检索结果-内蒙古大学图书馆

农业生物技术学报 2003年第4期11卷 365-369页

作者：林毅陈国强吴祖建林奇英谢联辉福建农林大学植物病毒研究所福建省植物病毒学重点实验室福州350002 福建农林大学植物病毒研究所福建省植物病毒学重点实验室

以半叶法测定抗烟草花叶病毒(Tobaccomosaicvirus,TMV)活性为监控手段,采用(NH4)2SO4分级沉淀、阳离子交换及亲和层析等方法,从绞股蓝(Gynostemmapentaphyllum)中分离到一种抗TMV蛋白,其分子量约为27kD,N端19个氨基酸残基为DINFSLAGADGQTYNTFIA(SWISS-PROT登录号为P83206)。N端序列分析表明,它是一种新的核糖体失活蛋白(ribosome-inactivatingproteins,RIPs),命名为gynostemmin。gynostemmin与其它植物RIPs的N端同源性介于10%~73%之间,其中Y14F17构成植物RIPsN端的“钉子”位点;gynostemmin与葫芦科植物RIPs的同源性为31%~73%,其中F4L6A9Y14F17I186个残基为葫芦科植物RIPsN端“钉子”位点。根据N端序列和葫芦科植物RIPs下游保守氨基酸序列设计简并引物,采用PCR扩增并克隆了编码gynostemmin的基因,包含609个碱基,推导出的203个氨基酸残基约占成熟蛋白的75%,软件分析表明,它含有核糖体失活蛋白的活性位点区。

关键词：绞股蓝抗烟草花叶病毒核糖体失活蛋白 N端序列基因克隆

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褐飞虱flightin基因多克隆抗体的制备及应用

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中国科技论文 2015年第6期10卷 724-727,734页

作者：何海芳张超张洁杨靓李为民吴祖建福建农林大学植物病毒研究所福建省植物病毒学重点实验室福州350002

为探讨不同翅型和龄期褐飞虱体内的flightin蛋白表达情况,通过Gateway重组技术构建原核表达载体pDEST17-flightin,以终浓度为1mmol/L的IPTG诱导的蛋白为抗原,免疫新西兰大白兔获得多克隆抗体。Western blotting检测表明,制备的flightin... 详细信息

为探讨不同翅型和龄期褐飞虱体内的flightin蛋白表达情况,通过Gateway重组技术构建原核表达载体pDEST17-flightin,以终浓度为1mmol/L的IPTG诱导的蛋白为抗原,免疫新西兰大白兔获得多克隆抗体。Western blotting检测表明,制备的flightin抗体可特异性地检测褐飞虱体内的flightin蛋白。间接ELISA检测结果表明,所制备的抗体效价达1∶6 400。flightin蛋白在褐飞虱长翅成虫中大量表达,在短翅雄虫中也检测到有微量表达,而在短翅雌虫和若虫中则检测不到。

关键词：褐飞虱翅型分化 flightin基因多克隆抗体

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辣椒脉斑驳病毒的多基因联合检测与鉴定

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中国农业科学 2020年第16期53卷 3412-3420页

作者：杨宏凯杨晶文沈建国蔡伟高芳銮福建农林大学植物病毒研究所福建省植物病毒学重点实验室福州海关技术中心榕城海关综合技术服务中心

【目的】辣椒脉斑驳病毒(Chilli veinal mottle virus,ChiVMV)是辣椒生产上危害严重的病毒,也是口岸检疫的重要病毒之一。本文旨在建立一种快速检测ChiVMV的多基因联合检测方法,实现ChiVMV的快速、准确鉴定。【方法】利用DAS-ELISA、RT-... 详细信息

