检索结果-内蒙古大学图书馆

中国卫生统计 2025年第1期42卷 56-61页

作者：任月秦阳兰宁张永超刘毅蓉赵晋芳罗天娥山西医科大学公共卫生学院卫生统计教研室 030001 北京市丰台区疾病预防控制中心重大疾病风险评估山西省重点实验室

目的探讨使用多组学数据和免疫相关基因构建不同深度学习模型对肺腺癌患者的预后预测价值并比较其预测性能。方法从TCGA数据库肺腺癌多组学数据提取免疫基因后分别用原始数据及单因素Cox回归过滤法、方差过滤法和弹性网络(elastic net,... 详细信息

目的探讨使用多组学数据和免疫相关基因构建不同深度学习模型对肺腺癌患者的预后预测价值并比较其预测性能。方法从TCGA数据库肺腺癌多组学数据提取免疫基因后分别用原始数据及单因素Cox回归过滤法、方差过滤法和弹性网络(elastic net,EN)方法降维后的数据构建DeepOmix、Nnet-survival、Cox-nnet和Deepsurv预后预测模型,采用一致性指数和时间依赖性ROC评价模型的预测效果。结果比较多组学模型C指数、3年AUC和5年AUC值结果显示:DeepOmix模型结合生物信号通路信息采用不同降维方法构建的肺腺癌预后预测模型与DeepOmix、Nnet-survival、Cox-nnet和Deepsurv模型相比预测性能最好(C指数在0.83以上,3年AUC在0.89以上,5年AUC在0.94以上)。在筛选变量构建预后预测模型中EN降维在绝大多数情况下具有良好的预测准确度。DeepOmix模型能显著区分高、低风险组患者,且高风险组预后较差(P<0.001)。结论DeepOmix模型结合生物信号通路以及EN降维可以分析高维低样本量数据,构建的肺腺癌预后预测模型与其他模型相比预测性能较高。

关键词： DeepOmix 深度学习预后预测生存分析肺腺癌

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纵向项目反应理论在慢性心力衰竭患者报告结局中的应用

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中国卫生统计 2025年第1期42卷 110-114页

作者：解赛君闫晶晶韩港飞余红梅罗艳虹田晶张岩波山西医科大学公共卫生学院卫生统计学教研室重大疾病风险评估山西省重点实验室030001 山西医科大学第一医院心内科山西中医药大学健康服务与管理学院

目的探讨纵向项目反应理论在慢性心力衰竭(chronic heart failure,CHF)患者报告结局生理领域中的应用,分析患者纵向随访过程中的重点警示条目。方法本研究收集2017年10月至2020年11月山西省2所三甲医院慢性心力衰竭患者报告结局量表(CHF... 详细信息

目的探讨纵向项目反应理论在慢性心力衰竭(chronic heart failure,CHF)患者报告结局生理领域中的应用,分析患者纵向随访过程中的重点警示条目。方法本研究收集2017年10月至2020年11月山西省2所三甲医院慢性心力衰竭患者报告结局量表(CHF patient-reported outcome measure,CHF-PROM)数据,并在患者出院后1个月、3个月、6个月,之后每半年进行电话随访。构建包含协变量的纵向项目反应理论模型,估计CHF-PROM中生理领域各条目的区分度、难度、项目信息曲线及各协变量的回归系数。结果分析结果显示区分度参数最高的是条目15(能独自上街购买物品,2.487);最小的难度阈值参数为条目13(日常活动能够自理,-0.489);条目6(脸色苍白,13.1%)和条目7(口唇发紫,13.4%)在生理领域条目里提供的信息量最大;在反映CHF患者院外健康状况的变化趋势方面,女性、体力劳动者、NYHA等级高及高龄患者,其独立性维度得分变化较快;食欲睡眠维度,男性、NYHA等级高及非体力劳动者得分变化较快;躯体症状维度,女性、非体力劳动者得分变化较快;BMI小的患者整体生理领域健康水平变化趋势更快。结论总体来说CHF患者院外生理领域健康衰退呈现一定的规律性。对CHF患者生理健康的干预应重点放在恶化较快的方面,及时给予患者关注,防止不良结局事件的发生。

