检索结果-内蒙古大学图书馆

南方医科大学学报 2025年第4期45卷 711-717页

作者：陈梅妹王洋雷黄伟张斐黄睿娜杨朝阳福建中医药大学中医学院福建福州350122 福建省中医健康状态辨识重点实验室福建福州350122

目的分析阈下抑郁组和正常组的语音情绪特征,并通过6种机器学习算法构建语音识别分类模型,为阈下抑郁辨识提供客观化依据,以提高早期诊断率。方法采集正常组和阈下抑郁组的朗读单词和文本的不同语音数据,每个语音段提取384维语音情绪特... 详细信息

目的分析阈下抑郁组和正常组的语音情绪特征,并通过6种机器学习算法构建语音识别分类模型,为阈下抑郁辨识提供客观化依据,以提高早期诊断率。方法采集正常组和阈下抑郁组的朗读单词和文本的不同语音数据,每个语音段提取384维语音情绪特征变量,包括能量特征、梅尔频率倒谱系数、零交叉率特征、声音概率特征、基频特征、差分特征等多个维度。采用递归特征消除方法筛选语音特征变量,然后利用自适应增强算法(AdaBoost)、随机森林(RF)、线性判别分析(LDA)、逻辑回归、Lasso回归和支持向量机机器学习算法构建分类模型,并评估模型的性能。为评估模型泛化能力,采用真实世界的语音数据,对最佳阈下抑郁语音识别分类模型进行测试。结果AdaBoost、RF和LDA模型在单词朗读语音测试集上预测准确率为100%、100%和93.3%,展现出高准确率和稳定性;在单词文本语音测试集上,AdaBoost、RF和LDA模型的预测准确率为90%、80%和90%,其余3个算法模型的准确率均小于80%。阈下抑郁语音AdaBoost和RF分类模型对真实世界的朗读单词和文本语音数据的预测准确率仍然可以达到了91.7%和80.6%,86.1%和77.8%。结论通过分析语音情绪特征可以有效地识别阈下抑郁个体,AdaBoost和RF模型在阈下抑郁个体分类方面表现出色,是识别阈下抑郁的有力工具,可以为临床应用和研究提供参考。

关键词：阈下抑郁识别语音情绪特征机器学习自适应增强算法随机森林

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五苓散汤剂保护血脑屏障改善小鼠脑出血后脑水肿的作用和机制

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中国实验方剂学杂志 2025年第4期31卷 1-9页

作者：陶大梅李惠红郑晓清邓云飞魏伟薛偕华福建中医药大学康复医学院福州350122 福建中医药大学附属康复医院福州350003 福建省认知功能康复重点实验室福州350003 福建省康复技术重点实验室福州350122

目的:研究五苓散治疗小鼠脑出血(ICH)后脑水肿的作用,并探讨其可能的机制。方法:采用胶原酶注射尾状核法建立ICH小鼠模型,随机分为假手术组,ICH组,五苓散低、高剂量(3.69、11.07 g·kg^(-1))造模前干预组,五苓散高剂量造模后干预组... 详细信息

