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中国植物病理学会第十一届全国会员代表大会暨2018年学术年会

作者：欧阳海兵王艳平范玉萍谢家慧孙丹丽杨丽娜詹家绥福建农林大学植物病毒研究所福建省植物病毒学国家重点实验室

马铃薯是重要粮食作物,由致病疫霉引起的晚疫病是马铃薯上毁灭性病害,也是国际第一大作物病害,其防治难度大,危害程度高,对社会的影响深远。致病疫霉效应子是致病疫霉菌攻击马铃薯的重要武器,其快速变异和进化是马铃薯垂直抗性丧失的主... 详细信息

马铃薯是重要粮食作物,由致病疫霉引起的晚疫病是马铃薯上毁灭性病害,也是国际第一大作物病害,其防治难度大,危害程度高,对社会的影响深远。致病疫霉效应子是致病疫霉菌攻击马铃薯的重要武器,其快速变异和进化是马铃薯垂直抗性丧失的主要原因,分子信息学预测致病疫霉基因组内至少含有550个RXLR效应子。Pi02860是致病疫霉RXLR核心效应子,然而其抗性基因尚未发掘,而非生物因素一温度,是决定病原菌种群分化和作物病害爆发的关键因子,对植物-病原菌互作有重要影响。本文采用分子生物学方法,研究Pi02860及其15个突变体的功能,通过构建表达载体,利用农杆菌介导的方法在本氏烟草上进行瞬时表达,检测各突变体对寄主INF1引起的免疫抑制作用,对晚疫病菌侵染的促进作用以及其亚细胞定位情况。研究表明,效应子Pi02860及其突变体促进致病疫霉的侵染;对烟草免疫系统的抑制作用;突变体亚细胞定位于细胞质和细胞核中。同时研究不同温度下Pi02860表达量的差异。即用14个晚疫病菌分别在10℃、18℃、25℃三个不同温度下侵染离体马铃薯叶片,通过RT-qPCR检测效应子Pi02860的基因表达量。研究发现,不同温度下,不同单倍型的晚疫病菌株关于Pi02860表达量存在很大差别,在侵染后第二天,50%以上的菌株在10℃表达很高,20%的菌株在18℃或25℃下有所表达,但表达量相对较低,20%的菌株基本不表达,结果显示,菌株特异性表达效应子Pi02860;温度对Pi02860表达有重要影响,相对于18℃和25℃,10℃下Pi02860表达量更高。

关键词：致病疫霉效应子温度

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野生大豆胁迫应答LRR类受体蛋白激酶基因的克隆及其表达特性分析

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大豆科学 2012年第5期31卷 718-724页

作者：杨靓李翔宇高鹏陈庆园郭玉双福建农林大学植物病毒研究所福建省植物病毒学重点实验室福建福州350002 黑龙江省农业科学院作物育种研究所黑龙江哈尔滨150086 东北农业大学园艺学院黑龙江哈尔滨150030 贵州省烟草科学研究所贵州贵阳550083

从前期构建的野生大豆在高盐、低温、干旱早期的基因表达谱中,选取了在4℃胁迫早期(1 h)上调表达的LRR-RLK的EST,通过SMART和RACE结合的方法获得了GsLRPK的全长序列:该基因全长2 264 bp,共编码714个氨基酸。生物信息学分析表明其氮端含... 详细信息

从前期构建的野生大豆在高盐、低温、干旱早期的基因表达谱中,选取了在4℃胁迫早期(1 h)上调表达的LRR-RLK的EST,通过SMART和RACE结合的方法获得了GsLRPK的全长序列:该基因全长2 264 bp,共编码714个氨基酸。生物信息学分析表明其氮端含有1个LRR N-terminal domain及串联排列的LRR-Motif;碳端含有丝/苏氨酸蛋白激酶催化结构域的11个亚基。此外,GsLRPK蛋白氮端22个氨基酸为可能的信号肽序列,并且存在1个跨膜结构域,很可能定位于细胞质膜或细胞器膜。半定量PCR分析显示该基因可受干旱、ABA、4℃低温及高盐胁迫的诱导,可能作为一个"关键节点"在胁迫信号传导通路中发挥重要作用。

关键词：野生大豆 LRR-RLK 渗透胁迫

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不同海拔马铃薯致病疫霉效应子AVR2,AVR3a,PI04314及PI02860的群体遗传结构分析

不同海拔马铃薯致病疫霉效应子AVR2,AVR3a,PI04314及PI02860的群...

