检索结果-内蒙古大学图书馆

CRISPR/Cas9介导的酿酒酵母ADH2基因中断及反义RNA干扰GPD1的表达

现代食品科技 2018年第10期34卷 64-71页

作者：刘奎梁丽敏李振辉叶浩盈潘艳飞何文锦陈由强薛婷福建师范大学海洋生物医药与制品产业化开发技术公共服务平台福建师范大学南方海洋研究院福建省微藻种质改良工程技术研究中心福建福州350117

CRISPR/Cas9是一个简单、高效的用于靶向目的基因和无标记的基因组工程的工具。本文通过构建酿酒酵母沉默组件PGK-SGPD1-CYC1,使甘油-3-磷酸脱氢酶I(Glycerol-3-phosphate dehydrogenase,GPD1)基因在PGK强启动子、CYC1终止子在特定区域... 详细信息

CRISPR/Cas9是一个简单、高效的用于靶向目的基因和无标记的基因组工程的工具。本文通过构建酿酒酵母沉默组件PGK-SGPD1-CYC1,使甘油-3-磷酸脱氢酶I(Glycerol-3-phosphate dehydrogenase,GPD1)基因在PGK强启动子、CYC1终止子在特定区域内进行干扰和表达。应用CRISPR/Cas9基因编辑技术,在中断乙醇脱氢酶Ⅱ(alcohol dehydrogenase Ⅱ,ADH2)基因的同时,定点敲入GPD1基因的反义干扰组件,从而特定地干扰GPD1的表达。采用高效的酵母化学转化法将反应组件敲入酿酒酵母Y1H中,CRISPR/Cas9介导的同源重组效率达43.48%,由此获得了ADH2基因中断和GPD1反义干扰的酿酒酵母突变株。发酵实验结果表明,酿酒酵母突变菌株SG1-1与出发菌株Y1H相比,乙醇产率提高了9.07%,甘油产率下降了12.05%,乙酸产率下降了12.30%,结果表明通过中断ADH2基因及插入GPD1反义干扰组件,既能够中断ADH2基因的功能,减少乙醇转化为乙醛,同时也能在一定程度上干扰GPD1基因的表达,提高乙醇产率。

关键词：酿酒酵母中断乙醇脱氢酶Ⅱ基因中断甘油-3-磷酸脱氢酶Ⅰ

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饲料中添加裂殖壶菌对斑马鱼抗创伤弧菌感染的影响

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福建农业学报 2019年第10期34卷 1117-1123页

作者：陈华张丽娟李素一柯翎陈叙林晨韬福建省农业科学院生物技术研究所福建福州350003 福建师范大学生命科学学院福建福州350007 福建师范大学南方海洋研究院福建省微藻种质改良工程技术研究中心福建福州350117 福建师范大学福建省特色海洋生物资源可持续利用重点实验室福建福州350117

【目的】研究饲料中添加裂殖壶菌对鱼类抗细菌感染能力的影响,为裂殖壶菌作为饲料添加剂的应用提供理论基础。【方法】以6个月的成年斑马鱼为研究对象,以基础颗粒饲料为对照组(C组),试验组在基础饲料中添加干重3%的裂殖壶菌(S组),进行2... 详细信息

【目的】研究饲料中添加裂殖壶菌对鱼类抗细菌感染能力的影响,为裂殖壶菌作为饲料添加剂的应用提供理论基础。【方法】以6个月的成年斑马鱼为研究对象,以基础颗粒饲料为对照组(C组),试验组在基础饲料中添加干重3%的裂殖壶菌(S组),进行28 d饲喂试验。28 d后以创伤弧菌Vibrio vulnificus菌株FJ03-X2对斑马鱼进行攻毒,统计免疫保护率,并收集斑马鱼的肾脏组织提取RNA,逆转录成cDNA,通过Real-time RT-PCR检测相关基因lysozyme和tnfb的表达。【结果】饲料中添加3%裂壶菌能够显著提高斑马鱼感染创伤弧菌后的存活率,相对保护率为42.8%;Real-time RT-PCR检测的结果发现S组的斑马鱼肾脏中溶菌酶Lysozyme的mRNA水平极显著高于对照组(P<0.01),而肿瘤坏死因子TNFb的m RNA水平则极显著低于对照组(P<0.01)。【结论】裂殖壶菌作为营养添加剂可以提高斑马鱼抗创伤弧菌感染的能力。

