检索结果-内蒙古大学图书馆

作者：陈红梅程龙飞刘荣昌傅光华施少华万春和傅秋玲黄瑜福建省农业科学院畜牧兽医研究所福建省畜禽疫病防治工程技术研究中心/福建省禽病防治重点实验室福建福州350013

近年来,多种细菌的质粒因携带cfr基因而表现对氟苯尼考和氯霉素耐药,该基因在世界多个国家流行.cfr基因也在人源、动物源、环境中分离的不同种属的细菌中被发现.该基因编码了一个甲基转移酶,它能在23SrRNA上修改2503位置的腺嘌呤残留物...

近年来,多种细菌的质粒因携带cfr基因而表现对氟苯尼考和氯霉素耐药,该基因在世界多个国家流行.cfr基因也在人源、动物源、环境中分离的不同种属的细菌中被发现.该基因编码了一个甲基转移酶,它能在23SrRNA上修改2503位置的腺嘌呤残留物,并对6种不同种类的抗生素产生耐药性,这些抗生素都结合了肽转移酶中心.自2000年第一次在牛源葡萄球菌中分离以来,cfr基因在人类和动物的临床分离中引起了全球的关注.多重耐药基因cfr广泛存在于革兰氏阳性菌中,但仅存在于两种革兰氏阴性菌中,包括大肠杆菌和普通变形杆菌.然而,未见cfr基因在禽源多杀性巴氏杆菌中发现的报道.为此,我们调查禽源多杀性巴氏杆菌中cfr耐药基因及cfr基因的遗传环境.菌株取自2003年至2016年在福建、广东和江西等地,从患病的禽类(鸡、鸭和鹅)中获得的113株禽源多杀性巴氏杆菌.通过PCR法对113株细菌进行cfr基因的扩增,使用多重PCR法测定cfr阳性菌株的荚膜型和LPS基因型,运用多位点序列分型分析(fr阳性菌株的序列型,采用引物步移法测定cfr基因的侧翼序列.结果显示,在113株禽源多杀性巴氏杆菌中,分离自番鸭的两株菌株中含有cfr基因,它们均属于荚膜A型,L1(Hl,H14)基因型,以及ST-129序列型,并呈现多重耐药的表型.两株菌所携带的cfr的基因环境是完全不同的,其中一个基因环境为(△ISApll-cfr-△IS26-△ISApll),另一个基因环境是(△IS26-cfr-△IS256),推断IS26和IS256可能在传播cfr方面发挥重要作用.这是我们首次在禽源多杀性巴氏杆菌中发现携带cfr基因的报道.此外,利用反向PCR证明了cfr基因所在的基因盒并不稳定,可以通过ISApll与IS26以及IS256与ISApll的同源重组将两者中间的序列转移出质粒形成环状中间体,从而介导cfr基因的水平转移.这表明插入序列ISApll与IS26以及IS256与ISApll的转座在介导cfr基因及其周围序列在同一菌株内或不同菌种间的水平转移中起重要作用.因此,为了减少cfr基因的传播,需要合理使用氟苯尼考等抗生素治疗,避免潜在的公共健康风险.

关键词：

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鸭圆环病毒感染对雏番鸭致病性研究

鸭圆环病毒感染对雏番鸭致病性研究

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福建省畜牧兽医学会第十二届理事会第三次会议暨福建省畜牧兽医学术年会

作者：傅光华李兆龙施少华程龙飞万春和刘荣昌陈红梅傅秋玲黄瑜福建省农业科学院畜牧兽医研究所福建省禽病防治重点实验室福建省畜禽疫病防治工程技术研究中心福州350013

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种公鸡精液在坦布苏病毒感染传播中的作用

种公鸡精液在坦布苏病毒感染传播中的作用

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福建省畜牧兽医学会第十二届理事会第三次会议暨福建省畜牧兽医学术年会

作者：陈珍施少华刘荣昌蔡国漳傅光华陈翠腾朱春华刘斌琼黄瑜福建省农业科学院畜牧兽医研究所/福建省畜禽疫病防治工程技术研究中心/福建省禽病防治重点实验室福州350013

利用建立的(RT-)PCR方法对35份表现产蛋下降、受精率低下的种母鸡卵巢组织和140份用于人工授精种公鸡的精液进行病毒感染检测及细菌分离.结果仅检出坦布苏病毒阳性,其阳性率分别为100.0％和57.8％;以建立的间接ELISA方法对该种鸡群的32...

