检索结果-内蒙古大学图书馆

中国农学通报 2012年第30期28卷 1-5页

作者：杨靓邓萍王开放刘妍刘小娟吴祖建福建农林大学植物保护学院/福建省植物病毒学重点实验室/福建农林大学植物病毒研究所福州350002

为了进行水稻草状矮缩病毒(Rice grassy stunt virus,RGSV)诊断方法和蛋白功能研究。通过RT-PCR方法从感染RGSV的水稻中克隆该病毒的P2基因,并将此基因片段重组到原核表达载体pDEST17上。将重组载体转化*** Rosetta,经IPTG诱导后获得分... 详细信息

为了进行水稻草状矮缩病毒(Rice grassy stunt virus,RGSV)诊断方法和蛋白功能研究。通过RT-PCR方法从感染RGSV的水稻中克隆该病毒的P2基因,并将此基因片段重组到原核表达载体pDEST17上。将重组载体转化*** Rosetta,经IPTG诱导后获得分子量约为29kDa含HIS标签的融合蛋白。以诱导的融合蛋白为抗原,免疫新西兰大耳白兔获得多克隆抗体,经酶联免疫检测发现其效价达到l:8192。并用制备的抗体建立了特异、灵敏的检测RGSV的IC-RT-PCR和Dot-blot ELISA方法,为该病毒的检测、诊断提供了保障,同时也为P2蛋白的结构和功能研究奠定了基础。

关键词：水稻草状矮缩病毒 P2基因原核表达多克隆抗体

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水稻条纹花叶病毒编码结构蛋白的抗体制备与检测

水稻条纹花叶病毒编码结构蛋白的抗体制备与检测

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中国植物病理学会2017年学术年会

作者：赵萍贾东升郭剑光魏太云福建农林大学植物病毒研究所福建省植物病毒学重点实验室

水稻条纹花叶病毒(Rice stripe mosaic virus,RSMV),属于弹状病毒科质型弹状病毒属的一个新种,由电光叶蝉以持久增殖型方式传播。该病毒共编码2个非结构蛋白P3和P6,以及5个结构蛋白:核衣壳蛋白(N)、糖蛋白(G)、核糖核酸聚合酶(L)、磷酸... 详细信息

水稻条纹花叶病毒(Rice stripe mosaic virus,RSMV),属于弹状病毒科质型弹状病毒属的一个新种,由电光叶蝉以持久增殖型方式传播。该病毒共编码2个非结构蛋白P3和P6,以及5个结构蛋白:核衣壳蛋白(N)、糖蛋白(G)、核糖核酸聚合酶(L)、磷酸化蛋白(P)和基质蛋白(M)。由于是2017年首次报道的新病毒,目前对该病毒由介体昆虫传播的机制尚不清楚。为了便于研究RSMV在介体昆虫体内的侵染机制,本研究首先通过原核表达N、P、M、G蛋白,并免疫注射小鼠制备了N、P、M、G蛋白的多克隆抗体。通过Western blot检测,N、P、M、G蛋白均可在RSMV侵染的昆虫体内检测到特异性蛋白条带。随后对抗血清进行纯化,并交联荧光素。通过免疫荧光标记检测RSMV侵染的电光叶蝉消化道组织,共聚焦显微镜观察发现N、P抗体可特异性标记电光叶蝉消化道内的病毒,表明N和P抗体可用于昆虫体内病毒的免疫荧光标记检测;而M和G抗体不能特异性标记RSMV编码的蛋白,相关抗体仍需改变方法进行重新制备。针对N和P抗体,笔者通过免疫荧光标记方法对实验室饲毒条件下电光叶蝉的带毒率进行检测,发现饲毒后6天的电光叶蝉带毒率高达60%以上,RT-PCR方法也验证了该检测结果。综合以上研究结果,本研究制备的N和P抗体可用于检测病毒在介体昆虫体内的分布,并可用于昆虫带毒率的检测,为解析RSMV与介体昆虫间的互作机制和病害田间检测奠定了基础。