关键词：慢性心力衰竭患者报告结局纵向项目反应理论

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老年吞咽障碍影响因素探究及其预测研究

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重庆医科大学学报 2025年第4期50卷 501-510页

作者：彭朋陈忻睿周艺林田小芹唐于钦邓丹重庆医科大学公共卫生学院卫生统计学教研室重庆市江北区疾病预防控制中心/重庆市江北区卫生监督所

目的：探究老年人吞咽障碍影响因素，构建吞咽障碍预测模型，为临床实践提供理论依据。方法：本研究采用病例对照研究设计，选取重庆医科大学附属第一医院老年病科2016年3月至2023年6月就诊的吞咽障碍患者为病例组，同期同科室就诊的非... 详细信息

目的：探究老年人吞咽障碍影响因素，构建吞咽障碍预测模型，为临床实践提供理论依据。方法：本研究采用病例对照研究设计，选取重庆医科大学附属第一医院老年病科2016年3月至2023年6月就诊的吞咽障碍患者为病例组，同期同科室就诊的非吞咽障碍病人为对照组，利用相关性分析、套索回归（least absolute shrinkage and selection operator,LASSO）及多因素logistic回归探究吞咽障碍影响因素，十折交叉验证训练极度梯度提升算法（extreme gradient boosting,XGBoost）模型用于预测吞咽障碍并运用沙普利加性解释（SHapley additive exPlanations,SHAP）方法对模型进行可视化处理。结果：病例组1 009例，对照组2 125例。相关性及LASSO回归共筛选12个因素进行多因素logistic回归，多因素结果显示患有肌肉减少症、年龄增加、照料者为子女或看护、老年人身体衰弱、口腔健康状况差、自我生活能力差、抑郁、认知障碍是吞咽障碍的危险因素（OR>1,P<0.05），女性、参加社区活动为吞咽障碍的保护因素（OR<1,P<0.05）。XGBoost模型预测效能较好，模型精确率为0.795、查准率为0.711、灵敏度为0.613、特异度为0.881,F1值为0.661，受试者工作特征（receiver operating characteristic,ROC）曲线下面积AUC=0.855。SHAP图显示，前5位重要特征分别为照料者、口腔评分、衰弱情况、日常生活能力及认知功能。结论：老年人吞咽障碍影响因素众多，临床上应更加关注口腔健康差、身体衰弱、日常生活需要依赖他人及认知功能障碍的老年人，XGBoost模型在老年人吞咽障碍预测上有较好的表现，可为临床实践提供参考。

关键词：吞咽障碍影响因素预测模型 XGBoost模型

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精浆氧化还原电位与精子DNA碎片指数、高DNA着色性及运动参数的相关性研究

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中国医科大学学报 2025年第1期54卷 56-60页

作者：刘星池张倩李栗妍关小川张宁于月新中国人民解放军北部战区总医院生殖医学科沈阳110016 中国医科大学公共卫生学院卫生统计学教研室沈阳110122

目的研究精浆氧化还原电位(ORP)和归一化氧化还原电位(nORP)与精子DNA碎片指数(DFI)、高DNA着色性(HDS)及运动参数的相关性,探讨其是否能作为评估男性生育潜能的生物标志物。方法选取2023年10月至12月于中国人民解放军北部战区总医院生... 详细信息

