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福建畜牧兽医 2021年第4期43卷 12-14页

作者：赵敏李家玉何海斌黄瑜万春和福建农林大学生命科学学院福州350002 福建省农业科学院畜牧兽医研究所/福建省畜禽疫病防治工程技术研究中心/福建省禽病防治重点实验室福州350013 龙岩学院/预防兽医学与生物技术福建省高校重点实验室福建龙岩364012

鹅圆环病毒(Goose circovirus,GoCV)属于圆环病毒科圆环病毒属成员,鹅群感染后可造成法氏囊、脾和胸腺淋巴细胞减少,从而易继发多种条件性病原二次感染,危害极大。本文从鹅圆环病毒的流行病学特点、基因组特征、致病性及诊断方法等方面... 详细信息

鹅圆环病毒(Goose circovirus,GoCV)属于圆环病毒科圆环病毒属成员,鹅群感染后可造成法氏囊、脾和胸腺淋巴细胞减少,从而易继发多种条件性病原二次感染,危害极大。本文从鹅圆环病毒的流行病学特点、基因组特征、致病性及诊断方法等方面进行综述。

关键词：鹅圆环病毒流行病学基因组诊断方法研究进展

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水稻生物学特性对稻田甲烷排放的影响

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农学学报 2020年第2期10卷 75-80页

作者：沈学良田光蕾周元昌王缨福建农林大学/作物遗传育种与综合利用教育部重点实验室福州350002 福建省农业遗传工程重点实验室/福建省农业科学院生物技术研究所福州350003

为了阐明水稻品种与稻田甲烷排放的关系,为培育低甲烷水稻品种提供科学依据。本研究从水稻植株形态特征和生物学特性等方面,论述水稻植株与甲烷排放的关系。水稻根系主要通过根系分泌物和根系泌氧能力二个方面影响甲烷气体的生成和氧化... 详细信息

为了阐明水稻品种与稻田甲烷排放的关系,为培育低甲烷水稻品种提供科学依据。本研究从水稻植株形态特征和生物学特性等方面,论述水稻植株与甲烷排放的关系。水稻根系主要通过根系分泌物和根系泌氧能力二个方面影响甲烷气体的生成和氧化;水稻分蘖特性主要影响甲烷气体的排放;水稻叶片则通过光合作用和蒸腾作用二个方面分别影响甲烷气体的产生和排放;水稻籽粒的灌浆特性主要通过与根系争夺碳水化合物而影响甲烷的产量。这些因素既相互独立又相互协调影响水稻稻田的甲烷排放。

关键词：水稻甲烷生物学特性根系分蘖叶片籽粒品种

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H146-like鹅嵌杯病毒TaqMan-MGB PCR检测方法的建立及应用

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中国预防兽医学报 2020年第10期42卷 1019-1024页

作者：郑敏张世忠王劭谢开春江丹丹肖世峰陈少莺邓国华福建省农业科学院畜牧兽医研究所福建福州350013 福建省畜禽疫病防治工程技术研究中心福建福州350013 福建省南平市延平区畜牧兽医水产局福建南平353000 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室黑龙江哈尔滨150069

为建立检测H146-like鹅嵌杯病毒(GCV)的TaqMan-MGB荧光定量PCR方法,本研究根据GenBank已登录的H146-like GCV基因组(KY399947)的NS基因保守区序列,设计合成一对能够特异性扩增134 bp片段的特异性引物(GCV-QP3/GCV-QP4)和TaqMan-MGB探针(GCV-Probe),经过反应体系和条件优化,建立了检测H146-like GCV的TaqMan-MGB荧光定量PCR方法。当质粒标准品为5.07×10^2拷贝/μL^5.07×10^9拷贝/μL时,荧光定量标准曲线Ct值与模板浓度呈良好的线性关系,相关系数可达0.995。特异性试验结果显示,该方法对水禽常见病毒(如鹅星状病毒、鹅副粘病毒、鹅细小病毒、番鸭呼肠孤病毒、Ⅰ型鸭肝炎病毒与鸭坦布苏病毒等)的检测均为阴性,仅对H146-like GCV检测为阳性,特异性较强;敏感性试验结果显示,该方法可以检测到的最低质粒标准品为5.07×10^2拷贝/μL,而常规PCR方法检测该质粒标准品最低为5.07×10^4拷贝/μL,敏感性高;批内和批间的变异系数均小于1.6%,重复性良好。对福建省62份疑似临床组织样品进行检测,结果显示TaqMan-MGB探针荧光定量PCR方法阳性检出率为93.5%(58/62),而常规PCR方法的阳性检出率为72.6%(45/62),两种方法的符合率为77.59%。本研究建立的荧光定量PCR检测方法特异性强、灵敏性高,重复性好,在H146-like GCV的快速检测中具有良好的应用前景。

