检索结果-内蒙古大学图书馆

中国水稻科学 2024年

作者：韦新宇曾跃辉肖长春黄建鸿阮宏椿杨旺兴邹文广许旭明三明市农业科学研究院生物技术研究所福建省(山区)作物遗传改良与创新利用重点实验室福建省农业科学院植物保护研究所三明市农业科学研究院水稻研究所

【目的】稻瘟病是一种由丝状子囊菌稻瘟病菌Magnaporthe oryzae引起的世界性真菌病害，严重影响水稻的品质和产量，培育和种植抗性品种是控制稻瘟病发生最经济有效的措施，而抗性基因的挖掘和利用是选育抗病品种的基础和关键。本研究以... 详细信息

【目的】稻瘟病是一种由丝状子囊菌稻瘟病菌Magnaporthe oryzae引起的世界性真菌病害，严重影响水稻的品质和产量，培育和种植抗性品种是控制稻瘟病发生最经济有效的措施，而抗性基因的挖掘和利用是选育抗病品种的基础和关键。本研究以三明市农业科学研究院自主选育且具有广谱抗性的优质籼型杂交稻保持系康丰B (KFB)为研究材料，对其抗稻瘟病基因Pi-kf2(t)进行抗谱分析、克隆和功能验证。【方法】利用来自全国不同地区100个稻瘟病菌株对KFB (Pi-kf2(t))、75-1-127 (Pi9)、C101A51 (Pi2)、IRBLzt-T (Piz-t)、EBZ (Pi50)和GM 4 (Pigm)幼苗3-4叶期进行喷雾接菌；结合半定量PCR (RT-PCR)和实时荧光定量PCR (qRT-PCR)技术对Pi-kf2(t)两个候选基因Pi-kf2(t)-NBS2和Pi-kf2(t)-NBS4进行表达模式分析；采用同源克隆技术并构建系统进化树对Pi-kf2(t)基因进行克隆以及分析Pi-kf2(t)与Pi9，Pi2，Piz-t，Pi50和Pigm之间的进化关系；通过转基因互补试验对Pi-kf2(t)候选基因进行功能验证。【结果】Pi-kf2(t)与Pi9，Pi2，Piz-t，Pi50和Pigm存在明显的抗谱差异，其抗谱分别为93%，90%，91%，78%，95%和96%；候选基因Pi-kf2(t)-NBS2在KFB苗期叶片具有较高的表达水平且不受稻瘟病菌诱导，属于组成型表达，而Pi-kf2(t)-NBS4表现出极其低的表达量；多重氨基酸序列比对分析表明，Pi-kf2(t)-NBS2与Pi9，Pi2，Piz-t，Pi50和Pigm蛋白分别存在45，31，34，2和2个氨基酸的差异；系统进化树分析表明，Pi-kf2(t)-NBS2与Pi50和Pigm具有更近的亲缘关系和更高的同源性；另外，转基因互补试验进一步验证了候选基因Pi-kf2(t)-NBS2即为Pi-kf2(t)抗稻瘟病基因。【结论】Pi-kf2(t)为Pi2/Pi9基因家族中一个新的稻瘟病抗性基因，本研究为Pi-kf2(t)后期抗病机理研究提供了理论基础，同时为选育抗稻瘟病水稻新品种提供了重要种质资源。

关键词：水稻康丰B 稻瘟病 Pi2/Pi9 抗性基因 NBS-LRR

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利用水稻启动子捕获系筛选水稻胚发育相关基因的初步研究

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中国生物工程杂志 2009年第6期29卷 108-112页

作者：胡昌泉李素一刘华清刘次桃张晖潘大仁王锋福建省农业科学院生物技术研究所农业遗传工程重点实验室福州350003 福建农林大学生命科学学院福州350013 福建师范大学生命科学学院福州350007

通过对2227个启动子捕获系中报道基因β-葡萄糖苷酸酶(β-glucuronidase,gus)表达活性检测,筛选到7个水稻胚中表达GUS活性的启动子捕获系,对其中编号为W9154的捕获系作了进一步分析。Southern杂交分析表明W9154是一个单拷贝T-DNA插入系,... 详细信息

通过对2227个启动子捕获系中报道基因β-葡萄糖苷酸酶(β-glucuronidase,gus)表达活性检测,筛选到7个水稻胚中表达GUS活性的启动子捕获系,对其中编号为W9154的捕获系作了进一步分析。Southern杂交分析表明W9154是一个单拷贝T-DNA插入系,其T-DNA插入在水稻基因组第3号染色体上一个未知蛋白基因的第2个内含子中。对该未知蛋白基因上游调控序列生物信息学分析显示,其调控序列除含有TATA-box和CAAT-box等常见启动子元件外,还含有RY基序、E盒、G盒及AACA等种子特异性启动子的特征性元件。表达特征分析发现,编码上述未知蛋白的基因在野生型水稻的胚和茎中表达,这与捕获系W9154中GUS表达活性完全一致。这些表明启动子捕获系w9154捕获的候选基因可能是一个水稻胚发育相关基因。

