检索结果-内蒙古大学图书馆

中国植物病理学会2016年学术年会

作者：吴维江朝阳韩玉陈红燕贾东升王海峰魏太云福建农林大学植物病毒研究所福建省植物病毒学重点实验室福建农林大学植物保护学院

南方水稻黑条矮缩病毒(Southern rice black-streaked dwarf virus,SRBSDV)由介体白背飞虱(Sogatella furcifera,Horvath)以持久增殖型方式传播,其引起的南方水稻黑条矮缩病是水稻生产上一种重要的病毒病害。为了研究SRBSDV侵染介体昆虫... 详细信息

南方水稻黑条矮缩病毒(Southern rice black-streaked dwarf virus,SRBSDV)由介体白背飞虱(Sogatella furcifera,Horvath)以持久增殖型方式传播,其引起的南方水稻黑条矮缩病是水稻生产上一种重要的病毒病害。为了研究SRBSDV侵染介体昆虫后,介体响应病毒侵染以及SRBSDV的复制增殖机理,我们根据病毒侵染不同阶段利用Illumina平台测定了SRBSDV在白背飞虱培养细胞中初侵染(2 h)、复制增殖(48 h)、以及病毒完全侵染时(120h)的转录组。对转录组测序结果进行组装后共得到70 712条Unigene序列,通过GO聚类和KEGG Pathway代谢通路分析发现与生物代谢相关的基因最多。在对四组样品进行差异分析后,共得到1485个显著差异表达基因,其中病毒侵染后2,48,120h的上调表达基因分别为306、323和359个,下调表达基因分别为428、370和486个。对差异基因进行GO和KEGG聚类分析后结果表明:介体昆虫培养细胞对SRBSDV侵染不同时间的响应存在差异,在病毒通过内吞侵入时,会导致培养细胞的细胞膜发生一系列的改变,此时差异基因主要集中在细胞过程相关通路,如细胞连接、膜相关蛋白、吞噬等;在病毒大量复制时,其需要借助细胞内各种原料,导致与代谢相关通路基因大量上调;当病毒在细胞内大量积累时,会导致细胞的死亡,此时与细胞程序性死亡相关通路基因大量上调表达,且免疫通路相关基因在病毒侵染后期表达最高,初侵染时次之,病毒在单个细胞中复制时最低,表明病毒侵染不同时期的介体培养细胞对病毒亲和性存在差异,病毒初侵染引起免疫通路相关基因的差异表达要高于在单个细胞中复制时的差异表达,且SRBSDV的侵染对白背飞虱培养细胞是有害的,病毒的大量积累会导致细胞死亡。

关键词：南方水稻黑条矮缩病毒培养细胞白背飞虱转录组

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叶蝉共生菌Sulcia介导水稻矮缩病毒经卵传播

叶蝉共生菌Sulcia介导水稻矮缩病毒经卵传播

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中国昆虫学会2016年学术年会

作者：贾东升毛倩卓陈勇刘宇艳王海涛吴维陈倩陈红燕魏太云福建农林大学植物病毒研究所/福建省植物病毒学重点实验室福州福建350002

[目的]黑尾叶蝉以持久增殖型方式传播水稻矮缩病毒(Rice dwarfvirus,RDV),并经卵传播。本研究针对RDV的经卵传播机制开展实验。[方法]通过免疫荧光标记对RDV侵入卵巢的过程进行系统分析,通过酵母双杂交和GST pull-down技术证明共生菌Sul...