关键词：鹅嵌杯病毒 RNA病毒荧光定量PCR TaqMan探针病毒检测

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利用分子标记辅助选择改良闽恢3301稻瘟病抗性

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南方农业学报 2019年第8期50卷 1665-1670页

作者：田大刚杨小双陈子强陈在杰林艳王锋福建省农业科学院生物技术研究所/福建省农业遗传工程重点实验室福州350003 福建农林大学植物保护学院福州350002

【目的】改良三系杂交籼稻强势恢复系闽恢3301的稻瘟病抗性,以提高其在生产中的应用价值。【方法】以75-1-127和C101A51为稻瘟病主效基因Pi9和Pi2的供体亲本,以闽恢3301为受体亲本,通过杂交、多代回交和自交,结合分子标记辅助选择和田... 详细信息

【目的】改良三系杂交籼稻强势恢复系闽恢3301的稻瘟病抗性,以提高其在生产中的应用价值。【方法】以75-1-127和C101A51为稻瘟病主效基因Pi9和Pi2的供体亲本,以闽恢3301为受体亲本,通过杂交、多代回交和自交,结合分子标记辅助选择和田间选择的方法,将供体亲本的Pi9和Pi2基因导入闽恢3301中,改良其稻瘟病抗性。利用21个福建近年流行的稻瘟菌菌株及其混合菌液对闽恢3301改良系进行人工接种抗性鉴定,并连续两年在上杭茶地病圃进行田间自然诱发抗性鉴定。将闽恢3301改良系和闽恢3301分别与三系不育系荟丰A和广8A及两系不育系GRD-7S进行测配,考察其农艺性状,以闽恢3301为父本的杂交组合为对照。【结果】通过利用Pi2/9分子标记对抗病基因进行跟踪选择,最终获得含Pi9和Pi2的闽恢3301改良系(闽恢3301-Pi9和闽恢3301-Pi2)各20份。除闽恢3301-Pi9对SH17004菌株表现为中感外,闽恢3301-Pi9对其他20个稻瘟病菌株及于2016和2017年在田间自然诱发鉴定中均表现出抗病,且闽恢3301-Pi2对21个稻瘟病菌株及于2016和2017年在田间自然诱发鉴定中均表现出抗病或高抗,二者抗性达到甚至超过两供体亲本75-1-127和C101A51的抗性水平,但闽恢3301对7个稻瘟病菌株表现感病,对1个菌株表现中感,对其他菌株则表现中抗或抗病,且田间自然诱发鉴定中均表现高感,说明闽恢3301-Pi9和闽恢3301-Pi2抗性水平得到有效提高。除RGD-7S×闽恢3301-Pi9和RGD-7S×闽恢3301-Pi2组合的单株产量分别极显著(P<0.01)高于相应的对照组合外,其他以闽恢3301改良株系为父本的杂交组合在株高、穗长、分蘖数、千粒重、单株产量和结实率上无显著差异(P>0.05),表明闽恢3301-Pi2和闽恢3301-Pi9在培育稻瘟病抗性杂交水稻组合上具有广阔的应用前景。【结论】闽恢3301-Pi9和闽恢3301-Pi2抗性得到有效提高的同时在农艺性状和配合力等方面保持了闽恢3301及其组合的主要特性,说明利用Pi9和Pi2基因可有效改良闽恢3301的稻瘟病抗性,不仅拓宽了稻瘟病抗谱,还不影响闽恢3301的配合力,二者可作为新的水稻材料进行推广应用。