利用建立的(RT-)PCR方法对35份表现产蛋下降、受精率低下的种母鸡卵巢组织和140份用于人工授精种公鸡的精液进行病毒感染检测及细菌分离.结果仅检出坦布苏病毒阳性,其阳性率分别为100.0％和57.8％;以建立的间接ELISA方法对该种鸡群的320份种母鸡血清和140份种公鸡血清检测坦布苏病毒抗体,其阳性率分别为100.0％和69.3％.以上结果表明,该种鸡群的种母鸡和种公鸡均感染坦布苏病毒.以自精液中分离的坦布苏病毒人工感染成年公鸡,5 d后在其精液中检测到坦布苏病毒,第14天在其血清中检测到坦布苏病毒抗体;以检测为坦布苏病毒阳性的精液通过人工授精给开产蛋鸡后出现产蛋率下降,并在其卵巢和血清中分别检测到坦布苏病毒及其特异性抗体.可见,种公鸡也可感染坦布苏病毒,且可通过精液以人工授精方式水平传播给开产蛋鸡并造成产蛋下降.因此,应加强种公鸡坦布苏病毒感染的监测,并将其纳入种鸡场垂直传播疫病控制与净化计划中.

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鹅多瘤病毒VP1基因的克隆及EvaGreen实时荧光定量PCR方法的建立

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中国兽医学报 2018年第12期38卷 2289-2295页

作者：万春和刘荣昌程龙飞施少华傅光华陈红梅傅秋玲陈翠腾黄瑜福建省农业科学院畜牧兽医研究所福建省畜禽疫病防治工程技术研究中心/福建省禽病防治重点实验室

针对鹅多瘤病毒(goose hemorrhagic polyomavirus,GHPV)VP1基因核苷酸序列设计并合成1对特异性引物,从1株樱桃谷鸭源GHPV(命名为FJ201601株)扩增获得VP1基因核苷酸序列全长,并进行核苷酸同源性比较和遗传进化分析,明确其VP1基因分子特... 详细信息

针对鹅多瘤病毒(goose hemorrhagic polyomavirus,GHPV)VP1基因核苷酸序列设计并合成1对特异性引物,从1株樱桃谷鸭源GHPV(命名为FJ201601株)扩增获得VP1基因核苷酸序列全长,并进行核苷酸同源性比较和遗传进化分析,明确其VP1基因分子特征。基于GHPV各分离株VP1基因特点,设计特异性的实时荧光定量PCR引物,建立基于EvaGreen实时荧光定量PCR检测GHPV方法。结果显示,克隆的FJ201601株VP1基因全长为1 062bp,与GHPV各参考分离株核苷酸同源性为99.7%~100.0%;在遗传进化上可将GHPV分为2个大的遗传进化分支(Clade 1和Clade 2),FJ201601株属于Clade 2分支。建立的EvaGreen检测GHPV实时荧光定量PCR检测方法,其标准曲线方程y轴截距为39.12,斜率为-3.489,扩增相关系数为0.996,扩增效率为99.7%;敏感性强,最低检测限为88.0拷贝/μL;特异性好,扩增产物的溶解曲线分析只出现单一的特异峰,Tm值为(82.18±0.22)℃,无引物二聚体,对水禽常见病原检测均为阴性;重复性好,组内变异系数和组间变异系数分别为0.62%~1.76%和0.92%~2.44%。用建立的检测方法对80份多品种生长不良鸭进行检测发现4份阳性(樱桃谷鸭2份、麻鸭2份),阳性率为5%(4/80)。本研究证实麻鸭中存在GHPV感染,为丰富GHPV感染宿主谱和开展GHPV感染流行病学调查和致病机理研究提供检测手段。

