检索结果-内蒙古大学图书馆

中国人兽共患病学报 2007年第6期23卷 527-531页

作者：郭永利陈毅歆黄德党罗海峰葛胜祥程通张军夏宁邵厦门大学国家传染病诊断试剂与疫苗工程技术研究中心细胞生物学与肿瘤细胞工程教育部重点实验室福建省医学分子病毒学研究中心厦门361005

目的制备抗HIV-1p24单克隆抗体(单抗,McAb),并利用双抗体夹心ELISA法建立HIV-1p24抗原检测试剂。方法以基因工程原核重组抗原HIV-1p24蛋白免疫BALB/c小鼠,利用常规杂交瘤技术和间接ELISA法制备单克隆抗体,单抗经纯化和HRP标记后,利用双... 详细信息

目的制备抗HIV-1p24单克隆抗体(单抗,McAb),并利用双抗体夹心ELISA法建立HIV-1p24抗原检测试剂。方法以基因工程原核重组抗原HIV-1p24蛋白免疫BALB/c小鼠,利用常规杂交瘤技术和间接ELISA法制备单克隆抗体,单抗经纯化和HRP标记后,利用双抗体夹心ELISA筛选检测p24蛋白的最佳配伍单抗以期建立HIV-1p24抗原检测试剂。结果成功筛选到16株稳定分泌抗HIV-1p24单抗的杂交瘤细胞株,并从中筛选出最佳单抗配伍组合“16G12+2F2b-HRP”,该组合对p24蛋白的检测灵敏度为20pg/mL,对感染性克隆pNL4-3表达的HIV病毒培养上清检测呈阳性,对100份HIV阴性人血清无非特异性反应,显示出良好的检测灵敏度和特异性。结论本研究初步成功地建立了HIV-1p24抗原的检测试剂,并为最终建立HIV第四代诊断试剂(HIV Ag/Ab Assay)奠定了坚实的基础。

关键词： HIV-1 p24蛋白单克隆抗体夹心ELISA

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一株抗H5亚型禽流感病毒血凝素蛋白单克隆抗体的广谱中和活性

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病毒学报 2007年第2期23卷 85-90页

作者：罗海峰陈毅歆陈自敏郭永利王嘉张军陈鸿霖管轶夏宁邵厦门大学国家传染病诊断试剂与疫苗工程技术研究中心细胞生物学与肿瘤细胞工程教育部重点实验室福建省医学分子病毒学研究中心厦门361005 汕头大学医学院汕港联合流感中心汕头515031

以H5N1禽流感病毒株Ck／HK／Yu22／02作为抗原，应用常规杂交瘤技术和血凝抑制实验筛选出抗H5亚型禽流感病毒血凝素蛋白的单抗8H5，单抗8H5经免疫荧光鉴定具有很好的H5特异性。选择33株2002～2006年不同地域，不同宿主中分离的不同遗传... 详细信息

以H5N1禽流感病毒株Ck／HK／Yu22／02作为抗原，应用常规杂交瘤技术和血凝抑制实验筛选出抗H5亚型禽流感病毒血凝素蛋白的单抗8H5，单抗8H5经免疫荧光鉴定具有很好的H5特异性。选择33株2002～2006年不同地域，不同宿主中分离的不同遗传变异亚系的H5N1病毒代表株，对单抗8H5分别进行血凝抑制实验及中和试验分析，结果显示单抗8H5对所有H5亚型病毒均有较强反应，而对非H5亚型标准病毒株均不反应，说明8H5是一株广谱性抗H5特异性中和单抗，并提示单抗8H5的HA识别表位可能是一个相当保守的中和表位。并且单抗8H5双抗夹心系统的初步评价显示了其在诊断应用上的前景。

关键词：禽流感病毒 H5N1 单克隆抗体血凝素中和

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H5N1禽流感病毒血凝素抗原快速检测试剂对不同现场标本的检测比较

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病毒学报 2007年第2期23卷 91-95页

作者：陈毅歆罗海峰徐飞海葛胜祥陈自敏郭永利王嘉罗文新吴婷张军陈鸿霖管轶夏宁邵厦门大学国家传染病诊断试剂与疫苗工程技术研究中心细胞生物学与肿瘤细胞工程教育部重点实验室福建省医学分子病毒学研究中心厦门361005 汕头大学医学院汕港联合流感中心汕头515031

利用H5亚型禽流感病毒血凝素抗原快速检测试剂“H5-HA（Ag）Dot-ELISA（H5-Dot）”对来自陆禽、水禽的484份气管拭子、泄殖腔拭子和粪便拭子标本进行检测，结果：①不同采集方式的H5N1阳性标本的检出率高低有别，气管拭子的检出率最高... 详细信息