关键词：裂殖壶菌斑马鱼创伤弧菌饲料添加剂

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岩藻黄素通过NF-κB信号通路抑制LPS诱导的细胞炎症反应的研究

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福建师范大学学报（自然科学版） 2019年第2期35卷 89-96页

作者：刘逸煊刘家伶郭凯黄敏黄鹭强彭家礼陈由强苏经迁福建师范大学南方生物医学研究中心福建福州350117 福建师范大学生命科学学院福建福州350117 福建省天然免疫生物学重点实验室福建福州350117 福建师范大学南方海洋研究院福建福州350117 福建省微藻物质改良工程技术研究中心福建福州350117 台湾海洋大学海洋生物研究所台湾台北20224

通过已构建的THP1-Lucia/NF-κB细胞筛选系统,对岩藻黄素、虾青素、β-胡萝卜素和玉米黄质等4种海洋来源的类胡罗卜素化合物进行抗炎活性筛选,结果发现岩藻黄素具有良好的抗炎活性.在此基础,进一步研究岩藻黄素对NF-κB信号通路的调控机... 详细信息

通过已构建的THP1-Lucia/NF-κB细胞筛选系统,对岩藻黄素、虾青素、β-胡萝卜素和玉米黄质等4种海洋来源的类胡罗卜素化合物进行抗炎活性筛选,结果发现岩藻黄素具有良好的抗炎活性.在此基础,进一步研究岩藻黄素对NF-κB信号通路的调控机制,结果揭示了岩藻黄素能通过抑制IκB-α的细胞质降解和NF-κB蛋白的磷酸化,进而抑制由LPS诱导的细胞炎症因子的产生,从而达到抗炎效果.

关键词：类胡萝卜素岩藻黄素 LPS 抗炎活性 NF-κB

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斑马鱼g型溶菌酶基因序列分析及其原核表达

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南方农业学报 2022年第1期53卷 229-237页

作者：陈华林晨韬陈曦葛均青福建省农业科学院生物技术研究所福州350003 福建师范大学生命科学学院/南方海洋研究院福建省微藻种质改良工程技术研究中心/福建省特色海洋生物资源可持续利用重点实验室福州350117

【目的】实现斑马鱼g型溶菌酶在大肠杆菌中表达,以获得高纯度且具溶菌活性的融合蛋白,为探究g型溶菌酶在斑马鱼抗菌过程中的作用机制及其开发利用打下基础。【方法】通过ClustalW、ExPASy、SignalP-5.0 Server及PSIPRED等在线软件对斑马... 详细信息

