检索结果-内蒙古大学图书馆

生物工程学报 2025年第4期41卷 1547-1558页

作者：潘剑茹张紫怡楚金囡韩亚南郑雪颖蔡诗容何火聪福州大学生物科学与工程学院福州大学福建省海洋酶工程重点实验室西安交通大学生命科学与技术学院线粒体生物医学中心福建医科大学附属肿瘤医院/福建省肿瘤医院放射生物学及肿瘤放射治疗学研究室福州大学化学学院

活性氧(reactiveoxygenspecies,ROS)是放射治疗引发肿瘤患者副作用的重要介导因素之一。由谷胱甘肽S-转移酶(glutathione S-transferase, GST)、超氧化物歧化酶1 (superoxide dismutase 1,SOD1)和跨膜肽构成的融合抗氧化酶可有效抵御ROS损伤。将2种抗氧化酶进一步与基质金属蛋白酶-2/9底物X肽及跨膜肽R9融合后，得到的融合抗氧化酶GST-SOD1-X-R9 (GS1XR)跨膜进入肿瘤细胞的能力降低，从而实现对正常细胞的靶向防护。然而，非人源GST的应用可能具有免疫原性风险，为解决这一问题，本研究利用无缝克隆技术构建含人源GST基因的表达载体，用于非人源GST基因的替换，进而表达和纯化了新型跨膜融合抗氧化酶GS1R和GS1XR。随后，以GS1为对照，评估新型GS1R和GS1XR对H2O2诱导的L-02细胞氧化损伤的保护作用。实验结果表明，新型GS1XR的GST比活性与改造前蛋白保持一致，但SOD比活性有所提高。200μmol/L H2O2可短暂激活核因子-红细胞2-相关因子2 (nuclear factor-erythroid 2-related factor 2, Nrf2)通路，然而，24 h后激活效应减弱，导致细胞活力下降至48.4%。GS1R和GS1XR可清除胞内ROS，直接抵御氧化损伤，并促进Nrf2入核激活抗氧化通路，使细胞活力恢复至正常水平，且两者保护作用相当。相比之下，缺乏跨膜能力的GS1仅能清除胞外ROS，保护效果有限。综上所述，2种新型融合抗氧化酶在抵御ROS介导的正常细胞氧化损伤方面均展现出良好的应用潜力，本研究为其在相关领域的进一步研究奠定了基础。

关键词：融合抗氧化酶过氧化氢肝细胞氧化损伤

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当归生药中两种PR-10蛋白亚型的纯化与表征

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生物工程学报 2019年第1期35卷 159-168页

作者：王香玲李娴何火聪李玲玲吕迪陈翠煌叶小强刘树滔潘剑茹福州大学生物科学与工程学院福建福州350108 福建医科大学附属肿瘤医院/福建省肿瘤医院放射生物学及肿瘤放射治疗学研究室福建福州350014 福建省科技厅转化医学重点实验室福建福州350014

为了进一步研究当归(Angelicasinensis)生药中的蛋白质及其功能,通过80%硫酸铵沉淀、Sephadex G-50凝胶过滤层析、DEAE-Sepharose阴离子交换层析,首次从当归生药中纯化出两种分子量相近的蛋白(命名为ASPR-C-1和ASPR-C-2)。ASPR-C-1和ASP... 详细信息

为了进一步研究当归(Angelicasinensis)生药中的蛋白质及其功能,通过80%硫酸铵沉淀、Sephadex G-50凝胶过滤层析、DEAE-Sepharose阴离子交换层析,首次从当归生药中纯化出两种分子量相近的蛋白(命名为ASPR-C-1和ASPR-C-2)。ASPR-C-1和ASPR-C-2在SDS-PAGE上的分子量分别为17.33 kDa和17.18 kDa,在溶液中主要以单体形式存在,但会部分形成二聚体,二者均为糖蛋白,糖基含量分别为2.6%和8.2%。经基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI-TOF-TOF?)鉴定发现ASPR-C-1和ASPR-C-2均为病程相关(Pathogenesis-related 10,PR-10)家族蛋白,且具有核糖核酸酶活性,比活分别为73.60 U/mg和146.76 U/mg。两种蛋白的最适pH相近,均为5.6左右,但最适温度不同,ASPR-C-1的为50℃,ASPR-C-2的为60℃。二者虽然在60℃下都表现出最大的酶活力稳定性,但在更高的处理温度(80–100℃)下,ASPR-C-1迅速失活,最终仅余20%左右活力,ASPR-C-2则表现出良好的热稳定性,最终仍有80%左右活力。此外,Fe^(2+)对二者的酶活性具有激活作用,而Ca^(2+)、Mg^(2+)、Zn^(2+)、Mn^(2+)、Ag^+、Cu^(2+)、EDTA、DTT和SDS则会不同程度地抑制二者的酶活性。研究结果为深入研究来自当归生药的PR-10蛋白的生物学功能奠定了基础。