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中国植物病理学会第十一届全国会员代表大会暨2018年学术年会

作者：黄艳媚李源周世豪杨丽娜欧阳海兵刘浩詹家绥福建农林大学植物病毒研究所/福建省植物病毒学国家重点实验室

致病疫霉基因组至少含有550个RXLR效应子。自从发现效应子AVR3a功能及寄主互作蛋白后,其他效应子的功能也陆续报道出来。但是对致病疫霉效应子群体遗传结构及演化的研究相对较少,且大多是对不同国家和地区的致病疫霉菌株的研究,对同一... 详细信息

致病疫霉基因组至少含有550个RXLR效应子。自从发现效应子AVR3a功能及寄主互作蛋白后,其他效应子的功能也陆续报道出来。但是对致病疫霉效应子群体遗传结构及演化的研究相对较少,且大多是对不同国家和地区的致病疫霉菌株的研究,对同一地区不同海拔高达的研究极少,不同海拔的病原菌所生存的环境差异很大,本研究以致病疫霉效应子AVR2,AVR3a,PI04314,PI02860为研究对象,了解中国云南同一山峰不同海拔致病疫霉效应子群体遗传结构、种群分化机制及种群分化与寄主的关系。(1)本研究组在2016年晚疫病发病中期于云南宣威(E 104°,N 26°)按照海拔(跨度700m)不同划分5个群体,共采集354个致病疫霉样本,后对效应子基因AVR2,AVR3a,PI04314,PI02860等进行扩增测序。(2)效应子基因的群体遗传结构:分析5个群体的AVR2,AVR3a,PI04314,PI02860效应子基因的核苷酸、氨基酸、单倍体多样性及其空间分布,估算效应子基因种群分化系数,构建效应子基因单倍体网络。(3)效应子基因种群分化机制:分析AVR2,AVR3a,PI04314,PI02860效应子基因同义与非同义突变的比例,中性检测系数,有效群体量的历史变迁,群体间遗传物质的交换程度及流向,地理间隔和遗传物质交换程度的相关性,以明确突变、自然选择、瓶颈效应和基因流在效应子基因种群分化中的作用。

关键词：致病疫霉效应子群体遗传结构海拔

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利用酵母双杂交系统筛选本氏烟中与RGSV P5互作的蛋白

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江西农业大学学报 2023年第2期45卷 404-412页

作者：熊桂红胡昱颛吴祖建江西农业大学农学院/江西省薯芋生物学重点实验室江西南昌330045 福建农林大学植物病毒研究所福建福州350002

【目的】水稻草状矮化病是由水稻草状矮化病毒引起的,给粮食产量造成了严重威胁。RGSV P5是该病毒的沉默抑制子,在抵抗寄主RNA沉默中发挥重要作用。筛选、鉴定与水稻草状矮缩病毒(RGSV)沉默抑制子P5互作的寄主蛋白,为揭示水稻草状矮化... 详细信息