【目的】实现斑马鱼g型溶菌酶在大肠杆菌中表达,以获得高纯度且具溶菌活性的融合蛋白,为探究g型溶菌酶在斑马鱼抗菌过程中的作用机制及其开发利用打下基础。【方法】通过ClustalW、ExPASy、SignalP-5.0 Server及PSIPRED等在线软件对斑马鱼g型溶菌酶进行生物信息分析,经密码子优化后合成斑马鱼g型溶菌酶基因,亚克隆至pET-28a(+)表达载体并转化大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞,以IPTG进行诱导表达,并通过非干扰型蛋白浓度测定试剂盒和溶菌酶测定试剂盒(比浊法)测定其浓度及溶菌活性。【结果】从GenBank检索获得的斑马鱼溶菌酶基因g1(NM_001002706.1)和g2(XM_002664371.5)分别命名为Zeb-Lys-g1和Zeb-Lys-g2。Zeb-Lys-g1基因开放阅读框(ORF)长591 bp,共编码196个氨基酸残基,其编码蛋白分子量约21.6 kD;Zeb-Lys-g2的ORF长576 bp,共编码191个氨基酸残基,其编码蛋白分子量约21.1 kD;2种斑马鱼g型溶菌酶序列中均含有2个半胱氨酸残基及3个保守的催化残基位点(Glu、Asp和Asp)。Zeb-Lys-g1的N端含有17个氨基酸的信号肽,而Zeb-Lys-g2不存在典型的信号肽结构,但其三级结构均具有多个α-螺旋结构。在基于溶菌酶序列相似性构建的系统发育进化树中,Zeb-Lys-g1序列与金鱼g型溶菌酶序列的亲缘关系最近,而Zeb-Lys-g2序列与鲈形目和鲽形目鱼类的g型溶菌酶序列亲缘关系较近。将合成的斑马鱼g型溶菌酶基因(Zeb-Lys-g1和Zeb-Lys-g2)亚克隆至pET-28a(+)表达载体并转化BL21(DE3)感受态细胞,20℃下经IPTG(终浓度0.5 mmol/L)诱导16 h,可获得融合蛋白Zeb-Lys-g1和Zeb-Lys-g2,纯化后的浓度分别为1.01和1.66 mg/mL,对应的溶菌活性分别为689.68和44.39 U/mg。【结论】鱼类g型溶菌酶的基因变异较保守,经密码子优化及全基因合成方式合成的斑马鱼g型溶菌酶基因Zeb-Lys-g1和Zeb-Lys-g2可通过原核表达获得高纯度、高溶菌活性的融合蛋白,为探究斑马鱼溶菌酶的抗菌机制提供了技术支持。

关键词：斑马鱼 g型溶菌酶序列特征原核表达溶菌活性

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6种植物激素对威氏海链藻生长及岩藻黄素积累的影响

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福建师范大学学报（自然科学版） 2020年第4期36卷 57-63页

作者：郑灵芝章洁任颖侯艳蕊黄鹭强福建师范大学生命科学学院福建福州350117 福建师范大学南方海洋研究院福建福州350117 福建省微藻种质改良工程技术研究中心福建福州350117 福建省特色海洋生物资源可持续利用重点实验室福建福州350117 江西省食品检验检测研究院江西南昌330001

比较茉莉酸甲酯、吲哚丁酸、6-苄基氨基腺嘌呤、赤霉素、氯吡苯脲和脱落酸对威氏海链藻的生长及岩藻黄素积累的影响.结果表明,6种激素对威氏海链藻生物量的积累和岩藻黄素含量的提高都有不同程度的调节作用.其中,茉莉酸甲酯、吲哚丁酸... 详细信息

比较茉莉酸甲酯、吲哚丁酸、6-苄基氨基腺嘌呤、赤霉素、氯吡苯脲和脱落酸对威氏海链藻的生长及岩藻黄素积累的影响.结果表明,6种激素对威氏海链藻生物量的积累和岩藻黄素含量的提高都有不同程度的调节作用.其中,茉莉酸甲酯、吲哚丁酸和6-苄基氨基腺嘌呤作用效果较好(P<0.05),最佳添加浓度分别为200、30、2μmol·L^-1;赤霉素、氯吡苯脲、脱落酸对威氏海链藻生物量存在促进作用,但对其岩藻黄素积累作用效果不显著(P>0.05).