目的:研究五苓散治疗小鼠脑出血(ICH)后脑水肿的作用,并探讨其可能的机制。方法:采用胶原酶注射尾状核法建立ICH小鼠模型,随机分为假手术组,ICH组,五苓散低、高剂量(3.69、11.07 g·kg^(-1))造模前干预组,五苓散高剂量造模后干预组。各组小鼠于ICH模型建立后进行改良神经功能评分(mNSS)和小动物核磁T2序列扫描检测脑出血体积;采用Y迷宫、旷场、水迷宫实验对各组小鼠进行神经行为学检测;苏木素-伊红(HE)染色观察脑组织病理改变情况;免疫组化观察脑组织水通道蛋白4(AQP4)、神经元核抗原(NeuN)、神经胶质细胞原纤维酸性蛋白(GFAP)表达情况;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测血肿部位AQP4和闭合蛋白-5(Claudin-5)、闭锁小带蛋白-1(ZO-1)表达情况。结果:与假手术组比较,ICH组mNSS评分、脑出血体积和水迷宫逃避潜伏期均显著增加(P<0.01),水迷宫接触平台次数和进入平台所在象限次数及Y迷宫自发交替率和旷场中心路程与总路程之比均显著减少(P<0.01),苏木素-伊红(HE)染色结果显示ICH组出现细胞排列紊乱、细胞间隙变大、细胞肿胀等病理改变,免疫组化结果显示ICH组AQP4、GFAP阳性细胞所占比例较假手术组显著增加(P<0.01),NeuN阳性细胞所占比例显著减少(P<0.01),Western blot结果显示,与假手术组比较,ICH组AQP4蛋白表达量显著增加(P<0.01),Claudin-5、ZO-1蛋白表达量显著减少(P<0.01);与ICH组比较,五苓散干预后mNSS评分和脑出血体积、水迷宫逃避潜伏期明显减少(P<0.05,P<0.01),水迷宫接触平台次数和进入平台所在象限次数及Y迷宫自发交替率和旷场中心路程与总路程之比明显增加(P<0.05,P<0.01),五苓散干预可减轻ICH后脑组织病理改变,AQP4、GFAP阳性细胞所占比例较ICH组显著减少(P<0.01),NeuN阳性细胞所占比例显著增加(P<0.01),AQP4蛋白表达量明显减少(P<0.01),Claudin-5、ZO-1蛋白表达量明显增加(P<0.01)。结论:五苓散干预能够减少小鼠ICH后神经功能评分和脑出血体积,增加Claudin-5和ZO-1的表达,同时降低AQP4的表达,从而有效改善ICH后的神经功能缺损、血脑屏障受损及脑水肿,发挥脑保护作用。

关键词：五苓散脑出血(ICH) 脑水肿水通道蛋白4(AQP4) 血脑屏障(BBB)

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泽泻醇A保护血脑屏障改善脑缺血/再灌注损伤的作用和机制研究

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中国药理学通报 2024年第1期40卷 83-90页

作者：邓云飞李惠红魏伟周阳杰薛偕华福建中医药大学康复医学院福建福州350122 福建中医药大学附属康复医院福建福州350003 福建省康复技术重点实验室福建福州350122 福建省认知功能康复重点实验室福建福州350003

目的探讨泽泻醇A(alisol A, AA)通过抑制基质金属蛋白酶9(matrix metalloproteinase 9, MMP-9)改善皮层血脑屏障(blood brain barrier, BBB)障碍介导的脑缺血/再灌注损伤(cerebral ischemia-reperfusion injury, CIRI)。方法构建小鼠全脑缺血/再灌注(global cerebral ischemia-reperfusion, GCI/R)体内动物模型,AA灌胃干预7 d(30 mg·kg^(-1)),改良神经功能缺损评分(modified neurological severity score, mNSS)、旷场和Y迷宫实验检测神经功能,磁共振波谱(magnetic resonance spectroscopy, MRS)检测皮层相关代谢物质水平,透射电镜(transmission electron microscope, TEM)观察皮层BBB超微结构,蛋白免疫印迹法和免疫组织化学检测皮层MMP-9蛋白表达,分子对接分析AA与MMP-9结合的可能性。结果相较于假手术组(Sham), GCI/R组小鼠mNSS评分升高、旷场总路程和中心路程占总路程比值均减少、Y迷宫交替率降低(P<0.01),而AA干预组(GCI/R+AA)较GCI/R组小鼠mNSS评分降低、旷场总路程和中心路程占总路程比值增加、Y迷宫交替率增加(P<0.01)。MRS检测发现GCI/R组小鼠大脑皮层γ-氨基丁酸、N-乙酰天门冬氨酸表达降低,胆碱、肌醇和牛磺酸表达升高(P<0.01);GCI/R+AA组小鼠γ-氨基丁酸、N-乙酰天门冬氨酸表达升高,胆碱、肌醇和牛磺酸表达降低(P<0.01)。TEM发现GCI/R组小鼠脑微血管基膜塌陷、管腔变窄;内皮细胞被激活、质膜褶皱且间隙变大,紧密连接破坏;星形胶质细胞终足肿胀。GCI/R+AA组小鼠血管管腔充盈;内皮细胞质膜平整,紧密连接完好;星形胶质细胞终足相对正常。蛋白免疫印迹和免疫组织化学检测发现GCI/R组小鼠皮层MMP-9表达水平明显升高(P<0.01),GCI/R+AA组明显降低(P<0.05)。分子对接发现AA与MMP-9可通过TYR-50和ARG-106两个基团结合,结合能为-6.24 kcal·mol^(-1)。结论 AA治疗可改善GCI/R小鼠皮层CIRI,其机制可能是通过抑制MMP-9升高造成BBB损伤。

