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中国植物病理学会第十一届全国会员代表大会暨2018年学术年会

作者：林文忠丘萍金晶刘顺民吴然林晨杜振国吴祖建福建农林大学植物病毒研究所福建省植物病毒学重点实验室

多分体负义RNA病毒(segmented negative-sense RNA viruses,sNSV)普遍采取"抓帽机制"来合成含帽子结构的信使RNA(mRNA),即它们从寄主mRNA抓取一段10～20个碱基的帽子序列,然后以这段帽子序列为引物,转录自身基因组,生成在5端... 详细信息

多分体负义RNA病毒(segmented negative-sense RNA viruses,sNSV)普遍采取"抓帽机制"来合成含帽子结构的信使RNA(mRNA),即它们从寄主mRNA抓取一段10～20个碱基的帽子序列,然后以这段帽子序列为引物,转录自身基因组,生成在5端含一段"异源"帽子序列的病毒mRNA。水稻条纹病毒(Rice stripe tenuivirus,RSV)是一种重要的植物sNSV。近年,本实验室建立了一种高通量测序技术,可以方便且低成本地测取RSV抓取的帽子序列。番茄黄化曲叶病毒(Tomato yellow leaf curl virus,TYLCV)是一种重要的双生病毒。虽然已知TYLCV基因组含6个开放阅读框(ORF),但TYLCV基因组上的转录起始位点(transcription start sites,TSS),目前还不清楚。本研究首先建立了一种方法,可以稳定地获得RSV与TYLCV共侵染的本氏烟(Nicotiana benthamiana)。接着,本研究取RSV和TYLCV共侵染,或RSV单独侵染的本氏烟(阴性对照),以高通量测序技术测取了RSV抓取的帽子序列,分别获得库1(混合侵染)和库2(单独侵染)。将库1中的帽子序列Map到TYLCV基因组,获得TYLCV转录起始位点(即帽子序列第一个碱基)21个,其中,TYLCV病毒链9个,反义链12个;库1中能Map到TYLCV的帽子序列,仅有49条(4个unique)也存在于库2中,这表明多数Map到TYLCV的帽子序列来自TYLCV mRNA,而非寄主mRNA.上述结果表明RSV的"抓帽"可以作为一种工具,鉴定TYLCV的TSS。与传统的RACE实验相比,"抓帽"具有明显的优势:①不必针对每条mRNA设计和筛选不同的引物;②所有TSSs在同一高通量测序反应中获得;③在所得信息量相同的条件下,"抓帽"比传统的RACE实验花费低。

关键词：水稻条纹病毒番茄黄化曲叶病毒转录起始位点 "抓帽"

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水稻黄矮病毒非结构蛋白P6在介体昆虫侵染过程中的功能研究

水稻黄矮病毒非结构蛋白P6在介体昆虫侵染过程中的功能研究

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中国植物病理学会2017年学术年会

作者：谢云杰张晓峰王娟王海涛魏太云福建省植物病毒学重点实验室福建农林大学植物病毒研究所

水稻黄矮病毒（Rice yellow sturt virus,RYSV）是弹状病毒科,核弹状病毒属的成员,是负单链RNA病毒能够同时侵染水稻和介体叶蝉。该病毒编码的非结构蛋白P6在病毒侵染介体昆虫过程中的功能还不清楚。鉴于此,本研究通过免疫荧光技术在黑... 详细信息

水稻黄矮病毒（Rice yellow sturt virus,RYSV）是弹状病毒科,核弹状病毒属的成员,是负单链RNA病毒能够同时侵染水稻和介体叶蝉。该病毒编码的非结构蛋白P6在病毒侵染介体昆虫过程中的功能还不清楚。鉴于此,本研究通过免疫荧光技术在黑尾叶蝉培养细胞标记P6与各个蛋白之间的定位关系,结果发现P6分别能与病毒原质组分蛋白N、P在细胞核内发生共定位,并且利用酵母双杂交系统进一步验证了P6分别能与N、P发生明显互作。为了进一步明确P6在病毒复制增殖中发挥的作用,笔者利用了RNAi干扰技术,即在病毒侵染黑尾叶蝉培养细胞中干扰P6,用共聚焦显微镜观察病毒侵染率变化情况,利用RT-PCR实验检测N、P以及基质蛋白M的相对表达量。结果表明,干扰P6后,病毒侵染率从50%下降到25%,N与对照相比相对表达量下降约37%,P与对照组相比相对表达量下降约32%,M与对照组比相对表达量下降约48%,总体上病毒量发生明显下降。因此,笔者推测水稻黄矮病毒在介体昆虫体内形成病毒原质时,P6分别与N、P相互作用,利于病毒原质的形成,加快了病毒的复制,对病毒复制增殖起到了明显的促进作用。