关键词：水稻启动予捕获系胚发育相关基因表达特征

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变形假单胞菌免疫刺激复合物对大黄鱼口服免疫效果的评价

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农业生物技术学报 2024年第9期32卷 2181-2189页

作者：许斌福陈秀霞池洪树李素一郑在予徐梦婷江秋欢郑炜强林能锋福建省农业科学院生物技术研究所福建省水产病害防治工程技术研究中心海水养殖生物育种全国重点实验室/宁德市富发水产有限公司

变形假单胞菌(Pseudomonas plecoglossicida)是大黄鱼(Larimichthys crocea)内脏白点病的主要病原，可导致巨大经济损失。前期研究表明免疫刺激复合物(immune stimulating complexes, ISCOMs)具有较好的口服免疫效果。为了评价口服变形... 详细信息

变形假单胞菌(Pseudomonas plecoglossicida)是大黄鱼(Larimichthys crocea)内脏白点病的主要病原，可导致巨大经济损失。前期研究表明免疫刺激复合物(immune stimulating complexes, ISCOMs)具有较好的口服免疫效果。为了评价口服变形假单胞菌ISCOMs免疫大黄鱼的效果，本研究制备具有笼格状纳米颗粒结构的变形假单胞菌ISCOMs疫苗(Pp-ISCOMs)，检测口服免疫后21 d大黄鱼头肾的各免疫因子的基因表达水平，通过菌体血清凝集方法测定免疫后大黄鱼血清效价，并测定其免疫保护力。结果显示，与灭活变形假单胞菌(Pp)和空白对照(CK)相比，口服免疫Pp-ISCOMs的大黄鱼头肾的髓样分化因子88 (myeloid differentiation factor 88, MyD88)(P<0.05)和白介素2 (interleukin 2, IL-2)(P<0.001)等免疫相关因子表达显著提高；受免21 d的大黄鱼血清凝集效价为2～2；用5.0×10～2 CFU/g剂量的变形假单胞菌腹腔注射攻毒后，Pp-ISCOMs和Pp受免鱼的相对免疫保护率分别为73.3%和40%。研究表明变形假单胞菌ISCOMs口服免疫可提高大黄鱼抗变形假单胞菌感染能力，具有良好的应用前景。本研究为大黄鱼内脏白点病的免疫防控提供了技术支撑。

关键词：变形假单胞菌免疫刺激复合物(ISCOMs) 口服大黄鱼免疫效果

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水稻OsTZF3基因敲除和过量表达载体的构建与遗传转化

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福建农业科技 2019年第3期50卷 1-5页

作者：周淑芬刘华清福建省农业科学院生物技术研究所福建福州350003 福建省农业遗传工程重点实验室福建福州350003

为进一步研究水稻OsTZF3基因的生物学功能,利用日本晴基因组的OsTZF3基因序列,构建了OsTZF3的CRISP/Cas9敲除表达载体pKTZF3和过量表达载体pCXUN-TZF3;并通过农杆菌介导法导入粳稻日本晴胚性愈伤组织中,分别获得了pKTZF3和pCXUN-TZF3转... 详细信息

为进一步研究水稻OsTZF3基因的生物学功能,利用日本晴基因组的OsTZF3基因序列,构建了OsTZF3的CRISP/Cas9敲除表达载体pKTZF3和过量表达载体pCXUN-TZF3;并通过农杆菌介导法导入粳稻日本晴胚性愈伤组织中,分别获得了pKTZF3和pCXUN-TZF3转化再生植株55个和42个克隆;进一步通过PCR法鉴定了35个克隆转pKTZF3植株和10个克隆转pCXUN-TZF3植株。

关键词：水稻基因敲除过量表达遗传转化 OsTZF3

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水稻胚特异表达基因Os08PTS启动子的克隆及分析

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福建农业科技 2021年第3期52卷 6-10页

作者：颜静宛林智敏周淑芬陈子强福建省农业科学院生物技术研究所福建福州350003 福建省农业遗传工程重点实验室福建福州350003

为分析编码磷脂酰肌醇转移蛋白基因Os08PTS在水稻种子发育中的功能及利用Os08PTS启动子进行遗传改良。依据T-DNA插入位点信息,克隆Os08PTS基因启动子,并利用生物信息学手段分析Os08PTS启动子的顺式作用元件特征,同时构建启动子与GUS融... 详细信息

