检索结果-内蒙古大学图书馆

中国农业科学 2025年第5期58卷 907-917页

作者：徐元元贾东升宾羽魏太云福建农林大学植物保护学院/媒介病毒研究中心/福建省植物病毒学重点实验室

【目的】水稻矮缩病毒（rice dwarf virus,RDV）引起的水稻矮缩病是危害中国南方水稻生产的重要病害。结合前人的研究基础，利用分子生物学等手段，解析肽聚糖识别蛋白6(PGRP6)参与调控媒介昆虫黑尾叶蝉（Nephotettix cincticeps）体内... 详细信息

【目的】水稻矮缩病毒（rice dwarf virus,RDV）引起的水稻矮缩病是危害中国南方水稻生产的重要病害。结合前人的研究基础，利用分子生物学等手段，解析肽聚糖识别蛋白6(PGRP6)参与调控媒介昆虫黑尾叶蝉（Nephotettix cincticeps）体内共生菌携带RDV经卵垂直传播的机制，为水稻病毒病的生物防治提供理论依据。【方法】利用酵母双杂交技术筛选与经卵传播相关蛋白（prp、Nasuia porin、P8）均互作的PGRP，并通过GST pull-down进一步验证其互作关系；利用实时荧光定量PCR技术测定相关基因在无毒和带毒虫体内的表达差异，并分析干扰PGRP6、prp后对共生菌增殖的影响，同时通过Western blot检测对昆虫体内共生菌膜蛋白积累的影响；分析抑制PGRP6表达对叶蝉存活率、子代带毒率、带毒子代的病毒核酸水平的影响，并利用荧光原位杂交（FISH）和免疫荧光标记观察叶蝉卵巢内prp、PGRP6、Nasuia及RDV的分布情况；通过抑菌圈和肽聚糖降解实验验证PGRP6的功能。【结果】黑尾叶蝉的PGRP6与prp、Nasuia porin、P8均存在互作；PGRP6和prp在RDV侵染的黑尾叶蝉中的表达量均显著升高；抑制PGRP6表达可促进共生菌Nasuia和Sulcia的增殖，而抑制prp降低了共生菌的增殖，其功能与PGRP6相反，当两者同时被干扰后对共生菌的增殖无显著影响；ds PGRP6处理导致黑尾叶蝉存活率显著降低，子代带毒率增加，子代昆虫体内的病毒量明显高于对照组；免疫荧光标记发现PGRP6与prp、Nasuia、RDV均在卵巢组织中分布并发生共定位，prp和Nasuia是包裹的位置关系；PGPR6存在抑菌功能，可发挥抑制共生菌增殖的作用。【结论】PGRP6通过抑制黑尾叶蝉体内共生菌的增殖维持卵巢组织内的稳态，其与prp的功能相拮抗，其既确保了黑尾叶蝉的生命活力，又调控了共生菌携带RDV的垂直传播。

关键词：水稻矮缩病毒黑尾叶蝉肽聚糖识别蛋白富脯氨酸蛋白共生菌卵巢经卵传播抑菌

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植物病毒经介体昆虫唾液腺水平传播至寄主韧皮部机制的研究进展及展望

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植物保护学报 2022年第1期49卷 198-206页

作者：张洪祥贾东升陈倩魏太云福建农林大学媒介病毒研究中心福建省植物病毒学重点实验室福州350002

很多植物病毒经介体昆虫以持久循回型的方式水平传播至寄主韧皮部致病,而唾液腺是介体昆虫持久传毒的重要器官,也是植物病毒在介体昆虫内循回需要克服的最后一道防线。持久性植物病毒要完成水平传播,必须突破昆虫唾液腺屏障的阻碍,因此... 详细信息

很多植物病毒经介体昆虫以持久循回型的方式水平传播至寄主韧皮部致病,而唾液腺是介体昆虫持久传毒的重要器官,也是植物病毒在介体昆虫内循回需要克服的最后一道防线。持久性植物病毒要完成水平传播,必须突破昆虫唾液腺屏障的阻碍,因此病毒和介体昆虫间形成了“攻”与“守”的较量与对决。揭示持久性植物病毒克服昆虫唾液腺屏障,实现水平传播的机制,对病害控制具有重要意义。该文着眼于介体昆虫唾液腺在持久传毒过程中的重要功能,回顾了虫传植物病毒突破介体昆虫唾液腺侵入屏障和释放屏障的分子机制,探讨了昆虫唾液蛋白通过调节植物或昆虫的适应性和行为促进或抑制病毒水平传播的功能,为制定阻断介体昆虫传播植物病毒途径的防控策略提供理论依据。