关键词：水稻条纹花叶病毒抗体制备 Western blot检测免疫荧光标记检测

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南方水稻黑条矮缩病毒非结构蛋白P6是病毒增殖的关键因子

南方水稻黑条矮缩病毒非结构蛋白P6是病毒增殖的关键因子

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中国植物病理学会2016年学术年会

作者：韩玉贾东升毛倩卓陈倩陈红燕魏太云福建农林大学植物病毒研究所福建省植物病毒学重点实验室

南方水稻黑条矮缩病毒（Southern rice black-streaked dwarf virus,SRBSDV）引起的南方水稻黑条矮缩病给我国农业生产造成巨大的损失。SRBSDV编码的非结构蛋白P5-1、P6和P9-1是病毒侵染形成病毒原质（viroplasm）的组分,参与病毒的复... 详细信息

南方水稻黑条矮缩病毒（Southern rice black-streaked dwarf virus,SRBSDV）引起的南方水稻黑条矮缩病给我国农业生产造成巨大的损失。SRBSDV编码的非结构蛋白P5-1、P6和P9-1是病毒侵染形成病毒原质（viroplasm）的组分,参与病毒的复制和装配。本实验通过首先免疫荧光标记技术在介体培养细胞中观察SRBSDV侵染后P5-1、P6和P9-1表达的先后顺序,结果发现P6在SRBSDV侵染白背飞虱细胞时最早表达并不断增大,随后P5-1和P9-1蛋白表达。随后利用RNAi技术分别干扰P5-1、P6和P9-1蛋白在白背飞虱培养细胞中的表达,均导致SRBSDV的侵染率显著降低。抑制P5-1蛋白表达后,P5-1和P9-1的表达量明显降低,但P6的表达量和对照组相当;抑制P6蛋白表达后,P5-1、P6和P9-1的表达量都显著降低;抑制P9-1蛋白表达后,除了自身蛋白的表达量降低外,另外两个蛋白的表达水平不受影响。为了进一步验证P6蛋白的功能,通过微针注射法将源于P6、P5-1和P9-1基因的dsRNA分别导入饲毒1 d的白背飞虱体内,以dsGFP处理为对照,注射后5 d后对白背飞虱消化道进行免疫荧光标记。共聚焦显微镜观察发现,与对照组相比,分别抑制病毒原质三个组分蛋白的表达均可阻碍病毒在昆虫体内的增殖,且病毒被局限在初侵染的上皮细胞内。其中dsP6处理组带毒率显著下降,且P6蛋白被抑制后P5-1和P9-1蛋白均不表达;而抑制P5-1或P9-1蛋白的表达后,昆虫的带毒率不受影响,且在初侵染上皮细胞内仍可观察到P6蛋白的表达。该研究结果表明P6蛋白是病毒原质形成中的关键因子,最早表达并参与激发或调控病毒原质其他组分蛋白的表达,抑制P6蛋白的表达则完全阻碍病毒的增殖。该研究结果同时表明P6蛋白是阻断病毒增殖最理想的靶标。

关键词：南方水稻黑条矮缩病毒白背飞虱病毒原质复制关键因子

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水稻齿叶矮缩病毒Pns10蛋白的原核表达、抗血清制备及初步应用

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激光生物学报 2012年第6期21卷 546-550页

作者：丁新伦谢荔岩潘贤吴祖建福建农林大学植物病毒研究所福建省植物病毒重点实验室福建福州350002

水稻齿叶矮缩病毒Pns10蛋白由基因组片段S10编码。从RRSV福建沙县分离物(RRSV-F)中获取该病毒的全基因组,根据RRSV泰国分离物核苷酸序列设计特异性引物获得S10编码区,利用Directional TOPO克隆技术,将S10连接至克隆表达载体pET100/D-TOP... 详细信息

水稻齿叶矮缩病毒Pns10蛋白由基因组片段S10编码。从RRSV福建沙县分离物(RRSV-F)中获取该病毒的全基因组,根据RRSV泰国分离物核苷酸序列设计特异性引物获得S10编码区,利用Directional TOPO克隆技术,将S10连接至克隆表达载体pET100/D-TOPO构建重组质粒,并进行了序列测定和分析。重组质粒经IPTG诱导在BL21star(DE3)***中高效表达约35 kD Pns10蛋白。将Pns10蛋白免疫新西兰大白兔制备了特异性的抗血清,间接ELISA法测定抗血清效价为1∶7 680,Western blot分析表明抗血清特异性强。表达产物及抗血清在Pns10蛋白的结构和功能研究中具有重要的应用价值,制备的抗血清可用于水稻病株和传播介体的检测以及病毒病的诊断。