关键词：脑缺血/再灌注损伤基质金属蛋白酶9 泽泻醇A 血脑屏障神经保护分子对接

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松郁安神方对失眠模型大鼠睡眠结构以及原代培养DRN 5-HT能神经元兴奋性的影响

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时珍国医国药 2024年第5期35卷 1072-1076页

作者：张娅黄俊山张一帆李星陈莉弘郁阿翠福建省中医药科学院福建福州350003 福建省中医睡眠医学重点实验室福建福州350003 黄俊山全国名老中医药专家传承工作室福建福州350003

目的观察松郁安神方对失眠模型大鼠睡眠结构以及原代培养DRN 5-HT能神经元兴奋性的影响,探讨其对失眠模型大鼠的治疗作用及机制。方法50只雄性SD大鼠随机分为模型组、松郁安神方组、艾司唑仑组、唑吡坦组和曲唑酮组,每组10只。松郁安神... 详细信息

目的观察松郁安神方对失眠模型大鼠睡眠结构以及原代培养DRN 5-HT能神经元兴奋性的影响,探讨其对失眠模型大鼠的治疗作用及机制。方法50只雄性SD大鼠随机分为模型组、松郁安神方组、艾司唑仑组、唑吡坦组和曲唑酮组,每组10只。松郁安神方组、艾司唑仑组、唑吡坦组和曲唑酮组大鼠分别给予15.9g/(kg·d)松郁安神方、0.1mg/(kg·d)艾司唑仑、1mg/(kg·d)唑吡坦和10.3mg/(kg·d)曲唑酮灌胃,模型组给予等体积生理盐水灌胃,连续14d。五组大鼠末次灌胃30min后采用电刺激法建立失眠动物模型。通过对各组大鼠脑电和肌电电极的埋藏及信号采集,进行睡眠结构分析。体外培养大鼠原代DRN 5-HT能神经元,采用免疫荧光法鉴定,分别加入模型组和松郁安神方组脑脊液,运用全细胞膜片钳实验技术记录两组原代培养DRN 5-HT能神经元的内在膜特性(包括静息膜电位和膜输入阻抗),电流诱发动作电位特征属性(包括阈值电位、幅度、超极化后电位幅度、半幅时程、上升速率和下降速率)和发放频率。结果与模型组比较,松郁安神方组可以缩短失眠大鼠睡眠潜伏期(SOL)(P<0.01),延长总睡眠时间(TST)(P<0.01)。在睡眠结构上主要表现为延长慢波睡眠(SWS)和快速动眼睡眠(REMS)(P均<0.01)。与松郁安神方组比较,艾司唑仑组、唑吡坦组和曲唑酮组均可缩短SOL(P均<0.01),艾司唑仑组、唑吡坦组可延长TST(P均<0.01),而曲唑酮组对TST影响不大(P>0.05),艾司唑仑组、唑吡坦组和曲唑酮组均可延长非快速动眼睡眠(NREMS),缩短REMS(P<0.05和P<0.01),但艾司唑仑组和唑吡坦组主要表现为延长快波睡眠(LS),减少SWS(P均<0.01),而曲唑酮组则表现为延长SWS(P<0.01),对LS几乎不产生影响(P>0.05)。与模型组相比,松郁安神方组5-HT能神经元静息膜电位(RMP)和膜输入阻抗(Rin)均明显降低(P均<0.01),电流诱发动作电位的阈值电压提高(P<0.05),动作电位的幅度、上升速率以及下降速率均降低(P<0.05和P<0.01),而超极化后电位幅度和半幅时程两组比较差异无统计学意义(P均>0.05)。与模型组相比,松郁安神方组亦能降低电流诱发的5-HT能神经元动作电位发放的频率(P<0.01)。结论松郁安神方可缩短SOL,延长TST。在睡眠结构上主要表现为延长SWS和REMS,在改善REMS以及恢复正常的睡眠结构方面具有明显优势,其改善睡眠的作用机制可能与抑制DRN 5-HT能神经元兴奋性有关。