关键词：水稻黄矮病毒 P6 黑尾叶蝉互作

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共生菌、卵黄原蛋白和水稻矮缩病毒三者互作介导RDV的经卵传播

共生菌、卵黄原蛋白和水稻矮缩病毒三者互作介导RDV的经卵传播

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中国植物病理学会2017年学术年会

作者：吴维毛倩卓贾东升黄玲芝李曼曼陈红燕魏太云福建农林大学植物病毒研究所福建省植物病毒学重点实验室

水稻矮缩病毒(Rice dwarf virus,RDV)是水稻矮缩病的病原物,由介体昆虫黑尾叶蝉以持久增殖型方式进行传播,同时也通过经卵传播方式直接将病毒传至子代昆虫。同时叶蝉体内的初生共生菌Sulcia和Nasuia也可通过经卵方式进行垂直传播,现有... 详细信息

水稻矮缩病毒(Rice dwarf virus,RDV)是水稻矮缩病的病原物,由介体昆虫黑尾叶蝉以持久增殖型方式进行传播,同时也通过经卵传播方式直接将病毒传至子代昆虫。同时叶蝉体内的初生共生菌Sulcia和Nasuia也可通过经卵方式进行垂直传播,现有研究表明在叶蝉体内初生共生菌和RDV入卵均发生在卵黄沉积期,此时卵巢大量摄入卵黄原蛋白;且共生菌和RDV均经由一类位于卵巢管柄处特异化的滤泡细胞-上皮鞘细胞侵入卵母细胞,而滤泡细胞可摄取血腔中的卵黄原蛋白提供给卵母细胞。这可能暗示共生菌和卵黄原蛋白在RDV入卵过程中起着一定作用。现有研究已证明RDV可通过与叶蝉初生共生菌Sulcia的外膜蛋白互作粘附在共生菌表面,伴随Sulcia入卵侵入卵母细胞;但是黑尾叶蝉的另一个初生共生菌Nasuia和卵黄原蛋白在RDV经卵传播过程中的作用仍不清楚。笔者通过免疫荧光观察发现:在卵巢上皮鞘处和卵巢内Nasuia、卵黄原蛋白和RDV三者存在共定位,免疫电镜的结果也表明在上皮鞘和卵内共生菌Nasuia内部可以观察有RDV病毒粒子分布,且卵黄原蛋白胶体金颗粒会特异性的标记在Nasuia上。据此笔者初步判定Nasuia、卵黄原蛋白可能介导RDV的经卵传播。通过酵母双杂交和GSTPull down实验也表明RDV的主要外壳蛋白P8与Nasuia的孔蛋白以及卵黄原蛋白的第四个结构域存在互作。此外,黑尾叶蝉菌胞内会特异性的表达肽聚糖识别蛋白相关蛋白NCrp,干扰此基因表达会抑制Nasuia,而不会对Sulcia造成明显的影响。因此笔者通过RNAi抑制NCrp的表达,与对照注射GFP相比,叶蝉体内Nasuia量明显降低,而叶蝉体内的病毒量不受影响。但病毒的经卵传播效率受到明显的抑制,主要表现为病毒侵染卵巢比例降低,后代卵内病毒量和带毒率均明显降低。同时注射卵黄原蛋白抗体的抗体阻断实验表明:抑制卵巢对卵黄原蛋白的吸收,对Sulcia的入卵没有明显的影响,但会明显降低卵巢内Nasuia和RDV的含量,同时也会明显降低后代卵内Nasuia和RDV的侵染率以及卵内含量。根据笔者现有的结果笔者推断RDV还可以通过与Nasuia和卵黄原蛋白的互作,突破经卵传播屏障。

关键词：水稻矮缩病毒经卵传播 Nasuia 卵黄原蛋白

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水稻瘤矮病毒在介体电光叶蝉体内的侵染和扩散过程

水稻瘤矮病毒在介体电光叶蝉体内的侵染和扩散过程

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中国植物病理学会第十届全国会员代表大会暨2014年学术年会及第四届中美植物病理学学术研讨会