关键词：植物病毒介体昆虫唾液腺唾液蛋白水平传播

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茉莉C病毒侵染性克隆的构建及CP基序分析

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微生物学报 2022年第10期62卷 3813-3824页

作者：朱丽娟张崇涛白雅妮陈梓茵解晓盈韩艳红福建农林大学植物保护学院媒介病毒研究中心福建福州350002 福建农林大学生命科学学院福建福州350002

【目的】构建茉莉C病毒(JaVC)福建分离物基因组全长cDNA侵染性克隆,克隆9省JaVC分离物的CP基因并比较分析基序差异,调查JaVC在我国茉莉产区的分布和传播情况。【方法】提取JaVC检测呈阳性的茉莉叶片总RNA,以反转录后的cDNA为模板扩增获... 详细信息

【目的】构建茉莉C病毒(JaVC)福建分离物基因组全长cDNA侵染性克隆,克隆9省JaVC分离物的CP基因并比较分析基序差异,调查JaVC在我国茉莉产区的分布和传播情况。【方法】提取JaVC检测呈阳性的茉莉叶片总RNA,以反转录后的cDNA为模板扩增获得JaVC基因组全长序列并构建全长cDNA克隆pXT-JaVC-FJ;同时构建了外壳蛋白(coat protein,CP)融合红色荧光蛋白mCherry的克隆(pXT-JaVC CP-mCherry)。利用农杆菌浸润法侵染本生烟,通过RT-PCR检测法和激光共聚焦扫描显微镜观察法验证JaVC侵染性。克隆其他8省JaVC分离物的3'末端包含CP的片段并测序分析CP基序差异。通过田间调查明确JaVC在茉莉上的发生情况和其传播介体。【结果】pXT-JaVC-FJ浸润本生烟可引起系统侵染,说明该克隆具有侵染活性。所有JaVC分离物的CP均编码296个氨基酸,JaVC中国台湾分离物的CP与各分离物核苷酸序列相似性为82.27%‒91.36%,与广东分离物相似性最高;氨基酸序列相似性为92.23%‒96.82%,与云南分离物相似性最高;各分离物CP的氨基酸序列在32‒35位点上差异显著,具有6种不同的氨基酸基序排列,分别为SEHA、GENA、REGT、SENA、GGDA和GGNA。田间调查显示,JaVC在中国茉莉植株上广泛分布且可在蓟马中检测到JaVC。【结论】成功构建了JaVC-FJ的侵染性克隆,这为该病毒的基因功能、致病机理等研究奠定了基础;通过我国茉莉产区JaVC的发生及变异情况分析,为JaVC引起的病毒病的防治提供了理论依据。

关键词：茉莉C病毒外壳蛋白侵染性cDNA克隆

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水稻OsUF的基序分析及其亚细胞定位

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农业生物技术学报 2019年第2期27卷 222-228页

作者：丁作美王媛媛石超南王红张成龙郑晓媛张超吴祖建吴建国福建农林大学植物保护学院/植物病毒研究所/虫媒病毒研究中心

E3泛素连接酶作为泛素化途径中的重要调控者参与细胞内多种生物学过程。为了挖掘水稻（Oryza sativa）抗病毒分子中的重要基因,本研究基于前期的研究成果,通过反转录PCR方法（reverse transcription PCR, RT-PCR）克隆得到水稻E3泛素连... 详细信息

E3泛素连接酶作为泛素化途径中的重要调控者参与细胞内多种生物学过程。为了挖掘水稻（Oryza sativa）抗病毒分子中的重要基因,本研究基于前期的研究成果,通过反转录PCR方法（reverse transcription PCR, RT-PCR）克隆得到水稻E3泛素连接酶—泛素融合蛋白（ubiquitin fusion protein, UF）基因的cDNA序列（GenBank No. XM015757177.2）。基序（motif）分析结果显示,OsUF中含有7个保守的motif,其中包含了5个泛素相关motif （Ubiquitin, Rad60-SLD, Ubiquitin-2, Rad60-SLD-2和DUF2407）和2个非泛素化相关motif （RibosomalL4F01020和zf-C4pol）;利用Gateway同源重组体系将OsUF cDNA全长重组到融合表达绿色荧光蛋白（green fluorescent protein, GFP）的表达载体pEarleyGate103上,然后通过农杆菌介导（Agrobacterium-mediated）的烟草（Nicotiana benthamiana）瞬时表达系统,在本氏烟叶片中瞬时表达OsUF蛋白。亚细胞定位和4',6-二脒基-2-苯基吲哚（4',6-diamidino-2-phenylindole, DAPI）染核结果显示,OsUF蛋白定位在细胞核。Western blot结果显示,OsUF与GFP蛋白融合并正确表达。本研究为深入分析OsUF可能参与的生物学过程以及解析水稻抗病毒机理提供了理论资料。