利用H5亚型禽流感病毒血凝素抗原快速检测试剂“H5-HA（Ag）Dot-ELISA（H5-Dot）”对来自陆禽、水禽的484份气管拭子、泄殖腔拭子和粪便拭子标本进行检测，结果：①不同采集方式的H5N1阳性标本的检出率高低有别，气管拭子的检出率最高，泄殖腔拭子次之，粪便拭子最低（P〈0．05），因此建议现场采样时应尽可能采集气管拭子标本；②陆禽标本检出率显著高于水禽标本（P〈0．05），对病毒培养阳性的陆禽气管拭子检出率达80％（95％CI：70．6％～87．8％），对水禽气管拭子标本的检出率为38％（95％CI：26．9％～49．4％），可能与标本中病毒滴度高低有关；③有症状与无症状陆禽标本的检出率无显著差异。另外，H5-Dot试剂对333份非H5病毒气管拭子标本的特异性为99．4％（95％CI：97．9％～99．9％）。这些结果表明，H5-Dot是一种较为可靠的H5亚型禽流感病毒早期快速检测方法，在缺乏仪器设施和高素质专业技术人员的H5N1禽流感病毒防控第一线具有重要推广价值。

关键词：禽流感病毒 H5N1 血凝素抗原快速检测拭子宿主

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多样性人源天然噬菌体抗体库的构建及初步应用

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细胞与分子免疫学杂志 2006年第6期22卷 786-789,793页

作者：王晋罗文新李利峰陈瑛炜王明桥张军夏宁邵厦门大学细胞生物学与肿瘤细胞工程教育部重点实验室福建省医学分子病毒学研究中心福建厦门361005

目的:构建多样性良好的人源天然噬菌体抗体库。方法:从正常人外周血中分离淋巴细胞,以RT-PCR和半巢式PCR扩增重链可变区VH基因和轻链可变区VL基因,以重叠延伸PCR将VH、VL组装成scFv基因,并将其克隆入噬菌粒载体pCANTAB-5E中。以pCANTAB... 详细信息

目的:构建多样性良好的人源天然噬菌体抗体库。方法:从正常人外周血中分离淋巴细胞,以RT-PCR和半巢式PCR扩增重链可变区VH基因和轻链可变区VL基因,以重叠延伸PCR将VH、VL组装成scFv基因,并将其克隆入噬菌粒载体pCANTAB-5E中。以pCANTAB-5E电转化大肠杆菌TG1,构建人源天然噬菌体抗体库,测序分析抗体基因的家族信息和多样性,并用多种抗原对其进行筛选。结果:获得了库容为2×108的人源天然噬菌体抗体库。分别用5种抗原对其进行筛选,均可获得特异性噬菌体抗体的富集。结论:成功地构建了一个多样性良好的人源天然噬菌体抗体库,可用于制备具有应用前景的人源抗体。

关键词：人源天然噬菌体抗体库单链抗体多样性

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噬菌体抗体库固相筛选条件的初步研究

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细胞与分子免疫学杂志 2006年第5期22卷 664-667页

作者：王明桥罗文新陈瑛炜袁权王晋张军夏宁邵福建省医学分子病毒学研究中心厦门大学教育部细胞生物学与肿瘤细胞工程重点实验室福建厦门361005

目的:探讨噬菌体抗体库的固相筛选条件,为筛选方案的设计提供实验依据。方法:利用多种针对HEVNE2蛋白的特异性噬菌体人源抗体和非特异性噬菌体人源抗体,对噬菌体抗体与抗原的结合时间、抗原包被的浓度、洗涤强度和洗脱方式等多种筛选的... 详细信息

目的:探讨噬菌体抗体库的固相筛选条件,为筛选方案的设计提供实验依据。方法:利用多种针对HEVNE2蛋白的特异性噬菌体人源抗体和非特异性噬菌体人源抗体,对噬菌体抗体与抗原的结合时间、抗原包被的浓度、洗涤强度和洗脱方式等多种筛选的条件进行初步探索。结果:阳性噬菌体抗体与抗原反应1min,就可较好结合,洗涤次数为20～30次、洗涤液的pH为5时,筛选得到的阳性率最高。包被抗原的浓度对筛选的阳性率没有明显影响,用10mg/L抗原竞争洗脱60min,可得到较高的阳性率。结论:噬菌体抗体库的筛选是一个非常复杂的过程,其中的各个条件之间有着密切的联系,应该根据具体情况进行调整。