关键词：当归生药糖蛋白纯化 PR-10 核糖核酸酶

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GST-SOD1-R9融合蛋白的表达、纯化、稳定性与跨膜效应

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生物工程学报 2017年第5期33卷 828-837页

作者：潘剑茹吴伦巧何火聪陈莉娟苏颖李玲玲刘树滔福州大学生物科学与工程学院福建福州350108 福建医科大学附属肿瘤医院福建省科技厅转化医学重点实验室福建省肿瘤医院放射生物学及肿瘤放射治疗学研究室福建福州350014

穿膜肽TAT介导的双效抗氧化酶GST(谷胱甘肽巯基转移酶)-TAT-SOD1(Cu,Zn超氧化物歧化酶),可有效清除胞内自由基,其预防氧化损伤的效果强于SOD1-TAT,但前者的跨膜能力不如后者。为增强双效抗氧化酶的跨膜效率,本研究融合了SOD1和穿膜肽R9... 详细信息

穿膜肽TAT介导的双效抗氧化酶GST(谷胱甘肽巯基转移酶)-TAT-SOD1(Cu,Zn超氧化物歧化酶),可有效清除胞内自由基,其预防氧化损伤的效果强于SOD1-TAT,但前者的跨膜能力不如后者。为增强双效抗氧化酶的跨膜效率,本研究融合了SOD1和穿膜肽R9,合成SOD1-R9全基因序列,并将其插入带有GST的原核表达载体pGEX-4T-1中,成功构建了GST-SOD1-R9融合蛋白表达质粒。然后,将重组质粒pGEX-4T-1-SOD1-R9转化大肠杆菌BL21(DE3),用IPTG诱导表达融合蛋白,通过改变诱导温度和诱导时间,确定了融合蛋白在25℃下表达11 h,可得到高表达量的可溶性GST-SOD1-R9融合蛋白。利用80%硫酸铵沉淀和GST琼脂糖树脂纯化得到纯蛋白,应用SDS-PAGE和酶活性鉴定纯化的蛋白为正确表达的目标蛋白。GST-SOD1-R9融合蛋白的温度和pH稳定性实验结果证实,该蛋白在生理条件下具有良好的SOD和GST活性。细胞跨膜实验结果证明其跨膜能力与GST-TAT-SOD1融合蛋白相比显著增强(P<0.05)。这些工作为深入研究GST-SOD1-R9的抗氧化损伤效应建立了基础。

关键词： GST-SOD1-R9 构建融合蛋白表达纯化稳定性跨膜效应

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全长SOD2重组蛋白的可溶表达、纯化、稳定性与跨膜效应

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生物工程学报 2017年第7期33卷 1168-1177页

作者：潘剑茹陈莉娟何火聪苏颖王香玲李娴陈翠煌吴伦巧刘树滔福州大学生物科学与工程学院福建福州350108 福建省科技厅转化医学重点实验室福建医科大学附属肿瘤医院福建省肿瘤医院放射生物学及肿瘤放射治疗学研究室福建福州350014

超氧化物歧化酶(SOD)家族是保护细胞免受正常代谢过程中产生的活性氧(ROS)毒性所必需的,含Mn2+离子的超氧化物歧化酶(Mn-SOD,SOD2)是其中最重要的一种。本研究合成了人源SOD2全基因序列,并将其插入带有GST的原核表达载体p GEX-4T-1中,... 详细信息

超氧化物歧化酶(SOD)家族是保护细胞免受正常代谢过程中产生的活性氧(ROS)毒性所必需的,含Mn2+离子的超氧化物歧化酶(Mn-SOD,SOD2)是其中最重要的一种。本研究合成了人源SOD2全基因序列,并将其插入带有GST的原核表达载体p GEX-4T-1中,成功构建了GST-SOD2融合蛋白表达质粒。然后,将重组质粒p GEX-4T-1-SOD2转化大肠杆菌BL21(DE3),用IPTG在25℃下诱导表达融合蛋白,得到可溶性GST-SOD2融合蛋白,经GST亲和树脂纯化得到比活为1 788 U/mg的纯蛋白,分子量约为46 k Da。利用凝血酶切去GST标签后经肝素亲和柱纯化得到了电泳纯的SOD2重组蛋白,该蛋白分子量约为25 k Da,与SOD2全长序列的理论分子量相符,比活为2 000 U/mg。两种重组SOD2蛋白在生理条件下都具有良好的SOD活性,且都具有显著的跨膜能力(P<0.05)。这些工作为深入研究两种全长重组SOD2蛋白的结构与生物效应建立了基础。

