检索结果-内蒙古大学图书馆

中国农业科学 2021年第10期54卷 2095-2104页

作者：郑信诗尚鹏祥李景远丁新伦吴祖建张洁福建农林大学植物保护学院植物病毒研究所/闽台作物有害生物生态防控国家重点实验室/福建省植物病毒学重点实验室

【目的】通过分析发现木尔坦棉花曲叶病毒(cotton leaf curl Multan virus,CLCuMuV)C4开放阅读框(open reading frame,ORF)附近可编码3个不同大小的蛋白,而NCBI数据库登录的CLCuMuV各个分离物编码的C4蛋白大小也不尽相同,本研究试图通... 详细信息

【目的】通过分析发现木尔坦棉花曲叶病毒(cotton leaf curl Multan virus,CLCuMuV)C4开放阅读框(open reading frame,ORF)附近可编码3个不同大小的蛋白,而NCBI数据库登录的CLCuMuV各个分离物编码的C4蛋白大小也不尽相同,本研究试图通过分析该3个假定的"C4 ORF"编码蛋白对病毒致病性的影响,以明确CLCuMuV C4蛋白ORF的确切定位。【方法】根据双生病毒编码蛋白的保守性,在CLCuMuV C4 ORF附近查找到3个大小不等的ORF,分别标记为C4-L(567 nt)、C4-M(546 nt)和C4-S(303 nt)。利用同源重组的方法将该3个ORF分别构建到PVX异源表达载体,通过农杆菌介导的植物接种法,分析PVX介导的3个蛋白在本氏烟表达对本氏烟症状的影响。利用同源重组的方法构建CLCuMuV野生型及C4-L或C4-S缺失突变型的侵染性克隆,同样通过农杆菌介导的植物接种法,分别与其伴随DNA-β分子的侵染性克隆接种本氏烟,分析C4-L或C4-S缺失对CLCuMuV致病性的影响,并利用Southern blot和Western blot分别对接种烟草的病毒基因组的积累量和病毒C4蛋白的表达量进行分析。同时利用Gateway系统载体对C4-L和C4-S蛋白在本氏烟叶片表皮细胞中的亚细胞定位进行分析。【结果】PVX异源表达载体接种本氏烟,结果发现PVX-C4-L和PVX-C4-S接种的本氏烟叶片卷曲、叶柄伸长,并且PVX-C4-S症状更重,而PVX-C4-M接种的本氏烟症状较轻或基本无症状,Western blot试验也在PVX-C4-L和PVX-C4-S接种组检测到了C4蛋白的表达,说明C4-S ORF编码的蛋白对PVX异源病毒的致病性影响最大。侵染性克隆接种本氏烟,结果发现野生型(CLCuMuV)和C4-L突变型(CLCuMuV-ΔL)接种的本氏烟叶片皱缩增生、叶柄和茎秆扭曲,而C4-S突变型(CLCuMuV-ΔS)和对照组(Mock)接种的本氏烟未显示任何症状,并且前两者的植株高度明显矮于后两者,同时Southern blot试验在CLCuMuV和CLCuMuV-ΔL接种的本氏烟中均检测到大量病毒基因组的积累,而Western blot试验也在其中检测到C4蛋白的表达,说明C4-S ORF编码的蛋白在CLCuMuV诱导寄主产生症状过程中起关键作用。亚细胞定位发现YFP-C4-L主要定位在本氏烟叶片表皮细胞的叶绿体,YFP-C4-S则定位在细胞膜或细胞质周边,并有点状聚集体结构。【结论】C4-S ORF编码的蛋白对CLCuMuV的侵染必不可少,而C4-L和C4-M ORF编码的蛋白对CLCuMuV的侵染不是必需。