关键词：威氏海链藻植物激素生物量岩藻黄素

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岩藻黄素生物合成途径及其对光照响应研究进展

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福建师范大学学报（自然科学版） 2021年第5期37卷 96-108页

作者：方静平陈钦常黄鹭强福建师范大学南方海洋研究院福建福州350117 福建省微藻种质改良工程技术研究中心福建福州350117 福建师范大学生命科学学院福建福州350117

岩藻黄素是自然界中最丰富的脂溶性类胡萝卜素,占所有类胡萝卜素总产量的10%.由于岩藻黄素拥有众多对人体健康有益的生物活性,其在海洋药物、新型功能食品和保健品开发应用上有巨大的商业前景.阐述了现阶段岩藻黄素生物合成产业的主要... 详细信息

岩藻黄素是自然界中最丰富的脂溶性类胡萝卜素,占所有类胡萝卜素总产量的10%.由于岩藻黄素拥有众多对人体健康有益的生物活性,其在海洋药物、新型功能食品和保健品开发应用上有巨大的商业前景.阐述了现阶段岩藻黄素生物合成产业的主要瓶颈以及岩藻黄素生物合成途径的研究现状,综述了岩藻黄素合成途径对光照响应的研究进展,最后对如何利用新技术解决现有问题进行了简要的探讨.

关键词：微藻岩藻黄素-叶绿素蛋白复合体岩藻黄素生物合成途径光照

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三角褐指藻PtCryP基因的克隆及敲除载体构建

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福建轻纺 2019年第12期 8-16页

作者：赵靖悦龚林雷娜娜陈由强何文锦福建师范大学生命科学学院海洋生物医药与制品产业化开发技术公共服务平台福建师范大学南方海洋研究院福建省微藻种质改良工程技术研究中心

文章旨在获得三角褐指藻中隐花色素PtCryP的全长序列并进行生物信息分析,且利用CRISPR/Cas9系统的pKS diaCas-sgRNA质粒,通过质粒酶切、引物退火、连接重组质粒,成功构建了三角褐指的敲除载体,并通过DNA测序确定插入了sgRNA序列。PtCry... 详细信息

文章旨在获得三角褐指藻中隐花色素PtCryP的全长序列并进行生物信息分析,且利用CRISPR/Cas9系统的pKS diaCas-sgRNA质粒,通过质粒酶切、引物退火、连接重组质粒,成功构建了三角褐指的敲除载体,并通过DNA测序确定插入了sgRNA序列。PtCryP基因的开放阅读框全长为1575 bp,编码524个氨基酸,预测的等电点8.30,理论分子量58.98 kD。通过结构域分析,隐花色素蛋白的典型结构域存在于PtCryP蛋白中。本研究首次构建了三角褐指藻PtCryP的CRISPR/Cas9敲除载体,为下一步三角褐指藻CryP的表达和功能研究奠定基础。

关键词：三角褐指藻 PtCryP基因生物信息学分析 CRISPR/Cas9

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利用研磨仪快速提取基因组DNA用于PCR

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生物技术通讯 2019年第5期30卷 668-673页

作者：胡荣飞陈璐瑶张小妮吴均坚何文锦陈由强薛婷福建师范大学生命科学学院海洋生物医药与制品产业化开发技术公共服务平台福建师范大学南方海洋研究院福建省微藻种质改良工程技术研究中心

目的:采用机械法破碎细胞壁释放DNA,以达到快速用于PCR的目的。方法:用全自动研磨仪破碎细胞,设计16个频率和时间的组合,探究不同研磨频率和研磨时间的组合对DNA提取的影响,并将每个组合提取的DNA进行PCR。同时,利用研磨仪结合液氮进行... 详细信息

目的:采用机械法破碎细胞壁释放DNA,以达到快速用于PCR的目的。方法:用全自动研磨仪破碎细胞,设计16个频率和时间的组合,探究不同研磨频率和研磨时间的组合对DNA提取的影响,并将每个组合提取的DNA进行PCR。同时,利用研磨仪结合液氮进行研磨,以此来提取完整的基因组DNA。结果:不同的研磨频率和研磨时间的组合提取的DNA经PCR扩增后,均能得到目的条带。综合考虑选出DNA快速提取的最佳组合为研磨频率60 Hz,研磨2 min。直接研磨不能提取出完整的基因组DNA,若利用研磨仪结合液氮进行研磨,则可以快速提取出完整的基因组DNA,研磨条件为40 Hz,研磨2 min。在茂源链霉菌、三角褐指藻和酿酒酵母中利用研磨仪研磨法快速提取的DNA均实现了目的片段的扩增,最后用该方法提取的DNA在茂源链霉菌中实现了4023 bp较大片段的扩增。结论:建立了快速提取DNA用于PCR的方法,该方法在茂源链霉菌、三角褐指藻和酿酒酵母中均取得成功,证明该方法具有普遍的适用性,该方法提取的DNA也适用于较大目的片段的PCR实验。