关键词：闽恢3301 稻瘟病抗性分子标记辅助选择 Pi9 Pi2 农艺性状

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利用CRISPR/Cas9技术创制糯稻新材料

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福建农业学报 2019年第5期34卷 503-508页

作者：范美英梅法庭朱义旺林雅容赵丽丽田光蕾王锋福建省农业科学院生物技术研究所/福建省农业遗传工程重点实验室福建福州350003 福建农林大学作物科学学院福建福州350002

【目的】通过CRISPR/Cas9基因组编辑技术遗传改良优质粳稻秀水134来创制糯稻新材料。【方法】构建靶向水稻直链淀粉合成主效基因Wx的CRISPR/Cas9表达载体,并通过农杆菌介导秀水134的遗传转化。【结果】共获得了45个转基因株系,其中41个... 详细信息

【目的】通过CRISPR/Cas9基因组编辑技术遗传改良优质粳稻秀水134来创制糯稻新材料。【方法】构建靶向水稻直链淀粉合成主效基因Wx的CRISPR/Cas9表达载体,并通过农杆菌介导秀水134的遗传转化。【结果】共获得了45个转基因株系,其中41个株系发生靶定位置的碱基修改,突变率达到91.1%。通过表型考察和直链淀粉含量分析获得了糯稻新材料。【结论】该方法可以创制直链淀粉明显降低的糯稻新材料,为糯稻育种研究提供重要的材料基础。

关键词： CRISPR/Cas9 Wx 糯稻

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全基因组分析策略应用于水稻抗稻瘟病基因鉴定的研究和进展

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分子植物育种 2019年第5期17卷 1525-1530页

作者：梁廷敏陈在杰陈松彪福建农林大学生命科学学院福州350002 福建省农业科学院生物技术研究所福建省农业遗传工程重点实验室福州350003

水稻是世界上最重要的粮食作物之一。稻瘟病严重危害水稻生产,每年可造成水稻大面积减产。利用水稻抗病基因资源,培育抗病水稻品种,是防治稻瘟病的经济有效、安全的方法。基于遗传定位及图位克隆,已有一百多个抗稻瘟病基因得到鉴定,其... 详细信息

水稻是世界上最重要的粮食作物之一。稻瘟病严重危害水稻生产,每年可造成水稻大面积减产。利用水稻抗病基因资源,培育抗病水稻品种,是防治稻瘟病的经济有效、安全的方法。基于遗传定位及图位克隆,已有一百多个抗稻瘟病基因得到鉴定,其中有二十多个基因被克隆。近年来,全基因组分析策略进一步推动了水稻抗稻瘟病基因鉴定的发展。本研究简要总结了水稻抗稻瘟病基因的定位和克隆,并概述了全基因组分析策略应用于水稻抗稻瘟病基因鉴定的研究和进展。

关键词：水稻稻瘟病抗病基因极端分离混合池重测序分析全基因组关联分析

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新型欧洲鳗鲡抗菌肽elecilin在毕赤酵母中的表达

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福建畜牧兽医 2021年第2期43卷 19-21页

作者：张丽娟吴唯维李素一陈华柯翎陈叙林晨韬福建省农业科学院生物技术研究所福州350003 福建师范大学生命科学学院福州350007 福建师范大学南方海洋研究院福建省微藻种质改良工程技术研究中心福州350117 福建师范大学福建省特色海洋生物资源可持续利用重点实验室福州350117

前期采用差减杂交的方法筛选到新型欧洲鳗鲡抗菌肽elecilin,其基因全长为477 bp,编码159个氨基酸,理论分子量约17.4 kDa。为了获得具活性的大量表达的抗菌肽,本研究利用毕赤酵母表达了elecilin。首先将elecilin基因克隆至酵母分泌表达载... 详细信息

