 12和 10 52发展的 Western blot技术可以检测到感染 CTV的墨西哥酸橙或 Citrusexcelsa植株内 CTV的 4... 详细信息

本文利用多克隆抗体发展了一种无背景的 Western blot技术并用于研究柑桔速衰病毒( CTV)的蛋白。结果表明 ,利用 CTV兔多克隆抗体 12 12和 10 52发展的 Western blot技术可以检测到感染 CTV的墨西哥酸橙或 Citrusexcelsa植株内 CTV的 4种蛋白 P1、P2、P3和 P4。在健株或病株内杂交反应均无非特异性背景。从不同寄主上分离到的 CTV不同分离物的蛋白条带是不同的。利用12 12和 10 52抗体均可以检测到感染 6个 CTV分离物的墨西哥酸橙幼苗内的 P1、P2和 P3。利用10 52抗体能检测到感染严重型分离物 T36、T3和 Mm2的墨西哥酸橙幼苗内微弱的 P4 ,但感染轻型分离物 T30、T2 6和 T4的幼苗内则检测不到。利用 12 12抗体检测不到 P4。在 ***内 ,12 12和10 52抗体均能检测到感染所有分离物的病株内的 P1。在感染 T3、T2 6、T4或 Mm2的病株内能检测到 P2 ,但在感染 T30和 36分离物的病株内则检测不到。在感染 T36、T3、T2 6、T4和 Mm2的病株内可检测到 P3,但在感染 T30的病株内则检测不到。在大多数植物内 ,P1、P2、P3和 P4的分子量分别约为 2 5k Da,2 4 k Da,2 1k Da和 18k Da。在感染 T36分离物的 C. excelsa植株体内 ,P1和 P3的分子量分别约为 2 7k Da和 2 2 k Da,比感染其它分离物的 ***和墨西哥酸?

关键词： Western-blot 多克隆抗体柑桔速衰病毒蛋白

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表达反义核酶RNA的转基因水稻对矮缩病毒复制和症状的抑制作用

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中国病毒学 1996年第3期11卷 277-283页

作者：杨文定吴祖建王苏燕刘伟平叶寅谢联辉田波中国科学院微生物研究所福建农业大学植物病毒研究所

用基因枪法将含有ＲＤＶ第五片段反义核酶序列基因的植物表达载体ｐＲＯＫＩＩ转化水稻幼胚，在Ｇ４１８存在的条件下，约２～３个月可筛选出抗性愈伤，转入分化培养基中培养可分化出幼苗。经Ｓｏｕｔｈｅｒｎ杂交法检测为阳性的水稻幼... 详细信息

用基因枪法将含有ＲＤＶ第五片段反义核酶序列基因的植物表达载体ｐＲＯＫＩＩ转化水稻幼胚，在Ｇ４１８存在的条件下，约２～３个月可筛选出抗性愈伤，转入分化培养基中培养可分化出幼苗。经Ｓｏｕｔｈｅｒｎ杂交法检测为阳性的水稻幼苗进行抗病性测定显示，转ＲＤＶ反义核酶基因的水稻植株对ＲＤＶ的复制和症状有显著抑制作用。转基因植株发病较轻，并能部分结实，而对照植株则明显矮化且大多不能抽穗。

关键词：水稻矮缩病毒反义核酶基因转基因水稻 RNA

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黄瓜花叶病毒两亚组分离物寄主反应和血清学性质比较研究

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植物病理学报 1997年第4期27卷 353-360页

作者：徐平东李梅林奇英谢联辉厦门华侨亚热带植物引种园国家植物引种隔离检疫基地福建农业大学植物病毒研究所

根据寄主反应和血清学试验将我国分离的１６个黄瓜花叶病毒（ＣＭＶ）分离物及４个标准毒株（Ｆｎｙ．Ｌｎｙ，Ｍ和ＷＬ）区分为两个亚组。１４个分离物及标准毒株Ｆｎｙ、Ｍ属亚组ＩＤＴＬ血清组，２个分离物及标准毒株Ｌｎｙ、ＷＬ属... 详细信息