关键词：木尔坦棉花曲叶病毒 C4开放阅读框致病性

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草莓白化相关病毒中国分离物全基因组分析

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园艺学报 2021年第1期48卷 146-152页

作者：陈道张洁吴祖建丁新伦福建农林大学植物病毒研究所闽台作物有害生物生态防控国家重点实验室福建省植物病毒重点实验室福州350002

草莓白化相关病毒(strawberrypallidosis-associatedvirus,SPa V)属于长线形病毒科(Closteroviridae)毛形病毒属(Crinivirus),可引起草莓病害,2017年在中国首次报道。采用高通量测序、RACE和RT-PCR技术获得了SPa V中国分离物(FJ)的基因组全长。该病毒含有两条正单链基因组RNA1和RNA2。RNA1全长8 048 nt,5′和3′非编码区序列分别为264和197 nt,含有3个开放阅读框(ORF),分别编码ORF 1a/1b融合蛋白和p9蛋白。RNA2全长7 977 nt,5′和3′非编码区序列分别为248和186 nt,含有8个开放阅读框(ORF),分别编码HSP70h、CPh、CP、CPm、p7、p6、p9和p28等8个蛋白。RNA1和RNA2与美国M1分离物分别具有98.5%和99.0%的核苷酸一致性;系统发育分析结果表明,SPa V中国分离物(FJ)单独处在一个分支。对SPa V来源的小RNA的分析表明,来源于SPa V的小RAN长度以21和22 nt为主。

关键词：草莓草莓白化相关病毒高通量测序 RT-PCR 基因组序列

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草莓上新发现的病毒研究现状与展望

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园艺学报 2024年第7期51卷 1639-1648页

作者：丁新伦张洁吴祖建福建农林大学植物病毒研究所福建省植物病毒重点实验室闽台作物有害生物生态防控国家重点实验室福州350002

草莓病毒病是制约草莓产量和品质的重要因素之一。随着高通量测序技术在植物病毒检测和鉴定上的应用,一些新病毒相继在草莓上被发现。本文中综述了近十年来草莓上新发现的11种病毒,包括5种(黄瓜花叶病毒、菠菜潜隐病毒、番茄线虫传多面... 详细信息

草莓病毒病是制约草莓产量和品质的重要因素之一。随着高通量测序技术在植物病毒检测和鉴定上的应用,一些新病毒相继在草莓上被发现。本文中综述了近十年来草莓上新发现的11种病毒,包括5种(黄瓜花叶病毒、菠菜潜隐病毒、番茄线虫传多面体病毒、橄榄潜伏病毒1和芸薹黄化病毒)以草莓为其新寄主和6种(草莓马铃薯叶卷病毒1、草莓病毒1、草莓病毒2、草莓病毒3、森林草莓相关病毒1和草莓病毒A)首次报道的新病毒,对这些新发现病毒的研究现状进行了阐述和总结,并对研究中存在的主要问题和今后的研究方向进行了讨论和展望,以期为生产上草莓病毒病诊断、检测、病害流行预测、预防和控制提供参考。

关键词：草莓病毒

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木尔坦棉花曲叶病毒编码蛋白的亚细胞定位分析

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植物病理学报 2020年第2期50卷 203-210页

作者：尚鹏祥胡汝检陈家盛郑信诗杜振国张洁吴祖建福建农林大学植物保护学院植物病毒研究所闽台作物有害生物生态防控国家重点实验室福建省植物病毒学重点实验室福州350002

木尔坦棉花曲叶病毒(Cotton leaf curl Multan virus,CLCuMV)是典型的单组分双生病毒,并伴随β卫星分子,是棉花曲叶病的主要病原之一。本研究利用农杆菌介导的瞬时表达系统,将CLCuMV及其卫星分子编码的7个病毒蛋白在本氏烟表皮细胞中表... 详细信息

木尔坦棉花曲叶病毒(Cotton leaf curl Multan virus,CLCuMV)是典型的单组分双生病毒,并伴随β卫星分子,是棉花曲叶病的主要病原之一。本研究利用农杆菌介导的瞬时表达系统,将CLCuMV及其卫星分子编码的7个病毒蛋白在本氏烟表皮细胞中表达。通过激光共聚焦显微镜观察发现:V1、C2和C3定位于细胞核;C1和βC1定位在细胞核以及细胞质或细胞膜上,并且在细胞质中形成丝状结构;V2和C4主要定位在细胞质或细胞膜上,细胞核也有微量表达,V2可形成大小不一的颗粒状聚集体结构,C4在细胞膜上可见点状聚集体结构。同时,利用RT-PCR和Western blot对病毒各基因的转录和表达水平进行了分析。CLCuMV编码蛋白的亚细胞定位为蛋白功能的进一步研究提供重要理论依据。