作者：郑立敏刘华敏李俊钦魏太云福建省植物病毒学重点实验室/福建农林大学植物病毒研究所

水稻瘤矮病毒(rice gall dwarf virus,RGDV)属于呼肠孤病毒科(Reoviridae)植物呼肠孤病毒属(Phytoreovirus)。RGDV的主要传播介体是电光叶蝉(Recilia dorsalis),介体叶蝉一旦带毒,可终身带毒并经卵传毒。目前RGDV在其主要介体电光叶蝉... 详细信息

水稻瘤矮病毒(rice gall dwarf virus,RGDV)属于呼肠孤病毒科(Reoviridae)植物呼肠孤病毒属(Phytoreovirus)。RGDV的主要传播介体是电光叶蝉(Recilia dorsalis),介体叶蝉一旦带毒,可终身带毒并经卵传毒。目前RGDV在其主要介体电光叶蝉体内的侵染和扩散过程还不清楚,本研究通过免疫荧光标记和电镜技术观察了RGDV侵染电光叶蝉介体不同时间后,病毒在其消化道系统的定位和侵染循回过程。研究发现电光叶蝉饲毒后3天,病毒在电光叶蝉的滤室处复制组装成子代病毒粒体,表明电光叶蝉的滤室上皮细胞是RGDV的初侵染点。饲毒后5天,子代病毒穿过基底膜扩散到滤室外层的肌肉组织,进而侵染中肠和后肠,同时病毒释放到血淋巴细胞。饲毒后15天,RGDV侵染电光叶蝉的唾液腺。由此明确RGDV在电光叶蝉介体的侵染和扩散过程为:病毒首先侵入滤室上皮细胞,经复制后穿过基底膜扩散到滤室外层的肌肉组织,沿着环肌和纵肌侵染整个中肠和后肠并释放到血淋巴细胞,最后侵染唾液腺。本研究首次直观地阐述了RGDV在电光叶蝉消化系统的侵染和扩散过程,为解析病毒和介体侵染屏障的互作机制奠定基础。

关键词：水稻瘤矮病毒电光叶蝉滤室上皮细胞唾液腺

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电光叶蝉siRNA抗病毒途径介导水稻条纹花叶病毒与水稻瘤矮病毒在昆虫体内的协生关系

电光叶蝉siRNA抗病毒途径介导水稻条纹花叶病毒与水稻瘤矮病毒在...

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中国植物病理学会2019年学术年会

作者：刘烨赵萍贾东升魏太云卫静福建农林大学植物病毒研究所福建省植物病毒学重点实验室

由介体电光叶蝉(Recilia dorsalis)以持久增殖型方式传播的水稻条纹花叶病毒(Rice stripe mosaic virus,RSMV)和水稻瘤矮病毒(Rice gall dwarf virus,RGDV)目前在我国南方稻区有蔓延暴发的趋势。近期研究发现二者存在协生关系,RGDV的侵... 详细信息

由介体电光叶蝉(Recilia dorsalis)以持久增殖型方式传播的水稻条纹花叶病毒(Rice stripe mosaic virus,RSMV)和水稻瘤矮病毒(Rice gall dwarf virus,RGDV)目前在我国南方稻区有蔓延暴发的趋势。近期研究发现二者存在协生关系,RGDV的侵染促进了RSMV在介体电光叶蝉体中肠内的增殖。通过对叶蝉中肠小RNA测序发现,RSMV源的siRNA在与RGDV复合侵染的叶蝉中肠内的数量低于其单独侵染的数量,表明虫体抗RSMV的RNAi通路被抑制,进而促进RSMV的积累。同时发现RGDV源的siRNA在复合侵染叶蝉肠道内的数量高于在单独侵染的肠道内的数量,表明RGDV可能通过吸引虫体的RNAi反应进而减少该途径对RSMV的防御,从而促进RSMV的增殖。通过干扰RNAi通路关键基因dicer2的表达,发现RSMV和RGDV在叶蝉肠道内的积累均增加,表明RGDV可能通过调控昆虫RNAi免疫通路促进RSMV的增殖。因此本研究建立RGDV通过调控叶蝉RNAi通路介导其与RSMV协生关系的模型,为探索新的病毒病防控技术提供理论依据。

关键词：水稻条纹花叶病毒水稻瘤矮病毒协生关系 RNAi

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Matlab软件中的图像处理功能在植物病原统计遗传学研究中的应用

Matlab软件中的图像处理功能在植物病原统计遗传学研究中的应用

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中国植物病理学会第十届全国会员代表大会暨2014年学术年会及第四届中美植物病理学学术研讨会

