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中华医学会病理学分会2006年学术年会

作者：张文敏张萌姜桔红黄爱民文剑明福建医科大学基础医学院病理学系福建医科大学肿瘤研究室中山大学中山医学院病理学教研室中山大学中山医学院病理学教研室福建医科大学基础医学院病理学系福建医科大学肿瘤研究室中山大学中山医学院病理学教研室

目的构建人肿瘤-睾丸抗原 LAGE-1的原核表达质粒,表达、纯化LAGE-1融合蛋白并制备GST-LAGE-1多克隆抗体。方法逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)方法扩增人肝癌组织LAGE-1基因3′端片段,连入原核表达载体 pGEX-4T-1(+),构建原核表达质粒pGEX- ... 详细信息

目的构建人肿瘤-睾丸抗原 LAGE-1的原核表达质粒,表达、纯化LAGE-1融合蛋白并制备GST-LAGE-1多克隆抗体。方法逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)方法扩增人肝癌组织LAGE-1基因3′端片段,连入原核表达载体 pGEX-4T-1(+),构建原核表达质粒pGEX- LAGE-1并测序。将该质粒转化大肠杆菌BL21 (DE3)进行诱导表达,经包涵体透析复性和谷胱甘肽巯基转移酶纯化系统分离纯化目的蛋白。用纯化的融合蛋白GST-LAGE-1免疫新西兰大白兔, 间接ELISA法测定抗体效价,饱和硫酸铵沉淀法纯化抗体,并采用Western blot检测GST-LAGE-1 多克隆抗体特异性。结果 RT-PCR扩增得到 LAGE-1基因3′端264bp片段,测序结果与 GenBank公布序列一致;成功构建pGEX-LAGE-1 原核表达质粒,含有该质粒的大肠杆菌经IPTG诱导后表达分子量约为36KD的蛋白,经包涵体复性和GST融合蛋白纯化系统纯化,得到重组蛋白 GST-LAGE-1,纯度达90％;制备兔抗GST-LAGE-1 抗体,纯化的抗体经Western blot证实可与目的蛋白特异性结合。结论获得了纯化的肿瘤-睾丸抗原LAGE-1重组蛋白及其特异性多克隆抗体,为进一步研究LAGE-1抗原在肿瘤免疫治疗中的作用奠定基础。

关键词： LAGE-1 原核表达纯化抗体

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肿瘤-睾丸抗原LAGE-1基因的原核表达纯化和抗血清制备

引用

中华肿瘤防治杂志 2006年第15期13卷 1154-1157页

作者：张文敏张萌姜桔红黄爱民文剑明福建医科大学基础医学院病理学系福建医科大学肿瘤研究室福建福州350004 中山大学附属第一医院病理科广东广州510080

目的:构建人肿瘤-睾丸抗原LAGE-1的原核表达质粒,表达、纯化LAGE-1融合蛋白并制备GST-LAGE-1多克隆抗体。方法:逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)方法扩增人肝癌组织LAGE-1基因3′端片段,连入原核表达载体pGEX-4T-1(+),构建原核表达质粒pGEX-L... 详细信息

目的:构建人肿瘤-睾丸抗原LAGE-1的原核表达质粒,表达、纯化LAGE-1融合蛋白并制备GST-LAGE-1多克隆抗体。方法:逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)方法扩增人肝癌组织LAGE-1基因3′端片段,连入原核表达载体pGEX-4T-1(+),构建原核表达质粒pGEX-LAGE-1并测序。将该质粒转化大肠埃希菌BL21(DE3)进行诱导表达,经包涵体透析复性和谷胱甘肽巯基转移酶纯化系统分离纯化目的蛋白。用纯化的融合蛋白GST-LAGE-1免疫新西兰大白兔,间接ELISA法测定抗体效价,饱和硫酸铵沉淀法纯化抗体,并采用Western blot检测GST-LAGE-1多克隆抗体特异性。结果:RT-PCR扩增得到LAGE-1基因3′端264bp片段,测序结果与GenBank公布序列一致;成功构建pGEX-LAGE-1原核表达质粒,含有该质粒的大肠埃希菌经IPTG诱导后表达相对分子质量约为36×103的蛋白,经包涵体复性和GST融合蛋白纯化系统纯化,得到重组蛋白GST-LAGE-1,纯度达90%;制备兔抗GST-LAGE-1抗体,纯化的抗体经Western blot证实可与目的蛋白特异性结合。结论:获得了纯化的肿瘤-睾丸抗原LAGE-1重组蛋白及其特异性多克隆抗体,为进一步研究LAGE-1抗原在肿瘤免疫治疗中的作用奠定基础。

关键词：肝肿瘤/遗传学抗原肿瘤/生物合成睾丸/免疫学基因抗体逆转录聚合酶链反应

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人胃印戒细胞癌组织cDNA消减文库的构建

引用

福建医科大学学报 2004年第2期38卷 141-145页

作者：苏红英张鹏飞郑秋红郑天荣黄雄飞福建医科大学基础医学院病理学系福州350004 福建省肿瘤医院肿瘤分子生物学研究室福州350014

目的　构建人胃印戒细胞癌组织 c DNA消减文库。　方法　采用抑制性消减杂交技术 ,以胃印戒细胞癌组织为检测子 ,正常胃黏膜组织为驱动子 ,分离胃印戒细胞癌组织特异性表达的基因片段 ,并与 T载体连接 ,构建人胃印戒细胞癌组织 c DNA消... 详细信息

目的　构建人胃印戒细胞癌组织 c DNA消减文库。　方法　采用抑制性消减杂交技术 ,以胃印戒细胞癌组织为检测子 ,正常胃黏膜组织为驱动子 ,分离胃印戒细胞癌组织特异性表达的基因片段 ,并与 T载体连接 ,构建人胃印戒细胞癌组织 c DNA消减文库。　结果　成功构建高消减效率的人胃印戒细胞癌组织 c DNA消减文库 ,获得 2 0 0多个阳性克隆 ,随机挑取 5 0个克隆鉴定均有长度为 1 0 0～ 75 0 bp插入片段。　结论　应用抑制性消减杂交技术构建人胃印戒细胞癌组织 c DNA消减文库。

关键词：癌印戒细胞胃肿瘤 DNA 互补基因文库遗传学技术杂交

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