目的研究精浆氧化还原电位(ORP)和归一化氧化还原电位(nORP)与精子DNA碎片指数(DFI)、高DNA着色性(HDS)及运动参数的相关性,探讨其是否能作为评估男性生育潜能的生物标志物。方法选取2023年10月至12月于中国人民解放军北部战区总医院生殖医学科男科门诊就诊的309例男性作为研究对象。采用电极法检测精浆ORP、nORP,分析其与DFI、HDS、年龄、禁欲时间、精液量、精子总数、精子浓度、前向运动精子数、前向运动精子百分率、非前向精子数、非前向精子百分率、不动精子数、不动精子百分率、精子活动率、曲线速度(VCL)、直线速度(VSL)、平均速度(VAP)、线性指数(LIN)、直性指数(STR)及振动指数(WOB)的相关性;对nORP结果进行三等分,比较其与上述参数的差异。采用广义线性回归探讨nORP与HDS的关系,同时生成HDS与nORP的平滑曲线拟合。结果Pearson相关性及Spearman相关性分析显示,ORP和nORP均与精液量、不动精子百分率及DFI呈正相关,与前向运动精子数、前向运动精子百分率、精子活动率、VSL、VAP呈负相关(P<0.05);不同的是ORP还与禁欲时间、不动精子数呈正相关(P<0.05),与LIN、STR及WOB呈负相关(P<0.05),而nORP还与HDS呈正相关(P<0.05),与精子总数、精子浓度、非前向精子数、非前向精子百分率、不动精子数、VCL呈负相关(P<0.05)。nORP分组结果显示,精液量、精子总数、精子浓度、前向运动精子数、前向运动精子百分率、非前向精子数、非前向精子百分率、不动精子数、不动精子百分率、精子活动率、VCL、VSL、VAP、DFI、HDS组间比较差异有统计学意义(P<0.05);将nORP与HDS制作曲线拟合,对年龄及禁欲时间进行了调整。随着HDS的增加,nORP呈线性上升趋势。结论ORP、nORP都与精子DFI和主要运动参数相关,但nORP还与代表精子成熟度的HDS相关,更能反映精液质量,可作为评估男性生育潜能的生物标志物。

关键词：精浆氧化还原电位精子DNA碎片指数精子高DNA着色性精子运动参数氧化应激性不育

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食品与营养科学 2025年第2期14卷 118-128页

作者：潘浩楠余萍萍程洪锋易静重庆医科大学公共卫生学院卫生统计学教研室重庆重庆医科大学附属第二医院健康管理中心重庆

背景:生命早期饥荒暴露会导致代谢综合征和脂肪肝病,但对最新定义的代谢功能障碍相关脂肪性肝病(MASLD)风险的影响暂不清楚。本研究的目的是通过因果定向无环图(DAG)分析生命早期饥荒暴露MASLD患病风险的影响。方法:分析了重庆市某体检... 详细信息

背景:生命早期饥荒暴露会导致代谢综合征和脂肪肝病,但对最新定义的代谢功能障碍相关脂肪性肝病(MASLD)风险的影响暂不清楚。本研究的目的是通过因果定向无环图(DAG)分析生命早期饥荒暴露MASLD患病风险的影响。方法:分析了重庆市某体检中心15,791例含腹部超声检查体检对象的数据。将研究对象按出生年份分为(1953年1月1日至1955年12月31日出生)、童年晚期暴露组(1956年1月1日至1958年12月31日出生)、幼儿暴露组、胎儿暴露组(1959年1月1日至1961年12月31日出生)和非暴露组(1962年1月1日至1964年12月31出生)。通过DAG模型获得无偏调整集。使用二元logistic和线性回归模型对结果进行调整。结果:本研究人群中MASLD患病率为38.1%。但男性和女性受饥荒暴露人群的MASLD患病风险相反。相比于非暴露组,男性胎儿饥荒暴露组(OR = 0.688, 95% CI: [0.608, 0.779], P = 0.000)和幼儿饥荒暴露组(OR = 0.673, 95% CI: [0.593, 0.764], P = 0.000)和童年晚期暴露组(OR = 0.628, 95% CI: [0.537, 0.735], P = 0.000)患MASLD风险较低。而女性的童年晚期暴露组患MASLD的风险是非暴露组约1.2倍(OR = 1.236, 95% CI: [1.089, 1.404], P = 0.001)。早年经历饥荒男性的BMI、甘油三酯(TG)和高密度脂蛋白(HDL)指标的心血管代谢相关风险都较低,而经历饥荒女性的空腹血糖较高。结论:生命早期暴露于饥荒可能会降低男性老年时患MASLD的风险,但女性在童年晚期经历饥荒可能会增加老年时MASLD的风险,不同性别的风险差异可能是由于饥荒经历对男性和女性心血管代谢风险因素相关指标的影响不同所造成的。本研究与过往研究的差异可能是由于地区间受灾程度差异和研究对象的年龄阶段不同导致的,需要进一步的队列研究探索饥荒暴露对MASLD的长期影响。Background: Early life famine exposure leads to metabolic syndrome and fatty liver disease, but the effect on the risk of newly defined metabolic dysfunction-associated fatty liver disease (MASLD) is unclear. The aim of this study was to analyze the impact of early life famine exposure to MASLD risk by causally oriented acyclic graph (DAG). Methods: The data of 15,791 subjects with abdominal ultrasound examination in a physical examination center in Chongqing were analyzed. Participants were divided into (born between January 1, 1953 and December 31, 1955), late childhood exposure group (born between January 1, 1956 and December 31, 1958), infant exposure group, fetal exposure group (born between January 1, 1959 and December 31, 1961) and non-exposure group (born between January 1, 1962 and December 31, 1964). The unbiased adjustment set was obtained by the DAG model. The results were adjusted using binary logistic and linear regression models. Results: The prevalence of MASLD in this population was 38.1%. However, men and women have opposite risks of MASLD in people exposed to famine. Compared with the non-

