检索结果-内蒙古大学图书馆

微生物学通报 2025年第2期52卷 749-756页

作者：徐鑫游广炬郑欣程晓霞王劭曾丽肖世峰郑敏陈少莺陈仕龙福建省农业科学院畜牧兽医研究所福建福州350013 福建农林大学动物科学学院福建福州350002 福建省畜禽疫病防治工程技术研究中心福建福州350013

【背景】我们前期将新型鸭呼肠孤病毒(novel duck reovirus,NDRV)强毒株NP03在番鸭胚成纤维细胞(muscovy duck embryo fibroblast,MDEF)上进行传代,选育出NDRV弱毒株S,将强弱毒株p18蛋白进行比对发现弱毒p18蛋白C端缺失35个氨基酸。【... 详细信息

【背景】我们前期将新型鸭呼肠孤病毒(novel duck reovirus,NDRV)强毒株NP03在番鸭胚成纤维细胞(muscovy duck embryo fibroblast,MDEF)上进行传代,选育出NDRV弱毒株S,将强弱毒株p18蛋白进行比对发现弱毒p18蛋白C端缺失35个氨基酸。【目的】制备p18蛋白的多克隆抗体并鉴定NDRV强弱毒株p18蛋白的差异。【方法】采用RT-PCR方法扩增NDRV强弱毒株p18基因编码序列,克隆至原核表达载体pET-28a中诱导表达,用镍柱纯化目的蛋白,通过SDS-PAGE和Western Blot对纯化蛋白进行鉴定。进一步用纯化的蛋白免疫小鼠制备p18蛋白多克隆抗体,通过间接ELISA、Western Blot和间接免疫荧光试验(indirect immunofluorescence assay,IFA)对制备的多克隆抗体进行检测鉴定NDRV强弱毒株。【结果】对目的蛋白进行SDS-PAGE和Western Blot鉴定结果表明,分别获得了NDRV强弱毒株p18重组蛋白。对多克隆抗体进行间接ELISA检测,效价达1:51200。Western Blot鉴定显示,制备的p18蛋白多克隆抗体能特异性检测NDRV强、弱毒株感染细胞后表达的p18蛋白,结果表明,强、弱毒株p18蛋白的分子量有明显差异,分别约为18 kDa和14 kDa。IFA结果表明,制备的p18蛋白多克隆抗体可以特异性识别NDRV强、弱毒复制时表达的p18蛋白。【结论】本研究制备的p18蛋白多克隆抗体可用于NDRV强弱毒株p18蛋白检测,并发现NDRV强、弱毒株p18蛋白存在明显差异,为深入研究NDRV p18蛋白生物学功能及致病机理奠定了基础。

关键词：新型鸭呼肠孤病毒 p18蛋白多克隆抗体毒力

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一例波斯猫泛白细胞减少症的诊疗

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福建畜牧兽医 2025年第1期47卷 76-78页

作者：刘玉涛连春红福建省农业科学院畜牧兽医研究所/福建省畜禽疫病防治工程技术研究中心福州350013

临床接诊1只3月龄、体重2.2 kg因发烧、呕吐等前来就诊的波斯猫。经血常规、猫泛白细胞减少症抗原测试纸、血液生化等方法检查,确诊为猫泛白细胞减少症。通过采取抗病毒、抗菌消炎、对症治疗和补充体液后,抗原测试纸检测结果为阴性,机... 详细信息

临床接诊1只3月龄、体重2.2 kg因发烧、呕吐等前来就诊的波斯猫。经血常规、猫泛白细胞减少症抗原测试纸、血液生化等方法检查,确诊为猫泛白细胞减少症。通过采取抗病毒、抗菌消炎、对症治疗和补充体液后,抗原测试纸检测结果为阴性,机体各项指标恢复正常,波斯猫预后良好。

关键词：猫泛白细胞减少症诊断治疗

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猪捷申病毒荧光RT-RAA检测方法的建立及应用

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动物医学进展 2025年第3期46卷 130-133页

作者：孙志华林青康龙滨王隆柏周伦江俞道进陈秋勇福建农林大学动物科学学院中西兽医结合与动物保健福建省高校重点实验室福建福州350002 福建省农业科学院畜牧兽医研究所/福建省畜禽疫病防治工程技术研究中心福建福州350013

为快速检测猪捷申病毒(PTV),根据PTV 5′UTR基因保守序列设计特异性引物和探针,优化荧光逆转录重组酶介导等温扩增(RT-RAA)反应条件和体系,并通过特异性、敏感性、重复性试验和临床应用对RT-RAA进行评价。结果表明,在37℃恒温反应22 mi... 详细信息