为分析编码磷脂酰肌醇转移蛋白基因Os08PTS在水稻种子发育中的功能及利用Os08PTS启动子进行遗传改良。依据T-DNA插入位点信息,克隆Os08PTS基因启动子,并利用生物信息学手段分析Os08PTS启动子的顺式作用元件特征,同时构建启动子与GUS融合表达载体,通过农杆菌介导法获得转基因植株,验证启动子的表达特征。结果表明:Os08PTS基因启动子片段中包含启动子的基本元件TATA-box和CAAT-box,以及光调控元件、赤霉素应答元件、生长素反应元件、参与防御和应激反应相关元件等多个与生长发育或者逆境胁迫相关的顺式作用元件,还含有与分生组织表达以及胚乳表达相关元件等。进一步构建Os08PTS启动子的GUS融合载体,并获得水稻遗传转化植株。Os08PTS启动子序列能够驱动Os08PTS基因在水稻茎和种子胚的表达,该启动子具有驱动下游基因转录的活性。

关键词：水稻启动子 GUS染色

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农杆菌介导转mgfp4基因水稻的获得

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福建农业学报 2012年第12期27卷 1287-1291页

作者：周淑芬福建省农业科学院生物技术研究所福建福州350003 福建省农业遗传工程重点实验室福建福州350003

通过农杆菌介导法将携带mgfp4基因的植物表达载体pCAGFPHyg导入水稻明恢86中,获得101个独立克隆的转基因植株。PCR检测和Southern blot分析证明外源基因已整合进水稻基因组中,T0代种子的分离分析结果表明大部分转基因植株为单T-DNA插入... 详细信息

通过农杆菌介导法将携带mgfp4基因的植物表达载体pCAGFPHyg导入水稻明恢86中,获得101个独立克隆的转基因植株。PCR检测和Southern blot分析证明外源基因已整合进水稻基因组中,T0代种子的分离分析结果表明大部分转基因植株为单T-DNA插入。荧光检测及RT-PCR分析结果显示mgfp4基因能在水稻中表达,但其发出的绿色荧光检测效果不甚理想。

关键词：水稻绿色荧光蛋白基因农杆菌介导遗传转化

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TALEN介导水稻OsTZF9基因定点突变研究

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福建农业科技 2019年第2期50卷 11-15页

作者：周淑芬施惠芳福建省农业科学院生物技术研究所福建福州350003 福建省农业遗传工程重点实验室福建福州350003

RR-TZF锌指基因在植物生长发育和胁迫反应中起着重要作用。利用TALEN基因组编辑技术定点突变水稻RR-TZF基因OsTZF9,结果表明:根据日本晴基因组中的OsTZF9基因序列,设计3对TALEN靶序列,并构建相应的3个TALEN植物敲除表达载体;通过农杆菌... 详细信息

RR-TZF锌指基因在植物生长发育和胁迫反应中起着重要作用。利用TALEN基因组编辑技术定点突变水稻RR-TZF基因OsTZF9,结果表明:根据日本晴基因组中的OsTZF9基因序列,设计3对TALEN靶序列,并构建相应的3个TALEN植物敲除表达载体;通过农杆菌介导法分别将3个TALEN敲除载体导入水稻明恢86和秀水134的胚性愈伤组织中,获得了100个转化再生植株,PCR检测获得87个阳性植株;PCR扩增转基因植株靶突变区并测序列,发现所有转基因植株均未出现靶突变。

关键词：水稻 OsTZF9基因 TALEN 定点突变

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刺激隐核虫幼虫膜蛋白单克隆抗体的制备与特性分析

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福建农业学报 2017年第5期32卷 469-475页

作者：池洪树刘晓东郑在予龚晖柯巧珍林能锋福建省农业科学院生物技术研究所/福建省水产病害防治工程技术研究中心福建福州350003 大黄鱼育种国家重点实验室福建宁德352100

为获得刺激隐核虫幼虫膜蛋白单克隆抗体并初步分析单抗特性,提取刺激隐核虫幼虫膜蛋白,免疫Balb/c小鼠,取脾细胞与SP2/O细胞融合,以间接ELISA筛选阳性杂交瘤细胞。通过ELISA方法检测单克隆抗体的亚类及效价;通过SDS-PAGE和western blot... 详细信息