关键词：脂肪肝代谢功能障碍相关脂肪性肝病血糖老年人有向无环图

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基于随机森林的冠状动脉狭窄风险识别模型

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中山大学学报(医学科学版) 2025年第1期46卷 138-146页

作者：吕勇峰王钰婧张乐怡李一心原娜田晶山西医科大学第一临床医学院山西太原030000 山西医科大学医学科学院山西太原030000 公共卫生学院卫生统计学教研室山西太原030000 山西医科大学第一医院心血管内科山西太原030000 重大疾病风险评估山西省重点实验室山西太原030000

【目的】采用机器学习方法构建冠状动脉狭窄风险识别模型,分析影响冠状动脉狭窄的主要因素。【方法】连续纳入2013年1月至2020年5月就诊于山西省两所医院,经冠状动脉造影确诊为冠心病的患者。以患者临床资料为自变量,Gensini积分为结局... 详细信息

【目的】采用机器学习方法构建冠状动脉狭窄风险识别模型,分析影响冠状动脉狭窄的主要因素。【方法】连续纳入2013年1月至2020年5月就诊于山西省两所医院,经冠状动脉造影确诊为冠心病的患者。以患者临床资料为自变量,Gensini积分为结局变量,采用Logistic回归、反向传播神经网络(BPNN)和随机森林(RF)算法构建冠状动脉狭窄风险识别模型。通过灵敏度(TPR)、特异度(TNR)、准确率(ACC)、阳性预测值(PV+)、阴性预测值(PV-)、受试者工作特征曲线下面积(AUC)和校准曲线进行模型评价。并对最佳模型进行特征重要性排序。【结果】Logistic回归、反向传播神经网络和随机森林模型的TPR分别为75.76%、74.30%和93.70%,ACC分别为74.05%、72.30%和79.49%,AUC分别为0.7399、0.7231、0.7522,随机森林模型综合效能表现最佳。随机森林模型结果表明,胸痛症状、心电图提示ST段异常、室性早搏、合并高血压、房颤、心脏彩超提示节段性室壁运动异常、主动脉瓣关闭不全、肺动脉瓣关闭不全、心血管疾病家族史、体质量指数是冠脉狭窄的前10位重要变量。【结论】在识别冠状动脉狭窄方面,随机森林模型表现出最佳的综合性能,可较为准确地评估冠脉狭窄的程度,为临床干预提供科学依据。

