检索结果-内蒙古大学图书馆

中国病原生物学杂志 2020年第7期15卷 761-767页

作者：花璇王涛毕言伟陶裕凯孔德龙汤仁仙吴建伟江苏省免疫与代谢重点实验室江苏徐州221004 贵州医科大学基础医学院微生物学教研室贵州贵阳550025 贵州医科大学基础医学院寄生虫学教研室贵州贵阳550025

目的设计家蝇抗真菌肽MAF-1A衍生肽Mt6-21DLeu,探讨其抗白色念珠菌(Candida albicans,Ca)活性及作用机制。方法通过氨基酸替换法设计MAF-1A衍生肽Mt6-21DLeu;采用微量液体稀释法测定Mt6-21DLeu对Ca的最低抑菌浓度(MIC)和最低杀菌浓度(M... 详细信息

目的设计家蝇抗真菌肽MAF-1A衍生肽Mt6-21DLeu,探讨其抗白色念珠菌(Candida albicans,Ca)活性及作用机制。方法通过氨基酸替换法设计MAF-1A衍生肽Mt6-21DLeu;采用微量液体稀释法测定Mt6-21DLeu对Ca的最低抑菌浓度(MIC)和最低杀菌浓度(MFC)以及不同环境中Mt6-21DLeu对Ca抑菌活性的变化;通过时间-杀菌曲线反映Mt6-21DLeu对Ca的杀菌动力学;通过结晶紫染色测定Mt6-21DLeu对Ca不同阶段生物被膜的清除作用;采用多功能酶标仪检测荧光探针DPH的相对荧光密度;荧光显微镜观察Mt6-21DLeu的细胞膜通透性;采用流式细胞仪检测Mt6-21DLeu影响Ca活性氧ROS生成的影响。结果与MAF-1A相比,Mt6-21DLeu抑制Ca生长的效果提高近5倍,其MIC和MFC分别为0.128 mg/ml和0.256 mg/ml。在盐离子环境中,Mt6-21DLeu活性几乎不受影响,胰酶环境对Mt6-21DLeu有所抑制但远小于对MAF-1A活性的干扰。时间-杀菌曲线结果显示在MIC和2 MIC浓度下,Mt6-21DLeu于9 h后逐渐抑制Ca的生长;4 MIC浓度时Mt6-21DLeu的杀菌能力增强。Mt6-21DLeu在4、24、48 h时均能部分清除Ca已形成的生物被膜,清除效果与Mt6-21DLeu的浓度有关;4 MIC浓度的Mt6-21DLeu能显著增加Ca细胞膜的流动性(P<0.01)及通透性,进而引起Ca菌体内ROS的积累。结论衍生肽Mt6-21DLeu能高效、持久、稳定地抑杀Ca,其抗菌作用可能通过增强细胞膜通透性、促进胞内ROS积累的多靶点模式实现。因此,可将Mt6-21DLeu作为治疗Ca感染的候选药物分子。

关键词：家蝇抗菌肽衍生肽白色念珠菌抑菌活性活性氧

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耐甲氧西林金黄色葡萄球菌流行病学特征的研究进展

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大连医科大学学报 2013年第2期35卷 183-187页

作者：王斌史友权司怡然钟民涛黄敏大连医科大学基础医学院临床医学专业辽宁大连116044 大连医科大学基础医学院微生物学教研室辽宁大连116044

近些年耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)的感染越来越严重,且呈现逐年升高的趋势,成为医院感染流行的主要病原菌,MRSA因其多药耐药、易暴发流行、治疗困难和病死率高等特点已成为临床治疗的难题。本文就近年来MRSA流行病学特征的调查,分... 详细信息

近些年耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)的感染越来越严重,且呈现逐年升高的趋势,成为医院感染流行的主要病原菌,MRSA因其多药耐药、易暴发流行、治疗困难和病死率高等特点已成为临床治疗的难题。本文就近年来MRSA流行病学特征的调查,分别对其分类、分布及其感染诱因和耐药特征加以总结和综述,为临床的治疗和预防提供对策。

关键词： MRSA 耐药性流行病学特征医院感染

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登革病毒2型非结构蛋白NS2B的原核表达、纯化及其抗体的制备

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免疫学杂志 2008年第2期24卷 135-138页

作者：刘丽梅陈宗涛田衍平陈炜江雯徐小峰高娜安静第三军医大学基础医学部微生物学教研室重庆400038 第三军医大学基础医学部组织胚胎学教研室重庆400038 首都医科大学基础医学院微生物学教研室北京100069