作者：吴娥娇谢业焜陈凤平詹家绥福建省植物病毒学重点实验室/福建农林大学植物病毒研究所

在植物病理学研究中,测量病斑面积和菌落大小是一项重要而又基本的工作。通常情况,研究者对病斑和菌落大小的计算主要依靠肉眼目测或用刻度尺衡量,该方法不仅效率低、耗时长,而且误差大,重复性差。在病原的统计遗传学研究中,试验样品量... 详细信息

在植物病理学研究中,测量病斑面积和菌落大小是一项重要而又基本的工作。通常情况,研究者对病斑和菌落大小的计算主要依靠肉眼目测或用刻度尺衡量,该方法不仅效率低、耗时长,而且误差大,重复性差。在病原的统计遗传学研究中,试验样品量往往很大,病斑面积和菌落大小的测量方法尤其需要改进。随着计算机和数码技术的飞速发展,利用这些技术对病斑和菌落图像进行分析测量,可以大大减轻劳动负担并节省工作时间和提高准确率。本研究以马铃薯晚疫病菌(Phytophthora infestans)为材料,用美国植物病理学会推荐的Assess和Matlab软件所编程序对图像进行测量病斑和菌落面积和大小,同时以人工直接测量为参照,计算平均处理每个菌落获得数据所需要的时间及准确率,结果表明Assess、人工直接测和Matlab所编程序量法所获得的菌落大小无显著差异,测量每张图片所需平均时间分别约为90s、40s和20s,Matlab所编的程序不仅省时,更重要的是自动化强可大批量处理图片获得数据且不受菌落形态和拍照图片大小的影响,是病原统计遗传学研究中快速、大批量测定菌落和病斑的一种行之有效的方法。

关键词：图像处理植物病原菌马铃薯晚疫病 Matlab Assess

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水稻条纹病毒胁迫下水稻两品种的比较蛋白质组学

水稻条纹病毒胁迫下水稻两品种的比较蛋白质组学

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第七届全国病毒学学术研讨会暨第二届武汉现代病毒学国际研讨会

作者：张晓婷谢荔岩林奇英吴祖建谢联辉福建省植物病毒学重点实验室福建农林大学植物病毒研究所

水稻条纹病毒(Rice stripe virus,RSV)所致的水稻条纹叶枯病,对我国水稻生产危害相当严重。为了明确感病品种武育粳3号及其田间抗病突变系 KT95-418 在 RSV 侵染后的蛋白质组学变化及其差异,采用 TCA/丙酮法分别提取两个品种

关键词：

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水稻矮缩病毒诱导黑尾叶蝉细胞凋亡的机制研究

水稻矮缩病毒诱导黑尾叶蝉细胞凋亡的机制研究

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中国植物病理学会2016年学术年会

作者：陈倩郑立敏王海涛张玲华魏太云福建农林大学植物病毒研究所福建省植物病毒学重点实验室

许多持久增殖型的植物病毒在介体昆虫内高效增殖的同时,对介体昆虫的生长发育也会产生不利的影响。早期研究发现水稻矮缩病毒(Rice dwarf virus,RDV)侵染可降低黑尾叶蝉若虫的存活率和成虫寿命,同时昆虫内部器官会出现一定程度的细胞病... 详细信息