【目的】水稻草状矮化病是由水稻草状矮化病毒引起的,给粮食产量造成了严重威胁。RGSV P5是该病毒的沉默抑制子,在抵抗寄主RNA沉默中发挥重要作用。筛选、鉴定与水稻草状矮缩病毒(RGSV)沉默抑制子P5互作的寄主蛋白,为揭示水稻草状矮化病毒致病的分子机制提供理论基础,为该病毒病的防治提供有效策略。【方法】利用酵母双杂交技术筛选与水稻草状矮化病毒P5互作的寄主蛋白。提取感染水稻草状矮化病毒的水稻叶片的总RNA。依据P5基因的CDS序列设计特异性引物。利用RT-PCR技术获得P5基因,将P5基因构建到酵母诱饵表达载体pGBKT7上,利用双酶切鉴定诱饵质粒。将诱饵载体pGBKT7、pGBKT7-P5、重组质粒pGBKT7-P5/pGADT7分别转化到酵母感受态细胞Y2H Gold中,通过观察其在缺陷培养基SD/-Trp、SD/-Leu-Trp/上的生长情况及在SD/-Ade/-His/-Leu/-Trp/X-α-gal上的显色情况检测诱饵质粒的毒性和自激活活性。将烟草酵母cDNA文库质粒转化到含诱饵载体pGBKT7-P5的酵母感受态细胞中,先后用不同缺陷型培养基SD/-Leu/-Trp、SD/-Ade/-His/-Leu/-Trp和SD/-Ade/-His/-Leu/-Trp/X-α-gal筛选后获得阳性克隆。经酵母质粒提取、转化、测序和Blast等分子生物学方法最终获得互作蛋白的序列。【结果】RT-PCR扩增得到P5基因,其大小为576 bp。成功构建诱饵载体pGBKT7-P5。表达的诱饵蛋白P5对酵母菌没有毒性和自激活活性。诱饵蛋白P5从本氏烟酵母cDNA文库中进行大量筛选,获得15个阳性克隆,分析后最终得到7个与P5互作的本氏烟蛋白。经生物信息学分析它们分别为线粒体孔蛋白VDAC、ADP核糖基化因子GTP水解酶激活蛋白ArfGAP、囊泡突触结合蛋白Syt-2、延伸因子eEF1A、脯氨酸合成酶共转录的细菌同源蛋白PROSC、非特征蛋白C9orf78及一种未知蛋白。【结论】本研究成功筛选到7个与水稻草状矮化病毒P5互作的寄主因子。这些互作的寄主因子主要参与转运、生物或非生物胁迫、胁迫应答等生物学过程。深入研究这些互作因子将为解析寄主蛋白参与调控病毒的复制、运动、致病等分子机制提供理论基础,为水稻草状矮化病毒病的防治提供新的思路。

关键词：水稻草状矮化病毒 P5蛋白酵母双杂交蛋白互作

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云南番木瓜环斑病毒的发生及遗传多样性

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微生物学通报 2014年第6期41卷 1142-1151页

作者：朱静谭冠林包改丽刘芳李晓静吴祖建李凡云南农业大学农业生物多样性应用技术国家工程研究中心云南昆明650201 云南农业大学现代教育技术中心云南昆明650201 福建农林大学植物病毒研究所福建省植物病毒学重点实验室福建福州350002

【目的】明确云南省番木瓜环斑病毒(Papaya ringspot virus,PRSV)发生情况,并对其进行遗传多样性分析。【方法】利用RT-PCR技术,于2011-2012年对采自云南省昆明市、楚雄州、保山市、德宏州、西双版纳州、临沧市、玉溪市、红河州、文山... 详细信息