为快速检测猪捷申病毒(PTV),根据PTV 5′UTR基因保守序列设计特异性引物和探针,优化荧光逆转录重组酶介导等温扩增(RT-RAA)反应条件和体系,并通过特异性、敏感性、重复性试验和临床应用对RT-RAA进行评价。结果表明,在37℃恒温反应22 min即可完成对PTV核酸扩增,最低检出限度为30.1 copies/μL;与猪流行性腹泻病毒(PEDV)、猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)、猪轮状病毒(PoRV)、猪德尔塔冠状病毒(PDCoV)均无交叉反应;重复性试验显示,组内和组间变异系数均小于5%;23份临床样品检测显示PTV阳性率为21.74%(5/23),检测结果与RT-qPCR一致。说明建立的PTV荧光RT-RAA检测方法具有简便、高效、稳定等优点,为PTV的快速检测和流行病学调查提供了技术手段。

关键词：猪捷申病毒荧光逆转录重组酶介导等温扩增检测方法

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新型鸭呼肠孤病毒的分离与鉴定

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病毒学报 2012年第3期28卷 224-230页

作者：陈少莺陈仕龙林锋强王劭江斌程晓霞朱小丽李兆龙福建省农业科学院畜牧兽医研究所福州350013 福建省畜禽疫病防治工程技术研究中心福州350013

本研究从临床表现为出血性坏死性肝炎的病死鸭肝脾中分离到病毒。病原特性鉴定显示,分离毒能致死番鸭胚和鸡胚;人工感染1日龄雏番鸭、雏半番鸭均能复制出与临床自然发病鸭相同的临床症状和病理变化,并能回收到病毒。分离毒能在MDEF等多... 详细信息

本研究从临床表现为出血性坏死性肝炎的病死鸭肝脾中分离到病毒。病原特性鉴定显示,分离毒能致死番鸭胚和鸡胚;人工感染1日龄雏番鸭、雏半番鸭均能复制出与临床自然发病鸭相同的临床症状和病理变化,并能回收到病毒。分离毒能在MDEF等多种细胞中增殖并产生细胞病变。电镜下病毒在细胞浆中呈大量散在、成堆和晶格状排列,病毒粒子呈球形、无囊膜、双层衣壳、直径70nm左右。在SDS-PAGE中具有禽呼肠孤病毒10个RNA片段的特征,但M1-3和S1-4片段的迁移率明显不同于番鸭呼肠孤病毒(MDRV)。分离毒S3基因全序列与禽呼肠孤病毒(ARV)、火鸡呼肠孤病毒(TRV)和MDRV的核苷酸同源性分别为60%～60.2%,61.9%,62.3%～62.7%,氨基酸同源性分别为68.2%～69%,68.2%,69.3%～70.1%;S3基因编码的σB蛋白属于单独的进化分支,提示分离毒S3基因具有不同于ARV和MDRV的特征。结果表明鸭出血性坏死性肝炎的病原是一种属于呼肠孤病毒科正呼肠孤病毒属新型鸭呼肠孤病毒。

关键词：鸭新型鸭呼肠孤病毒出血性坏死性肝炎分离鉴定

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番鸭源小鹅瘟病毒PT株VP基因的克隆与序列分析

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农业生物技术学报 2012年第1期20卷 79-84页

作者：王劭朱小丽林锋强程晓霞陈仕龙李兆龙陈少莺福建省农业科学院畜牧兽医研究所福建省畜禽疫病防治工程技术研究中心

为了获得番鸭(Cairina moschata)源小鹅瘟病毒(Goose parvovirus,GPV)结构蛋白VP基因的相关信息,根据国内外已发表鹅源GPV与番鸭细小病毒(Muscovy duck parvovirus,MDPV)全基因序列,应用DNAStar分子生物学软件设计一对引物,应用高保真PC... 详细信息

为了获得番鸭(Cairina moschata)源小鹅瘟病毒(Goose parvovirus,GPV)结构蛋白VP基因的相关信息,根据国内外已发表鹅源GPV与番鸭细小病毒(Muscovy duck parvovirus,MDPV)全基因序列,应用DNAStar分子生物学软件设计一对引物,应用高保真PCR技术扩增番鸭源小鹅瘟病毒PT株(GPVPT株)VP全基因序列。将扩增得到的VP全基因克隆到pMD18-T载体上,获得的重组质粒经PCR鉴定后进行序列测定。结果表明,PT株VP全基因大小为2199bp,编码732个氨基酸(GenBank登录号:JF926695),与番鸭源小鹅瘟病毒GPVDY株核苷酸及其推导氨基酸同源性分别为98.8%和98.8%,高于鹅源GPV与MDPV参考毒株。在国内外首次发现番鸭源GPVVP基因VP1独特区具有MDPV核苷酸序列特征,而VP2基因具有鹅源GPV核苷酸序列特征。本研究从番鸭源GPVPT株成功克隆到结构蛋白全基因序列,为深入研究番鸭源GPV的起源及水禽细小病毒遗传衍化提供参考。