关键词：松郁安神方失眠睡眠结构中缝背核 5-HT能神经元兴奋性

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人源胰腺癌类器官模型的构建及应用新进展

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中国癌症杂志 2024年第6期34卷 590-597页

作者：陈虹曹治云福建中医药大学中西医结合研究院福建福州350122 福建省中西医结合老年性疾病重点实验室福建福州350122 福建省高校中西医结合基础重点实验室福建福州350122

胰腺癌严重威胁人类健康,其高度异质性和恶性表型使患者的5年生存率仅为7.2%。胰腺癌的发病机制及药物开发研究常依赖于传统的二维培养模型(细胞系)和患者来源异种移植瘤模型,但因细胞系缺乏肿瘤的三维环境和异质性特征,而异种移植瘤模... 详细信息

胰腺癌严重威胁人类健康,其高度异质性和恶性表型使患者的5年生存率仅为7.2%。胰腺癌的发病机制及药物开发研究常依赖于传统的二维培养模型(细胞系)和患者来源异种移植瘤模型,但因细胞系缺乏肿瘤的三维环境和异质性特征,而异种移植瘤模型则存在培养时间长、成功率低、难以开展高通量药物筛选等问题,急需开发可高度反映胰腺癌特征和分子变异的三维培养模型。人源胰腺癌类器官作为近年发展起来的三维培养模型,是从组织样本中提取的多细胞单位,在机械和酶消化后嵌入细胞外基质凝胶中,可再现原患者的组织学特征及器官特点,甚至具有原器官的功能。随着胰腺癌类器官培养体系的不断发展及完善,其简便、经济及稳定的培养技术已经逐步建立,推动人源胰腺癌类器官的应用扩展到药物高通量筛选、个体化精准治疗、更深入的发病机制及针对性的药物开发研究。同时,人源胰腺癌类器官亦是胰腺癌临床分子分型研究的优势全新半体内模型,特别在针对研究高突变及高异质性患者的病因、分子特征、组织形态及体细胞突变负荷方面表现优越。大样本量人源胰腺癌类器官生物样本库的构建,将成为生物学、基础医学和临床肿瘤学研究的全新平台,有助于胰腺癌发病机制的深入研究及治疗策略的优化。人源胰腺癌类器官可再现临床患者特征的实验室模型的应用,将使药物筛选、发病机制研究、个体化治疗的实现成为可能。本文综述人源胰腺癌类器官的最新研究进展,希望该文为从事相关人源胰腺癌类器官研究的人员提供借鉴。

关键词：胰腺癌人源类器官发病机制药物筛选精准治疗

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慢性膝骨关节炎患者大脑结构形态的改变

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中国康复医学杂志 2025年第3期40卷 369-374页

作者：叶晋吴一玉张弛刘金勇蔡树河连晓文福建中医药大学附属康复医院福建省福州市350003 福建省康复技术重点实验室福建中医药大学康复医学院

目的:探索慢性膝骨关节炎患者大脑结构形态的变化特点。方法:使用基于体素的形态学测量分析(voxel-based morphometry,VBM)和基于表面的形态学测量分析(surfacebased morphometry,SBM)以及基于灰质体积构建的结构协变网络(structural co... 详细信息

目的:探索慢性膝骨关节炎患者大脑结构形态的变化特点。方法:使用基于体素的形态学测量分析(voxel-based morphometry,VBM)和基于表面的形态学测量分析(surfacebased morphometry,SBM)以及基于灰质体积构建的结构协变网络(structural covariance networks,SCN)分析慢性膝骨关节炎(knee osteoarthritis,KOA)患者大脑结构形态与健康受试者(healthy control,HC)间的差异。结果:(1)VBM分析:与HC受试者相比较,慢性KOA患者以左侧颞极(temporal pole)为中心区域的灰质体积显著减小(voxels水平,P<0.001;cluster水平,P=0.049,FWE校正,voxels size=833)。(2)SBM分析:与HC受试者相比较,慢性KOA患者左侧额下回盖部(pars opercularis)区域脑沟深度显著减小(voxels水平,P<0.001;cluster水平,P=0.003,FWE校正,voxels size=293)。(3)SCN分析:与HC受试者相比较,慢性KOA患者基于局部灰质体积构建的SCN鲁棒性强于HC受试者(P=0.032)。结论:慢性KOA患者存在大脑结构形态的异常,这为慢性KOA对中枢神经系统可能的影响提供了新的理解。