【目的】明确云南省番木瓜环斑病毒(Papaya ringspot virus,PRSV)发生情况,并对其进行遗传多样性分析。【方法】利用RT-PCR技术,于2011-2012年对采自云南省昆明市、楚雄州、保山市、德宏州、西双版纳州、临沧市、玉溪市、红河州、文山州等地的24个番木瓜、南瓜和罗汉果疑似病样进行扩增、测序,对样品中获得的940 bp PRSV部分cp基因及3′端非编码区的序列应用分子生物学软件MEGA 5进行系统发育分析。【结果】从17个样品中检测到了PRSV,检出率为70.8%,表明该病毒在云南的发生较为普遍。云南PRSV不同分离物间的核苷酸序列变异较大,与其他已报道的PRSV分离物之间的基因组3′端核苷酸序列一致性为81.7%-100%。基于PRSV的CP部分氨基酸序列及基因组3′端核苷酸的系统进化分析结果表明,来自亚洲、北美洲、南美洲和大洋洲的PRSV分离物可以分为2个组,其中第Ⅰ组均为来自中国的分离物,包括了大部分的PRSV云南分离物,第Ⅰ组内分离物间的差异较第Ⅱ组大;第Ⅱ组的分离物来源较为复杂,亚洲、北美洲、南美洲和大洋洲均有分布。基于PRSV CP部分氨基酸序列构建的系统进化树中,各分离物之间没有明显的地理和寄主相关性,而基于PRSV基因组3′端核苷酸序列构建的系统进化树中,除中国大陆分离物和印度分离物外,其他地区的PRSV在进化上与其地理来源有明显的相关性。【结论】PRSV在云南的昆明市、楚雄州、保山市、德宏州、西双版纳州、临沧市、玉溪市、红河州和文山州等地都有不同程度发生,且为害寄主植物涉及番木瓜、南瓜及罗汉果,PRSV侵染罗汉果为云南首次发现。云南PRSV分离物的分子变异很大,但是关于PRSV的分子变异是否与其地理分布及症状表现有关,以及P型和W型的分子区分特征还有待进一步研究。

关键词：番木瓜环斑病毒 cp基因分子变异多样性分析

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西番莲病毒可视化多重RT-LAMP检测技术的建立

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病毒学报 2023年第6期39卷 1682-1692页

作者：谢丽雪陈细红张小艳陈江姗张立杰高芳銮沈建国李韬福建省农业科学院果树研究所福州350013 福州海关技术中心/福建省检验检疫技术研究重点实验室福州350001 福建农林大学植物病毒研究所福州350002

东亚西番莲病毒(East Asian Passiflora virus,EAPV)、夜来香花叶病毒(Telosma mosaic virus,TeMV)和黄瓜花叶病毒(Cucumber mosaic virus,CMV)是当前危害我国西番莲的主要病毒种类。为建立同时快速检测西番莲上EAPV、TeMV和CMV的可视化多重逆转录环介导等温核酸扩增(Multiplex reverse transcription loop-mediated isothermal amplification,multiplex RT-LAMP)技术,本研究根据GenBank已报道的EAPV、TeMV和CMV外壳蛋白(Coat protein,CP)基因序列保守区域分别设计、筛选特异性引物,并通过反应体系和反应条件的优化,建立了可同时快速检测EAPV、TeMV和CMV的多重RT-LAMP技术,并进行了特异性、灵敏度测定及西番莲果园样品的检测。结果表明,建立的多重RT-LAMP方法特异性良好,可对EAPV、TeMV和CMV同时进行检测,而与西番莲上其他病毒及阴性对照无交叉反应;多重RT-LAMP的灵敏度最低可检测稀释至145×10-3 ng/μL总RNA,与一步法RT-PCR方法的灵敏度相当;西番莲果园样品3种病毒的多重RT-LAMP检测结果与一步法RT-PCR检测结果一致。本研究建立的多重RT-LAMP方法操作简便、特异性强、灵敏度高,适用于基层实验室和现场对西番莲上EAPV、TeMV和CMV的快速初筛。

关键词：西番莲东亚西番莲病毒夜来香花叶病毒黄瓜花叶病毒多重逆转录环介导等温核酸扩增病毒检测

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河南省主要推广品种对小麦黄花叶病毒抗性的评价

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植物保护学报 2011年第2期38卷 102-108页

作者：孙炳剑李洪连杨新志谢联辉陈剑平福建农林大学植物病毒研究所福州350002 浙江省植物有害生物防控国家重点实验室培育基地农业部植物保护与生物技术重点实验室浙江省植物病毒重点实验室浙江省农业科学院病毒学与生物技术研究所杭州310021 河南农业大学植物保护学院郑州450002 河南省西平县植保植检站西平463900