关键词：水稻齿叶矮缩病毒(RRSV) Pns10蛋白原核表达抗血清制备和应用

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中国马铃薯晚疫病菌线粒体DNA单倍型分析

中国马铃薯晚疫病菌线粒体DNA单倍型分析

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中国植物病理学会2015年学术年会

作者：段国华祝雯陈凤平詹家绥福建省植物病毒学重点实验室福建农林大学植物病毒研究所

为了解和探讨我国马铃薯晚疫病菌线粒体DNA单倍型的组成和分布,本研究采用PCR-RFLP方法分析了2010—2012年从我国11个省市17个地区分离的1519个马铃薯晚疫病菌株的线粒体DNA单倍型及其频率分布。结果显示Ⅰa型为主要单倍型,占65.17%,其... 详细信息

为了解和探讨我国马铃薯晚疫病菌线粒体DNA单倍型的组成和分布,本研究采用PCR-RFLP方法分析了2010—2012年从我国11个省市17个地区分离的1519个马铃薯晚疫病菌株的线粒体DNA单倍型及其频率分布。结果显示Ⅰa型为主要单倍型,占65.17%,其次为Ⅱa型,占24.1%,最少为Ⅱb,占10.73%,Ⅰb型则未检测到。研究结果表明我国的马铃薯晚疫病菌群体中,新的群体已经代替了旧的群体,群体的遗传多样性日趋复杂。

关键词：马铃薯晚疫病线粒体单倍型

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病毒被限制在昆虫中肠是灰飞虱不属于南方水稻黑条矮缩病毒有效介体的原因

病毒被限制在昆虫中肠是灰飞虱不属于南方水稻黑条矮缩病毒有效介...

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中国植物病理学会2012年学术年会

作者：贾东升陈红燕毛倩卓刘启飞魏太云福建农林大学植物病毒研究所福建省植物病毒学重点实验室

近年来,南方水稻黑条矮缩病毒（Southern rice black-streaked dwarf virus,SRBSDV）在我国南方稻区大面积发生,给农业生产带来了巨大的损失。SRBSDV属于呼肠孤病毒科斐济病毒属的一个暂定种,由白背飞虱以持久增殖型方式高效传播。我们... 详细信息

近年来,南方水稻黑条矮缩病毒（Southern rice black-streaked dwarf virus,SRBSDV）在我国南方稻区大面积发生,给农业生产带来了巨大的损失。SRBSDV属于呼肠孤病毒科斐济病毒属的一个暂定种,由白背飞虱以持久增殖型方式高效传播。我们在田间调查和实验过程中发现灰飞虱也可以低效带毒,但不能有效传毒。为了明确SRBSDV在灰飞虱体内的侵染机理,本研究应用病毒编码蛋白抗体与荧光素的交联物,包括P9-1-rhodamine和P10-FITC,通过免疫荧光标记技术系统比较分析了SRBSDV在灰飞虱和白背飞虱体内的侵染循回过程。介体饲毒后2d,SRBSDV在70%白背飞虱个体的中肠上皮细胞建立初侵染点,而在灰飞虱体内检测不到病毒。饲毒后4d,SRBSDV可以初次侵染灰飞虱中肠上皮细胞,其侵染率仅5%;而此时SRBSDV在20%的白背飞虱体内已从初侵染部位向周围扩散。饲毒后8d,SRBSDV在84%的白背飞虱体内大量扩散,且45%的白背飞虱唾液腺已有病毒侵染;而此时灰飞虱体内的病毒仍然局限于中肠内部的扩散,在唾液腺中检测不到病毒,即使饲毒后14d和25d病毒仍然不能到达灰飞虱的唾液腺。为了明确是否SRBSDV从灰飞虱中肠释放到血淋巴过程受到阻碍,在饲毒后25d,我们通过免疫荧光标记和荧光定量PCR技术在灰飞虱血淋巴中均未检测到病毒。综合以上结果,认为SRBS-DV在灰飞虱体内可以侵入、复制并扩散,但由于受到中肠侵入屏障的阻碍而使灰飞虱带毒率低,由于受到中肠释放屏障的阻碍而使病毒无法从中肠向血淋巴扩散,从而使病毒无法扩散到达唾液腺,最终灰飞虱不能有效地传播病毒。该研究结果为评估灰飞虱携带SRBSDV向北扩散的风险提供了理论基础。