关键词：膝骨关节炎磁共振成像灰质体积脑沟深度结构协变网络

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基于神经血管单元稳态的电针对脑缺血再灌注损伤大鼠认知功能的影响及作用机制

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中国康复医学杂志 2025年第2期40卷 161-170页

作者：饶婷陈白林淑芳杨珊莉游咏梅福建中医药大学附属康复医院福建省福州市350003 福建省康复技术重点实验室福建中医药大学康复医学院

目的:观察电针百会、神庭穴对脑缺血再灌注模型鼠认知功能的影响并探讨其机制。方法:健康雄性SD大鼠随机分为假手术组、模型组、电针组及非穴组,每组15只。除假手术组外,余各组均接受大脑中动脉缺血再灌注(MCAO/R)模型制备。电针组进行... 详细信息

目的:观察电针百会、神庭穴对脑缺血再灌注模型鼠认知功能的影响并探讨其机制。方法:健康雄性SD大鼠随机分为假手术组、模型组、电针组及非穴组,每组15只。除假手术组外,余各组均接受大脑中动脉缺血再灌注(MCAO/R)模型制备。电针组进行百会、神庭穴电针干预7d,非穴组进行百会、神庭穴向外侧平开5mm电针干预7d,模型组及假手术组仅接受同等条件抓取及固定。采用神经行为学评分和TTC染色进行模型检验,神经行为学评分评估认知功能,HE染色法观察海马区细胞形态,免疫组化观察海马区CD31、GFAP、IBa1表达,ELISA观察海马区VEGF、BDNF、IL-10表达。结果:电针可缩短MCAO模型鼠Morris水迷宫逃避潜伏期,增加穿越平台次数,改善海马区细胞水肿、坏死及炎性细胞浸润,增加VEGF、IL-10、BDNF蛋白表达,增加CD31阳性表达,降低GFAP、IBa1阳性细胞数。结论:电针百会、神庭穴可改善脑缺血再灌注损伤大鼠认知功能,作用机制可能与调节神经血管单元(NVU)各组分,维持NVU稳态有关。

关键词：脑缺血再灌注损伤认知功能电针百会神庭神经血管单元

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松郁安神方通过cAMP/CREB信号通路改善失眠大鼠睡眠的研究

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中药新药与临床药理 2022年第10期33卷 1322-1327页

作者：曾雪爱周春权吴华嵩郭昕子黄俊山福建省中医药科学院福建省中医睡眠医学重点实验室福建福州350003 福建中医药大学福建福州350003

目的探讨松郁安神方(甘松、郁金、玫瑰花等)通过环磷酸腺苷(cAMP)/cAMP反应元件结合蛋白(CREB)信号通路改善失眠大鼠睡眠的作用机制。方法将大鼠随机分为对照组、模型组及松郁安神方低、高剂量组。除对照组外,其余3组采用腹腔注射对... 详细信息

目的探讨松郁安神方(甘松、郁金、玫瑰花等)通过环磷酸腺苷(cAMP)/cAMP反应元件结合蛋白(CREB)信号通路改善失眠大鼠睡眠的作用机制。方法将大鼠随机分为对照组、模型组及松郁安神方低、高剂量组。除对照组外,其余3组采用腹腔注射对氯苯丙氨酸(PCPA)复制失眠模型。模型复制成功后,松郁安神方低、高剂量组分别给予8.5、17 g·kg^(-1)松郁安神方灌胃,每天1次,连续7 d。观察大鼠一般状态,动物睡眠生物解析系统记录大鼠脑电(EEG)和肌电(EMG),采用ELISA法检测下丘脑cAMP含量,实时荧光定量PCR和Western Blot法分别检测下丘脑CREB mRNA和p-CREB蛋白表达。结果与对照组比较,模型组大鼠白天时段非快速眼动(NREM)和快速眼动(REM)睡眠量均明显减少(P<0.01),觉醒量明显增加(P<0.01),下丘脑cAMP含量、CREB mRNA和p-CREB蛋白表达均明显降低(P<0.01)。松郁安神方治疗后,与模型组比较,松郁安神方低、高剂量组非快速眼动睡眠量均明显增加(P<0.05,P<0.01),觉醒量均明显减少(P<0.05,P<0.01),下丘脑c AMP含量、CREB mRNA和p-CREB蛋白表达均明显升高(P<0.05,P<0.01)。结论松郁安神方可能通过下丘脑c AMP/CREB信号通路改善失眠大鼠睡眠。