关键词：噬菌体抗体库固相筛选筛选条件

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亲和层析法用于噬菌体抗体库的筛选

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病毒学报 2006年第1期22卷 44-49页

作者：陈瑛炜罗文新王明桥王晋李利峰袁权张军夏宁邵福建省医学分子病毒学研究中心厦门大学细胞生物学与肿瘤细胞工程教育部重点实验室厦门361005

本研究报道一种基于固定化金属亲和层析(IMAC)的噬菌体抗体库液相筛选方法。将纯化的带有His标签的抗原与噬菌体抗体库混合,噬菌体抗体与抗原充分结合后再加入亲和介质,使噬菌体抗体抗原复合物通过His标签与介质结合,然后通过充分洗涤... 详细信息

本研究报道一种基于固定化金属亲和层析(IMAC)的噬菌体抗体库液相筛选方法。将纯化的带有His标签的抗原与噬菌体抗体库混合,噬菌体抗体与抗原充分结合后再加入亲和介质,使噬菌体抗体抗原复合物通过His标签与介质结合,然后通过充分洗涤去除非特异性噬菌体抗体,最后将特异性噬菌体抗体洗脱下来,感染TG1,进行下一轮筛选。整个筛选过程中抗原与抗体的结合在液相中完成,不仅消除了固相介质对抗原表位的影响,也更有利于噬菌体抗体与抗原的充分作用。将此方法应用于HEV NE2蛋白特异性人源噬菌体抗体的筛选,抗原竞争ELISA,阳性血清阻断,可溶性单链抗体表达检测及测序结果表明,最终获得2个特异性人源抗体。

关键词：噬菌体抗体库固定化金属亲和层析液相筛选

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抗SARS-CoV N蛋白单克隆抗体的特异性及其识别抗原表位的初步鉴定

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中国病毒学 2006年第3期21卷 207-212页

作者：王健伟王彦斌常昭瑞闫克夏谭文杰屈建国夏宁邵阮力洪涛中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所北京100052 福建省医学分子病毒学研究中心厦门大学细胞生物学与肿瘤细胞工程教育部重点实验室厦门361005

为了明确抗SARS-CoVN蛋白单克隆抗体的特异性,并鉴定其识别表位,首先在***中表达了人类冠状病毒229E(HCoV-229E)和OC43(HCoV-OC4)N蛋白,用Westernblotting和间接免疫荧光方法分别检测了4株抗SARS-CoVN蛋白单克隆抗体(1-1C2、1-1D6、2-8F11和2-2E5)与HCoV-OC43和HCoV-229E及其N蛋白的交叉反应情况,而后应用12种重组截短型SARS-CoVN蛋白对上述4种单克隆抗体的识别表位进行了初步定位。结果显示:(1)在4株抗N蛋白单克隆抗体中,1-1C2、1-1D6和2-2E5不与HCoV-OC43和HCoV-229E及其N蛋白发生交叉反应,为SARS-CoVN蛋白特异性抗体;(2)2-8F11、1-1D6和2-2E5针对的抗原表位位于SARS-CoVN蛋白的aa30-60,1-1C2针对的抗原表位则位于SARS-CoVN蛋白的aa170-184。这一研究为阐明SARS-CoVN蛋白的免疫学特征,建立特异性免疫诊断技术和研究其致病机制提供了必要的依据和材料。

关键词： SARS相关冠状病毒(SARS—CoV) 核衣壳蛋白单克隆抗体抗原表位

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SARS-CoV N蛋白与人冠状病毒HCoV-OC43和HCoV-229E的交叉反应表位及特异表位的确定

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病毒学报 2006年第4期22卷 248-255页

作者：闫克夏谭文杰张相民王慧娟张陵林周为民夏宁邵阮力中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所北京100052 福建省医学分子病毒学研究中心厦门大学细胞生物学与肿瘤细胞工程教育部重点实验室厦门361005

为确定SARS-CoV N蛋白的特异抗原表位，对3种人冠状病毒SARS-CoV、HCoV-OC43和HCoV-229EN蛋白之间的交叉免疫反应进行了系统研究。构建了分别表达SARS-CoV、HCoV—OC43和HCoV-229EN蛋白的重组痘苗病毒，并制备了相应的小鼠免疫血清。用... 详细信息