关键词：番鸭源小鹅瘟病毒(GPV) VP基因克隆序列分析

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新型鸭呼肠孤病毒NP03株S3基因序列分析

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农业生物技术学报 2010年第3期18卷 567-572页

作者：王劭陈少莺陈仕龙朱小丽林锋强江斌程晓霞张世忠李兆龙福建省农业科学院畜牧兽医研究所福建省畜禽疫病防治工程技术研究中心

根据GenBank禽呼肠孤病毒(ARV)和番鸭呼肠孤病毒(MDRV)S3基因序列设计合成1对引物,特异性扩增新型鸭呼肠孤病毒NP03株的S3基因,并对其序列进行分析。结果克隆获得NP03株S3cDNA包含完整的阅读框架,同源性分析NP03分离株S3基因核苷酸序列... 详细信息

根据GenBank禽呼肠孤病毒(ARV)和番鸭呼肠孤病毒(MDRV)S3基因序列设计合成1对引物,特异性扩增新型鸭呼肠孤病毒NP03株的S3基因,并对其序列进行分析。结果克隆获得NP03株S3cDNA包含完整的阅读框架,同源性分析NP03分离株S3基因核苷酸序列与ARV、火鸡呼肠孤病毒(TRV)和MDRV的同源性分别为60%～60.2%、61.9%和58.2%～62.7%,氨基酸的同源性分别为68.2%～69%、68.2%和63%～70.4%。表明NP03株的S3基因具有不同于ARV和MDRV的特征,分离毒NP03是一株新型鸭呼肠孤病毒。

关键词：新型鸭呼肠孤病毒 S3基因序列分析

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副猪嗜血杆菌神经氨酸酶的克隆测序与生物信息学分析

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中国兽医学报 2013年第9期33卷 1339-1344页

作者：车勇良陈如敬王隆柏江斌吴学敏刘玉涛庄向生周伦江福建省农业科学院畜牧兽医研究所/福建省畜禽疫病防治工程技术研究中心福建福州350013

对副猪嗜血杆菌神经氨酸酶基因进行PCR扩增、克隆和测序,并进行同源性比较。应用生物信息学方法,对副猪嗜血杆菌神经氨酸酶的二级结构和B细胞抗原表位进行预测。结果显示,副猪嗜血杆菌神经氨酸酶基因全长2 007bp,编码668个氨基酸,同源... 详细信息

对副猪嗜血杆菌神经氨酸酶基因进行PCR扩增、克隆和测序,并进行同源性比较。应用生物信息学方法,对副猪嗜血杆菌神经氨酸酶的二级结构和B细胞抗原表位进行预测。结果显示,副猪嗜血杆菌神经氨酸酶基因全长2 007bp,编码668个氨基酸,同源性分析显示所测5株不同血清型的副猪嗜血杆菌神经氨酸酶基因相似度在98%以上,对应氨基酸相似度在97%以上。二级结构的预测结果显示该酶主要以无规则卷曲、α螺旋和延伸链为主,只有少数的β转角;推测该酶有16个B细胞优势抗原表位区域、8个糖基化位点。该研究为进一步分析副猪嗜血杆菌免疫机理、表位疫苗设计等奠定理论基础。

关键词：副猪嗜血杆菌神经氨酸酶二级结构 B细胞抗原表位预测

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伪狂犬病病毒变异株gC抗体间接ELISA检测方法的建立及初步应用

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畜牧兽医学报 2022年第6期53卷 2029-2034页

作者：吴学敏陈如敬陈秋勇车勇良严山刘玉涛周伦江王隆柏福建省农业科学院畜牧兽医研究所/福建省畜禽疫病防治工程技术研究中心福州350013

本研究旨在建立变异伪狂犬病病毒FJ-2012株gC蛋白抗体间接ELISA检测方法,掌握不同猪场猪群的gC抗体水平情况。将FJ-2012株gC基因连接至pCzn1载体,转染至Arctic express(DE3)感受态细胞,IPTG诱导表达产物经SDS-PAGE和Western blot验证,... 详细信息