关键词：松郁安神方 cAMP/CREB信号通路失眠睡眠时相大鼠

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24-乙酰泽泻醇A通过miR-98-5p/TRPM2改善脑微血管内皮细胞缺血/再灌注损伤

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中国药理学通报 2025年第4期41卷 695-702页

作者：魏伟李惠红徐沛韬陶大梅邓云飞詹增土福建中医药大学附属康复医院福建省认知功能康复重点实验室福建中医药大学康复医学院

目的探讨24-乙酰泽泻醇A（Alisol A 24-acetate, 24A）改善脑微血管内皮细胞（brain microvascular endothelial cells, BMECs）缺血/再灌注损伤分子机制及其与miR-98-5p/瞬时受体电位离子通道-2（TRPM2）的相关性。方法 bEnd.3细胞OGD 8 h/R 16 h构建离体BMECs缺血/再灌注损伤模型，miR-98-5p mimics转染后18.77μmol·L-124A干预24 h,分为对照、OGD/R、OGD/R+24A、OGD/R+24A+miR-98-5p mimics及OGD/R+miR-98-5p mimics组；qPCR检测miR-98-5p和TRPM2 mRNA水平；ELISA检测IL-1β、TNF-α水平；Western blot检测TRPM2、p-AKT、p-GSK3β、AKT、GSK3β、Bcl-2、Bax、ZO-1、Occludin、Claudin-5蛋白表达水平；流式细胞术检测凋亡及活性氧（ROS）水平；双荧光素酶验证miR-98-5p与TRPM2靶向关系。结果 OGD/R组比对照组凋亡明显、Bcl-2/Bax降低，ZO-1、Occludin、Claudin-5减少，IL-1β、TNF-α和ROS增加，miR-98-5p、p-AKT/AKT、p-GSK3β/GSK3β降低但TRPM2增加；但与OGD/R组相比，除对照组外其余三组在以上方面表现出了相反趋势；与OGD/R+24A组相比，OGD/R+24A+miR-98-5p mimics组凋亡减轻，ZO-1、Occludin、Claudin-5降解减少，炎症和ROS减轻，miR-98-5p、p-AKT/AKT、p-GSK3β/GSK3β增加且TRPM2降低；但与OGD/R+24A+miR-98-5p mimics组相比，OGD/R+miR-98-5p mimics组则逆转了这种趋势。双荧光素酶证实miR-98-5p靶向调控TRPM2。结论 24A通过miR-98-5p抑制BMECs内TRPM2表达，调控AKT/GSK3β信号通路，减少OGD/R炎症及氧化应激介导的细胞凋亡，阻止ZO-1、Occludin及Claudin-5降解，改善血脑屏障（blood brain barrier, BBB）渗透性。

关键词： 24-乙酰泽泻醇A 脑缺血/再灌注损伤脑微血管内皮细胞 miR-98-5p TRPM2

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星形胶质细胞源性外泌体miR-193b-3p靶向TRPM2改善脑微血管内皮细胞氧糖剥夺/再氧合损伤的机制研究

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中华神经医学杂志 2024年第9期23卷 874-885页

作者：邓云飞李惠红魏伟陶大梅郑晓清薛偕华福建中医药大学康复医学院福州350122 福建中医药大学附属康复医院脑病康复一科福建省康复技术重点实验室福建省认知功能康复重点实验室福州350003

目的通过构建体外氧糖剥夺/再氧合(OGD/R)模型,探讨脑缺血再灌注过程中星形胶质细胞(AS)源性外泌体对脑微血管内皮细胞损伤的保护作用及机制。方法(1)通过双荧光素酶报告基因检测确定miR-193b-3p对抑制瞬时受体电位M2型通道(TRPM2)的调... 详细信息