为获得刺激隐核虫幼虫膜蛋白单克隆抗体并初步分析单抗特性,提取刺激隐核虫幼虫膜蛋白,免疫Balb/c小鼠,取脾细胞与SP2/O细胞融合,以间接ELISA筛选阳性杂交瘤细胞。通过ELISA方法检测单克隆抗体的亚类及效价;通过SDS-PAGE和western blot分析单抗特异性结合的蛋白,并以串联质谱方法对所识别条带进行鉴定;采用免疫荧光法分析单抗的抗原结合位点和特异性。结果得到3株能稳定分泌刺激隐核虫幼虫膜蛋白抗体的细胞株(5D11AG5、5H9BG3、6E11CE7)。这3株细胞株产生的抗体亚型均为IgM,ELISA效价分别为1∶3200、1∶25600、1∶51200。单抗5D11AG5和单抗5H9BG3株能够识别~35kDa的刺激隐核虫幼虫膜蛋白线性抗原表位,单抗5D11AG5所识别的蛋白与数据库中刺激隐核虫表面抗原蛋白、嗜热四膜虫微管蛋白(tubulin)的肽段具有较高覆盖率。免疫荧光结果显示单抗5D11AG5和单抗5H9DG3识别部位主要在虫体表面近胞口的前端,而单抗6E11CE7识别虫体表面外膜。刺激隐核虫幼虫膜蛋白单克隆抗体的制备,为刺激隐核虫功能性蛋白的筛选、纯化和功能分析提供了条件。

关键词：刺激隐核虫幼虫膜蛋白单克隆抗体白点病

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检测水禽源细小病毒的胶体金试纸条的研制

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中国预防兽医学报 2017年第9期39卷 722-726页

作者：程龙飞张长弓傅秋玲何琼贾志娟陈慧敏傅光华万春和林群群刘荣昌黄瑜福建省农业科学院畜牧兽医研究所福建省畜禽疫病防治工程技术研究中心/福建省禽病防治重点实验室福建福州350013 厦门市波生生物技术有限公司福建厦门360121

为建立水禽源细小病毒的快速检测方法,本研究采用纯化的小鹅瘟病毒(GPV)免疫BALB/c小鼠,取免疫小鼠脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞进行融合,筛选到21株能够稳定分泌抗GPV的单克隆抗体(MAb),将1株MAb纯化后与胶体金结合,喷涂金标垫,与另一株纯... 详细信息

为建立水禽源细小病毒的快速检测方法,本研究采用纯化的小鹅瘟病毒(GPV)免疫BALB/c小鼠,取免疫小鼠脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞进行融合,筛选到21株能够稳定分泌抗GPV的单克隆抗体(MAb),将1株MAb纯化后与胶体金结合,喷涂金标垫,与另一株纯化的MAb配对,制成检测水禽源细小病毒的胶体金试纸条。特异性试验表明,鹅细小病毒、番鸭细小病毒和新型番鸭细小病毒的检测结果均为阳性,猪细小病毒、1型鸭甲肝病毒、坦布苏病毒、产蛋下降综合征病毒、H9N2亚型禽流感病毒、番鸭呼肠孤病毒和新城疫病毒等的检测结果均为阴性。该方法对鹅细小病毒、番鸭细小病毒和新型番鸭细小病毒的最低检出量分别为10^(4.7) ELD50/mL、10^(4.7)ELD50/mL和10^(5.7) ELD50/mL。重复性试验良好。对临床粪便样品的检测,该方法比PCR方法简单快速,但是存在漏检的情况。上述结果表明,本实验建立的方法可用于水禽源细小病毒病的初步快速筛查。

关键词：鹅细小病毒番鸭细小病毒新型番鸭细小病毒胶体金试纸条单克隆抗体

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基于正向遗传学策略解析水稻免疫相关性状分子机制

基于正向遗传学策略解析水稻免疫相关性状分子机制

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第三届“模式生物与人类健康”发育遗传学全国学术研讨会

作者：陈松彪福建省农业科学院生物技术研究所福建省农业遗传工程重点实验室

水稻抗病分子基础及其信号通路与拟南芥等双子叶模式植物的抗病分子途径相比有很大差异。许多拟南芥抗病通路中关键节点的同源蛋白在水稻中对抗病途径的影响并未象其在拟南芥中的影响那么显著。为了深入研究水稻抗病分子机制,本研究综... 详细信息

水稻抗病分子基础及其信号通路与拟南芥等双子叶模式植物的抗病分子途径相比有很大差异。许多拟南芥抗病通路中关键节点的同源蛋白在水稻中对抗病途径的影响并未象其在拟南芥中的影响那么显著。为了深入研究水稻抗病分子机制,本研究综合利用组培诱变、T-DNA插入、EMS诱变、辐射诱变等策略,大规模创制涉及水稻免疫相关性状的突变体,并结合高通量全基因组测序,建立高效图位克隆体系,对控制水稻免疫相关性状的遗传位点进行解析。基于正向遗传学策略,已鉴定了系列调控水稻PCD及抗病应答、以及基础抗性的关键节点基因,

关键词：相关性状拟南芥策略解析分子机制

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