[目的]黑尾叶蝉以持久增殖型方式传播水稻矮缩病毒(Rice dwarfvirus,RDV),并经卵传播。本研究针对RDV的经卵传播机制开展实验。[方法]通过免疫荧光标记对RDV侵入卵巢的过程进行系统分析,通过酵母双杂交和GST pull-down技术证明共生菌Sulcia与RDV的的互作。[结果]发现病毒首先侵染卵柄,随后扩散到卵柄上皮鞘,然后侵入卵母细胞,因此推测病毒是通过卵柄上皮鞘侵入卵母细胞。根据已有的文献报道叶蝉内共生菌Sulcia也经卵垂直传播,本研究对RDV和共生菌Sulcia在卵巢的侵染进行共标记,发现共生菌Sulcia未侵入卵柄上皮鞘时,RDV仅侵染卵柄部位,当Sulcia侵入卵柄上皮鞘时RDV也侵入卵柄上皮鞘,且RDV粒体分布在共生菌表面。同时通过电镜在卵柄上皮鞘和卵母细胞内均观察到RDV吸附或嵌入共生菌Sulcia表面。此外,通过RT-qPCR对带毒和无毒黑尾叶蝉体内Sulcia的含量进行比较,发现带毒叶蝉体内的共生菌含量比无毒黑尾叶蝉高,且带毒卵内的共生菌与RDV含量呈正相关。由此我们初步认为共生菌Sulcia侵入卵的过程中介导RDV侵入卵,并推测两者间存在互作而导致RDV吸附在共生菌表面。并且共生菌Sulcia外膜蛋白(OMP)的BSA结构域与RDV外壳蛋白P2的N端(1-688aa)存在特异性互作。当用提取的RDV粒体与卵巢组织在体外孵育,发现RDV可与卵巢卵柄上皮鞘部位的共生菌相结合,且原核表达的P2蛋白N端多肽也可与卵柄上皮鞘的共生菌在体外相结合,而通过注射法将Sulcia外膜蛋白OMP的多克隆抗体注入叶蝉腹部封闭共生菌,导致RDV无法侵入卵柄上皮鞘。该研究进一步表明RDV的P2N与共生菌外膜蛋白间存在直接的互作。[结论]首次明确黑尾叶蝉共生菌Sulcia通过外膜蛋白与RDV粒体表面P2蛋白间的直接互作介导RDV突破经卵传播屏障侵入叶蝉卵柄上皮鞘,并侵入卵母细胞。

关键词：

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水稻DEAD-box RNA解旋酶OsRH37超表达和RNAi转基因水稻的获得及其亚细胞定位分析

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农业生物技术学报 2015年第11期23卷 1410-1420页

作者：张超高芳銮郑璐平丁作美杨振李阳吴建国吴祖建福建农林大学植物病毒研究所/福建省植物病毒学重点实验室

DEAD-box RNA解旋酶(RNA helicase,RH)普遍存在于绝大多数的生物体中,参与到RNA新陈代谢的各个方面。本研究从日本晴水稻(Oryza sativa ***)叶片RNA中成功克隆DEAD-box RNA解旋酶基因Os RH37的CDS全长序列。序列比对发现,Os RH37的氨基... 详细信息

DEAD-box RNA解旋酶(RNA helicase,RH)普遍存在于绝大多数的生物体中,参与到RNA新陈代谢的各个方面。本研究从日本晴水稻(Oryza sativa ***)叶片RNA中成功克隆DEAD-box RNA解旋酶基因Os RH37的CDS全长序列。序列比对发现,Os RH37的氨基酸序列与拟南芥(Arabidopsis thaliana)DEAD-box RNA解旋酶17、37和52的氨基酸序列一致性>70%,与来自于不同动物体内DEAD-box RNA解旋酶的氨基酸序列一致性普遍<60%。构建了Os RH37的水稻超表达和RNAi干扰载体,通过水稻遗传转化体系成功转化水稻获得Os RH37超表达和RNAi T0转基因水稻阳性植株。sq RT-PCR分析表明,与野生型日本晴水稻中Os RH37表达量相比,Os RH37超表达T1转基因水稻中Os RH37表达量均明显上调,而Os RH37 RNAi转基因水稻中Os RH37的表达量均显著下调。构建青色荧光蛋白的瞬时表达载体CFP-Os RH37,经农杆菌(Agrobacterium tumefaciens)接种导入本氏烟(Nicotiana benthamiana)叶片表皮细胞,激光共聚焦显微观察结果显示,Os RH37蛋白定位于细胞核、染色质核仁和细胞质中的点状结构。Os RH37的生物信息学分析、超表达和RNAi转基因水稻的获得以及亚细胞定位分析将为研究其在水稻生长发育和胁迫反应中发挥的重要作用提供线索。

关键词： DEAD-box RNA解旋酶(RH) OsRH37 超表达 RNAi 亚细胞定位

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台湾进境美人蕉上美人蕉黄斑驳病毒的检测与鉴定

台湾进境美人蕉上美人蕉黄斑驳病毒的检测与鉴定

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中国植物病理学会2017年学术年会

作者：陈细红蔡伟高芳銮廖富荣沈建国福建出入境检验检疫局检验检疫技术中心福建省检验检疫技术研究重点实验室福建农林大学植物病毒研究所厦门出入境检验检疫局检验检疫技术中心