前期采用差减杂交的方法筛选到新型欧洲鳗鲡抗菌肽elecilin,其基因全长为477 bp,编码159个氨基酸,理论分子量约17.4 kDa。为了获得具活性的大量表达的抗菌肽,本研究利用毕赤酵母表达了elecilin。首先将elecilin基因克隆至酵母分泌表达载体pPICZaA,构建了重组分泌表达质粒pPICZaA-elecilin,电击转化毕赤酵母X-33。经Zeocin筛选和PCR鉴定,获得重组酵母菌,通过甲醇诱导,SDS-PAGE和Western blot鉴定,证实诱导后的培养基中存在与预期分子量大小相一致的蛋白,能被His-tag单克隆抗体识别,表明利用酵母成功表达了欧洲鳗鲡抗菌肽elecilin。这为进一步研究该抗菌肽的功能及作为饲料添加剂的应用奠定了基础。

关键词：欧洲鳗鲡抗菌肽表达毕赤酵母

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水稻细胞质雄性不育系谷丰A稻瘟病抗性基因分子鉴定及遗传分析

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分子植物育种 2019年第5期17卷 1411-1416页

作者：张柱坚林艳田大刚周元昌福建农林大学作物遗传育种与综合利用教育部重点实验室福州350002 福建省作物设计育种重点实验室福州350002 福建省农业科学院生物技术研究所福建省农业遗传工程重点实验室福州350003

谷丰A是一个优良的抗稻瘟病水稻细胞质雄性不育系,利用它已配制出多个优良杂交水稻品种,并且已成为选育抗稻瘟病不育系的重要亲本之一。本研究利用Pigm、Pi9、Pi2、Piz-t、Pi-d2、Pi-d3、Pit、Pi5、Pii、Pib、Pi-ta等11个抗稻瘟病基因... 详细信息

谷丰A是一个优良的抗稻瘟病水稻细胞质雄性不育系,利用它已配制出多个优良杂交水稻品种,并且已成为选育抗稻瘟病不育系的重要亲本之一。本研究利用Pigm、Pi9、Pi2、Piz-t、Pi-d2、Pi-d3、Pit、Pi5、Pii、Pib、Pi-ta等11个抗稻瘟病基因的特异分子标记,检测和分析了谷丰A的抗稻瘟病基因型。结果表明,该不育系中含有稻瘟病抗性基因Pi-d2、Pi-d3和Pigm。进一步分析确定了这3个基因都来源于其亲本之一地谷A。用8个稻瘟病菌田间接种鉴定表明,谷丰A比福伊B及单基因系谷梅4号、IRBLKs-Ka (Pik)、IRBL9-W (Pi9)、IRBLta-K1 (Pi-ta)等广谱高抗的材料具有更好的抗性。

关键词：水稻谷丰A 稻瘟病抗性基因分子标记

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酵母双杂交筛选水稻OsJAG互作蛋白

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基因组学与应用生物学 2019年第10期38卷 4572-4579页

作者：孔兰王锋蔡正正邱荣华吴春燕段远霖吴为人福建农林大学福建省作物设计育种重点实验室教育部作物遗传育种与综合利用重点实验室福州350002 福建农业科学学院生物技术研究所/福建省遗传工程重点实验室福州350003

水稻OsJAG是一个重要的C2H2型锌指蛋白,在水稻花器官发育,特别是浆片和雄蕊的确定中具有关键作用,但与之相互作用的蛋白质却鲜有报道。本研究利用酵母双杂交方法,以OsJAG为诱饵蛋白,从水稻明恢86的幼穗cDNA文库中筛选到38个与OsJAG有相... 详细信息

水稻OsJAG是一个重要的C2H2型锌指蛋白,在水稻花器官发育,特别是浆片和雄蕊的确定中具有关键作用,但与之相互作用的蛋白质却鲜有报道。本研究利用酵母双杂交方法,以OsJAG为诱饵蛋白,从水稻明恢86的幼穗cDNA文库中筛选到38个与OsJAG有相互作用的蛋白质,包括3个GDSL(Gly-Asp-Ser-Leu)脂酶家族成员(OsGELP95,OsGELP67和OsGELP6)、2个线粒体电压依赖性阴离子通道蛋白(OsVDAC1和OsVDAC2)、受harpin诱导的蛋白、丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶和泛素化相关蛋白等。通过双分子荧光互补技术对部分蛋白的互作进行了验证,结果显示OsJAG与OsGELP95、OsGELP67、OsVDAC1和OsVDAC2均存在相互作用。本实验为深入研究OsJAG在水稻生殖发育和花器官特化的遗传调控机制提供了理论参考。