关键词：木尔坦棉花曲叶病毒亚细胞定位病毒蛋白

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草莓轻型黄边病毒中国分离物全基因组序列测定和分析

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病毒学报 2022年第5期38卷 1187-1194页

作者：江山陈道叶立乐张洁吴祖建丁新伦福建农林大学植物病毒研究所福建省植物病毒重点实验室闽台作物有害生物生态防控国家重点实验室福州350002

草莓轻型黄边病毒(Strawberry mild yellow edge virus,SMYEV)是引起我国草莓病毒病害的重要病毒之一,我们测定了共侵染草莓植株的2个SMYEV中国分离物FJ1和FJ2的全基因组序列。FJ1和FJ2分离物基因组全长均为5971 nt,包含5个开放阅读框(O... 详细信息

草莓轻型黄边病毒(Strawberry mild yellow edge virus,SMYEV)是引起我国草莓病毒病害的重要病毒之一,我们测定了共侵染草莓植株的2个SMYEV中国分离物FJ1和FJ2的全基因组序列。FJ1和FJ2分离物基因组全长均为5971 nt,包含5个开放阅读框(ORF),其中,FJ2分离物ORF4编码蛋白C端缺乏7 aa。SMYEV分离物FJ1和FJ2的基因组核苷酸序列一致性为89.8%,两者和其他SMYEV分离物的基因组核苷酸序列一致性分别为83.7%~89.8%和84.1%~90.0%;基于CP基因的系统进化分析表明,SMYEV分离物分为2个大组群4个亚群,FJ1和FJ2分别归属不同的组,两者具有较远的亲缘关系,其中FJ1与中国分离物sy01和sy04、日本分离物T1以及韩国分离物KNS1亲缘关系最近,FJ2与中国分离物sy02、加拿大一株分离物PEI113_12以及日本分离物T2亲缘关系最近。RDP4重组分析表明,FJ1和FJ2均存在潜在的重组事件。本研究首次报道了我国SMYEV基因组全长序列,为该病毒在我国的侵染流行、检测和防控提供了理论基础。

关键词：草莓草莓轻型黄边病毒基因组全长序列分析

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福建省六种草莓病毒的分子检测

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植物保护学报 2018年第6期45卷 1433-1434页

作者：陈道丁新伦张洁谢荔岩吴祖建福建农林大学植物病毒研究所闽台作物有害生物生态防控国家重点实验室福建省植物病毒重点实验室福州350002

我国是世界上草莓栽培面积最大、产量最多的国家,草莓病毒病是影响草莓生产的重要因素之一。在我国,草莓斑驳病毒(Strawberry mottle virus,SMoV)、草莓皱缩病毒(Strawberry crinkle virus,SCV)、草莓镶脉病毒(Strawberry vein banding ... 详细信息

我国是世界上草莓栽培面积最大、产量最多的国家,草莓病毒病是影响草莓生产的重要因素之一。在我国,草莓斑驳病毒(Strawberry mottle virus,SMoV)、草莓皱缩病毒(Strawberry crinkle virus,SCV)、草莓镶脉病毒(Strawberry vein banding virus,SVBV)和草莓轻型黄边病毒(Strawberry mild yellow edge virus,SMYEV)分布广、危害重(王国平等,1991);近年来草莓坏死休克病毒(Strawberry necrotic shockvirus,SNSV)(Li & Yang,2011)、黄瓜花叶病毒(Cucumber mosaic virus,CMV)(Chen et al.,2014)和草莓白化病毒(Strawberry pallidosis-associated virus,SPaV)(Ding et al.,2017)也相继被报道。

关键词：草莓生产病毒病分子检测福建省草莓镶脉病毒黄瓜花叶病毒 mosaic 栽培面积

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小麦矮缩病毒外壳蛋白基因的原核表达、抗体制备及应用

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植物病理学报 2013年第4期43卷 362-367页

作者：王亚娇任堂雨刘艳王锡锋中国农业科学院植物保护研究所植物病虫害生物学国家重点实验室北京100193 福建农林大学植物病毒研究所福建省植物病毒学重点实验室福州350002