目的原核表达登革病毒(Dengue Virus,DV)NS2B蛋白并纯化,制备NS2B的小鼠多克隆抗体。方法RT-PCR扩增DV2全长的NS2B基因序列,构建表达带有6×His标签的NS2B的原核表达载体,进行表达与纯化,免疫Balb/c小鼠,制备NS2B多克隆抗体。采用EL... 详细信息

目的原核表达登革病毒(Dengue Virus,DV)NS2B蛋白并纯化,制备NS2B的小鼠多克隆抗体。方法RT-PCR扩增DV2全长的NS2B基因序列,构建表达带有6×His标签的NS2B的原核表达载体,进行表达与纯化,免疫Balb/c小鼠,制备NS2B多克隆抗体。采用ELISA检测抗体效价,Western-blot及免疫荧光染色检测其特异性。结果成功构建原核表达载体pQE-31/NS2B,进一步获得相对分子质量为16000的纯化蛋白及多克隆抗体,ELISA显示抗体效价达1∶25600。Western-blot和免疫荧光染色显示多克隆抗体与NS2B蛋白特异性结合。结论本研究获得了纯化的DV2NS2B蛋白,成功地制备了NS2B多克隆抗体,为进一步研究NS2B的作用机制奠定了基础。

关键词：登革病毒 Nonstructural Protein 2B(NS2B) 原核表达载体纯化蛋白多克隆抗体

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Rasmussen脑炎患者脑组织的转录组学特征分析

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第三军医大学学报 2020年第14期42卷 1407-1413页

作者：罗乔荔王一松关宇光陈思畅范东瀛王培刚栾国明安静首都医科大学基础医学院病原生物学系微生物学教研室北京100069 首都医科大学三博脑科医院功能神经外科北京100093

目的探究Rasmussen脑炎(Rasmussen encephalitis,RE)患者脑组织的转录组学特征。方法采用RNA-seq的方法,对2008年4月至2013年12月首都医科大学附属北京三博脑科医院收治的RE及颞叶癫痫(temporal lobe epilepsy,TLE)患者(对照)中各选取4... 详细信息

目的探究Rasmussen脑炎(Rasmussen encephalitis,RE)患者脑组织的转录组学特征。方法采用RNA-seq的方法,对2008年4月至2013年12月首都医科大学附属北京三博脑科医院收治的RE及颞叶癫痫(temporal lobe epilepsy,TLE)患者(对照)中各选取4例脑组织的基因表达谱进行检测。结果聚类分析显示RE患者及对照脑组织差异表达基因(differentially expressed genes,DEGs)谱存在明显差异。共筛选出1285个DEGs,其中782个(60.9%)下调,503个(39.1%)上调。上调表达的DEGs主要富集于神经元信号转导相关的通路,可能与RE患者频繁的癫痫发作相关;下调表达的DEGs主要富集于细胞骨架、细胞周期及趋化作用相关的通路,可能与RE患者脑组织中神经元的丢失及再生以及部分病原体感染后的免疫应答相关。上调表达的关键基因为TAS2R40、HTR4、NAP1L2,下调表达的关键基因为CXXC1、SEPTIN8、CCR7。结论RE患者脑组织的转录组学具有明显特征,DEGs主要富集于神经元信号转导、细胞周期以及趋化作用相关的通路中。

关键词： Rasmussen脑炎癫痫 RNA-Seq 转录组学

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SARS冠状病毒M基因的克隆及其表达

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中国病毒学 2005年第1期20卷 1-4页

作者：晏辉钧赵卫方丹云周经姣龙北国张文炳郭辉玉江丽芳中山大学基础医学院微生物学教研室广东广州510080 南方医科大学热带卫生学系微生物学教研室广东广州510515

从SARS冠状病毒(GD322株)组织培养上清中提取 RNA,进行 RT PCR扩增其 M基因并克隆到巴氏毕赤酵母表达载体 pPICZαB,电穿孔法将重组体整合入酵母菌 P. pastoris,经抗生素 Zeocin筛选产生的转化子进行表型鉴定,取Mut+菌用甲醇诱导表达,SD... 详细信息

从SARS冠状病毒(GD322株)组织培养上清中提取 RNA,进行 RT PCR扩增其 M基因并克隆到巴氏毕赤酵母表达载体 pPICZαB,电穿孔法将重组体整合入酵母菌 P. pastoris,经抗生素 Zeocin筛选产生的转化子进行表型鉴定,取Mut+菌用甲醇诱导表达,SDS PAGE检测其表达产物。Mut+ 酵母转化菌经甲醇诱导可分泌表达约 65kDa和42 kDa的蛋白质,与SARS恢复期病人血清的免疫印迹证实它们为特异的重组M蛋白质,且获得的重组M蛋白质具有免疫反应性。