美人蕉黄斑驳病毒（Cannayellow mottle virus,CaYMV）属于花椰菜花叶病毒科（CaulimoViridae）、杆状DNA病毒属（Badnavirus）成员,是美人蕉上为害较为严重的一种病毒,侵染美人蕉引起叶片褪绿斑、叶脉黄化、茎秆和花上出现条斑等症状。... 详细信息

美人蕉黄斑驳病毒（Cannayellow mottle virus,CaYMV）属于花椰菜花叶病毒科（CaulimoViridae）、杆状DNA病毒属（Badnavirus）成员,是美人蕉上为害较为严重的一种病毒,侵染美人蕉引起叶片褪绿斑、叶脉黄化、茎秆和花上出现条斑等症状。CaYMV引起的美人蕉黄斑驳病防治非常困难,近年来在美国发生严重的地区被迫采取销毁病株的方式来防止其进一步扩散。为预防和控制该病毒的发生,建立快速、有效的检测方法,加强该病毒的早期检测具有重要意义。本研究以台湾进境的美人蕉植株为材料,提取DNA为模板,利用建立的nested PCR检测技术,从疑似病株上扩增出大小约352bp的目的片段。目的片段回收、纯化后,进行克隆测序。序列测定结果表明:目的片段序列全长为352bp,与预先设计的片段大小完全相同,并与GenBank已报道的CaYMV病毒基因序列高度一致。上述结果表明:该批美人蕉植株上携带有CaYMV。

关键词：美人蕉黄斑驳病毒检测与鉴定

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干扰水稻矮缩病毒(RDV)非结构蛋白Pns11的表达可抑制病毒在介体黑尾叶蝉内的复制

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农业生物技术学报 2015年第11期23卷 1401-1409页

作者：陈倩张玲华黄海宁魏太云谢联辉福建农林大学植物病毒研究所/福建省植物病毒学重点实验室

水稻矮缩病毒(Rice dwarf virus,RDV)主要由介体昆虫黑尾叶蝉(Nephotettix cincticeps)以持久增殖型方式传播。在RDV侵染介体黑尾叶蝉培养细胞时,病毒编码的非结构蛋白Pns11参与形成病毒原质,但Pns11的具体功能尚不知晓。本研究应用RNA... 详细信息

水稻矮缩病毒(Rice dwarf virus,RDV)主要由介体昆虫黑尾叶蝉(Nephotettix cincticeps)以持久增殖型方式传播。在RDV侵染介体黑尾叶蝉培养细胞时,病毒编码的非结构蛋白Pns11参与形成病毒原质,但Pns11的具体功能尚不知晓。本研究应用RNA干扰(RNA interference,RNAi)技术,将体外合成靶向Pns11基因的ds RNA转染黑尾叶蝉培养细胞,可显著降低Pns11的表达,并抑制病毒的积累和侵染。用显微注射技术将体外合成靶向Pns11基因的ds RNA导入到黑尾叶蝉,可显著抑制病毒在昆虫体内的侵染和扩散,最终降低介体传毒效率。结果表明,RDV Pns11是病毒在介体昆虫体内侵染和复制所必需的,是病毒复制的关键因子,可作为阻断病毒在介体内的复制和传播提供有效靶点。

关键词：水稻矮缩病毒(RDV) 病毒原质 Pns11 复制 RNA干扰(RNAi) 黑尾叶蝉

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干扰水稻齿叶矮缩病毒(RRSV)非结构蛋白Pns6的表达阻碍病毒在褐飞虱体内的增殖

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农业生物技术学报 2015年第11期23卷 1486-1493页

作者：陈红燕李俊钦刘宇艳郭年梅魏太云贾东升福建农林大学植物病毒研究所/福建省植物病毒学重点实验室

水稻齿叶矮缩病毒(Rice ragged stunt virus,RRSV)由介体褐飞虱(Nilaparvata lugens)以持久增殖型方式传播。RRSV编码的非结构蛋白6(nonstructural protein 6,Pns6)是病毒原质的组分,但其在介体昆虫传毒中的功能未知。本研究利用ds RNA... 详细信息