小麦矮缩病毒(Wheat dwarf virus,WDV)引起的小麦矮缩病是近年来我国小麦生产中的一种重要病毒病害,急需研发快速精准的检测技术用于预测预报和病毒-介体相互作用的研究。本研究应用Gateway重组技术构建了外壳蛋白基因(Coat protein,CP... 详细信息

小麦矮缩病毒(Wheat dwarf virus,WDV)引起的小麦矮缩病是近年来我国小麦生产中的一种重要病毒病害,急需研发快速精准的检测技术用于预测预报和病毒-介体相互作用的研究。本研究应用Gateway重组技术构建了外壳蛋白基因(Coat protein,CP)的原核表达载体,将重组表达载体转化大肠杆菌Rosetta,经IPTG诱导获得CP基因原核表达蛋白。以重组蛋白为抗原免疫新西兰大白兔制备得到了相应的抗体,Western blot检测表明制备的抗体能与CP重组蛋白、感病小麦和带毒叶蝉特异性结合,说明获得的抗体特异性高。用获得的抗体进行免疫荧光标记,观察到病毒分布在介体叶蝉的前中肠和中中肠部位,为WDV的预测预报和介体条沙叶蝉传毒机制的研究奠定了基础。

关键词：小麦矮缩病毒原核表达多克隆抗体 Western blot 免疫荧光标记

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水稻矮缩病毒Pns6和P8蛋白在病毒侵染水稻原生质体后的表达

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中国水稻科学 2019年第2期33卷 118-123页

作者：张洁宛柏杰尚鹏祥丁新伦杜振国吴祖建福建农林大学植物病毒研究所/福建省植物病毒学重点实验室/闽台作物有害生物生态防控国家重点实验室福州350002 江苏沿海地区农业科学研究所江苏盐城224000

【目的】为明确水稻矮缩病毒(Rice dwarf virus, RDV) Pns6和P8蛋白在病毒侵染水稻原生质体后的表达动态,【方法】利用PEG介导的病毒侵染原生质体体系,通过免疫荧光和电镜技术分析Pns6、P8蛋白以及病毒粒体在水稻原生质体中的定位;同时... 详细信息

【目的】为明确水稻矮缩病毒(Rice dwarf virus, RDV) Pns6和P8蛋白在病毒侵染水稻原生质体后的表达动态,【方法】利用PEG介导的病毒侵染原生质体体系,通过免疫荧光和电镜技术分析Pns6、P8蛋白以及病毒粒体在水稻原生质体中的定位;同时,通过Western blot和实时荧光定量PCR分析Pns6和P8蛋白及其RNA在水稻原生质体中的积累量。【结果】病毒接种水稻原生质体48h后,Pns6蛋白在细胞质中可以形成类似于病毒原质(viroplasm)的点状内含体,P8蛋白也大量的表达。同时,病毒粒体在水稻原生质体中也形成内含体状的结构。病毒接种水稻原生质体12 h后,均可检测到Pns6和P8蛋白的表达,并且在36 h后达到最高值。病毒接种水稻原生质体后,Pns6 RNA在24 h时表达量达到最高,P8 RNA在36 h时表达量达到最高。【结论】RDV侵染水稻原生质体后,Pns6和P8蛋白均有表达,并且病毒也可能通过形成病毒原质来完成病毒在寄主细胞的复制和装配。

关键词：水稻矮缩病毒水稻原生质体 Pns6蛋白 P8蛋白

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水稻MYB基因家族特征及其在RGSV和RRSV侵染后的响应

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植物病理学报 2023年第2期53卷 258-266页

作者：徐荣荣常青魏莹李霞吴建国赵珊珊福建农林大学虫媒介病毒研究中心福建省植物病毒学重点实验室闽台作物有害生物生态防控国家重点实验室福州350002

MYB基因家族作为植物体内最大的转录因子家族之一,在调节植物生长发育以及抗逆境胁迫方面发挥着至关重要的作用。然而,OsMYBs在水稻抗病毒通路中的作用还尚不清楚。为了探究OsMYBs家族在水稻抗病毒通路中所扮演的角色,对其结构、特征,... 详细信息