关键词： Mn超氧化物歧化酶构建融合蛋白表达纯化稳定性跨膜效应

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非小细胞肺癌中ARL4C的表达及其在EGFR-TKI耐药中的作用

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肿瘤防治研究 2020年第7期47卷 498-503页

作者：陈增廖锦容苏颖何志勇胡丹林可焴金善丰林仁章林贤东福建省肿瘤医院福建医科大学附属肿瘤医院放射生物学及肿瘤放射治疗研究室福州350014 福建省肿瘤医院福建医科大学附属肿瘤医院肿瘤内科福州350014 福建省肿瘤医院福建医科大学附属肿瘤医院病理科福州350014 福建省科技厅转化医学重点实验室福州350014

目的探讨非小细胞肺癌中ARL4C的表达及其与临床病理特征的关系以及在EGFR-TKI耐药中的作用。方法收集63例NSCLC患者的癌组织和癌旁组织,qRT-PCR法检测ARL4C的表达并分析其与临床病理特征之间的关系。qRTPCR和Western blot法检测ARL4C在... 详细信息

目的探讨非小细胞肺癌中ARL4C的表达及其与临床病理特征的关系以及在EGFR-TKI耐药中的作用。方法收集63例NSCLC患者的癌组织和癌旁组织,qRT-PCR法检测ARL4C的表达并分析其与临床病理特征之间的关系。qRTPCR和Western blot法检测ARL4C在各细胞株中的表达,MTS检测细胞活性及IC50的变化,Transwell侵袭实验检测ARL4C表达变化对细胞侵袭能力的影响。结果非小细胞肺癌组织中ARL4C表达水平低于癌旁组织(P<0.05),其表达水平与淋巴结转移、TNM分期和肺膜侵犯密切相关(P<0.05)。TKI耐药细胞株HCC827/ER中ARL4C在mRNA以及蛋白表达水平相较对照细胞株HCC827显著下调(P<0.05);ARL4C过表达细胞株HCC827/ER/ARL4C-OEIC50显著下降(P<0.05),Transwell分析结果显示过表达ARL4C后肺癌细胞的侵袭能力受到抑制(P<0.05)。结论ARL4C异常表达与非小细胞肺癌淋巴结转移、TNM分期和肺膜侵犯密切相关。过表达ARL4C能提高非小细胞肺癌细胞对EGFR-TKI药物的敏感度并抑制非小细胞肺癌细胞的侵袭能力。

关键词： ARL4C 非小细胞肺癌 EGFR-TKI 获得性耐药

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EBV相关性胃癌中PIWIL1和PIWIL4表达及与预后的相关性

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临床与实验病理学杂志 2021年第6期37卷 637-642,649页

作者：林华妹邹长棪胡丹苏颖廖锦容林可焴相智声郑雄伟林贤东福建医科大学附属肿瘤医院/福建省肿瘤医院放射生物学及肿瘤放射治疗研究室福州350014 福建医科大学附属肿瘤医院/福建省肿瘤医院病理科福州350014 福建医科大学附属肿瘤医院/福建省肿瘤医院流行病研究室福州350014 福建医科大学附属肿瘤医院/福建省肿瘤医院福建省肿瘤转化医学重点实验室福州350014

目的探讨PIWIL1和PIWIL4表达与EBV相关性胃癌(EBV-associated gastric cancer,EBVaGC)临床病理学特征及预后的关系。方法收集胃腺癌111例,采用原位杂交技术鉴定EBVaGC,应用qRT-PCR检测正常胃黏膜上皮细胞株GES-1、EBV阴性胃癌细胞株MKN... 详细信息