水稻齿叶矮缩病毒(Rice ragged stunt virus,RRSV)由介体褐飞虱(Nilaparvata lugens)以持久增殖型方式传播。RRSV编码的非结构蛋白6(nonstructural protein 6,Pns6)是病毒原质的组分,但其在介体昆虫传毒中的功能未知。本研究利用ds RNA诱导的RNA干扰(RNA interference,RNAi)技术研究Pns6蛋白在病毒侵染介体昆虫中的功能。通过膜饲喂法将源于Pns6基因的ds RNA(ds Pns6)以及源于绿色荧光蛋白(green fluorescent protein,GFP)基因的ds RNA(ds GFP)分别导入2龄褐飞虱体内,并以饲喂10%蔗糖的处理为对照,之后于病株上获毒2 d。应用免疫荧光标记技术检测发现,昆虫获毒9 d后,ds GFP和10%蔗糖处理组褐飞虱的带毒率分别为27%和30%,而ds Pns 6处理组褐飞虱的带毒率仅为10%;同时q RT-PCR检测发现,Pns6蛋白的表达量受到抑制后,病毒编码的结构蛋白P8和P9的表达量也显著下降(P<0.05)。此外,ds GFP和10%蔗糖处理组褐飞虱的传毒率分别为20%和22%,干扰Pns6蛋白的表达后褐飞虱的传毒率仅为6%。研究结果表明,Pns6是RRSV在褐飞虱体内增殖的重要蛋白,抑制Pns6的表达显著降低褐飞虱的带毒率并抑制病毒的增殖,同时削弱褐飞虱的传毒能力,明确了Pns6可作为理想的靶标用于阻断RRSV在褐飞虱体内的增殖。

关键词：水稻齿叶矮缩病毒(RRSV) RNA干扰(RNAi) 褐飞虱 Pns6蛋白增殖

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水稻条纹病毒(RSV)外壳蛋白(CP)自身互作位点和亚细胞定位区域的鉴定

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农业生物技术学报 2015年第11期23卷 1421-1429页

作者：邓萍刘小娟杨靓吴祖建福建农林大学植物病毒研究所/福建省植物病毒学重点实验室

水稻条纹病毒（Rice stripe virus,RSV）的外壳蛋白（coat protein,CP）参与病毒转录复制等多个过程,病毒蛋白之间的相互作用对病毒活性非常重要。本研究利用酵母双杂交技术（yeast two-hybrid,Y2H）和双分子荧光互补（bimolecular fluo... 详细信息

水稻条纹病毒（Rice stripe virus,RSV）的外壳蛋白（coat protein,CP）参与病毒转录复制等多个过程,病毒蛋白之间的相互作用对病毒活性非常重要。本研究利用酵母双杂交技术（yeast two-hybrid,Y2H）和双分子荧光互补（bimolecular fluorescence complementation,Bi FC）技术进一步研究了CP的自身互作位点及其在亚细胞定位中的影响。结果发现,CP的C端307;18位氨基酸区域对其自身互作是必需的,缺失或破坏该结构会导致CP无法实现自身互作,其中4个氨基酸（L308,V309,F312和F313）是互作的关键位点。CP定位于细胞膜和细胞质并且在细胞质中聚集成团,而CP点突变在植物叶片中定位被改变,主要定位于细胞膜,细胞质中没有聚集状颗粒物,说明CP的自身互作与其在植物中的定位是有相关性的两个过程。研究结果有助于揭示CP在RSV侵染过程中所起的重要作用。

关键词：水稻条纹病毒(RSV) 外壳蛋白(CP) 病毒蛋白自身互作亚细胞定位

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抑制南方水稻黑条矮缩病毒非结构蛋白P5-1的表达阻碍病毒在昆虫体内的增殖

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植物保护学报 2015年第3期42卷 418-424页

作者：曹金强王针针陈红燕毛倩卓贾东升魏太云福建农林大学植物病毒研究所福建省植物病毒学重点实验室福州350002

为明确南方水稻黑条矮缩病毒(Southern rice black-streaked dwarf virus,SRBSDV)编码的非结构蛋白P5-1参于SRBSDV在介体白背飞虱体内侵染过程中的作用机制,通过原核表达蛋白制备SRBSDV编码的非结构蛋白P5-1的多克隆抗体,并应用Western ... 详细信息