为确定SARS-CoV N蛋白的特异抗原表位，对3种人冠状病毒SARS-CoV、HCoV-OC43和HCoV-229EN蛋白之间的交叉免疫反应进行了系统研究。构建了分别表达SARS-CoV、HCoV—OC43和HCoV-229EN蛋白的重组痘苗病毒，并制备了相应的小鼠免疫血清。用间接免疫荧光方法，检测了3种N蛋白的表达及其与3种冠状病毒免疫动物血清和SARS病人恢复期血清之间的反应。与此同时，用Western blot方法分析了原核表达的39个不同区段的SARS-CoVN蛋白与3种冠状病毒动物免疫血清和SARS病人恢复期血清之间的交叉反应性。免疫荧光检测结果表明，SARS-CoV、HCov-OC43和HCoV-229E3种病毒的N蛋白在重组痘苗病毒感染的HeLa细胞中均可以特异表达；3种N蛋白之间存在明显交叉免疫反应。Western blot结果显示，SARS-CoV N蛋白的表位主要位于30～60aa、170～184aa、301～320aa和360～422aa；与HCoV-OC43的交叉反应表位主要位于30～60aa、90～120aa、204～214aa和320～360aa；与HCoV-229E的交叉反应表位主要位于30～60aa、150～160aa和301～360aa。含SARS-CoVN蛋白特异表位的重组肽N155b（60～214aa）和N185（30～214aa）只与SARS病人恢复期血清和灭活SARS-CoV免疫小鼠的血清反应，而不与灭活HCoV-OC43和HCoV-229E免疫的山羊血清产生交叉反应。上述结果为使用SARS-CoVN蛋白抗原进行特异诊断试剂的研究，提供了重要的实验依据。

关键词： SARS-CoV HCoV-OCA3 HCoV-229E N蛋白抗原表位

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鳞片状细胞癌抗原Ⅰ与乙型肝炎病毒的结合受反应位点环域疏水性的影响

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生物工程学报 2005年第1期21卷 52-57页

作者：陈敏程通许辰煜吴婷欧山海张涛张军夏宁邵厦门大学福建省医学分子病毒学研究中心细胞生物学与肿瘤细胞工程教育部重点实验室厦门361005

鳞片状细胞癌抗原Ⅰ (SCCA1)是丝氨酸蛋白酶抑制剂 (serpin)超家族的成员 ,具有多种变异体。有报道其中的两种(BP和AJ5 15 70 6 )能通过乙型肝炎病毒 (HBV)的前S1抗原促进表达SCCA1的细胞与HBV的结合。本研究从HepG2细胞中扩增出的一株S... 详细信息

鳞片状细胞癌抗原Ⅰ (SCCA1)是丝氨酸蛋白酶抑制剂 (serpin)超家族的成员 ,具有多种变异体。有报道其中的两种(BP和AJ5 15 70 6 )能通过乙型肝炎病毒 (HBV)的前S1抗原促进表达SCCA1的细胞与HBV的结合。本研究从HepG2细胞中扩增出的一株SCCA1(A1)却不具备HBV结合能力。将A1的C末端与BP的C末端互换 ,获得的A1 BP能够结合HBV ,而BP A1却不能。A1与BP的C末端仅有 3个氨基酸的差异 ,其中 2个位于反应位点环域。一级结构分析发现在该区域内 ,A1的疏水性较弱 ,而BP和AJ5 15 70 6的疏水性较强。将A1的aa349位的弱疏水性的谷氨酸突变为强疏水性的缬氨酸 ,则可获得HBV结合能力。反之 ,将BP同一位点的缬氨酸突变为谷氨酸 ,则会丧失HBV结合能力。这些结果提示SCCA1与HBV的结合受反应位点环域的疏水性的影响。

关键词：乙型肝炎病毒鳞片状细胞癌抗原Ⅰ 前S1抗原

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高致病性H5亚型禽流行性感冒病毒血凝素单克隆抗体的制备与初步应用

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病毒学报 2005年第6期21卷 422-427页

作者：陈毅歆罗海峰葛胜祥郭永利彭耿王嘉陈鸿霖张军管轶夏宁邵厦门大学细胞生物学与肿瘤细胞工程教育部重点实验室福建省医学分子病毒学研究中心厦门361005 北京万泰生物药业有限公司北京102200 汕头大学医学院汕港联合流感中心汕头515031

以禽流感病毒株Ck/HK/Yu22/02(H5N1)作为免疫原,利用常规杂交瘤技术和血凝抑制试验法成功地筛选出6株稳定分泌抗高致病性H5亚型禽流感病毒血凝素的单克隆抗体(单抗),分别命名为2F2、3C8、3FC1、7C6、10HD4和13G4。经血凝抑制试验法分析... 详细信息

以禽流感病毒株Ck/HK/Yu22/02(H5N1)作为免疫原,利用常规杂交瘤技术和血凝抑制试验法成功地筛选出6株稳定分泌抗高致病性H5亚型禽流感病毒血凝素的单克隆抗体(单抗),分别命名为2F2、3C8、3FC1、7C6、10HD4和13G4。经血凝抑制试验法分析,结果发现这6株单抗具有特异性高、反应性强、识别谱宽且互补等特点。基于单抗2F2,初步建立了三种H5N1病毒诊断方法,经评估证实均具有很好的特异性。由此说明,研究制备的抗H5亚型禽流感病毒血凝素单抗可适用于H5N1病毒的诊断。

关键词：禽流行性感冒病毒H5N1 血凝素单克隆抗体酶联免疫吸附试验胶体金免疫试验

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