关键词：鹅多瘤病毒 VP1基因 EvaGreen实时荧光定量PCR方法樱桃谷鸭麻鸭

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多重基因重组型HH9N2亚型AIV福建分离株全基因组的分子特征

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中国家禽 2018年第5期40卷 17-23页

作者：陈翠腾万春和傅光华陈珍朱春华黄瑜福建省农业科学院畜牧兽医研究所、福建省禽病防治重点实验室、福建省畜禽疫病防治工程技术研究中心福建福州350013

为从分子水平上了解福建省活禽市场H9N2亚型禽流感病毒的遗传演化情况及其与其他亚型禽流感病毒之间的遗传进化关系,对2015年分离自福州市某活禽市场的一株鸡源H9N2亚型禽流感病毒A/chicken/Fujian/05/2015(H9N2)进行了全基因组扩增、... 详细信息

为从分子水平上了解福建省活禽市场H9N2亚型禽流感病毒的遗传演化情况及其与其他亚型禽流感病毒之间的遗传进化关系,对2015年分离自福州市某活禽市场的一株鸡源H9N2亚型禽流感病毒A/chicken/Fujian/05/2015(H9N2)进行了全基因组扩增、克隆、测序,并对所获得的全序列与参考株进行了8个基因片段的同源性比较和遗传进化分析。结果显示:该分离株的HA基因与鸡源病毒A/chicken/Zhejiang/SIC40/2015(H9N2)的核苷酸同源性最高,裂解位点处氨基酸序列为-PSRSSR↓GLF-,符合低致病性裂解位点序列特征,其226位氨基酸为L,具有与哺乳动物唾液酸α,2~6受体结合的特性;NA基因颈部63、64和65位点氨基酸有缺失,与鸡源病毒A/chicken/Zhejiang/SIC32/2014(H9N2)的核苷酸同源性最高;M2基因的31位氨基酸为N,表明该病毒已经对金刚烷胺类药物产生耐药性;分离株的基因组由3个亚系的基因重组产生,其中HA和NA基因来源于BJ/94亚系,PB2和M基因来源于G1亚系,PB1、PA、NP和NS基因来源于F98亚系;该分离株的6个内部基因PB2、PB1、PA、NP、M、NS与H7N9、H10N8、H5N6亚型禽流感病毒的内部基因存在复杂的交叉重组现象。因此需加强对H9N2亚型禽流感病毒的流行病学监测。

关键词： H9N2亚型禽流感病毒遗传进化分析基因重组

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鸭瘟病毒TaqMan实时荧光定量PCR方法的建立

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福建农林大学学报（自然科学版） 2018年第6期47卷 722-728页

作者：万春和刘荣昌陈翠腾程龙飞施少华傅光华陈红梅傅秋玲黄瑜福建省农业科学院畜牧兽医研究所/福建省畜禽疫病防治工程技术研究中心/福建省禽病防治重点实验室福建福州350013

根据鸭瘟病毒(DEV) gE基因的特征,设计特异性引物和探针,经条件优化后,建立检测DEV的TaqMan实时荧光定量PCR方法.结果表明:当gE基因含量为1.0×10~1～1.0×10~6拷贝·μL^(-1)时,建立的实时荧光定量PCR检测方法有良好的线... 详细信息