MYB基因家族作为植物体内最大的转录因子家族之一,在调节植物生长发育以及抗逆境胁迫方面发挥着至关重要的作用。然而,OsMYBs在水稻抗病毒通路中的作用还尚不清楚。为了探究OsMYBs家族在水稻抗病毒通路中所扮演的角色,对其结构、特征,以及对已报道的单链RNA病毒水稻草状矮化病毒(rice grassy stunt virus,RGSV)和双链RNA病毒水稻锯齿叶矮缩病毒(rice ragged stunt virus,RRSV)侵染后的表达谱进行分析,发现51个响应RGSV侵染,50个响应RRSV侵染。进一步分析发现,26个OsMYBs可同时响应两种不同类型病毒。从中筛选出10个表达量相对较高且差异倍数较大的基因进行实时荧光定量PCR(Real-time Quantitative PCR,qRT-PCR)验证,结果表明,OsMYB30、LOC_Os02g42850、LOC_Os02g47744、LOC_Os05g37050、LOC_Os06g43090和LOC_Os08g33150在响应两种病毒侵染后表达量下调;而LOC_Os05g38460在响应两种病毒侵染后表达量上调。LOC_Os05g51160和LOC_Os09g26170在RGSV侵染后表达量上调,在RRSV侵染后表达量下调;而LOC_Os08g05520在RGSV侵染后表达量下调,在RRSV侵染后表达量上调。这10个基因中有7个在两种病毒侵染后表达量变化趋势相同,表明这些基因可能对病毒响应具有广谱性。这为深入解析OsMYBs在水稻与病毒互作中的功能提供了有用的信息。

关键词：水稻MYB基因水稻草状矮化病毒水稻锯齿叶矮缩病毒

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水稻OsAGO家族成员特征及对RGDV和SRBSDV的响应

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植物保护学报 2024年第3期51卷 636-644页

作者：魏莹林冬煊刘鸿飞徐荣荣朱永生吴建国赵珊珊福建农林大学虫媒介病毒研究中心福建省植物病毒学重点实验室闽台作物有害生物生态防控国家重点实验室福州350002 福建省农业科学院水稻研究所福州350002

为初步探究OsAGO家族在水稻抗病毒通路中的功能,对水稻OsAGO蛋白的基因组结构、系统发育关系、氨基酸序列及水稻瘤矮病毒(rice gall dwarf virus,RGDV)和南方水稻黑条矮缩病毒(southern rice black streaked dwarf virus,SRBSDV)侵染后... 详细信息

为初步探究OsAGO家族在水稻抗病毒通路中的功能,对水稻OsAGO蛋白的基因组结构、系统发育关系、氨基酸序列及水稻瘤矮病毒(rice gall dwarf virus,RGDV)和南方水稻黑条矮缩病毒(southern rice black streaked dwarf virus,SRBSDV)侵染后的转录组数据进行分析,同时采用实时荧光定量PCR(quantitative real-time PCR,qPCR)技术对这2种病毒侵染后OsAGO基因的相对表达量变化进行验证。结果表明,19个水稻OsAGO蛋白的外显子数量、内含子数量及编码区长度存在较大差异,且这19个OsAGO蛋白均匀分布在3个分支中;OsAGO蛋白PAZ结构域中与小RNA结合相关的YF(酪氨酸-苯丙氨酸)基序在OsAGO2、OsAGO3和OsAGO5中变成了YY(酪氨酸-酪氨酸),OsAGO蛋白PIWI结构域中与OsAGO蛋白切割活性相关的DDX(X代表H或D,即天冬氨酸-天冬氨酸-组氨酸/天冬氨酸)基序在OsAGO13中替换为LDH(亮氨酸-天冬氨酸-组氨酸)基序,而在OsAGO17中不包含YF基序且DDX基序替换为HDR(组氨酸-天冬氨酸-精氨酸)基序。RGDV侵染后OsAGO5和OsAGO12基因的转录组分析结果与qPCR结果一致,其中OsAGO5上调表达,OsAGO12下调表达;SRBSDV侵染后OsAGO1a、OsAGO1b、OsAGO1c、OsAGO1d和OsAGO4b基因的转录组分析结果与qPCR结果一致,均上调表达。表明大多数OsAGO均能响应RGDV和SRBSDV的侵染。

关键词：水稻 RNA沉默 AGO蛋白水稻瘤矮病毒南方水稻黑条矮缩病毒

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