本研究旨在建立变异伪狂犬病病毒FJ-2012株gC蛋白抗体间接ELISA检测方法,掌握不同猪场猪群的gC抗体水平情况。将FJ-2012株gC基因连接至pCzn1载体,转染至Arctic express(DE3)感受态细胞,IPTG诱导表达产物经SDS-PAGE和Western blot验证,通过矩阵法试验、临界值的确定、特异性试验、重复性和敏感性试验,建立PRV-gC抗体间接ELISA检测方法,并对源于不同猪场的280份血清进行PRV-gC抗体检测。结果表明,成功表达获得FJ-2012株pCzn1-gC重组蛋白;建立的间接ELISA方法的最佳抗原包被浓度为10μg·mL^(-1)和最佳样品血清稀释比例为1∶50,阴性和阳性判定的OD_(650 nm)临界值为0.406~0.438,介于之间的判定为可疑;临床检测结果显示,120份盲样猪血清PRV-gC抗体阳性率为91.67%、PRV-gB抗体阳性率为95.00%,两种抗体检测结果的整体符合率为95.83%;PR不稳定的猪场血样PRV-gC抗体阳性率为96.25%(77/80),而PRV已净化的种猪场血样PRV-gC抗体阳性率为78.75%(63/80)。因此,建立的PRV变异株gC抗体间接ELISA检测方法为临床猪血清抗体检测提供了特异、灵敏和稳定的技术,也为开展变异PRV血清学调查奠定基础。

关键词：伪狂犬病病毒 gC蛋白酶联免疫吸附试验

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变异猪流行性腹泻病毒M和N融合双基因的原核表达及表达产物免疫原性分析

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畜牧兽医学报 2018年第6期49卷 1249-1255页

作者：王隆柏王晨燕吴学敏陈秋勇车勇良陈如敬周伦江福建省农业科学院畜牧兽医研究所/福建省畜禽疫病防治工程技术研究中心福州350013

旨在构建变异猪流行性腹泻病毒(PEDV)的M和N双基因融合质粒,并分析表达蛋白免疫原性。通过扩增变异PEDV FJFQ2014毒株(GenBank登陆号KJ646580)的M基因和N基因,将M基因克隆至pEASY-Blunt E2(pE2)表达载体,构建出pE2-M质粒。利用同源重组... 详细信息

旨在构建变异猪流行性腹泻病毒(PEDV)的M和N双基因融合质粒,并分析表达蛋白免疫原性。通过扩增变异PEDV FJFQ2014毒株(GenBank登陆号KJ646580)的M基因和N基因,将M基因克隆至pEASY-Blunt E2(pE2)表达载体,构建出pE2-M质粒。利用同源重组原理,采用无缝拼接试剂盒将N基因克隆至E2-M片段,转化到Trans 1-T1感受态细胞中,构建出pE2-M-N融合双基因质粒并转化Transetta(DE3),表达出相应的融合蛋白,采用SDS-PAGE和Western blot验证蛋白的表达情况。将纯化的M-N融合蛋白皮下接种BLAB/c小鼠,通过ELISA方法检测融合蛋白的免疫原性。结果表明:扩增出M和N基因,成功构建了pE2-M质粒,并将E2-M基因与N基因进行有效连接,构建出pE2-M-N融合双基因质粒,表达出了具有免疫原性的M-N融合蛋白,该蛋白能够诱导小鼠产生相应的特异性抗体。变异PEDV的pE2-M-N双基因融合质粒的构建,为进一步开展变异PEDV的诊断技术和免疫学等研究,奠定良好基础。

关键词：猪流行性腹泻病毒 PEDV M基因 N基因双基因表达

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毒素-抗毒素系统在细菌生物被膜形成中的作用及调控机制

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畜牧兽医学报 2022年第10期53卷 3326-3334页

作者：侯博王晨燕周伦江福建省农业科学院畜牧兽医研究所/福建省畜禽疫病防治工程技术研究中心福州350013

毒素-抗毒素(toxin-antitoxin,T-A)系统广泛存在于细菌基因组和质粒中,调控细菌的多种生理活动。细菌生物被膜是细菌适应应激环境(不利环境)而采取的一种生存策略,其具有极强的耐药性及免疫逃逸性,广泛存在于自然界,具有广泛的危害性,... 详细信息

毒素-抗毒素(toxin-antitoxin,T-A)系统广泛存在于细菌基因组和质粒中,调控细菌的多种生理活动。细菌生物被膜是细菌适应应激环境(不利环境)而采取的一种生存策略,其具有极强的耐药性及免疫逃逸性,广泛存在于自然界,具有广泛的危害性,严重威胁畜禽和人类的健康。本文对不同类型的T-A系统在细菌生物被膜形成中的作用和分子机制进行综述,旨在为更好地了解和掌握细菌T-A系统在生物被膜形成中的作用和调控关系,为生物被膜的清除和控制奠定基础。

关键词：生物被膜毒素-抗毒素系统细菌

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