关键词：泛素连接酶泛素融合蛋白亚细胞定位细胞核

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茉莉H病毒外壳蛋白基因的克隆、原核表达及抗血清制备

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植物病理学报 2021年第4期51卷 654-657页

作者：朱丽娟江朝杨韩艳红福建农林大学植物保护学院媒介病毒研究中心福州350002

茉莉H病毒(jasmine virus H,JaVH)是近年来引起茉莉病毒病的一种新病毒,Zhuo等[1]在我国福建黄化嵌纹的茉莉上首次发现并报道,随后Dey等[2]在美国夏威夷和华盛顿也发现了JaVH,并认为其是引起茉莉病症不可或缺的致病因子之一。

关键词：抗血清制备致病因子茉莉美国夏威夷原核表达病毒病新病毒病毒外壳蛋白基因

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六种水稻病毒一步法多重RT-PCR快速检测方法的建立

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农业生物技术学报 2022年第4期30卷 619-627页

作者：黄静王晨一兰彬源丁新伦张帅吴建国漳州职业技术学院食品工程学院漳州363000 福建农林大学媒介病毒研究中心福州350002 福建农林大学媒介病毒研究中心福州350002

农业生产上水稻(Oryza sativa)病毒病的发生大多为复合侵染,仅通过病毒病症状学的诊断往往很难准确分辨,因此开发快速精准诊断多种水稻病毒病的检测技术,对于水稻病毒病害的精准测报具有重要应用价值.基于此,本研究根据当前我国南方农... 详细信息

农业生产上水稻(Oryza sativa)病毒病的发生大多为复合侵染,仅通过病毒病症状学的诊断往往很难准确分辨,因此开发快速精准诊断多种水稻病毒病的检测技术,对于水稻病毒病害的精准测报具有重要应用价值.基于此,本研究根据当前我国南方农业生产上常见的6种水稻病毒,即水稻条纹病毒(Rice stripe virus,RSV)、水稻草状矮化病毒(Rice grassy stunt virus,RGSV)、水稻矮缩病毒(Rice dwarf virus,RDV)、水稻锯齿叶矮缩病毒(Rice ragged stunt virus,RRSV)、水稻黑条矮缩病毒(Rice black-streaked dwarf virus,RBSDV)和南方水稻黑条矮缩病毒(Southern rice black-streaked dwarf virus,SRBSDV)的外壳蛋白(coat protein,CP)的基因序列,设计了特异性检测引物,建立了可同时检测6种病毒的一步法多重逆转录PCR(reverse transcription-PCR,RT-PCR)体系,其结果表明一步法多重RT-PCR检测反应体系(总体系20μL)中,RSV上下游引物浓度为10μmol/L的体积加量为0.6μL、RDV为0.4μL、RGSV为0.3μL、RRSV为0.4μL、RBSDV为0.6μL、SRBSDV为0.2μL;Onestep RT/Taq Mix的用量确认为0.75μL,5×反应缓冲液用量为4μL,模板量为1μg.多重RT-PCR参数设定为RNA反转录50℃30 min;预变性94℃2 min;94℃变性30 s;退火温度58℃,30 s;72℃延伸1 min,35个循环;72℃终延伸10 min.研究结果表明该体系可同时高效精准地检测6种水稻病毒,极大地提高了检测效率;该方法可广泛应用于实验室精准检测、田间水稻病毒病和传毒介体的检测,也为相关产品的研发提供技术支持和参考依据.

关键词：水稻病毒多重RT-PCR 病毒检测

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影响茉莉H病毒沉默抑制子功能关键氨基酸的鉴定

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福建农林大学学报（自然科学版） 2022年第1期51卷 27-32页

作者：朱丽娟张崇涛王耀伟江朝杨解晓盈白雅妮韩艳红福建农林大学植物保护学院福建农林大学媒介病毒研究中心福建农林大学生命科学学院福建福州350002

茉莉H病毒(JaVH)是一种天竺葵黄斑病毒属病毒,可引起严重的茉莉病毒病害.该病毒基因组含有5个开放阅读框,分别编码2个复制相关蛋白、2个运动蛋白和1个外壳蛋白(CP),其中,CP可能是一个RNA沉默抑制子,并且与致病性密切相关.构建JaVH CP瞬... 详细信息