许多持久增殖型的植物病毒在介体昆虫内高效增殖的同时,对介体昆虫的生长发育也会产生不利的影响。早期研究发现水稻矮缩病毒(Rice dwarf virus,RDV)侵染可降低黑尾叶蝉若虫的存活率和成虫寿命,同时昆虫内部器官会出现一定程度的细胞病变。最近有报道发现水稻齿叶矮缩病毒(Rice ragged stunt virus,RRSV)可在介体褐飞虱唾液腺通过诱导细胞凋亡,促进病毒释放至植物内,这为我们研究RDV对介体昆虫的伤害机制提供了启示。本研究用高浓度的RDV提纯病毒侵染黑尾叶蝉培养细胞,在病毒侵染3天后,出现细胞凋亡显著的形态学特征,CCK-8法显示带毒细胞活力显著降低,表明RDV对黑尾叶蝉培养细胞有一定的伤害性。用可鉴定细胞凋亡晚期细胞核DNA断裂特征的TUNEL凋亡原位检测法,观察到多于对照的凋亡小体,证明RDV侵染可诱导黑尾叶蝉细胞凋亡。JC-1流式细胞术发现有20.87%细胞因线粒体跨膜电位下降,发生不可逆转的凋亡,推测RDV引发的细胞凋亡依赖于内源线粒体通路。RT-qPCR结果显示,RDV的侵染特异性激活线粒体通路的细胞凋亡的起始蛋白caspase 2,并且病毒增殖动态与caspase 2、抑制凋亡蛋白IAP1相对表达水平趋势基本一致,表明RDV的侵染诱导了依赖于内源线粒体通路的细胞凋亡。对caspase 2和IAP1进行基因沉默,结果显示病毒积累量显著低于对照,说明病毒的增殖与凋亡趋势呈正相关,推测RDV引发的细胞凋亡有利于病毒侵染。本研究利用黑尾叶蝉培养细胞体系,应用细胞凋亡验证的经典方法,证明RDV的侵染可以诱导细胞凋亡,首次从细胞凋亡角度研究RDV对黑尾叶蝉生长发育的不利影响的机制。研究结果为此类持久性增殖型的植物病毒与介体昆虫的共进化研究提供借鉴。

关键词：水稻矮缩病毒黑尾叶蝉细胞凋亡培养细胞

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水稻瘤矮病毒S12编码第2个RNA沉默抑制子

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中国科学：生命科学 2011年第1期41卷 61-69页

作者：吴建国王春政杜振国蔡丽君胡梅群吴祖建李毅谢联辉福建农林大学植物病毒研究所福建省植物病毒学重点实验室福州350002 北京大学生命科学学院北大-耶鲁植物分子遗传学及农业生物技术联合研究中心蛋白质工程和植物基因工程国家重点实验室北京100871

RNA沉默是一种保守而普遍存在于真核生物体内用于调控基因表达和发育的一种机制,也是植物抵抗病毒侵染和转录的一种防御机制.作为一种反防御机制,许多植物病毒编码沉默抑制子.本研究利用农杆菌共浸润的方法发现,RGDV基因组S12片段编码的... 详细信息

RNA沉默是一种保守而普遍存在于真核生物体内用于调控基因表达和发育的一种机制,也是植物抵抗病毒侵染和转录的一种防御机制.作为一种反防御机制,许多植物病毒编码沉默抑制子.本研究利用农杆菌共浸润的方法发现,RGDV基因组S12片段编码的Pns12蛋白是该病毒的第2个RNA沉默抑制因子.Pns12能够抑制正义链RNA诱发的局部沉默,但不能抑制由双链RNA诱发的局部沉默,在异源病毒表达载体PVX中,Pns12能够增强PVX对本氏烟草的致病性.上述结果提示,Pns12蛋白为RNA沉默抑制因子,可能作用于RNA沉默路径中dsRNA形成的上游.此外,Pns12亚细胞定位结果显示,Pns12主要定位于烟草表皮细胞的细胞核内,推测该基因可能在细胞核中发挥功能.

关键词：水稻瘤矮病毒(RGDV) Pns12 RNA沉默抑制子

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水稻草矮病毒多克隆抗体的制备及应用

水稻草矮病毒多克隆抗体的制备及应用

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中国植物病理学会2011年学术年会

作者：王颂谢联辉杨靓福建农林大学植物病毒研究所福建省植物病毒学重点实验室

水稻草状矮化病于20世纪70年代曾在南亚、东南亚大面积发生,给当地的水稻生产造成严重损失,在我国福建、台湾、广东、广西和海南等地也有分布。其病原是水稻草矮病毒(Rice grassy stunt virus,RGSV),为纤细病毒属(Tenuivirus)的一个成员... 详细信息

水稻草状矮化病于20世纪70年代曾在南亚、东南亚大面积发生,给当地的水稻生产造成严重损失,在我国福建、台湾、广东、广西和海南等地也有分布。其病原是水稻草矮病毒(Rice grassy stunt virus,RGSV),为纤细病毒属(Tenuivirus)的一个成员,病毒粒体丝状,由核衣壳蛋白和基因组RNA组成。基因组含6个ssRNA片段,均为双义编码。通过gateway构建原核表达载体,将这6个片段包含的11个基因(除NSvc1,编码的RdRp)在Rossta菌株里诱导表达,所得目的蛋白对兔子进行免疫注射,得到抗血清,并进一步用western blot、斑点免疫、ELISA检测其效价。

关键词：水稻草矮病毒多克隆抗体制备及应用

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