关键词： SARS冠状病毒 M基因克隆巴氏毕赤酵母表达

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铜绿假单胞菌生物被膜形成能力与基因型的相关性分析

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四川大学学报（医学版） 2006年第5期37卷 666-669页

作者：程曦杨维青石磊尹晓琳谢轶曾蔚李心晖苏建裕寇亚丽贾文祥四川大学华西基础医学与法医学院微生物学教研室成都610041 华南理工大学食品与生物工程学院河北医科大学基础医学院

目的探讨铜绿假单胞菌(PA)临床分离株的粘附性、生物被膜形成能力及其与基因型的相关性。方法采用改良的微量平板法对临床分离的48株PA生物被膜的形成进行定量分析;通过肠杆菌基因间重复一致序列-PCR(ERIC-PCR)技术绘制48株PA的指纹图谱... 详细信息

目的探讨铜绿假单胞菌(PA)临床分离株的粘附性、生物被膜形成能力及其与基因型的相关性。方法采用改良的微量平板法对临床分离的48株PA生物被膜的形成进行定量分析;通过肠杆菌基因间重复一致序列-PCR(ERIC-PCR)技术绘制48株PA的指纹图谱,应用计算机软件建立遗传相似性系数矩阵及聚类分析树状图。结果48株临床分离PA菌株生物被膜的形成能力不同。生物被膜形成能力不同的PA在基因型上表现出多态性,PA在17%遗传相似性系数上分为A、B、C、D、E五个基因型,生物被膜形成能力强的PA大都属于D型,其遗传相似性系数为42%。结论绝大多数临床分离的PA株具有较强的生物被膜形成能力;生物被膜形成能力不同的PA在基因型上表现出多态性;生物被膜形成能力较强的PA在基因型上表现出一定的相似性。

关键词：铜绿假单胞菌生物被膜基因指纹图谱基因型

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CXCR4和Survivin启动子的克隆及其在乳腺癌细胞系的转录特异性分析

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中华肿瘤防治杂志 2009年第5期16卷 321-324,350页

作者：李晓霞王宝利姚智天津医科大学基础医学院微生物学教研室天津300070 天津医科大学代谢病医院内分泌研究所天津300070 天津医科大学基础医学院免疫学教研室天津300070

目的:评估CXCR4和Survivin启动子在乳腺癌细胞系中的特异转录活性。方法:采用PCR方法扩增CXCR4和Survivin启动子序列,将其分别克隆到含有报告基因增强绿色荧光蛋白(EGFP)的质粒载体pEGFP-1和含有荧光素酶(LUC)的质粒载体pGL3-Basic,经... 详细信息

目的:评估CXCR4和Survivin启动子在乳腺癌细胞系中的特异转录活性。方法:采用PCR方法扩增CXCR4和Survivin启动子序列,将其分别克隆到含有报告基因增强绿色荧光蛋白(EGFP)的质粒载体pEGFP-1和含有荧光素酶(LUC)的质粒载体pGL3-Basic,经脂质体分别转染乳腺癌细胞系(MCF-7MDA-MB-231和T-47D)和乳腺上皮细胞(HBL-100)。荧光显微镜下观察EGFP的表达情况,并测定2个启动子在乳腺癌细胞中的荧光素酶活性。结果:CXCR4和Sur-vivin启动子在3种乳腺癌细胞中均表现特异的转录活性。CXCR4启动子在MDA-MB-231中的活性高于Survivin启动子(P=0.004);而在MCF-7细胞中活性低于Survivin启动子(P=0.006),两者在T-47D细胞中的启动子活性相当,P=0.615。结论:CXCR4和Survivin启动子在乳腺癌细胞中具有强的特异转录活性,且在不同乳腺癌细胞类型表现的转录特异性有一定差异。

关键词：乳腺肿瘤 CXCR4 Survivin 启动子转录靶向性

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重组Rab8截短体蛋白的原核表达、纯化和抗体制备

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免疫学杂志 2008年第2期24卷 234-237页

作者：徐小峰田衍平陈宗涛陈炜江雯刘丽梅安静第三军医大学基础医学部微生物学教研室重庆市微生物工程实验室重庆400038 第三军医大学基础医学部组织胚胎学教研室重庆400038 首都医科大学基础医学院微生物学教研室北京100069