为明确南方水稻黑条矮缩病毒(Southern rice black-streaked dwarf virus,SRBSDV)编码的非结构蛋白P5-1参于SRBSDV在介体白背飞虱体内侵染过程中的作用机制,通过原核表达蛋白制备SRBSDV编码的非结构蛋白P5-1的多克隆抗体,并应用Western blot和免疫荧光标记法检测抗体的特异性,以注射法将来源于P5-1基因的dsRNA(ds P5-1)注入获毒1 d的白背飞虱体内,5 d后通过免疫荧光标记法检测ds P5-1对SRBSDV在白背飞虱体内增殖的影响,同时以注射来源于GFP基因的dsRNA(ds GFP)为对照。结果显示,Western blot和免疫荧光标记分别检测到SRBSDV侵染水稻和白背飞虱表达的P5-1蛋白,表明所制备的P5-1抗体具有特异性。ds GFP处理的对照组白背飞虱带毒率高达81%,而ds P5-1处理的白背飞虱带毒率仅为21%,且P5-1蛋白的表达和SRBSDV在昆虫体内的增殖均受到抑制。表明P5-1蛋白是病毒在昆虫体内增殖的关键因子,可作为阻断病毒在昆虫体内增殖的理想靶标。

关键词：南方水稻黑条矮缩病毒 P5-1蛋白抗体制备 RNA干扰增殖

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褐飞虱flightin基因多克隆抗体的制备及应用

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中国科技论文 2015年第6期10卷 724-727,734页

作者：何海芳张超张洁杨靓李为民吴祖建福建农林大学植物病毒研究所福建省植物病毒学重点实验室福州350002

为探讨不同翅型和龄期褐飞虱体内的flightin蛋白表达情况,通过Gateway重组技术构建原核表达载体pDEST17-flightin,以终浓度为1mmol/L的IPTG诱导的蛋白为抗原,免疫新西兰大白兔获得多克隆抗体。Western blotting检测表明,制备的flightin... 详细信息

为探讨不同翅型和龄期褐飞虱体内的flightin蛋白表达情况,通过Gateway重组技术构建原核表达载体pDEST17-flightin,以终浓度为1mmol/L的IPTG诱导的蛋白为抗原,免疫新西兰大白兔获得多克隆抗体。Western blotting检测表明,制备的flightin抗体可特异性地检测褐飞虱体内的flightin蛋白。间接ELISA检测结果表明,所制备的抗体效价达1∶6 400。flightin蛋白在褐飞虱长翅成虫中大量表达,在短翅雄虫中也检测到有微量表达,而在短翅雌虫和若虫中则检测不到。

关键词：褐飞虱翅型分化 flightin基因多克隆抗体

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福州地区豨莶黄脉病病原的分子鉴定

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福建农林大学学报（自然科学版） 2015年第2期44卷 126-130页

作者：张洁林文武朱重庆吴锦鸿陈晓敏章松柏吴祖建福建农林大学植物病毒研究所/福建省植物病毒学重点实验室福建福州350002

为明确引起福建省福州地区豨莶上黄脉症状的病原,利用PCR技术,从3个样品上均扩增到双生病毒约500 bp的特异片段,选择病毒分离物Fz02进行全序列测定.结果表明:Fz02 DNA-A全长2771 nts,具有典型的双生病毒的基因组结构特征,与豨莶黄脉病... 详细信息

为明确引起福建省福州地区豨莶上黄脉症状的病原,利用PCR技术,从3个样品上均扩增到双生病毒约500 bp的特异片段,选择病毒分离物Fz02进行全序列测定.结果表明:Fz02 DNA-A全长2771 nts,具有典型的双生病毒的基因组结构特征,与豨莶黄脉病毒广州分离物(Sb YVV-Gz01)同源性最高,达93.4%.利用设计的卫星分子的特异性引物,在病毒分离物Fz02中扩增到betasatellite分子(Fz02β).Fz02β全长1359 nts,与Sb YVV广东分离物(GD13)伴随的betasatellite同源性最高,为85.3%.系统关系树表明,Fz02与Sb YVV各分离物聚类为一个大分支.此外,Sb YVV序列变异较大.

关键词：双生病毒豨莶黄脉病毒豨莶序列变异

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