关键词：研磨仪研磨 DNA快速提取 PCR 茂源链霉菌三角褐指藻酿酒酵母

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三角褐指藻△5-脂肪酸延长酶基因克隆、过表达载体构建及生物信息学分析

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福建农业科技 2019年第9期50卷 1-7页

作者：雷娜娜叶浩盈赵靖悦龚林胡荣飞何文锦陈由强薛婷福建师范大学生命科学学院海洋生物医药与制品产业化开发技术公共服务平台福建福州350117 福建师范大学南方海洋研究院福建省微藻种质改良工程技术研究中心福建福州350117

通过RT-PCR的方法克隆三角褐指藻的△5-脂肪酸延长酶基因的cDNA序列,利用双酶切技术构建重组表达载体,并对该基因进行相关的生物信息学分析。结果表明:三角褐指藻△5-脂肪酸延长酶基因的cDNA全长为834 bp,编码278个氨基酸,预测的等电点... 详细信息

通过RT-PCR的方法克隆三角褐指藻的△5-脂肪酸延长酶基因的cDNA序列,利用双酶切技术构建重组表达载体,并对该基因进行相关的生物信息学分析。结果表明:三角褐指藻△5-脂肪酸延长酶基因的cDNA全长为834 bp,编码278个氨基酸,预测的等电点为9-13,理论分子量32348-91。△5-脂肪酸延长酶基因中存在1个内含子,该酶属于ELO系列延长酶,可能定位于内质网中,包含多个跨膜区域和保守区域。亲缘关系分析表明,三角褐指藻△5-脂肪酸延长酶与假微型海链藻的亲缘关系最近。试验还成功构建了三角褐指藻△5-脂肪酸延长酶基因过表达重组质粒pPha-T1-5e,为下一步三角褐指藻中相关油脂代谢基因的表达和功能验证奠定基础。

关键词：三角褐指藻 △5-脂肪酸延长酶克隆生物信息学分析载体构建

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表面增强拉曼光谱在农残检测中的应用

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福建农业科技 2020年第3期51卷 59-64页

作者：吴钧坚何文锦陈由强薛婷福建师范大学生命科学学院海洋生物医药与制品产业化开发技术公共服务平台福建福州350117 福建师范大学南方海洋研究院/福建省微藻种质改良工程技术研究中心福建福州350117

农药在现代农业中广泛使用,残留在环境或瓜果蔬菜中的农药会对人体健康产生巨大的威胁,因此农药残留检测在现代农业生产活动中扮演着重要的角色。表面增强拉曼光谱(Surface-enhanced Raman Spectroscopy,SERS)技术在农药残留检测上有操... 详细信息

农药在现代农业中广泛使用,残留在环境或瓜果蔬菜中的农药会对人体健康产生巨大的威胁,因此农药残留检测在现代农业生产活动中扮演着重要的角色。表面增强拉曼光谱(Surface-enhanced Raman Spectroscopy,SERS)技术在农药残留检测上有操作简单、快速检测、成本低等优势,在农药残留检测领域有着广泛的应用前景。对拉曼散射的基本原理、表面增强拉曼的机制和拉曼增强活性基底的特点3个方面进行了介绍,并结合相关文献对表面增强拉曼技术在农药残留检测上的研究进行了综述和展望。

关键词：表面增强拉曼光谱农药残留检测

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