目的探讨PIWIL1和PIWIL4表达与EBV相关性胃癌(EBV-associated gastric cancer,EBVaGC)临床病理学特征及预后的关系。方法收集胃腺癌111例,采用原位杂交技术鉴定EBVaGC,应用qRT-PCR检测正常胃黏膜上皮细胞株GES-1、EBV阴性胃癌细胞株MKN-28、EBV感染的胃癌细胞株AGS-BX1、胃腺癌组织及癌旁组织中PIWIL1和PIWIL4的表达,并分析其与临床病理特征的相关性;Kaplan-Meier和Logistic以及Cox分析PIWIL1和PIWIL4表达与EBVaGC预后的相关性。结果PIWIL1与PIWIL4在EBVaGC组中的表达均高于非EBV相关性胃癌(non-EBV-associated gastric cancer,EBVnGC)组(P<0.05)。PIWIL1和PIWIL4在EBVaGC中的表达量分别为0.556±0.096、0.778±0.440,在癌旁组织中的表达量为0.240±0.121、0.501±0.431,分别上调2.31倍及1.55倍(P=0.033,P=0.029)。AGS-BX1中PIWIL1与PIWIL4表达水平高于GES-1和MKN-28(P<0.01)。PIWIL1和PIWIL4表达与胃腺癌TNM分期和淋巴结转移密切相关(P<0.05)。Kaplan-Meier分析结果显示,PIWIL4高表达组患者的总生存期较低表达组差(P=0.007)。Logistic及Cox分析显示PIWIL4表达与EBVaGC的预后相关(P<0.05),是EBVaGC预后独立危险因素。结论EBVaGC中PIWIL1和PIWIL4过表达,并与TNM分期和淋巴结转移密切相关,且PIWIL4与患者总生存期相关,是EBVaGC预后的独立危险因素,PIWIL4可能是判断EBVaGC预后的分子标志物。

关键词：胃肿瘤 EBV PIWIL1 PIWIL4 预后

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长链非编码RNA-RNU12在EB病毒相关胃癌中的表达及其意义

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临床与实验病理学杂志 2020年第11期36卷 1290-1295页

作者：刘芬邹长棪胡丹王晓宁郑雄伟苏颖林贤东福建省中医药大学免疫学与病原生物学教研室福州350108 福建省肿瘤医院/福建医科大学附属肿瘤医院放射生物学及肿瘤放射治疗研究室福州350014 福建省肿瘤医院/福建医科大学附属肿瘤医院病理科福州350014

目的探讨EB病毒(Epstein-Barr virus,EBV)感染与胃癌的相关性及长链非编码RNA-RNU12表达与胃癌临床病理特征、EBV感染的关系,为EBV相关胃癌(Epstein-Barr virus-associated gastric carcinoma,EBVaGC)的治疗、控制和预防提供理论依据。方法收集胃腺癌患者113例,分析EBV感染与临床病理特征的关系。采用原位杂交技术检测胃癌组织标本EBV感染。应用qRT-PCR检测胃癌及癌旁组织中RNU12的表达水平及其与临床病理特征的关系。结果EBV感染与患者年龄、组织分化、Lauren分型及肿瘤大小有关(P<0.05);与患者性别、浸润深度、淋巴结转移、TNM分期、脉管癌栓及神经侵犯无关(P>0.05)。RNU12在胃癌组织中的表达量为(0.01±0.004),在癌旁组织中的表达量为(0.179±0.001),下调3.35倍(P=0.001)。RNU12表达与淋巴结转移和EBV感染有关(P<0.05)。在EBVaGC中RNU12的表达量为(0.130±0.090),而相应癌旁组织的表达量为(0.393±0.093),下调3.0倍(P=0.023)。RNU12表达与EBVaGC的TNM分期、淋巴结转移及浸润深度密切相关(P<0.05)。Kaplan-Meier分析结果显示:在EBVaGC中RNU12高表达组总生存率优于高表达组(P=0.008)。结论RNU12可能是EBVaGC潜在的肿瘤生物学标志物。

关键词：胃肿瘤疱疹病毒4型长链非编码RNA RNU12 预后

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当归蛋白对小鼠的辐射防护作用

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辐射研究与辐射工艺学报 2018年第4期36卷 15-21页

作者：李娴王香玲何火聪李玲玲陈翠煌潘剑茹福州大学生物科学与工程学院福州350108 福建医科大学附属肿瘤医院福建省肿瘤医院放射生物学及肿瘤放射治疗学研究室福州350014

通过80%硫酸铵沉淀与Sephadex G-50凝胶过滤层析,从当归饮片中得到分子量为18.33 kDa的当归蛋白(命名AP)。用X射线对小鼠进行全身照射至吸收剂量6 Gy,建立急性照射损伤模型,以阿米福汀为对照,监测小鼠的体质量、外周血白细胞数、胸腺指... 详细信息

通过80%硫酸铵沉淀与Sephadex G-50凝胶过滤层析,从当归饮片中得到分子量为18.33 kDa的当归蛋白(命名AP)。用X射线对小鼠进行全身照射至吸收剂量6 Gy,建立急性照射损伤模型,以阿米福汀为对照,监测小鼠的体质量、外周血白细胞数、胸腺指数、脾脏指数、脾集落形成单位(CFU-S)、脾脏表观、脾组织病理分析和脾脏抗氧化活力等指标,检验当归蛋白AP的辐射防护效应。结果表明,当归蛋白AP可使受照小鼠的外周血白细胞数量、胸腺指数、脾脏指数、CFU-S和脾脏的过氧化氢酶活力分别增加135%、103%、23%、219%和180%,改善脾白髓损伤,使其体质量下降率减少94%。结果提示,当归蛋白AP对小鼠具有辐射防护作用。