目的获得Rab8纯化蛋白,制备多克隆抗体,为深入研究Rab8在病毒感染宿主细胞过程中的作用奠定基础。方法首先从HepG2细胞中克隆Rab8基因,然后从Rab8质粒中亚克隆Rab8C端编码122个氨基酸的基因片段,构建Rab8与6His的融合蛋白原核表达质粒... 详细信息

目的获得Rab8纯化蛋白,制备多克隆抗体,为深入研究Rab8在病毒感染宿主细胞过程中的作用奠定基础。方法首先从HepG2细胞中克隆Rab8基因,然后从Rab8质粒中亚克隆Rab8C端编码122个氨基酸的基因片段,构建Rab8与6His的融合蛋白原核表达质粒。原核表达与蛋白纯化后,免疫动物,制备Rab8多克隆抗体。采用ELISA法检测其效价,Western检验抗体特异性,间接免疫荧光染色法验证其免疫组化特性。结果克隆了人Rab8编码基因,构建了表达Rab8C端编码122个氨基酸的原核表达质粒pQE31-Rab8-122,经过大肠杆菌表达、镍亲和层析柱纯化,获得相对分子量约15000的融合蛋白,免疫Balb/c小鼠后收获抗血清。ELISA显示抗体效价达1/20000。Western blot和免疫荧光染色结果显示此多克隆抗体能够与原核表达的Rab8蛋白发生特异性反应,并能够识别HepG2细胞中内源性Rab8蛋白。结论本研究获得原核表达的Rab8纯化蛋白,成功的制备了Rab8多克隆抗体,为进一步研究Rab8参与病毒感染宿主细胞提供了重要的实验材料。

关键词： Rab8 原核表达抗体制备

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Dynamitin真核表达载体的构建及鉴定

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免疫学杂志 2008年第2期24卷 167-169页

作者：陈炜高娜王嘉丽田衍平陈宗涛徐小峰张俊磊刘丽梅江雯安静第三军医大学基础医学部微生物学教研室重庆市微生物工程实验室重庆400038 第三军医大学基础医学部组织胚胎学教研室重庆400038 首都医科大学基础医学院微生物学教研室北京100069

目的构建pRe-dyn真核表达质粒,为研究dynein-dynactin复合体在登革病毒逆行性运输中的作用奠定基础。方法RT-PCR扩增dynamitin基因片段后,将其克隆入真核表达载体pReceiver-M01a;通过PCR、酶切、测序和间接免疫荧光染色鉴定重组质粒。... 详细信息

目的构建pRe-dyn真核表达质粒,为研究dynein-dynactin复合体在登革病毒逆行性运输中的作用奠定基础。方法RT-PCR扩增dynamitin基因片段后,将其克隆入真核表达载体pReceiver-M01a;通过PCR、酶切、测序和间接免疫荧光染色鉴定重组质粒。结果经PCR扩增、酶切和测序验证,重组质粒构建正确,命名为pRe-dyn;重组质粒转染Vero细胞后,间接免疫荧光染色显示胞浆中有dyanimtin蛋白的表达。结论成功构建了真核表达质粒pRe-dyn,为后续研究dynamitin在病毒感染过程中的作用积累了有价值的实验资料。

关键词：病毒微管骨架逆行性运输胞质动力蛋白 Dynamitin

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抑制型抗TSH抗独特型抗体的发现及其意义

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中华内分泌代谢杂志 1991年第1期7卷 17-19页

作者：富宁笠木宽治瀬户昭白求恩医科大学基础医学院免疫教研室日本京都大学医学部附属医院核医学教室日本滋贺医科大学微生物学教室

本实验用家兔抗TSH抗体免疫同种异型匹配的家兔,得到抗TSH抗独特型抗血清。其中抗独特型抗血清No.551可抑制^(125)I TSH与甲状腺细胞膜TSH受体的结合达24％(TBII阳性),并可抑制100μU/ml bTSH刺激的cAMP释放达60.5％,与TBII阳性粘液水... 详细信息

本实验用家兔抗TSH抗体免疫同种异型匹配的家兔,得到抗TSH抗独特型抗血清。其中抗独特型抗血清No.551可抑制^(125)I TSH与甲状腺细胞膜TSH受体的结合达24％(TBII阳性),并可抑制100μU/ml bTSH刺激的cAMP释放达60.5％,与TBII阳性粘液水肿病人血清中的甲状腺刺激抑制型免疫球蛋白(TSII)相似。而正常兔血清、其他抗独特型血清及No.551家兔的免疫前血清均无此活性。

关键词：抗独特型抗体抗TSH 免疫球蛋白

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