关键词： Gensini积分反向传播神经网络随机森林冠状动脉狭窄机器学习

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基于机器学习的肾癌患者术后复发风险预测模型的构建与评价

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现代泌尿外科杂志 2025年第3期30卷 240-247页

作者：王佩佩侯钊马慧吕定阳王玘葳双卫兵山西医科大学第一医院泌尿外科山西太原030001 山西医科大学公共卫生学院卫生统计学教研室山西太原030001

目的探索肾癌患者术后复发的影响因素,构建复发风险的机器学习预测模型并评价其效能。方法回顾性收集山西医科大学第一医院泌尿外科2013—2021年间915例行手术治疗的肾癌患者的临床资料。将纳入研究的患者按7∶3的比例随机划分为训练集(... 详细信息

目的探索肾癌患者术后复发的影响因素,构建复发风险的机器学习预测模型并评价其效能。方法回顾性收集山西医科大学第一医院泌尿外科2013—2021年间915例行手术治疗的肾癌患者的临床资料。将纳入研究的患者按7∶3的比例随机划分为训练集(n=510)和验证集(n=218)。在训练集中使用最小绝对收缩和选择算子(LASSO)回归算法筛选重要变量,并构建肾癌患者术后复发风险的机器学习预测模型,在验证集中结合模型的受试者工作特征(ROC)曲线下面积(AUC)和准确率、F1值等指标对模型效能进行比较。结果LASSO回归筛选出影响肾癌患者术后复发的风险因素有吸烟史、肿瘤最大径、N分期、Fuhrman分级、凝血酶时间和纤维蛋白原水平,据此构建的logistic模型、决策树模型、随机森林模型和贝叶斯模型在验证集中的AUC值分别为0.862、0.792、0.843和0.861,准确率分别为0.917、0.908、0.904和0.927,F1值分别为0.357、0.286、0.323和0.600。综合比较,贝叶斯模型的性能最稳定且具有较好的区分度。结论在本数据集中,基于贝叶斯算法的机器学习预测模型效能较好,可为临床决策提供参考。

关键词：肾细胞癌复发机器学习预测模型逻辑回归决策树随机森林贝叶斯

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慢性心力衰竭患者住院期间QRS间期及其变化与远期全因死亡的关系

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中国循环杂志 2025年第1期40卷 46-53页

作者：王雅靖田晶郭威王磊张蕾张岩波韩清华山西医科大学第一临床医学院太原030001 山西医科大学第一医院心内科太原030001 山西省心血管病医院心内科太原030024 山西白求恩医院心内科太原030032 重大疾病风险评估山西省重点实验室太原030012 山西医科大学公共卫生学院卫生统计学教研室太原030012 山西省心脑血管病三高共管技术创新中心太原030001

目的:探讨慢性心力衰竭(心衰)患者住院期间QRS间期及其变化与远期全因死亡的关系。方法:纳入2014年3月至2021年11月于山西省3家三级甲等医院(山西医科大学第一医院、山西省心血管病医院、山西白求恩医院)诊断为慢性心衰的住院患者3580例... 详细信息