关键词：当归蛋白 X射线辐射防护小鼠

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胃癌中FOXD3的表达及其与β-catenin表达的相关性

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临床与实验病理学杂志 2020年第2期36卷 143-147页

作者：邹长棪林华妹胡丹苏颖夏言郑雄伟林贤东福建省肿瘤医院/福建医科大学附属肿瘤医院放射生物学及肿瘤放射治疗研究室福州350014 福建省肿瘤医院/福建医科大学附属肿瘤医院病理科福州350014 福建省肿瘤转化医学重点实验室福州350014

目的探讨FOXD3表达与胃癌临床病理学特征、预后及β-catenin表达的相关性。方法收集78例胃癌及癌旁组织,采用qRT-PCR法检测FOXD3 mRNA的表达,采用免疫组化EnVision法检测β-catenin的表达。结果FOXD3 mRNA在胃癌组织中的表达量为0.146&#... 详细信息

目的探讨FOXD3表达与胃癌临床病理学特征、预后及β-catenin表达的相关性。方法收集78例胃癌及癌旁组织,采用qRT-PCR法检测FOXD3 mRNA的表达,采用免疫组化EnVision法检测β-catenin的表达。结果FOXD3 mRNA在胃癌组织中的表达量为0.146±0.036,在癌旁组织中的表达量为-0.379±0.107,上调3.35倍(P=0.001)。FOXD3表达与胃癌分化程度和Lauren分型密切相关(P<0.05)。Kaplan-Meier分析结果显示,FOXD3高表达组总体生存率(overall survival,OS)比低表达组差(P=0.046)。Spearsman等级相关性分析结果显示,胃癌中FOXD3表达与β-catenin表达呈正相关(r=0.280,P=0.023)。结论FOXD3在胃癌组织中过表达并与胃癌组织分化程度、Lauren分型及预后密切相关,FOXD3可能通过Wnt/β-catenin信号促进胃癌的发生、发展,FOXD3可能是判断胃癌预后的分子标志物。

关键词：胃肿瘤 FOXD3 β-catenin 预后信号通路

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非小细胞肺癌组织中circ_0006692的表达及其对肺癌细胞增殖转移的调控机制

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肿瘤防治研究 2021年第9期48卷 846-852页

作者：陈增廖锦容邹长棪苏颖林可焴金善丰郑倩兰林贤东福建医科大学附属福建省肿瘤医院放射生物学及肿瘤放射治疗研究室福州350014 福建省科技厅转化医学重点实验室福州350014 福建医科大学附属福建省肿瘤医院病理科福州350014

目的探讨非小细胞肺癌(NSCLC)中circ_0006692的表达与临床病理特征的关系及机制。方法收集50对NSCLC和癌旁组织,qRT-PCR法检测癌和癌旁组织中circ_0006692的表达,并分析其与临床病理特征之间的关系。构建过表达、敲低的circ_0006692的A... 详细信息

目的探讨非小细胞肺癌(NSCLC)中circ_0006692的表达与临床病理特征的关系及机制。方法收集50对NSCLC和癌旁组织,qRT-PCR法检测癌和癌旁组织中circ_0006692的表达,并分析其与临床病理特征之间的关系。构建过表达、敲低的circ_0006692的A549肺癌细胞株,MTS、克隆形成实验、划痕创伤愈合实验和Transwell侵袭实验检测circ_0006692表达变化对细胞增殖、迁移和侵袭能力的影响。qRT-PCR和Western blot检测circ_0006692表达变化对EMT相关基因表达的影响。结果非小细胞肺癌组织中circ_0006692表达水平高于癌旁组织(P<0.05),其表达水平与肿瘤大小、TNM分期及肺膜侵犯密切相关(P<0.05)。circ_0006692敲低抑制细胞增殖、侵袭和转移,过表达可促进细胞增殖、侵袭和转移。qRT-PCR和Western blot结果显示circ_0006692敲低抑制A549肺癌细胞EMT相关基因CDH2和MMP7促进CDH1表达。结论非小细胞肺癌组织中circ_0006692的表达上调与肿瘤大小、TNM分期及肺膜侵犯密切相关;circ_0006692表达可调节A549肺癌细胞增殖、侵袭、转移以及EMT进展。

关键词： circ_0006692 非小细胞肺癌增殖转移 EMT

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