目的探讨DNA损伤激活的非编码RNA(non-coding RNA activated by DNA damage,NORAD)调节miR-155-5p/TLR6分子轴对脓毒症大鼠急性肺损伤(acute lung injury,ALI)的影响。方法将大鼠随机分为对照组、模型组、NORAD低表达空载组(LV-sh-NC组)...
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目的探讨DNA损伤激活的非编码RNA(non-coding RNA activated by DNA damage,NORAD)调节miR-155-5p/TLR6分子轴对脓毒症大鼠急性肺损伤(acute lung injury,ALI)的影响。方法将大鼠随机分为对照组、模型组、NORAD低表达空载组(LV-sh-NC组)、NORAD低表达组(LV-sh-NORAD组)、NORAD低表达+miR-155-5p低表达空载组(LV-sh-NORAD+NC antagomir)、NORAD低表达+miR-155-5p低表达组(LV-shNORAD+miR-155-5p antagomir)。ELISA法检测白细胞介素(interleukin,IL)8、IL-1β、肿瘤坏死因子α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)水平;实时荧光定量聚合酶链反应检测各组大鼠肺组织NORAD、miR-155-5p和Toll样受体6(Toll-like receptor 6,TLR6)基因表达;测量肺组织湿/干重比值(W/D);苏木精-伊红染色法(hematoxylineosin staining,HE)染色观察肺组织形态;原位末端标记法(Terminal deoxynucleotidyl transferase dUTP nick end labeling,TUNEL)法检测肺组织细胞凋亡;Western blot检测肺组织中TLR6、Bax、Bcl-2、裂解的半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3(cleaved cysteinyl aspartate specific proteinase 3,Cleaved-caspase-3)蛋白表达。双荧光素酶报告基因实验验证miR-155-5p与NORAD和TLR6的关系。结果与对照组比较,模型组和LV-sh-NC组大鼠肺组织损伤明显,血清IL-1β、TNF-α、IL-8水平、肺组织中NORAD和TLR6 mRNA表达、W/D比值、凋亡率、TLR6、Bax、Cleaved-caspase-3蛋白表达显著升高,肺组织miR-155-5p表达和Bcl-2蛋白表达显著降低(P<0.05)。下调NORAD表达可减轻大鼠肺组织损伤,降低血清IL-1β、TNF-α、IL-8水平、肺组织中NORAD和TLR6 mRNA表达、W/D比值、凋亡率、TLR6、Bax、Cleaved-caspase-3蛋白表达,肺组织miR-155-5p表达和Bcl-2蛋白表达显著升高(P<0.05)。下调miR-155-5p表达可降低负调控NORAD对脓毒症ALI大鼠的改善作用(P<0.05)。结论下调NORAD可抑制miR-155-5p/TLR6分子轴,减轻ALI大鼠肺损伤。
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