目的:探讨慢性心力衰竭(心衰)患者住院期间QRS间期及其变化与远期全因死亡的关系。方法:纳入2014年3月至2021年11月于山西省3家三级甲等医院(山西医科大学第一医院、山西省心血管病医院、山西白求恩医院)诊断为慢性心衰的住院患者3580例,记录患者入院及出院心电图的QRS间期,并计算住院期间QRS间期变化(ΔQRS)和ΔQRS比率(ΔQRS/入院QRS间期×100%)。根据ΔQRS三分位数将患者分为QRS间期下降组(n=1364)、QRS间期稳定组(n=1248)和QRS间期进展组(n=968),于患者出院后第1、3、6、12个月及此后每6个月进行电话随访,以远期全因死亡为终点事件,随访截止时间为2023年5月1日。采用Kaplan-Meier法绘制生存曲线,并用log-rank法进行组间比较。采用Cox比例风险回归模型进行预后分析,采用限制性立方样条图评估慢性心衰患者住院期间QRS间期相关指标与远期全因死亡风险之间的关系。结果:中位随访71(56,92)个月期间,共502例(14.0%)患者死亡。QRS间期下降组和QRS间期稳定组的远期全因死亡率明显低于QRS间期进展组(13.9%vs.10.7%vs.18.6%,χ^(2)=28.607,P<0.001)。多因素Cox回归分析显示,入院QRS间期(HR=1.005,95%CI:1.002~1.009,P=0.003)及住院期间ΔQRS比率(HR=2.071,95%CI:1.247~3.440,P=0.005)是慢性心衰患者远期全因死亡的独立影响因素。限制性立方样条图显示,当入院QRS间期>96.36 ms时,QRS间期越长,患者远期全因死亡风险越高;当入院QRS间期为89.32~96.36 ms时,QRS间期为慢性心衰患者远期全因死亡的保护性因素;当住院期间ΔQRS比率≥3.40%时,其数值越大,患者全因死亡风险越高。结论:入院QRS间期及住院期间ΔQRS比率是慢性心衰患者远期全因死亡的独立影响因素,入院QRS间期>96.36 ms和住院期间ΔQRS比率≥3.40%时患者远期全因死亡风险明显增加。

关键词：慢性心力衰竭 QRS间期 QRS间期变化影响因素全因死亡

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热带医学杂志 2025年第3期 301-307+330+284页

作者：陈祎炜潘珂君买买提艾力·吾布力鲁晓擘尔西丁·买买提新疆医科大学公共卫生学院流行病与卫生统计学教研室新疆医科大学第一附属医院感染病·肝病中心

目的分析入院时出现艾滋病（AIDS）相关疾病或症状AIDS患者的生存率，并通过建立列线图改善管理。方法纳入2000年10月9日-2021年1月13日新疆医科大学第一附属医院感染病·肝病中心收治首次入院合并有AIDS相关疾病或症状的465例AID... 详细信息

目的分析入院时出现艾滋病（AIDS）相关疾病或症状AIDS患者的生存率，并通过建立列线图改善管理。方法纳入2000年10月9日-2021年1月13日新疆医科大学第一附属医院感染病·肝病中心收治首次入院合并有AIDS相关疾病或症状的465例AIDS患者，按生存状态分为存活组（n=239）和死亡组（n=226）。患者信息包括人口学资料、AIDS相关疾病资料、临床表现和实验室检查数据。首先，按7∶3的比例随机划分为训练集325例（死亡组159例，存活组166例）和测试集140例（死亡组67例，存活组73例），对划分后的数据集进行差异性分析，差异均无统计学意义（P>0.05），确保划分数据集均衡可比，用Lasso回归筛选变量；其次，构建多因素Cox比例风险回归模型，绘制列线图预测患者的生存率；然后，绘制训练集和测试集的受试者工作特征（ROC）曲线、校准曲线进行模型评价；最后，绘制Kaplan-Meier生存曲线和累积风险图，分析不同预测因子对患者生存率和累积死亡风险的影响。结果两组患者婚姻状况、感染途径、耶氏肺孢子菌肺炎、细菌性肺炎、使用复方新诺明情况、治疗方案、血清天门冬氨酸氨基转移酶、丙氨酸氨基转移酶比较差异均有统计学意义(（χ2/Z=6.345、61.736、23.302、28.303、30.233、19.139、-2.610、-3.193,P均<0.05）。多因素Cox回归分析结果显示，使用复方新诺明情况（有，HR=0.694,95%CI:0.497～0.967）、咳痰（有，HR=1.785,95%CI:1.247～2.554）、婚姻状况（离婚或丧偶，HR=1.948,95%CI:1.104～3.437）、感染途径（异性性传播，HR=0.487,95%CI:0.253～0.937）和耶氏肺孢子菌肺炎（有，HR=0.274,95%CI:0.100～0.753）是影响AIDS患者生存的影响因素（P均<0.05）。ROC曲线显示，训练集1、2、3年生存率的曲线下面积（AUC）分别为0.705、0.713、0.716，测试集1、2、3年生存率的AUC分别为0.743、0.709、0.711；校准曲线显示，预测值与实际生存率有较高的一致性。生存曲线和累积风险图显示，使用复方新诺明情况、咳痰、婚姻状况、感染途径、耶氏肺孢子菌肺炎对患者生存率和累积死亡风险均有影响（P均<0.05）。结论本研究构建的列线图能够有效预测AIDS患者的生存率，使用复方新诺明情况、咳痰、婚姻状况、感染途径和耶氏肺孢子菌肺炎是影响患者生存的重要预测因子。该模型在训练集和测试集中的表现均良好，具有较高的预测精度，可为临床管理提供有益的参考。