【目的】辣椒脉斑驳病毒(Chilli veinal mottle virus,ChiVMV)是辣椒生产上危害严重的病毒,也是口岸检疫的重要病毒之一。本文旨在建立一种快速检测ChiVMV的多基因联合检测方法,实现ChiVMV的快速、准确鉴定。【方法】利用DAS-ELISA、RT-PCR方法对印度进境辣椒进行检测以确定是否携带有ChiVMV。根据ChiVMV外壳蛋白(coat protein,CP)和圆柱状内含体蛋白(cytoplasmic inclusion protein,CI)保守区域分别设计引物,筛选两个基因(CP和CI)的特异性引物组合,通过设定不同的引物用量组合以及对退火温度等条件进行优化,探索最佳的反应条件,建立多基因联合检测方法。利用建立的多基因联合检测体系对包含ChiVMV在内的辣椒病毒进行检测,以验证该体系特异性。同时对ChiVMV阳性样品的不同浓度cDNA进行扩增,测定其检测灵敏度。此外,对田间辣椒样本进行检测,以验证体系的实际应用效果。【结果】通过对印度进境辣椒的DAS-ELISA检测,发现样品提取液与ChiVMV呈阳性反应;利用CP861-F/CP861-R特异性引物对进行RT-PCR,扩增出与预期大小相一致的特异性片段,确认该批辣椒样品携带有ChiVMV。多基因联合检测体系中,应用引物对CP337-F/CP337-R、CI655-F/CI655-R分别扩增出长度为337、655 bp的特异性目的片段。经优化后的反应体系和程序为cDNA 2μL、CP337-F/CP337-R各0.625μL(10μmol·L)、CI655-F/CI655-R各1.375μL(10μmol·L)、2×PCR Master Mix12.5μL、ddH2O 6.5μL,退火温度50℃,共35个循环。建立的多基因联合检测方法具有良好的特异性和灵敏度,两个基因检测灵敏度均为10-4数量级。实际应用检测结果表明,该方法可从感染ChiVMV的样品中同时扩增出CP和CI的特异性目的片段。【结论】建立的多基因联合检测方法具有特异性强、灵敏度高、重复性好的特点,可为辣椒脉斑驳病毒的快速检测提供可靠的技术支持。

关键词：辣椒脉斑驳病毒外壳蛋白基因圆柱状内含体蛋白基因多基因联合检测

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福州地区豨莶黄脉病病原的分子鉴定

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福建农林大学学报（自然科学版） 2015年第2期44卷 126-130页

作者：张洁林文武朱重庆吴锦鸿陈晓敏章松柏吴祖建福建农林大学植物病毒研究所/福建省植物病毒学重点实验室福建福州350002

为明确引起福建省福州地区豨莶上黄脉症状的病原,利用PCR技术,从3个样品上均扩增到双生病毒约500 bp的特异片段,选择病毒分离物Fz02进行全序列测定.结果表明:Fz02 DNA-A全长2771 nts,具有典型的双生病毒的基因组结构特征,与豨莶黄脉病... 详细信息

为明确引起福建省福州地区豨莶上黄脉症状的病原,利用PCR技术,从3个样品上均扩增到双生病毒约500 bp的特异片段,选择病毒分离物Fz02进行全序列测定.结果表明:Fz02 DNA-A全长2771 nts,具有典型的双生病毒的基因组结构特征,与豨莶黄脉病毒广州分离物(Sb YVV-Gz01)同源性最高,达93.4%.利用设计的卫星分子的特异性引物,在病毒分离物Fz02中扩增到betasatellite分子(Fz02β).Fz02β全长1359 nts,与Sb YVV广东分离物(GD13)伴随的betasatellite同源性最高,为85.3%.系统关系树表明,Fz02与Sb YVV各分离物聚类为一个大分支.此外,Sb YVV序列变异较大.

关键词：双生病毒豨莶黄脉病毒豨莶序列变异

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草莓白化相关病毒中国分离物全基因组分析

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园艺学报 2021年第1期48卷 146-152页

作者：陈道张洁吴祖建丁新伦福建农林大学植物病毒研究所闽台作物有害生物生态防控国家重点实验室福建省植物病毒重点实验室福州350002

草莓白化相关病毒(strawberrypallidosis-associatedvirus,SPa V)属于长线形病毒科(Closteroviridae)毛形病毒属(Crinivirus),可引起草莓病害,2017年在中国首次报道。采用高通量测序、RACE和RT-PCR技术获得了SPa V中国分离物(FJ)的基因组全长。该病毒含有两条正单链基因组RNA1和RNA2。RNA1全长8 048 nt,5′和3′非编码区序列分别为264和197 nt,含有3个开放阅读框(ORF),分别编码ORF 1a/1b融合蛋白和p9蛋白。RNA2全长7 977 nt,5′和3′非编码区序列分别为248和186 nt,含有8个开放阅读框(ORF),分别编码HSP70h、CPh、CP、CPm、p7、p6、p9和p28等8个蛋白。RNA1和RNA2与美国M1分离物分别具有98.5%和99.0%的核苷酸一致性;系统发育分析结果表明,SPa V中国分离物(FJ)单独处在一个分支。对SPa V来源的小RNA的分析表明,来源于SPa V的小RAN长度以21和22 nt为主。