关键词：南方水稻黑条矮缩病毒白背飞虱灰飞虱病毒复制传播屏障

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南方水稻黑条矮缩病毒的病毒原质组分分析

南方水稻黑条矮缩病毒的病毒原质组分分析

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中国植物病理学会2012年学术年会

作者：毛倩卓刘启飞贾东升魏太云福建农林大学植物病毒研究所/福建省植物病毒学重点实验室

南方水稻黑条矮缩病毒(Southern rice black-streaked dwarf virus,SRBSDV)属于呼肠孤病毒科(Reoviridea)斐济病毒属(Fijivirus)的一个暂定种,由介体白背飞虱以持久增殖型方式传播。植物呼肠孤病毒均可在介体昆虫体内形成提供病毒复制... 详细信息

南方水稻黑条矮缩病毒(Southern rice black-streaked dwarf virus,SRBSDV)属于呼肠孤病毒科(Reoviridea)斐济病毒属(Fijivirus)的一个暂定种,由介体白背飞虱以持久增殖型方式传播。植物呼肠孤病毒均可在介体昆虫体内形成提供病毒复制和子代病毒粒体装配的场所一病毒原质(viroplasm)。目前已知SRBSDV编码的P9-1蛋白是形成病毒原质的组分之一。本研究通过免疫胶体金标记技术对SRBSDV侵染的白背飞虱唾液腺及其原代培养细胞进行电镜切片观察,发现病毒侵染形成的病毒原质呈现出深、浅两种纤维致密状的形态,标记P9-1蛋白的胶体金颗粒主要分布在浅色区域,其间散布着只有内壳蛋白的未成熟病毒粒子;而标记P5蛋白的胶体金颗粒主要分布在深色区域,并且有成熟的病毒粒子散布在其中。因此,推测南方水稻黑条矮缩病毒P9-1蛋白是viroplasm形成初期的主要组成成分,是病毒复制的关键场所;而在viroplasm形成的后期,P5蛋白是主要组成成分,负责病毒粒子的装配。

关键词：南方水稻黑条矮缩病毒病毒原质 P5蛋白 P9-1蛋白

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水稻矮缩病毒在不同介体内的侵染循回差异的机制研究

水稻矮缩病毒在不同介体内的侵染循回差异的机制研究

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中国植物病理学会2012年学术年会

作者：陈倩张鹏谢联辉魏太云福建农林大学植物病毒研究所/福建省植物病毒学重点实验室

水稻矮缩病毒（Rice dwarf virus,RDV）是引起水稻矮缩病的病原,造成多种水稻品种的矮化和减产,由主要介体黑尾叶蝉和次要介体二点黑尾叶蝉、二条黑尾叶蝉和电光叶蝉以持久性增殖型方式在体内循回并经卵传播。导致介体对病毒的亲和性的... 详细信息