为了评价河南省主要推广品种对小麦黄花叶病毒(Wheat yellow mosaic virus,WYMV)的抗性,于2006—2010年在河南省西平县病圃进行了田间抗性鉴定试验和室内间接ELISA检测,并分析了病害严重程度对产量的影响。结果表明,在供试的62个品种中... 详细信息

为了评价河南省主要推广品种对小麦黄花叶病毒(Wheat yellow mosaic virus,WYMV)的抗性,于2006—2010年在河南省西平县病圃进行了田间抗性鉴定试验和室内间接ELISA检测,并分析了病害严重程度对产量的影响。结果表明,在供试的62个品种中,仅有新麦208表现为免疫;豫麦70-36、泛麦5号、阜麦936、山东95519、豫麦70、高优503、豫麦9676、郑麦366和陕麦229等9个品种表现为抗病,占供试品种的14.5%;濮优938、兰考矮早8、新原958、花培2号、温优1号、豫麦18、郑麦9023、豫麦47、豫农201、偃展4110、豫麦36、百农878和豫麦49-198等13个品种表现为中抗,占供试品种的21.0%;另外39个品种表现为感病,占供试品种的62.9%。对48个品种进行了产量与病害严重度分析,发现随着病害的严重度增加,小麦的穗数、千粒重以及产量都有明显下降,严重度为1级时,平均减产9.6%;严重度达到2级和3级时,平均减产分别为30.3%和33.5%。

关键词：小麦黄花叶病毒小麦品种抗性产量损失

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马铃薯Y病毒多基因系统发育分析及其在株系鉴定中的应用

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遗传 2017年第10期39卷 918-929页

作者：邹文超沈林林沈建国蔡伟詹家绥高芳銮福建农林大学植物病毒研究所/福建省植物病毒学重点实验室福州350002 福建出入境检验检疫局检验检疫技术中心/福建省检验检疫技术研究重点实验室福州350001 福清出入境检验检疫局综合技术服务中心福清350300 福建农林大学闽台特色作物病虫生态防控协同创新中心福州350002

为实现马铃薯Y病毒(Potato virus Y,PVY)常见株系的快速鉴定,本文以PVY的P1、HC-pro、VPg和CP 4个基因为研究对象建立了快速准确的多基因联合体系。根据基因的不同组合建立5个不同数据集,分别进行系统发育分析,并通过贝叶斯标签关联显著... 详细信息

为实现马铃薯Y病毒(Potato virus Y,PVY)常见株系的快速鉴定,本文以PVY的P1、HC-pro、VPg和CP 4个基因为研究对象建立了快速准确的多基因联合体系。根据基因的不同组合建立5个不同数据集,分别进行系统发育分析,并通过贝叶斯标签关联显著性(Bayesian tip-association significance,Ba TS)分析各数据集中代表分离物与株系的关联性,以确定实现PVY快速鉴定的最佳组合。不同数据集的系统发育及Ba TS分析结果显示,除了联合P1、VPg和CP 3个基因数据集外,其他4个数据集均无法实现PVY常见株系的准确鉴定。采用不同建树方法对联合P1、VPg和CP 3个基因数据集比较分析显示,基于ML法和NJ法的系统发育树在拓扑结构上基本一致,均优于基于贝叶斯算法的最大分支置信(maximum clade credibility,MCC)树。同时,以HLJ26分离物为研究对象,对建立的多基因联合体系进行实际应用,结果显示该分离物与PVY^(NTN-NW)株系的3个分离物SYR-Ⅱ-2-8、SYR-Ⅱ-Be1和SYR-Ⅱ-Dr H以高置信值聚为一亚簇,表明该分离物可能属于PVY^(NTN-NW)株系(SYR-Ⅱ型)。重组分析显示,HLJ26基因组存在4个潜在的重组信号,分别位于P1、HC-pro/P3、VPg和CP的5￠-末端,与PVY^(NTN-NW)株系(SYR-Ⅱ型)的重组位点相一致,表明其属于PVYNTN-NW株系(SYR-Ⅱ型)。同时,应用多重RT-PCR成功扩增出约为1000 bp和400 bp的2个特异性片段,与PVY^(NTN-NW)株系(SYR-Ⅱ型)的特异条带大小相一致。这些结果进一步支持了多基因联合体系的鉴定结果。联合P1、VPg和CP 3个基因数据集系统发育分析,可以实现PVY常见株系的准确鉴定。