关键词：艾滋病生存分析列线图

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大容量天然人源Fab噬菌体展示抗体库的构建及鉴定

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中华流行病学杂志 2025年第2期46卷 288-295页

作者：赵雅坤魏销玥孟凡亮刘文韬范佳铭龙丽瑾王婉婷陈建伶张建中何利华刘立雍赵瑞孙迪袁雪珍闫笑梅中国医科大学公共卫生学院卫生统计学教研室沈阳110122 传染病溯源预警与智能决策全国重点实验室中国疾病预防控制中心传染病预防控制所北京102206 北京知禾新创生物技术有限公司北京102299

目的构建大容量天然人源Fab噬菌体展示抗体库,用于体外筛选高亲和力的特异性抗体。方法收集126名健康人的外周血,分离单个核细胞,提取RNA,反转录合成cDNA,以cDNA为模板,通过PCR分别扩增IgG、IgM的VH以及抗体V_(κ)、C_(κ)和V_(λ)、C_(... 详细信息

目的构建大容量天然人源Fab噬菌体展示抗体库,用于体外筛选高亲和力的特异性抗体。方法收集126名健康人的外周血,分离单个核细胞,提取RNA,反转录合成cDNA,以cDNA为模板,通过PCR分别扩增IgG、IgM的VH以及抗体V_(κ)、C_(κ)和V_(λ)、C_(λ)基因,以第一次PCR产物为模板进行二次PCR。通过重叠PCR将V_(κ)与C_(κ)及V_(λ)与C_(λ)连接得到轻链,最后通过重叠PCR得到轻链+VH片段。将酶切的抗体基因与含有重链CH1编码基因的噬菌体载体pNC3连接,电转化大肠埃希菌TG1感受态细胞。随机挑选100个阳性克隆进行菌落PCR鉴定及测序,并利用IMGT数据库和MAFFT序列比对软件分析抗体基因多态性。以重组表达的金黄色葡萄球菌α溶血素对抗体库进行富集筛选。随机挑选单克隆进行噬菌体ELISA检测,并对阳性克隆(抗原A450∶空白对照A_(450)≥2.1)进行测序。结果成功构建2个库容量分别为1.25×10^(11)的κ链和1.54×10^(11)的λ链的大容量天然人源Fab噬菌体展示抗体库,κ链和λ链噬菌体展示抗体库噬菌体滴度分别为6.04×10^(13) CFU/ml和3.50×10^(13) CFU/ml。κ链和λ链噬菌体展示抗体库转化阳性插入率分别为96%(96/100)和100%(100/100)。序列分析发现,测序获得的抗体序列均为独特序列。骨架区氨基酸序列相对保守,互补决定区(CDR)氨基酸序列长度不等,氨基酸多样性大,尤其是CDR3。经过IMGT数据库分析发现,序列有广泛的可变-多样性-连接片段家族分布。经过6轮富集筛选,获得了针对金黄色葡萄球菌α溶血素的特异性噬菌体抗体富集,对142个单克隆进行测序,结果显示共有8条独特型Fab抗体序列。结论本研究成功构建了大容量天然人源Fab噬菌体展示抗体库,抗体库多样性良好,可用于血清流行病学相关的抗体筛选。

关键词：噬菌体展示抗体库 Fab抗体天然抗体库

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