水稻矮缩病毒（Rice dwarf virus,RDV）是引起水稻矮缩病的病原,造成多种水稻品种的矮化和减产,由主要介体黑尾叶蝉和次要介体二点黑尾叶蝉、二条黑尾叶蝉和电光叶蝉以持久性增殖型方式在体内循回并经卵传播。导致介体对病毒的亲和性的机制目前尚不知晓,但持久性增殖型传播病毒在中肠的复制和从中肠扩散至内脏肌肉细胞及唾液腺能力直接决定了介体的传毒能力。先前的研究表明,RDV编码的非结构蛋白Pns10形成的包裹病毒粒体的小管不仅可沿着叶蝉培养细胞膜突起一肌动蛋白纤维构成的丝状伪足在细胞间扩散,还可穿越带毒介体肠道上皮细胞含有大量肌动蛋白（actin）纤维束的微绒毛,并沿着中肠表面内脏肌肉的actin纤维移动,确认了小管具有协助病毒在介体内扩散的能力。本研究比较了RDV在黑尾叶蝉（暴发区）、二条黑尾叶蝉（暴发区）和电光叶蝉（无病区）亲和性差异介体内的侵染循回过程,验证Pns10是病毒的介体传毒关键因子,探究RDV利用Pns10小管突破主要介体与次要介体侵染屏障的机理。结果发现在饲毒后的主要介体黑尾叶蝉内大量RDV分布于滤室、中肠、马氏管、唾液腺泡、输卵管和卵萼;Pns10小管可穿越肠道上皮细胞微绒毛和基底膜,到达表面肌肉,在收集到的血淋巴浆细胞和唾液腺泡上也可看到大量的Pns10小管积累。而次要介体二条黑尾叶蝉内,大部分RDV分布于后肠和马氏管、唾液腺和输卵管,滤室、中肠和表面肌肉都未检测到病毒,Pns10小管也分布于上皮细胞微绒毛。另一次要介体电光叶蝉无法带毒。由此,我们得出以下结论:①病毒在主要介体黑尾叶蝉内的分布比次要介体二条黑尾叶蝉广,这种分布差异与病毒对介体的亲和性差别是吻合的;②病毒和Pns10小管在生殖器官的积累为Pns10小管协助RDV经卵传毒提供证据;③来自无病区的电光叶蝉无法带毒再次强调了虫系与地区间的密切关系。

关键词：水稻矮缩病毒 Pns10蛋白管状结构叶蝉

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水稻瘤矮病毒Pns12蛋白的亚细胞定位(摘要)

水稻瘤矮病毒Pns12蛋白的亚细胞定位(摘要)

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第七届全国病毒学学术研讨会暨第二届武汉现代病毒学国际研讨会

作者：范国成吴祖建高芳銮黄美英谢荔岩林奇英谢联辉福建农林大学植物病毒研究所福建省植物病毒学重点实验室

水稻瘤矮病毒(Rice gall dwarf virus,RGDV)引起的水稻瘤矮病自1980年在泰国发现以来,已在马来西亚、中国、日本和韩国等水稻产区相继发生。RGDV 属呼肠孤病毒科(Reoviridae)、植物呼肠孤病毒属(Phytoreovirus),基因组由12条双

关键词：

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酵母双杂交技术研究NS3蛋白及其与CP,SP,NSvc4之间的互作

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热带作物学报 2012年第9期33卷 1642-1646页

作者：牛晓庆鹿连明吴祖建福建农林大学病毒研究所福建省植物病毒学重点实验室福建福州350002 中国热带农业科学院椰子研究所海南文昌571339 浙江省柑橘研究所浙江台州318020

采用RT-PCR扩增水稻条纹病毒基因NS3,构建酵母表达载体,将其分别连接酵母诱饵载体pGBKT7与酵母捕获载体pGADT7,得到重组子pGAD-NS3和pGBK-NS3。自身毒性的实验结果表明,NS3蛋白对酵母细胞无毒性,其自身也没有自激活活性,不存在自身互作... 详细信息

采用RT-PCR扩增水稻条纹病毒基因NS3,构建酵母表达载体,将其分别连接酵母诱饵载体pGBKT7与酵母捕获载体pGADT7,得到重组子pGAD-NS3和pGBK-NS3。自身毒性的实验结果表明,NS3蛋白对酵母细胞无毒性,其自身也没有自激活活性,不存在自身互作。将这2个重组子分别与水稻条纹病毒外壳蛋白CP、病害特异性蛋白SP、运动蛋白NSvc4两两共转化到酵母感受态细胞AH109中,转化产物涂布营养缺陷型培养基二缺、三缺、四缺平板,后经X-a-Gal染色观察,结果表明,NS3与SP的转化产物能在三缺平板上生长并在相应培养基中变蓝色,说明NS3与SP蛋白存在互作,该结果有助于进一步研究NS3蛋白的功能及彼此的互作在水稻条纹病毒致病机理上的作用。

关键词：水稻条纹病毒酵母双杂交蛋白互作

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