根据鸭瘟病毒(DEV) gE基因的特征,设计特异性引物和探针,经条件优化后,建立检测DEV的TaqMan实时荧光定量PCR方法.结果表明:当gE基因含量为1.0×10~1～1.0×10~6拷贝·μL^(-1)时,建立的实时荧光定量PCR检测方法有良好的线性扩增,其标准曲线方程为:y=-3.480x+37.955,扩增相关系数为0.999;敏感性强,最低检测限为10拷贝·μL^(-1);特异性好,仅对DEV强毒株和弱毒活疫苗株检测到阳性扩增信号,对鸭源其他传染病病原(番鸭细小病毒、鹅细小病毒、鸭腺病毒A型、鸭甲肝病毒1型、鸭甲肝病毒3型、番鸭呼肠孤病毒、新型鸭呼肠孤病毒、H9N2亚型禽流感病毒、禽1型副粘病毒、鸭源大肠杆菌、鸭疫里默氏杆菌、鸭源禽多杀性巴氏杆菌)检测均为阴性;重复性好,组内变异系数和组间变异系数分别为0.62%～1.14%和0.69%～2.40%.对临床送检疑似DEV感染的14份样品进行检测,并与常规PCR方法、病毒分离鉴定进行比较,阳性率分别为85.71%(12/14)、71.43%(10/14)和57.14%(8/14);且与常规PCR方法、病毒分离鉴定的阳性符合率均为100%.本试验建立的TaqMan实时荧光定量PCR方法,可用于开发DEV快速诊断试剂盒,用于开展DEV流行病学调查.

关键词：鸭瘟病毒 gE基因 TaqMan探针实时荧光定量PCR方法

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鸭肠炎病毒强毒和疫苗弱毒鉴别诊断PCR方法的建立

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福建农业学报 2018年第3期33卷 219-224页

作者：万春和刘荣昌陈翠腾程龙飞傅光华施少华陈红梅傅秋玲黄瑜福建省农业科学院畜牧兽医研究所/福建省畜禽疫病防治工程技术研究中心/福建省禽病防治重点实验室福建福州350013

为建立鸭肠炎病毒(duck enteritis virus,DEV)强毒和疫苗弱毒的鉴别诊断方法,通过分析比较GenBank数据库中上传的DEV强毒株和疫苗弱毒株UL2基因核苷酸序列,分析DEV疫苗弱毒和DEV强毒在UL2基因上的核苷酸序列,利用引物设计软件Oligo 7.0... 详细信息

为建立鸭肠炎病毒(duck enteritis virus,DEV)强毒和疫苗弱毒的鉴别诊断方法,通过分析比较GenBank数据库中上传的DEV强毒株和疫苗弱毒株UL2基因核苷酸序列,分析DEV疫苗弱毒和DEV强毒在UL2基因上的核苷酸序列,利用引物设计软件Oligo 7.0,设计一组可对DEV强毒株和疫苗弱毒株UL2基因进行编码区全长扩增的特异性引物,经条件优化后建立DEV强毒和疫苗弱毒鉴别诊断的PCR方法。结果表明,DEV疫苗弱毒和DEV强毒在UL2基因上存在528bp的连续核苷酸序列缺失。优化后的PCR方法最佳退火温度为55℃,对DEV强毒和疫苗弱毒扩增片段大小分别为1 019bp和491bp;敏感性强,最低检测限为15.3pg;特异性好,对鸭源常见传染病(如番鸭细小病毒、鸭圆环病毒、鹅细小病毒、鸭源大肠杆菌、鸭疫里默氏杆菌和鸭源禽多杀性巴氏杆菌)均无特异性扩增。

关键词：鸭肠炎病毒强毒疫苗弱毒 UL2基因 PCR 鉴别诊断

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鹦鹉幼雏病病毒福建株VP1基因的克隆及序列分析

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中国畜牧兽医 2018年第6期45卷 1661-1667页

作者：万春和程龙飞傅光华施少华陈红梅傅秋玲刘荣昌林建生黄瑜福建省农业科学院畜牧兽医研究所福建省畜禽疫病防治工程技术研究中心福建省禽病防治重点实验室福州350013

为明确虎皮鹦鹉源鹦鹉幼雏病病毒(budgerigar fledgling disease polyomavirus,BFPyV)福建株(命名为FJ-2016株)结构蛋白VP1基因特征,本研究针对BFPyVVP1基因特点设计特异性引物,利用PCR方法扩增获得FJ-2016株VP1基因全长序列,目的片段... 详细信息