根据寄主反应和血清学试验将我国分离的１６个黄瓜花叶病毒（ＣＭＶ）分离物及４个标准毒株（Ｆｎｙ．Ｌｎｙ，Ｍ和ＷＬ）区分为两个亚组。１４个分离物及标准毒株Ｆｎｙ、Ｍ属亚组ＩＤＴＬ血清组，２个分离物及标准毒株Ｌｎｙ、ＷＬ属亚组ⅡＴｏＲＳ血清组。选用９科２３种（或品种）植物进行寄主反应测定，发现茄科的心叶烟（Ｎ．ｇｌｕｔｉｎｏｓａ）、普通烟（Ｎ．ｔａｂａｃｕｍｃｕ．Ｘａｉｎｔｈｉ－ＮＣ）及葫芦科的西葫芦（Ｃｕｃｕｒｂｉｔａｐｅｐｏ）能将两亚组分离物区分开。采用法国和美国提供的８个单克隆抗体进行单、多克隆抗体夹心ＥＬＩＳＡ测定，能区分两亚组的分离物，首次证实在我国存在两个亚组的ＣＭＶ分离物。

关键词：黄瓜花叶病毒寄主克隆抗体血清学

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水稻簇矮病毒：植物呼肠孤病毒属的一个新成员

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福建农业大学学报 1996年第3期25卷 312-319页

作者：谢联辉林奇英谢莉妍陈昭炫福建农业大学植物病毒研究所

水稻簇矮病毒（ＲＢＳＶ）是由黑尾叶蝉（Ｎｅｐｈｏｔｅｔｉｘｃｉｎｃｔｉｃｅｐｓ）和二点黑尾叶蝉（Ｎ．ｖｉｒｅｓｃｅｎｓ）传播的持久性病毒，但不经卵传递；病害表现有奇特的多蘖症或节枝症，且其病株汁液与水稻矮缩病毒（ＲＤ... 详细信息

水稻簇矮病毒（ＲＢＳＶ）是由黑尾叶蝉（Ｎｅｐｈｏｔｅｔｉｘｃｉｎｃｔｉｃｅｐｓ）和二点黑尾叶蝉（Ｎ．ｖｉｒｅｓｃｅｎｓ）传播的持久性病毒，但不经卵传递；病害表现有奇特的多蘖症或节枝症，且其病株汁液与水稻矮缩病毒（ＲＤＶ）抗血清不起免疫反应．采用差速离心和蔗糖密度梯度离心，可获得ＲＢＳＶ提纯制剂，提纯制剂经紫外扫描，呈典型的核蛋白吸收曲线，Ａ２６０／２８０＝１．６４．在电镜下观察提纯病毒，可见大量比较均一的球状粒体，直径为６０．０ｎｍ．病毒粒体有双层衣壳，蛋白亚基清晰可辨．通过免疫扩散和免疫电镜试验，病毒粒体与ＲＢＳＶ抗血清有明显的血清学反应，而这种抗血清与ＲＤＶ、水稻瘤矮病毒（ＲＧＤＶ）不起反应．提纯ＲＢＳＶ制剂以苯酚－甲基苯酚－ＳＤＳ方法提取核酸．将其注射到昆虫介体内，具有侵染性．核酸制品有典型的核酸紫外吸收曲线，Ａ２６０／２８０＝２．０２．根据核酸在不同离子强度下对ＲＮａｓｅ的稳定性等的测定，表明其核酸属双链ＲＮＡ．根据紫外吸收测定，ＲＮＡ在ＲＢＳＶ粒体中的含量为１７．５％．用聚丙烯酰胺凝胶电泳测定，其ＲＮＡ的总分子质量为１６．６６×１０６．各组分相对分子质量分别为２．７０×１０６、２．３０×１０６、１?

关键词：水稻簇矮病毒病毒性质传毒介质呼肠孤病毒属

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