关键词：水稻 OsJAG 酵母双杂交 cDNA文库双分子荧光互补

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异源表达Hvsusiba2水稻对稻田甲烷排放及土壤相关菌群的影响

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中国生态农业学报 2018年第9期26卷 1333-1342页

作者：苏军单贞陈在杰福建省农业科学院生物技术研究所/福建省农业遗传工程重点实验室福州350003

Hvsusiba2是调控大麦淀粉合成和光合产物分配的转录因子。前期研究我们将Hvsusiba2导入粳稻(Oryza sativa ***),Hvsusiba2粳稻稻田甲烷排放显著下降,胚乳淀粉含量显著提高。为进一步明确Hvsusiba2对稻田甲烷排放的影响,本研究我们将Hvsu... 详细信息

Hvsusiba2是调控大麦淀粉合成和光合产物分配的转录因子。前期研究我们将Hvsusiba2导入粳稻(Oryza sativa ***),Hvsusiba2粳稻稻田甲烷排放显著下降,胚乳淀粉含量显著提高。为进一步明确Hvsusiba2对稻田甲烷排放的影响,本研究我们将Hvsusiba2导入籼稻(*** ***),研究异源表达Hvsusiba2籼稻全生育期甲烷排放和稻田主要甲烷菌及甲烷氧化菌变化。采用静态箱法测定Hvsusiba2水稻稻田甲烷排放通量,结果显示Hvsusiba2稻田全生育期的大部分时段甲烷排放量显著(P<0.05)或极显著(P<0.01)低于对照株系。Hvsusiba2水稻甲烷减排率幅度为54.7%~3.8%,减排率最高的时期为幼穗分化期。2个Hvsusiba2水稻株系生长季累计甲烷排放量分别为5 060.16 mg?m-2和5 250.60 mg?m-2,比对照减排30.30%和27.58%。采用荧光定量PCR法检测水稻关键生长期根土6类产甲烷菌和2类甲烷氧化菌以及土壤总细菌的丰度变化。结果显示:在整个生长期内Hvsusiba2水稻根土6类产甲烷菌菌群丰度的总体趋势是前期高、后期低;甲烷古菌(Archaea,ARC)、甲烷鬃菌科(Methanosaetaceae,Mst)和甲烷微菌目(Methanomicrobiales,MMb)3类菌群丰度的高峰出现在分蘖盛期,甲烷八叠球菌科(Methanosarcinaceae,Msc)菌群丰度的高峰出现在幼穗分化穗期,普通产甲烷菌(Methanogens,MET)和甲烷杆菌目(Methanobacteriales,MBT)分蘖期最高。Hvsusiba2水稻产甲烷菌丰度在分蘖期、抽穗期和开花期显著或极显著地低于野生型对照。在大部分测试时间段内Hvsusiba2水稻的2类甲烷氧化菌群丰度比对照有显著(P<0.05)或极显著(P<0.01)下降;Hvsusiba2水稻土壤总细菌丰度在水稻的分蘖期、抽穗期和开花期也显著低于野生型水稻。稻田中产甲烷菌的丰度依次是甲烷鬃菌科(Mst)>甲烷古菌(ARC)>普通产甲烷菌(MET)>甲烷微菌目(MMb)≥甲烷八叠球菌科(Msc)>甲烷杆菌目(MBT);2类甲烷氧化菌中Ⅰ型甲烷氧化菌(MBAC)丰度极显著大于Ⅱ型甲烷氧化菌(TYPEⅡ)。结合之前的研究结果,我们认为Hvsusiba2可能是通过改变水稻光合同化物分配生理,减少向土壤有机质的输送,降低土壤相关菌群的丰度达到稻田甲烷减排的。

关键词：水稻 Hvsusiba2异源表达甲烷减排产甲烷菌甲烷氧化菌菌群丰度

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