关键词：草莓草莓白化相关病毒高通量测序 RT-PCR 基因组序列

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水稻矮缩病毒非结构蛋白Pns6在病毒复制中的功能

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中国科技论文 2015年第24期10卷 2840-2846页

作者：陈倩张玲华黄海宁魏太云谢联辉福建农林大学植物病毒研究所福州350002 福建省植物病毒学重点实验室福州350002

水稻矮缩病毒(rice dwarf virus,RDV)主要由黑尾叶蝉以持久增殖型方式传播。RDV编码的3个非结构蛋白Pns6、Pns11和Pns12是病毒在介体细胞内侵染过程中形成提供病毒复制和子代病毒粒体装配的唯一场所——病毒原质(viroplasm)的主要成分... 详细信息

水稻矮缩病毒(rice dwarf virus,RDV)主要由黑尾叶蝉以持久增殖型方式传播。RDV编码的3个非结构蛋白Pns6、Pns11和Pns12是病毒在介体细胞内侵染过程中形成提供病毒复制和子代病毒粒体装配的唯一场所——病毒原质(viroplasm)的主要成分。利用黑尾叶蝉培养细胞和RNA干扰(RNA interference,RNAi)体系,研究Pns6在病毒侵染介体昆虫过程中的功能。结果显示,将体外合成靶向Pns6基因的dsRNA转染黑尾叶蝉培养细胞后,Pns6合成显著降低,viroplasm的形成和病毒的侵染也受到抑制。用显微注射技术导入到黑尾叶蝉的靶向Pns6基因的dsRNA,同样抑制viroplasm的形成和病毒的侵染,最终阻碍病毒在介体体内的有效扩散。这些研究明确了Pns6在病毒侵染黑尾叶蝉过程中的功能,Pns6是RDV的复制关键因子。

关键词：水稻矮缩病毒叶蝉病毒原质 Pns6 复制 RNAi

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水稻条纹病毒楚雄分离物一个重组RNA序列分析

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中国农学通报 2009年第18期25卷 352-355页

作者：程文金吴祖建谢联辉福建农林大学植物病毒研究所福建省植物病毒学重点实验室福州350002

为检测水稻条纹病毒(Rice stripe virus,RSV)基因组存在的重组RNA,采用RT-PCR方法扩增并克隆云南楚雄分离物(YCX07)的RNA重组片段YCX07R。克隆重组片段并测定序列。序列分析表明,YCX07R由RSV RNA2的3'端序列与RNA3的3'端序列重... 详细信息

为检测水稻条纹病毒(Rice stripe virus,RSV)基因组存在的重组RNA,采用RT-PCR方法扩增并克隆云南楚雄分离物(YCX07)的RNA重组片段YCX07R。克隆重组片段并测定序列。序列分析表明,YCX07R由RSV RNA2的3'端序列与RNA3的3'端序列重组而成,具有RSV基因组结构特征,采取双义编码策略,即在正、负链的5'端分别存在一个阅读框,编码两个重组蛋白YCX07R-5P、YCX07R-3P。分析推测重组更可能通过类似于脊髓灰质炎病毒(Poliovirus)的引物互补延伸机制发生。

关键词： RSV 重组RNA 双义编码

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水稻条纹病毒CP与叶绿体Rubisco SSU引导肽融合基因的构建及其原核表达

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农业生物技术学报 2008年第3期16卷 530-536页