目的通过构建体外氧糖剥夺/再氧合(OGD/R)模型,探讨脑缺血再灌注过程中星形胶质细胞(AS)源性外泌体对脑微血管内皮细胞损伤的保护作用及机制。方法(1)通过双荧光素酶报告基因检测确定miR-193b-3p对抑制瞬时受体电位M2型通道(TRPM2)的调控作用。采用miR-193b-3p模拟物/阴性序列转染bEnd.3细胞后进行OGD/R造模(分别为OGD/R+miR-193b-3p模拟物组及OGD/R+miR-193b-3p阴性序列组),通过实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测细胞miR-193b-3p表达、Western blotting实验检测TRPM2、Cleaved-Caspase-3、Bax、Bcl-2、ZO-1和Claudin-5蛋白表达,采用流式细胞术检测细胞凋亡率。(2)从C57BL/6乳鼠大脑皮层提取AS并鉴定。通过CCK-8法确定AS造模时间并通过超高速离心法提取AS培养基中的外泌体,采用电镜、粒径和标志蛋白进行鉴定,采用RT-qPCR法检测AS及其外泌体中miR-193b-3p含量。随后采用miR-193b-3p抑制序列转染AS后提取低表达miR-193b-3p的外泌体,与OGD/R造模的bEnd.3细胞共孵育(OGD/R+AS转染抑制剂外泌体组);采用miR-193b-3p阴性序列转染AS后提取外泌体,与OGD/R造模的bEnd.3细胞共孵育(OGD/R+AS转染阴性序列外泌体组);正常外泌体与OGD/R造模的bEnd.3细胞共孵育为OGD/R+AS外泌体组。通过RT-qPCR法检测各组细胞miR-193b-3p表达,通过Western blotting实验检测TRPM2、Cleaved-Caspase-3、Bax、Bcl-2、ZO-1和Claudin-5蛋白表达,采用流式细胞术检测凋亡率,采用划痕实验检测细胞迁移能力。结果(1)双荧光素酶报告基因检测显示miR-193b-3p可结合TRPM2 mRNA,且转染miR-193b-3p模拟物后TRPM2蛋白表达明显减少,与OGD/R组比较差异有统计学意义(P<0.05)。与OGD/R组相比,OGD/R+miR-193b-3p模拟物组细胞Cleaved-Caspase-3、Bax蛋白表达明显降低,Bcl-2、ZO-1和Claudin-5蛋白表达明显升高,差异有统计学意义(P<0.05)。提示miR-193b-3p可改善OGD/R过程中由TRPM2介导的bEnd.3细胞凋亡和紧密连接减少。流式细胞术进一步验证了上述结论,表现为与OGD/R组(21.34%)比较,OGD/R+miR-193b-3p模拟物组细胞凋亡率(13.93%)明显下降,差异有统计学意义(P<0.05)。(2)研究中提取的外泌体呈脂质双层杯状、粒径主要在126.5 nm左右,外泌体标志蛋白Cal为阴性、CD81和SG101为阳性,提示外泌体提取成功。造模后,AS及其外泌体中miR-193b-3p含量均降低,与Control组比较差异均有统计学意义(P<0.05)。进一步研究发现,与OGD/R组比较,OGD/R+AS外泌体组及OGD/R+AS转染阴性序列外泌体组中miR-193b-3p表达明显升高,TRPM2、Cleaved-Caspase-3和Bax蛋白表达明显降低,ZO-1、Claudin-5和Bcl-2表达明显升高,差异有统计学意义(P<0.05);而OGD/R+AS转染抑制剂外泌体组细胞上述蛋白表达无明显改变,组间差异无统计学意义(P>0.05)。流式细胞术凋亡检测结果与之一致,表现为与OGD/R组(18.22%)相比,OGD/R+AS外泌体组、OGD/R+AS转染阴性序列外泌体组细胞组细胞凋亡率(14.09%、13.79%)明显降低,差异有统计均意义(P<0.05);而OGD/R+AS转染抑制剂外泌体组细胞凋亡率(18.41%)无明显改变,差异无统计学意义(P>0.05)。细胞划痕实验显示,与OGD/R组(13.55%)相比,OGD/R+AS外泌体组、OGD/R+AS转染阴性序列外泌体组细胞迁移能力(43.01%、40.59%)明显增强,差异均有统计学意义(P<0.05);而OGD/R+AS转染抑制剂外泌体组细胞迁移能力无明显改变(16.26%),差异无统计学意义(P>0.05)。结论AS源性外泌体可通过miR-193b-3p远距离抑制脑微血管内皮细胞上的TRPM2蛋白表达,改善OGD/R造成的脑微血管内皮细胞损伤,进而改善OGD/R损伤。

关键词：外泌体 miR-193b-3p 星形胶质细胞脑微血管内皮细胞脑缺血再灌注损伤 TRPM2

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