茉莉H病毒(JaVH)是一种天竺葵黄斑病毒属病毒,可引起严重的茉莉病毒病害.该病毒基因组含有5个开放阅读框,分别编码2个复制相关蛋白、2个运动蛋白和1个外壳蛋白(CP),其中,CP可能是一个RNA沉默抑制子,并且与致病性密切相关.构建JaVH CP瞬时表达重组质粒pXT-CP,将其与pGDG混合浸润本生烟,浸润第5天利用紫外灯照射,观察到浸润区域仍具强烈荧光,表明CP是一个较强的沉默抑制子.为进一步鉴定CP的关键功能位点,将JaVH外壳蛋白与同属其他病毒进行比对后构建了18个pXT-CP突变体,利用农杆菌共浸润瞬时表达系统和Western blot明确了13个影响JaVH的CP功能的关键氨基酸位点,包括Trp 28、Arg 40、Arg 58、Gly 75、Ile 83、Thr 84、Val 108、Phe 111、Ser 115、Lys 123、Tyr 124、Arg132和Lys 200.

关键词：茉莉H病毒外壳蛋白 RNA沉默抑制子

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水稻抗褐飞虱基因QBPH1和QBPH4的精细定位与聚合效应分析

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中国农业科学 2024年第23期57卷 4619-4631页

作者：熊尚烨张翔梁宝慧叶仰东李浴阳朱晓朱志鸿官华忠张帅吴建国胡杰福建农林大学植物保护学院/闽台作物有害生物生态防控国家重点实验室/媒介病毒研究中心福建农林大学农学院/福建省作物设计育种重点实验室福建农林大学未来技术学院/遗传改良研究中心

【目的】利用遗传群体发掘新的水稻抗褐飞虱QTL，并评估其聚合效应，为抗虫育种提供重要的遗传材料和基因资源。【方法】利用日本晴（感虫型）和佳辐占（抗虫型）的重组自交系（RILs）群体，结合苗期抗性评价和极端混池测序法（BSA-seq... 详细信息

【目的】利用遗传群体发掘新的水稻抗褐飞虱QTL，并评估其聚合效应，为抗虫育种提供重要的遗传材料和基因资源。【方法】利用日本晴（感虫型）和佳辐占（抗虫型）的重组自交系（RILs）群体，结合苗期抗性评价和极端混池测序法（BSA-seq）定位抗褐飞虱QTL。进一步通过QTL精细定位、候选基因鉴定、聚合效应分析及混池转录组测序（BSR-seq），揭示QTL介导的抗性生理和分子机制。【结果】BSA-seq分析，在水稻第1(30—32 Mb区段)和第4(5—7 Mb区段)染色体上定位到2个主效抗性QTL，分别命名为QBPH1和QBPH4。通过区间连锁的分子标记，验证了这些QTL的真实性。QBPH4与已克隆的BPH3和BPH15位于同一位置，而QBPH1为一个新发现的QTL。通过加密标记和重组单株分析，将QBPH1的位置精确到30.61—30.65Mb。在此区域内，Os01g53294和Os01g53330分别编码呼吸爆发氧化酶蛋白B和花青素5,3-O-葡萄糖基转移酶，被认为是QBPH1的可靠候选基因。此外，通过对比QBPH1和QBPH4单基因及其聚合家系在苗期的抗性、褐飞虱蜜露面积和重量、虫增重、致死率、偏好性等指标，发现双基因聚合家系的抗性未显著增强。QBPH1和QBPH4均介导了抗生性和趋避性的生理机制，但其效应存在差异。BSR-seq分析揭示了QBPH1的不同等位基因型在转录调控、蛋白质氨基酸磷酸化和氧化还原过程中的差异表达基因（DEGs）显著富集。此外，与茉莉酸（jasmonic acid,JA）合成和信号传导路径相关的基因在抗虫材料中得到显著上调，并通过RT-qPCR试验得到了验证。【结论】成功在水稻第1染色体上鉴定了一个新的抗褐飞虱QTL——QBPH1。该QTL介导了水稻对褐飞虱的抗生性和趋避性，但与另一QTL的聚合效应并不显著。QBPH1可能通过参与JA通路来介导对褐飞虱的防御机制。在此基础上，Os01g53294和Os01g53330被确定为QBPH1的可靠候选基因。