关键词：马铃薯Y病毒多基因系统发育分析系统发育与性状关联分析 SYR-Ⅱ型

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防治烟草赤星病拮抗根际芽孢杆菌的筛选

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植物病理学报 2006年第6期36卷 555-561页

作者：方敦煌吴祖建邓云龙杨波林奇英福建农林大学植物病毒研究所生物农药与化学生物学教育部重点实验室福州350002 云南省烟草科学研究所玉溪653100

从健康烟草根分离到669株根际芽孢杆菌,通过平板对峙培养、代谢产物活性检测,筛选到9株抑制烟草赤星病菌(A lternaria alternata)活性较强的菌株,其菌体及粗代谢产物产生的抑菌圈直径均在10 mm以上;离体防效和田间小区防治试验表明,菌... 详细信息

从健康烟草根分离到669株根际芽孢杆菌,通过平板对峙培养、代谢产物活性检测,筛选到9株抑制烟草赤星病菌(A lternaria alternata)活性较强的菌株,其菌体及粗代谢产物产生的抑菌圈直径均在10 mm以上;离体防效和田间小区防治试验表明,菌株B6、B75的含菌发酵液和粗代谢产物的离体防效分别为75.6%、76.9%和62.5%、64.7%,小区防效分别为70.3%、75.8%和60.3%、64.4%。粗代谢产物的抑菌作用试验发现,菌株B75的粗代谢产物在一定浓度范围内均能抑制赤星病菌孢子萌发、菌丝生长与产孢。

关键词：烟草赤星病拮抗根际芽孢杆菌筛选抑制作用

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小麦黄花叶病毒P3蛋白致病功能域的鉴定和分析

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浙江农业学报 2019年第5期31卷 777-783页

作者：张岩亓玉华鲁燕华杨乾坤何雨娟李俊敏陈剑平福建农林大学植物保护学院福建福州350002 浙江省植物有害生物防控国家重点实验室培育基地农业农村部/浙江省植保生物技术重点实验室浙江省农业科学院病毒学与生物技术研究所浙江杭州310021 宁波大学植物病毒学研究所浙江宁波315211

小麦黄花叶病毒(Wheat yellow mosaic virus,WYMV)隶属于马铃薯Y病毒科(Potyviridae)大麦黄花叶病毒属(Bymovirus),其基因组由两条正义单链RNA组成,共编码10个蛋白。先前的研究表明,马铃薯Y病毒组多种病毒编码的保守蛋白P3具有多种功能... 详细信息

小麦黄花叶病毒(Wheat yellow mosaic virus,WYMV)隶属于马铃薯Y病毒科(Potyviridae)大麦黄花叶病毒属(Bymovirus),其基因组由两条正义单链RNA组成,共编码10个蛋白。先前的研究表明,马铃薯Y病毒组多种病毒编码的保守蛋白P3具有多种功能,在病毒复制、致病性、克服宿主抗性、细胞间移动等方面均具有重要作用,而P3在大麦黄花叶病毒属中是否有类似功能目前还未见报道。本研究利用烟草脆裂病毒(Tobacco rattle virus,TRV)介导的本氏烟基因沉默系统,明确了WYMV的P3碳端在本氏烟上具有致病功能域P3-C,但完整的P3则不具有致病能力。进一步移码突变研究表明,P3-C的致病性是由其编码的多肽引起的,而非病毒来源的小干扰RNA介导的宿主基因沉默。同时P3-C的两个跨膜结构域对致病性具有重要作用,单独表达任何一个跨膜结构域P3-C均不能在本氏烟上引起明显症状。

关键词：小麦黄花叶病毒 P3蛋白致病性

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