为明确虎皮鹦鹉源鹦鹉幼雏病病毒(budgerigar fledgling disease polyomavirus,BFPyV)福建株(命名为FJ-2016株)结构蛋白VP1基因特征,本研究针对BFPyVVP1基因特点设计特异性引物,利用PCR方法扩增获得FJ-2016株VP1基因全长序列,目的片段经胶回收后进行克隆测序。结果显示,BFPyV FJ-2016株VP1基因全长为1 032bp,编码343个氨基酸。所编码VP1蛋白的理论等电点为5.77,不稳定指数为40.91,是不稳定蛋白;脂肪系数为74.72;总平均疏水性指数为-0.366。将获得的VP1基因序列提交至GenBank,登录号为:MG148345。核苷酸同源性分析表明,不同时间、地区和品种BFPyV的VP1基因十分保守,相互之间的核苷酸同源性均在99.1%以上。遗传进化分析发现,不同时间和地域BFPyV相互之间亲缘关系较近,但可细分为两个大的遗传进化分支(Clade 1和Clade 2)。从宿主品种来看,虎皮鹦鹉源BFPyV各分离株的遗传进化与分离时间及地域无明显关系,虎皮鹦鹉源BFPyV分离株在Clade 1和Clade 2分支均有分布。本研究首次证实福建地区虎皮鹦鹉中存在BFPyV感染,相关研究结果为丰富不同地区BFPyV分子流行病学数据提供参考。

关键词：鹦鹉幼雏病病毒虎皮鹦鹉 VP1基因序列分析

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禽坦布苏病毒单克隆抗体的制备与初步分析

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福建农业学报 2018年第6期33卷 551-555页

作者：施少华程龙飞傅光华陈珍傅秋玲刘荣昌万春和陈红梅黄瑜福建省农业科学院畜牧兽医研究所/福建省畜禽疫病防治工程技术研究中心/福建省禽病防治重点实验室福建福州350013

为进一步建立基于禽坦布苏病毒E囊膜蛋白的快速检测方法,本研究通过纯化的禽坦布苏病毒为抗原免疫BALB/c小鼠,获得2株杂交瘤细胞株(2F6和4E11),其分泌的单抗效价可达1∶64 000,并可有效识别禽坦布苏病毒感染的Vero细胞;原核表达的囊膜E... 详细信息

为进一步建立基于禽坦布苏病毒E囊膜蛋白的快速检测方法,本研究通过纯化的禽坦布苏病毒为抗原免疫BALB/c小鼠,获得2株杂交瘤细胞株(2F6和4E11),其分泌的单抗效价可达1∶64 000,并可有效识别禽坦布苏病毒感染的Vero细胞;原核表达的囊膜E经SDS-PAGE电泳后可与单抗进行Western-blot发生反应,初步表明制备的单克隆抗体为禽坦布苏病毒E蛋白单抗,为该病分子流行病学研究及新型诊断方法建立奠定基础。

关键词：禽坦布苏病毒单克隆抗体 E蛋白

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家禽生态养殖模式及其发展策略

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中国家禽 2018年第2期40卷 43-46页

作者：刘荣昌黄瑜福建省农业科学院畜牧兽医研究所福建省畜禽疫病防治工程技术研究中心福建省禽病防治重点实验室福建福州350013

传统畜牧业的迅速发展,加快了我国农村经济发展的同时也对生态环境造成极大的破坏。发展生态养殖成为平衡环境污染与养殖业发展矛盾的重要途径。文章介绍了生态养殖的概念和意义,详细阐述了我国家禽生态养殖的主要模式,并从多个角度出发... 详细信息

传统畜牧业的迅速发展,加快了我国农村经济发展的同时也对生态环境造成极大的破坏。发展生态养殖成为平衡环境污染与养殖业发展矛盾的重要途径。文章介绍了生态养殖的概念和意义,详细阐述了我国家禽生态养殖的主要模式,并从多个角度出发,提出了农村发展家禽生态养殖的对策,以期为相关部门和从业人员提供参考。

关键词：家禽生态养殖发展策略

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