关键词：水稻褐飞虱抗性 QTL定位基因聚合转录组测序

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4种茉莉病毒一步法多重RT-PCR检测技术的建立

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植物病理学报 2024年第4期54卷 819-828页

作者：朱丽娟白雅妮苏兰怡王驰何诗芸韩艳红福建农林大学植物保护学院媒介病毒研究中心福州350002 三明学院三明365003 福建农林大学生命科学学院福州350002

茉莉生长过程中普遍受到多种病毒的复合侵染。由于缺乏病毒与症状关系的系统研究,仅通过症状很难准确分辨茉莉被何种病毒侵染,所以建立快速精准诊断多种茉莉病毒病的检测技术具有重要应用价值。本研究建立了一种可同时检测4种茉莉病毒... 详细信息

茉莉生长过程中普遍受到多种病毒的复合侵染。由于缺乏病毒与症状关系的系统研究,仅通过症状很难准确分辨茉莉被何种病毒侵染,所以建立快速精准诊断多种茉莉病毒病的检测技术具有重要应用价值。本研究建立了一种可同时检测4种茉莉病毒——茉莉T病毒(jasmine virus T,JaVT)、茉莉C病毒(jasmine virus C,JaVC)、茉莉H病毒(jasminevirus H,JaVH)和茉莉A病毒(jasmine virus A,JaVA)——的一步法多重逆转录PCR(one-step multiplex reverse transcription-PCR,RT-PCR)体系,其最优反应体系为:在总体系20.0μL中,JaVT、JaVC、JaVH和JaVA的上下游引物浓度分别为200、150、100和150nmol·L^(-1),One-step Enzyme Mix:0.2μL,2x反应缓冲液:10.0μL,模板量:1.0μg;多重RT-PCR参数设定为:RNA反转录50℃30min;预变性94℃2min;94℃变性30s;55℃退火30s;72℃延伸45s,30个循环;72℃整体延伸10 min。研究结果表明建立的一步法多重RT-PCR可同时高效精准地检测4种茉莉病毒,极大地提高了检测效率,可被广泛应用于实验室精准、高效检测和田间茉莉病毒病的检测。

关键词：茉莉病毒一步多重RT-PCR 检测

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水稻MYB基因家族特征及其在RGSV和RRSV侵染后的响应

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植物病理学报 2023年第2期53卷 258-266页

作者：徐荣荣常青魏莹李霞吴建国赵珊珊福建农林大学虫媒介病毒研究中心福建省植物病毒学重点实验室闽台作物有害生物生态防控国家重点实验室福州350002

MYB基因家族作为植物体内最大的转录因子家族之一,在调节植物生长发育以及抗逆境胁迫方面发挥着至关重要的作用。然而,OsMYBs在水稻抗病毒通路中的作用还尚不清楚。为了探究OsMYBs家族在水稻抗病毒通路中所扮演的角色,对其结构、特征,... 详细信息

MYB基因家族作为植物体内最大的转录因子家族之一,在调节植物生长发育以及抗逆境胁迫方面发挥着至关重要的作用。然而,OsMYBs在水稻抗病毒通路中的作用还尚不清楚。为了探究OsMYBs家族在水稻抗病毒通路中所扮演的角色,对其结构、特征,以及对已报道的单链RNA病毒水稻草状矮化病毒(rice grassy stunt virus,RGSV)和双链RNA病毒水稻锯齿叶矮缩病毒(rice ragged stunt virus,RRSV)侵染后的表达谱进行分析,发现51个响应RGSV侵染,50个响应RRSV侵染。进一步分析发现,26个OsMYBs可同时响应两种不同类型病毒。从中筛选出10个表达量相对较高且差异倍数较大的基因进行实时荧光定量PCR(Real-time Quantitative PCR,qRT-PCR)验证,结果表明,OsMYB30、LOC_Os02g42850、LOC_Os02g47744、LOC_Os05g37050、LOC_Os06g43090和LOC_Os08g33150在响应两种病毒侵染后表达量下调;而LOC_Os05g38460在响应两种病毒侵染后表达量上调。LOC_Os05g51160和LOC_Os09g26170在RGSV侵染后表达量上调,在RRSV侵染后表达量下调;而LOC_Os08g05520在RGSV侵染后表达量下调,在RRSV侵染后表达量上调。这10个基因中有7个在两种病毒侵染后表达量变化趋势相同,表明这些基因可能对病毒响应具有广谱性。这为深入解析OsMYBs在水稻与病毒互作中的功能提供了有用的信息。

关键词：水稻MYB基因水稻草状矮化病毒水稻锯齿叶矮缩病毒

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