作者：鹿连明林丽明谢荔岩林奇英吴祖建谢联辉福州350002 福建农林大学植物病毒研究所福建省植物病毒学重点实验室

PCR扩增获得水稻(Oryza sativa ***)叶绿体Rubisco SSU引导肽基因和水稻条纹病毒(Rice stripe virus,RSV)外壳蛋白(coat protein,CP)基因。分别借助于pGEX-4T-1和pET-29a表达载体,通过两种方法构建了融合基因PR-CP和PR-S-CP。测序表明,其读码框完整,连接部位正确。将重组子pGEX-PR-CP和pET-PR-S-CP转化大肠杆菌(Escherichia coli)BL21(DE3)并诱导表达。SDS-PAGE电泳检测其表达产物分子量分别为64和40kD,与预期结果大小一致。Western blot鉴定发现,两种融合基因的表达产物均能与RSV CP抗体特异结合,说明融合蛋白中RSV CP蛋白保持了自身的抗原活性,叶绿体Rubisco SSU引导肽并未影响其正确表达。可以推断两种融合基因PR-CP和PR-S-CP在生物体内表达时,融合蛋白中的Rubisco SSU引导肽和RSV CP蛋白可能都能保持各自独立的结构和功能。

关键词：水稻条纹病毒外壳蛋白 Rubisco SSU引导肽融合基因原核表达

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致病疫霉ATP6基因单倍型与地理因素的相关性分析

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江苏农业科学 2017年第8期45卷 75-78页

作者：张佳峰吴娥娇罗桂火祝雯詹家绥福建农林大学植物病毒研究所/福建省植物病毒学重点实验室福建福州350002

致病疫霉(Phytophthora infestans)是马铃薯晚疫病的病原菌,对世界马铃薯的生产造成严重影响。ATP6编码ATP合酶α亚基的第6个亚单位,对ATP合酶的功能及生物的生存生殖至关重要。本研究对来自我国7个群体140株马铃薯晚疫病菌的ATP6基因... 详细信息

致病疫霉(Phytophthora infestans)是马铃薯晚疫病的病原菌,对世界马铃薯的生产造成严重影响。ATP6编码ATP合酶α亚基的第6个亚单位,对ATP合酶的功能及生物的生存生殖至关重要。本研究对来自我国7个群体140株马铃薯晚疫病菌的ATP6基因进行核苷酸序列及其遗传结构和地理因素(海拔、经度和年平均气温)的相关分析。结果表明:7个群体中只有2种单倍型Hapl-1和Hapl-2,其中Hapl-1在群体中所占比例与当地的海拔呈显著正相关,与年平均气温和经度呈显著负相关,而Hapl-2在群体中的比例与当地的海拔、年平均气温和经度的相关正好与Hapl-1相反。群体间的遗传分化度(FST)与群体间直线距离呈显著正相关(r=0.659,P=0.001)。本研究表明,马铃薯致病疫霉ATP6基因单倍型分布和群体地理因素之间具有显著相关关系,该结果为了解致病疫霉的进化趋势和致病疫霉的防治提供了理论依据。

关键词：马铃薯晚疫病菌 76基因单倍型多样性地理因素核苷酸序列

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16个水稻品种对水稻矮缩病毒抗性的鉴定

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福建农林大学学报（自然科学版） 2010年第1期39卷 10-14页

作者：吴建国巴俊伟李冠义林奇英吴祖建谢联辉福建农林大学植物病毒研究所福建省植物病毒学重点实验室福建福州350002

16个水稻品种对水稻矮缩病毒(Rice dwarfvirus,RDV)的抗性鉴定结果表明:不同水稻品种对RDV的抗性存在明显差异.根据各品种的发病率划分其抗性等级.免疫品种1个,占供试品种的6.25%;中抗品种6个,占37.50%;中感品种3个,占18.75%;高感品种6... 详细信息

16个水稻品种对水稻矮缩病毒(Rice dwarfvirus,RDV)的抗性鉴定结果表明:不同水稻品种对RDV的抗性存在明显差异.根据各品种的发病率划分其抗性等级.免疫品种1个,占供试品种的6.25%;中抗品种6个,占37.50%;中感品种3个,占18.75%;高感品种6个,占37.50%.感病品种潜育期较短,为11-15 d左右;抗病品种潜育期较长,为15-20 d左右.水稻品种的发病率与叶蝉带毒率密切相关,相关系数为99.99%.协优46兼具抗虫性和抗病性;宜香2292仅具抗病性;冈优734为免疫品种,是水稻矮缩病抗性育种的良好材料.

关键词：水稻矮缩病毒品种抗性叶蝉抗病性抗虫性

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